Bacteriófagos en odontologia

El término bacteriófago se refiere a virus que son capaces de destruir bacterias o "bacterias
comedores ". Son las entidades biológicas más comunes en la tierra, con un número estimado
de 1031. bacteriófagos en la biosfera. Twort [1] y d’Hérelle [2] fueron los primeros en
describirlos, pero fue d'Herelle, quien aplicó el término a una sustancia bacteriolítica que aisló
de las heces. Este descubrimiento conduce a varios estudios y a la creación del "grupo de fagos",
del cual Max Delbrück, James Watson, y Francis Crick fueron los científicos más notables [3].

Delbrück, en 1939, descubrió un proceso de un solo paso para cultivar bacteriófagos, que,
después de una hora período latente, se multiplicaría para producir varios cientos de miles de
progenie. Juntos con Luria, en 1943, encontraron una bacteria que sufrió mutaciones
espontáneas después de la infección por un bacteriófago hasta que se volvió inmune al fago. En
1969, Delbrück, Hershey y Luria fueron galardonado con el Premio Nobel de Fisiología o
Medicina por su trabajo en bacteriófagos.

El descubrimiento de antibióticos, así como el uso indiscriminado de bacteriófagos para tratar

todo tipo de Las infecciones, incluso cuando no eran específicas de la enfermedad, es
probablemente la causa del abandono. de la terapia con fagos [4]. Sin embargo, la terapia con
fagos continuó siendo ampliamente practicada en la Unión Soviética. debido a la colaboración
entre Felix d'Herelle y sus colegas georgianos, especialmente George Eliava. Como resultado de
sus estudios de bacteriófagos, el Instituto de Vacunas y Sueros en Tbilisi produjo el primera
preparación comercial de fagos anticolera, que redujo la mortalidad por cólera en India al 10%
D’Herelle y Eliava pasaron en total 18 meses en 1933 y 1934 colaborando con otros científicos
en Georgia [5]. D’Herelle tenía la intención de mudarse a Tbilisi permanentemente, pero en
1937, Eliava y su esposa fue asesinada por el régimen soviético.

El Instituto Oswaldo Cruz en Río de Janeiro, Brasil, comenzó la producción de anti-disentería.

bacteriófagos en 1924 para combatir la disentería en países latinoamericanos. Dentro de un año,
el instituto había producido 10.000 viales de fagos, que fueron enviados a hospitales de todo
Brasil Los antibióticos se han usado durante más de 70 años y han reducido las enfermedades y
muertes causadas por enfermedades infecciosas. El primero fue la penicilina, y siguieron varios
otros tipos. El surgimiento de La resistencia bacteriana a los antibióticos más utilizados, un tema
de gran preocupación, puede conducir a muertes de muchas personas en todo el mundo. Tal
preocupación ha renovado el interés en los bacteriófagos. La disponibilidad de bacteriófagos
para una amplia aplicación humana es limitada, con algunas excepciones [6]. Un hallazgo
reciente ha proporcionado evidencia de que los bacteriófagos son más virulentos para las
bacterias en humanos células que a las de cultivos bacterianos [7]. Esto puede conducir a una
mayor investigación clínica que se centra en el desarrollo de productos y la aplicación clínica y
garantiza la eficacia, la seguridad y el cumplimiento de regulaciones globales Como los
antibióticos son la terapia estándar de primera línea contra las infecciones bacterianas, el uso
de bacteriófagos tiende a tener tres indicaciones principales: (1) para combatir infecciones por
bacterias resistentes a los antibióticos; (2) luchar infecciones resistentes a los antibióticos a
pesar de la sensibilidad en el cultivo bacteria no, debido a la mala circulación en casos de
osteomielitis y úlceras diabéticas, o en el caso de formación de biopelículas; (3) para atacar las
bacterias cuando los antibióticos no están indicados debido a, por ejemplo, alergias del paciente,
problemas o riesgo de colon irritable de la infección por Clostridium difficile, así como debido a
la preocupación por el exceso humano y ambiental exposición a antibióticos en aplicaciones
alimentarias y agrícolas. Algunos ejemplos de casos de bacteriófagos. uso son úlceras cutáneas,
infecciones purulentas, Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA), herida profilaxis,
quemaduras, infecciones poco accesibles, infecciones del tracto respiratorio, infecciones del
tracto urogenital y sepsis [8]. El uso de bacteriófagos en odontología es relativamente nuevo
[9,10]. El aislamiento de bacteriófagos. en la saliva oral, los tejidos orales, la caries dental y las
infecciones periodontales y endodóncicas pueden provocar uso más amplio Esta revisión evalúa
el modo de acción de los bacteriófagos, describe los disponibles actualmente bacteriófagos y
señala usos futuros en odontología considerando las fortalezas y limitaciones de terapia de fagos

2. Bacteriófagos: modo de acción y tipos

Los bacteriófagos, también conocidos como fagos, son virus que infectan a las bacterias, donde
se reproducen. Su cápside, o cubierta de proteína, donde se encuentra el contenido genético
del virus, puede variar en forma y ser icosaédrica, filamentosa o cabeza-cola. La estructura
cabeza-cola parece ser única de los bacteriófagos. Su genoma puede ser de ADN, y la cantidad
de genes varía de cuatro a varios cientos [11]. La estructura de un bacteriófago cabeza-cola,
que es el más útil para fines de odontología, es (Figura 1):

Cabeza: donde la cápside contiene el ADN de doble cadena, junto con proteínas internas.

Cuello: conecta la cabeza y la cola. Cola: estructura tubular que permite el paso del ADN
cuando está en contacto con la superficie bacteriana. Fibras de la cola: proteínas que se unen a
la superficie bacteriana. Placa final: contiene pasadores que penetran en la membrana para
permitir la liberación del ADN del fago en el anfitrión [11].

El ciclo de vida de un bacteriófago varía según su efecto sobre la estructura bacteriana. Si se

conduce a la muerte de la célula huésped, se llama ciclo de vida lítico. Si su ADN se copia en el
ADN del huésped, al recombinarse con cromosomas bacterianos cada vez que la célula se
divide, integrándose en el cromosoma como un profago, se llama ciclo de vida lisogénico. Los
bacteriófagos de interés en odontología. son todos líticos Se comportan como virus típicos,
utilizan los recursos de la célula para replicarse y hacen que la célula lisar, reventar y teñir en el
proceso. El ciclo lítico consta de las siguientes fases: (1) fijación: las proteínas de la cola se
unen a un receptor de superficie celular bacteriana; (2) Inyección de ADN: el fago inyecta el
genoma de ADN a través de la cola en bacterias citoplasma; (3) replicación del ADN: el ADN del
bacteriófago se reproduce en la célula bacteriana, proteína se sintetiza y se forman nuevas
cápsides; (4) ensamblaje de bacteriófagos: las cápsidas se llenan con nuevas partículas de fago
formadoras de ADN; (5) lisis: los genes hacen agujeros a lo largo de la membrana plasmática
bacteriana y paredes celulares para que el agua pase y la bacteria se expanda y explote,
liberando varios nuevos bacteriófagos capaces de infectar bacterias vecinas (Figura 2).

Los virus bacterianos se subdividen en 6 grupos morfológicos según los componentes del fago
[11]:

A: cápside y cola larga con vaina contráctil; B: cápside y cola larga con vaina rígida; C: cápside

y cola corta; D: nucleocápside de gran tamaño con estructuras superficiales fibrosas o

puntiagudas; E-fases incorporando una nucleocápside; F: fagos en forma de varilla o
filamentosos. La mayoría de los bacteriófagos de interés en la salud de la cavidad oral
pertenecen al orden Caudovirales. Su cápside es compuesto por una capa proteica y ADN lineal
de doble cadena. Sin una envoltura externa, la cabeza posee simetría cúbica de tipo
icosaédrico regular o alargado, y la cola forma una espiral Los capsómeros son visibles solo
bajo microscopía electrónica directa. La cola contiene una placa final, alfileres y / o fibras para
adsorción a la superficie de células bacterianas. El genoma de los bacteriófagos de cola.
usualmente consiste en módulos de unidades estructurales intercambiables. Genes
responsables de funciones similares se agrupan en grupos [11].

Las principales ventajas de la terapia con fagos resultan de las características de bacteriófagos
[10]: bacteriófagos son altamente específicos de la cepa y tienen un bajo impacto en la flora
comensal; se multiplican a la infección sitio y desaparecer con el patógeno objetivo; una sola
aplicación de bacteriófagos puede ser altamente eficaz; son productos naturales sin toxicidad
aparente; son fáciles de aislar y hacer no requiere pasos de purificación complicados; pueden
ser genéticamente modificados; pueden destruir biofilm; y, como son elementos
multiplicadores, su producción es económica. Sus desventajas, en contraste, son [10]: los
bacteriófagos son específicos de la cepa, lo que requiere un diagnóstico preciso antes del
tratamiento; la implementación del tratamiento de enfermedades multiespecies es más
complicada; bacteriófagos

son inmunogénicos; los fagos templados pueden transportar y propagar genes que codifican
toxinas y / o antibióticos
determinantes de resistencia, limitando el número de posibles fagos para la terapia; los
bacteriófagos son Elementos que evolucionan dinámicamente, lo que conduce a dificultades
de regulación.

3. Bacteriófagos y salud bucal

Un número creciente de posibles aplicaciones generales de la terapia de fagos en la cavidad

oral han sido sugirió. Los bacteriófagos son activos contra las bacterias planctónicas y, de
mayor interés para la administración oral y tratamientos dentales, contra bacterias
organizadas en biopelículas. Sin embargo, se pueden formar bacterias en las biopelículas.

refugios antibacteriófagos, de modo que los bacteriófagos y las bacterias puedan coexistir [12].
Los bacteriófagos pueden cambiar y adaptarse a las células incrustadas de biopelícula objetivo
generalizadas en su ecosistema. Los viriones pueden acceder biopelícula densa y se extiende a
través de las células vecinas apretadas, debilitando toda la estructura. Además, algunos
bacteriófagos usan varios tipos de despolimerasas para penetrar una cápsula bacteriana. o
matriz de biopelículas [13].

Algunos bacteriófagos se pueden encontrar en la saliva humana [14], y los huéspedes más
comunes son Actinobacterias, Bacteroidetes, Firmicutes, Fusobacterias y Proteobacterias
[15,16]. Un estudio reciente revisó los principales hallazgos sobre bacteriófagos y bacterias
orales [17], que son resumido a continuación.

Bacteriófagos de Actinomyces: probablemente usan estructuras superficiales que median en el

físico contacto con estreptococos como receptores. La interacción entre estreptococos y
Actinomyces contribuye al desarrollo de biopelículas [18]. Por lo tanto, bloqueando la
agregación conjunta con bacteriófagos puede reducir la formación de biopelículas sin eliminar
Actinomyces asociado a la salud, que puede ser Se utiliza para controlar el desarrollo de la
placa. Bacteriófagos de Aggregatibacter: Aggregatibacter está implicado en la periodontitis
agresiva localizada [19]. Los estudios in vitro sugieren que los bacteriófagos de Aggregatibacter
pueden transferir resistencia a los antibióticos casetes [20] y potencialmente aumentar la
liberación de leucotoxina [21]. El impacto clínico de estos Los hallazgos siguen siendo inciertos.
Bacteriófagos de enterococos: se ha observado lisogenia en cepas de E. faecalis de origen oral
[22]. Los enterococos, ocasionalmente involucrados en infecciones orales, pueden controlarse
con una amplia gama de bacteriófagos disponibles, que pueden ser especialmente útiles en
casos de lesiones endodóncicas persistentes. Bacteriófagos de estreptococos: un grupo diverso
de casi cincuenta bacteriófagos de varios tipos de morfología. y ambos estilos de vida pueden
infectar a S. mitis, S. mutans, S. oralis, S. salivarius y S. sobrinus [23,24]. Como los
estreptococos son los principales colonizadores en la formación de placa dental, su uso podría
prevenir la caries y la enfermedad periodontal. Bacteriófagos de Fusobacterium: se han aislado
los bacteriófagos de Fusobacterium nucleatum de muestras de saliva [25]. Sin embargo, la lisis
fue lenta. Porphyromonas, Prevotella y Tannerella: hasta la fecha, solo los bacteriófagos de
Prevotella han sido detectado in vivo [26]. Más estudios sobre estos importantes
periodontopatógenos anaerobios deberían realizarse para definir su posible uso clínico.
Treponema: Hasta la fecha, solo se ha detectado un bacteriófago de T. denticola [27].
Veillonella: solo bacteriófagos funcionales dirigidos a Veillonella spp. han sido descritos [28].
Lactobacillus: fagos para el Lactobacillus casei asociado a caries y seis Lactobacillus adicionales
especies han sido aisladas [29]. Lisinas: responsable de la producción segura, estable y fácil de
enzimas de fago que digieren bacterias paredes celulares para liberar partículas de fago
ensambladas. Las lisinas recombinantes a menudo son específicas de la especie, y
la mayoría son activos contra bacterias grampositivas. Los lipopolisacáridos (LPS) protegen los
gramnegativos bacterias de lisinas. Algunas lisinas se han probado con éxito contra A.
naeslundii y un amplio gama de especies de Streptococcus [30–32] y son, por lo tanto, un
nuevo tipo de antimicrobianos que pueden ser utilizado para atacar las bacterias orales.

Se han descrito otros fagos, pero pocos han sido aislados. La comunidad de fagos orales es un
depósito potencialmente rico de fagos terapéuticos y enzimas, que apenas se han explorado
[17]. Algunos bacteriófagos genéticamente modificados contra la biopelícula Enterococcus
faecalis se han reducido el número de células viables in vitro [33], y este hallazgo se suma al
conocimiento actual sobre el dental perspectivas de la terapia con fagos.

4. Posibles usos de bacteriófagos en odontología

Caries dental: el aislamiento de bacteriófagos de Streptococcus mutans [23,24] es un posible

uso para el tratamiento de esta enfermedad. Sin embargo, aún no se ha aplicado a la práctica
clínica. Enfermedades periodontales: varios agentes patógenos aeróbicos y anaerobios están
asociados con periodontal enfermedades Las variaciones de las comunidades bacteriófagas en
la salud y la enfermedad periodontal [34] y El hecho de que las personas sanas tengan una
comunidad de bacteriófagos más rica sugiere la posibilidad de desarrollando terapias basadas
en estas comunidades. Lesiones endodóncicas: se han realizado estudios sobre el efecto de los
bacteriófagos en las lesiones endodóncicas. restringido a Enterococcus faecalis [22,33]. La
diversa comunidad microbiana de biopelículas endodónticas sugiere que puede haber espacio
para más estudios en este campo. Periimplantitis: la identificación de un bacteriófago que se
une bien a la superficie de la circona [35] sugiere la existencia de fagos que pueden interferir
con las biopelículas que causan periimplantitis; sin embargo, Todavía es temprano para
probarlo clínicamente. Infecciones de la mucosa oral: un estudio ha encontrado que los
péptidos bacteriófagos pueden promover la proliferación de células epiteliales en la mucosa
oral humana sin transformación tumoral [36], que podría Mejora la cicatrización de los tejidos.
La terapia con fagos puede avanzar rápidamente en este campo, porque la terapia con fagos
para Las heridas cutáneas ya se han utilizado durante mucho tiempo.

5. Discusión

Antes de que se descubrieran los antibióticos, se habían realizado considerables

investigaciones sobre bacteriófagos como tratamiento para enfermedades bacterianas
humanas. Como los bacteriófagos atacan solo a sus bacterias huésped, no a las humanas
células, son buenos candidatos para este tipo de tratamiento. Después de que se descubrieron
los antibióticos, el estudio de bacteriófagos fue abandonado en gran parte en muchas partes
del mundo. Sin embargo, los fagos continuaron siendo utilizados con fines médicos en varios
países, como como Rusia, Georgia y Polonia, donde siguen en uso hoy en día. Como las
bacterias resistentes a los antibióticos tienen se ha vuelto mucho más frecuente, ha
aumentado el interés en recuperar la terapia con fagos.

La naturaleza infecciosa de varias enfermedades: caries, enfermedades periodontales,

enfermedades periapicales, trastornos inflamatorios de la mucosa oral e infecciones debidas a
procedimientos de implante: sugiere que bacteriófagos específicos pueden usarse como
ayudas para atacar bacterias en odontología. Los bacteriófagos pueden destruir la biopelícula
o limitar su crecimiento o maduración, lo que podría reducir el impacto de infecciones o
controlar sus fases agudas.
La terapia con fagos tiene algunas limitaciones, y una de ellas es la necesidad de personalizar el
tratamiento. para cada paciente según el estado bacteriano. Sin embargo, esto también puede
ser una virtud, ya que solo se dirige a La bacteria que causa la enfermedad. Como el costo es
bajo y el procedimiento para aislar un bacteriófago es sencillo, prevemos procedimientos más
sensibles para prevenir la resistencia a los antibióticos y Mejorar la inmunidad del paciente se
desarrollará en el futuro.

6. Conclusiones

Después del renacimiento de la terapia con fagos, ha habido espacio para que varios
investigadores investiguen esto alternativa terapéutica estrechamente y desarrollar
procedimientos más conservadores como aliados de los actuales tratos. Debería haber un
llamado a la acción en este campo. Por lo tanto, los cirujanos dentales deben aprender sobre
bacteriófagos

El baculovirus ODV-E66 degrada la membrana

peritrófica larval para facilitar
infección oral por baculovirus
1. Introducción

Los baculovirus lepidópteros son ADN de doble cadena envuelto virus caracterizados por un
ciclo de vida bifásico con dos fenotípicamente fenotipos de progenie distintos. Uno, el virus en
ciernes (BV) es responsable de la infección sistémica célula-célula in vivo y en tejido cultivo,
mientras que el otro fenotipo de progenie, el virus derivado de la oclusión (ODV) es esencial
para la infección oral en las células del intestino medio larval y horizontal transmisión entre
insectos (Slack y Arif, 2007). Durante la infección oral, Los ODV se liberan de los cuerpos de
oclusión (OB) en el alcalino entorno del intestino medio del huésped para iniciar la infección en
epiteliales susceptibles Células.

Muchas proteínas de envoltura ODV son involucrado en la infección oral, como los factores de
infecciosidad (os PIF) que son esenciales para el establecimiento exitoso de la infección oral.
Hasta ahora, 10 Se han identificado PIF incluyendo P74 (PIF0) (Haas-Stapleton et al., 2004; Kuzio
et al., 1989), PIF1, PIF2, PIF3 (Ohkawa et al., 2005), PIF4 (Fang et al., 2009; Huang et al., 2012),
PIF5 (ODV-E56) (Harrison et al., 2010; Sparks et al., 2011; Xiang et al., 2011a), PIF6 (Nie et al.,
2012), PIF7 (Liu et al., 2016), PIF8 (VP91) (Javed et al., 2017; Zhu et al., 2013) y PIF9 (Boogaard
et al., 2018; Wang et al., 2019). Todo el pif los genes se conservan en baculovirus y algunos de
ellos también se encuentran en nudivirus, hytrosavirues, polidnavirus y otros invertebrados
virus (Abd-Alla et al., 2008; Burke et al., 2013; Garcia-Maruniak et al., 2008; Jehle et al., 2006;
Wang et al., 2017), sugiriendo un posible proceso de entrada conservado explotado por estos
virus de ADN invertebrados. ODV-E66 es una de las principales proteínas de envoltura
específicas de ODV (Braunagel et al., 2003; Hong et al., 1994; Hou et al., 2013; Wang et al.,
2010b) que se conserva en todos los baculovirus lepidópteros (Jehle et al., 2006). La eliminación
de odv-e66 resultó en una disminución significativa en el Autographa californica
nucleopolihedrovirus múltiple (AcMNPV) oral infectividad, mientras que no perjudica la
replicación de BV (Xiang et al., 2011b). De acuerdo con el resultado de AcMNPV, la eliminación
de ODV-E66 de El nucleopolihedrovirus de Bombyx mori (BmNPV) no afectó la infectividad de
BV en células infectadas (Ono et al., 2012). ODV-E66 de AcMNPV y BmNPV ha sido identificado
como endo-condroitina específica del sustrato liasa (Sugiura et al., 2011, 2013), y la estructura
crtal de AcMNPV ODV-E66 mostró que la proteína tiene una estructura 3D similar a la de enzimas
de la familia bacteriana de polisacárido liasa 8 (PL8) (Kawaguchi et al., 2013). Los análisis de
bioquímica in vitro mostraron que BmNPV ODVE66 podría digerir sulfatos de condroitón (CS) del
peritrófico membrana (PM) del gusano de seda, lo que sugiere un papel potencial de ODVE66
en destruir la PM del intestino medio del huésped para facilitar la infección por ODV (Sugiura et
al., 2011, 2013). Sin embargo, esta hipótesis carece de evidencia en vivo. Un estudio proteómico
previo identificó ODV-E66 como el principal ODV proteína de la envoltura de Helicoverpa
armigera nucleopolihedrovirus (HearNPV), un agente de control biológico ampliamente
utilizado contra el algodón gusano de la cápsula en China (Hou et al., 2013; Sun, 2015). En este
estudio, nosotros investigó la función de ODV-E66 durante la infección por HearNPV. Los Los
resultados mostraron que la eliminación de ODV-E66 tuvo un efecto más significativo sobre
infección oral de HearNPV en larvas de 4º estadio en comparación con 3er larvas instar. La
infectividad oral de HearNPV eliminado odv-e66 podría ser rescatado por calcofluor white, un
agente que destruye el PM, sugiriendo que el PM es uno de los objetivos para ODV-E66. Además,
encontramos que La eliminación de odv-e66 podría aliviar el daño al PM causado por Escuche la
infección por VPN, apoyando la actividad condroitina liasa de ODVE66 Es funcional in vivo.

3. Resultados

3.1. Transcripción y expresión de proteínas de HearNPV odv-e66 Se localiza un motivo de inicio

de la transcripción tardía baculoviral, ATAAG. 20 nt aguas arriba del codón de inicio de
traducción ATG, lo que sugiere HearNPV odv-e66 puede expresarse en la fase tardía de la
infección por HearNPV. Mediante el uso del análisis transcripcional 3'RACE, la transcripción odv-
e66 se detectó de 18 a 72 h p.i. (Fig. 1A). Análisis de Western Blot mostró que un antisuero pAb
anti-ODV-E66 reaccionó con una banda de proteína funcionando a un tamaño esperado de 76
kDa expresado de 24 a 96 h p.i. (Fig. 1B). Tomados en conjunto, nuestros datos confirmaron que
odv-e66 es un gen tardío de HearNPV.

3.2. Construcción de HearNPV recombinante eliminado y reparado odv-e66 Virus Se construyó

un bacmid HaVace66-KO eliminado por odv-e66 a través de recombinación homóloga como se
describe en materiales y métodos (Fig. 2A). Los clones positivos se autenticaron por PCR y
digestión con Hind III (datos no mostrados). Luego, utilizando el sistema Bac-to-Bac, HearNPV El
gen de polihedrina (ph) solo se introdujo en HaBace66-KO para generar HaBace66-KO-ph, o e66
y ph genes fueron insertados simultáneamente en HaBace66 − KO para generar HaBace66 − REP-
ph (Fig. 2B). Ambos recombinantes Se confirmó que los bácmidos eran correctos por análisis de
PCR (datos no mostrado).

3.3. HearNPV ODV-E66 no es necesario para la producción de BV Las células HzAM1 se

transfectaron con bacmids HaBace66-KO-ph, HaBace66-REP-ph y HaBac-egfp-ph para generar
virus recombinantes. La expresión de egfp se controló por microscopía de fluorescencia. No
obvio Se observaron diferencias en la expresión de egfp a las 96 h p.t. o 96 h Pi. entre los tres
virus (Fig. 2C). El análisis de Western blot fue realizado para confirmar la eliminación y
reparación de odv-e66. Como se esperaba, Se detectó ODV-E66 en células infectadas con
vHaBace66-REP-ph, vHaBac-egfp-ph o HearNPV a las 72 h p.i., pero no en las células infectadas
con vHaBace66 − KO-ph (Fig. 2D). Evaluar el impacto de la eliminación en Producción de BV, las
células HzAM1 se infectaron con vHaBace66-KO-ph o vHaBace66 − REP-ph con vHaBac-egfp-ph
como control positivo a un MOI de 5. Los ensayos de crecimiento en un solo paso fueron
realizados por TCID50, y los resultados mostró que vHaBace66-KO-ph tenía una cinética de
crecimiento y títulos similares como el virus reparado vHaBace66-REP-ph o el virus de control
vHaBac-egfp-ph (Fig. 2E).

3.4. La eliminación de ODV-E66 no afectó la oclusión de ODV en los poliedros. Se realizó una
microscopía electrónica de transmisión para investigar el impacto, si lo hay, de odv-e66 en la
morfogénesis de ODV. Células infectadas con vHaBace66 − KO-ph y vHaBace66 − REP-ph se
cosecharon a las 72 h p.i. y procesado para observaciones EM. Tanto vHaBace66 − KO-ph como
Las células infectadas con vHaBace66-REP-ph exhibieron signos típicos de baculovirus infección
como núcleos agrandados, un notable virogénico denso en electrones estroma (VS) y presencia
de nucleocápsides en forma de bastón (Fig. 3ª y B). Oclusión de ODV en OB en células infectadas
con vHaBace66-KO-ph (Fig. 3A) fue similar a los de las células infectadas con vHaBace66-REP-ph
(Fig. 3B). Los OB purificados a partir de larvas infectadas también fueron observados por EM y
los resultados confirmaron además que la eliminación de HearNPV odv-e66 no tuvo una
influencia obvia en la oclusión de ODV en OBs (Fig. 3C y D).

3.5. La eliminación de ODV-E66 disminuye la infectividad oral de HearNPV Para determinar el

efecto de la deleción odv-e66 sobre la infectividad oral de HearNPV, los bioensayos se
realizaron inicialmente por el método de gotas en 3er estadio larvas de H. armigera. Los
resultados mostraron que el valor LC50 de vHaBace66 − KO-ph es 2.6 veces más alto que el del
virus reparado vHaBace66 − REP-ph (Tabla 1). Cuando se realizó el experimento de bioensayo

con larvas de cuarto estadio, la diferencia en el valor de LC50 entre dos virus recombinantes se
hicieron más significativos, con el valor LC50 de vHaBace66-KO-ph fue 26 veces mayor que el del
virus reparado vHaBace66 − REP-ph, 10 veces más que en las larvas de tercer estadio (Tabla 1).

3.6. La destrucción de la PM rescata la infectividad oral de odv-e66 eliminado HearNPV Dado

que ODV-E66 tiene una actividad de condroitinasa y se propuso desempeñar un papel
importante en la destrucción del host PM durante la entrada de ODV (Sugiura et al., 2011, 2013;
Xiang et al., 2011b) calcofluor white, an agente conocido para destruir el PM, se utilizó en el
bioensayo larvario. El tratamiento con 1% de calcofluor blanco aumentó la mortalidad de
vHaBace66− KO-ph a un nivel casi equivalente de vHaBace66-REP-ph (Tabla 2). El resultado
mostró que la destrucción del PM rescató eficientemente el oral infectividad de vHaBace66− KO
− ph, lo que implica que el PM puede ser el objetivo de ODV-E66.

3. .7. HearNPV ODV-E66 contiene actividad de condroitina liasa La actividad condroitina liasa de
AcMNPV ODV-E66 ha sido caracterizado previamente (Sugiura et al., 2011). Por lo tanto
investigamos si HearNPV ODV-E66 también contiene condroitina liasa actividad. Según la
alineación de secuencia con AcMNPV ODV-E66, dos forma truncada de HearNPV ODV-E66 (23–
672) y HearNPV ODV-E66 (44-672) (Fig. 4A) se clonaron y ambos se expresaron en E. coli sistema
en formas solubles (datos no mostrados). La actividad condroitina liasa El ensayo mostró que
ambas proteínas truncadas podrían degradar sustrato CS y produce residuos de ácido
glucurónico insaturado (GlcUA) que tienen absorción a 232 nm (Fig. 4B). La versión más corta,
HearNPV ODV-E66 (44-672) mostró una mayor actividad de condroitina liasa que ODVE66 (23–
672) (Fig. 4B), que es similar al resultado de AcMNPV ODVE66 prueba de actividad enzimática
(Sugiura et al., 2011). el PM en el intestino medio larvario, las larvas de H. armigera del tercer
estadio fueron alimentadas con dos dosis diferentes de OB de vHaBace66-KO-ph y HearNPV. El
PM se eliminó de las larvas infectadas después de 4 h p.i. y observado bajo SEM. El PM de las
larvas infectadas de forma simulada tenía un aspecto bastante liso y estructura superficial
densa, incluso en la administración de dosis altas de virus (Fig. 5, panel izquierdo). Para las larvas
infectadas con vHaBace66-KO-ph, el PM tenía un superficie ligeramente rugosa en comparación
con la de las larvas infectadas simuladas (Fig. 5, panel central). En contraste, el PM de las larvas
infectadas con el El virus T de tipo salvaje (WT) HearNPV G4 tenía una superficie con fibroso
obvio estructuras (flechas rojas) y muchos poros pequeños (flechas blancas) comparados con el
de vHaBace66-KO-ph y grupos simulados (Fig. 5, derecha) panel). Nuestra especulación es que
durante la infección por el virus WT, ODV-E66 puede digerir los glicanos de las proteínas
estructurales de PM, lo que lleva a degradación adicional de las proteínas por el insecto intestino
medio endógeno proteasas (Wang y Granados, 1997, 2001), y la exposición de la estructura
fibrosa subyacente (pueden ser fibras de quitina, flechas rojas). Los los resultados sugirieron que
ODV-E66 está involucrado en la degradación de PM de las larvas intestino medio

Derramamiento salival del virus BK y

viremia en receptores de trasplante renal
Introducción

Actualmente, las pruebas de laboratorio de bioquímica sanguínea son La primera opción para el
seguimiento del paciente y para el monitoreo enfermedades Sin embargo, la saliva se ha
sugerido como un excelente material para diagnóstico y monitoreo, principalmente porque la
recolección de saliva es simple, indolora, barato y seguro tanto para pacientes como para
médicos personal. Además, la saliva es una fuente de material que Se puede recoger varias veces
al día, sin dañar el paciente 1.

El poliomavirus BK (BKPyV) tiene una alta prevalencia de infección asintomática en la población

normal y es capaz de causar disfunción renal en injertos trasplantados a través de la nefritis
asociada al virus BK, principalmente porque Estos pacientes están inmunocomprometidos.
Cribado para BKPyV a menudo revela viruria y / o viremia, que puede progresar a enfermedades
activas2-4. Los receptores de trasplante de riñón necesitan atención especial y atención en el
seguimiento del trasplante. El tratamiento de inmunosupresión es esencial para el
mantenimiento del trasplante de riñón, pero influye negativamente en el equilibrio entre viral
replicación y respuesta inmune celular. Esto lleva a un riesgo potencial de infecciones primarias
u oportunistas reactivaciones4,5. BKPyV causa el 95% de la nefropatía casos relacionados con el
poliomavirus, con el 5% restante siendo causado por el virus JC. La nefropatía deteriora el injerto
función, causando su falla prematura en 1% a 10%

de los pacientes con trasplante renal 6. Dado que BKPyV permanece latente en el tejido renal,
riñón los receptores de trasplantes son monitoreados con gran interés para la detección de virus
con el fin de prevenir abiertamente enfermedad clínica Diagnóstico precoz e inmunológico. la
recuperación es esencial para prevenir el rechazo de trasplantes en estos pacientes El cribado
no invasivo puede facilitar la detección de nuevos casos y monitorear previamente casos
conocidos2,6-8. Por lo tanto, es importante conocer el perfil de desprendimiento oral de BKPyV
en estos pacientes y para comprender la importancia clínica de esta excreción en saliva para
ellos. El objetivo de esta investigación fue para verificar la presencia de BKPyV en la saliva del
riñón receptores de trasplante y correlacionarlo con sangre viremia
material y métodos

Diseñar y estudiar población Se realizó un estudio transversal en el que los sujetos formaron
parte de una muestra de conveniencia del Unidad de Trasplante de Riñón de la Universidad de
São Paulo, São Paulo / SP, Brasil. Este estudio fue aprobado por el Comité local de ética de la
investigación según el protocolo número 0234/10 con todos los participantes firmando un
formulario de consentimiento informado. Se recopilaron datos demográficos, incluidos
información sobre género, edad y período posterior al trasplante en el momento de la
recolección de datos. Los criterios de inclusión. tenían más de 18 años, habían tenido riñón
trasplante solo independientemente del postrasplante tiempo, mientras que los criterios de
exclusión estaban utilizando medicamentos antivirales en los últimos tres meses antes de la
muestra recolección, ser VIH positivo o haber sufrido trasplante multi-visceral

Estudio de población involucrada 126 trasplante de riñón destinatarios Se recogieron 126

muestras de saliva, y de estos mismos pacientes, también se tomaron 52 muestras de sangre
recolectado (solo de aquellos que dieron su consentimiento para sangre colección). Todas las
muestras fueron recolectadas al mismo cita, al azar. Aproximadamente 3 ml de no estimulado

La saliva se recogió en un halcón de 50 ml. tubo mediante el método de drenaje, con el primer
minuto La colección se descarta. Cinco mililitros de sangre fueron recogido y puesto en un tubo
que contiene coagulación factor, y se separaron alícuotas de muestra de sangre para analizar
BKPyV. Todas las muestras se almacenaron a -80 ° C. Extracción y cuantificación de ADN
mediante el uso de PCR cuantitativa en tiempo real La detección y cuantificación de BKPyV
fueron realizado mediante una PCR en tiempo real y laboratorio los procedimientos se realizaron
en el Laboratorio de Virología del Instituto de la Universidad de São Paulo de Medicina Tropical
(IMT-USP) 2,3. Extracción de ADN se realizó utilizando la extracción de ADN QIAamp Kit QIAGEN,
según protocolo para RT-qPCR en el que se utilizan cebadores y sondas específicas para detectar
el gen que codifica la proteína Ag-T de la BKPyV, que resulta en un fragmento de 80 pb (Reenviar:
5-GAAACTGAAGACTCTGGACATGGA-3; Marcha atrás: 5-GGCTGAAGTATCTGAGACTTGGG-3;
Sonda BKPyV: CAAGCACTGAATCCCAATCACAATGCTC) 9.

Las sondas de reacción se marcaron con FAM (6-carboxifluoresceína) como colorante indicador
en el extremo 5 ', y con TAMRA (6-carboxitetrametilrodamina) como un apagador en el extremo
3 '. La reacción final fue preparado con 12.5 μl de TaqMan Universal PCR master mix (2x) (Applied
Biosystems®, Carlsbad, CA, EE. UU.), 0.5 μl de cada cebador (10 μm), 0.5 μl de sonda (5 μm) y 6
μl de agua DEPC. Los parámetros de reacción fueron 2 minutos a 50 ° C y 10 minutos a 95 ° C,
seguido de 45 ciclos (15 segundos a 95 ° C y 1 minuto a 60 ° C) utilizando una máquina de PCR
ABI 7300 (Applied Biosystems®, Carlsbad, CA, EE. UU.). Un plásmido patrón que contiene la
región codificante del antígeno T grande se usó como control para determinar el número de
copias por mililitro en la reacción final. El protocolo empleado tiene una alta sensibilidad
analítica, es decir, un límite de detección de 1000 copias por mililitro (cp / mL)

de sangre.

Análisis estadístico

Comparar la presencia de BKPyV en sangre y saliva, se utilizó la prueba de proporción binomial.

Los variables "tiempo posterior al trasplante después del riñón trasplante "y" cuantificación de
BKPyV en saliva y sangre "no presentaron distribución normal (Kolmogorov-Smirnov, p <0,001).
Para verificar el asociaciones entre derramamiento salival BKPyV y períodos posteriores al
trasplante (en meses), el Mann- Se utilizó la prueba de Whitney. La correlación de Spearman fue
Se utiliza para correlacionar la carga viral en la saliva y la sangre. de receptores de trasplante
renal. Los datos resultantes fueron analizados a través del software SPSS 17.0 (SPSS Inc.,
Chicago, IL, EE. UU.). Todas las pruebas fueron realizadas considerando un nivel de significancia
de 0.05.

Resultados

La edad media de los participantes fue de 51.11 ± 12.45. años, de los cuales 69 (54.8%) eran
hombres y 57 (45,2%) eran mujeres. La media posterior al trasplante el tiempo después del
trasplante renal fue de 4.80 + 6.04 meses. BKPyV se cuantificó en 126 muestras de saliva, con
una media de 4,761 + 11,105cp / mL (mínimo = 63; máximo = 55,241, mediana = 1,108), y en 52
muestras de sangre, con una media de 93,604 + 364,227cp / mL (mínimo = 80; máximo =
1,459,398, mediana = 1,255), con el último mostrando mayor cuantificación viral Solo 16/52
(30.8%) los participantes presentaron BKPyV en sangre, mientras que 59/126 (46.8%) excretaron
el virus en la saliva (p = 0.004) (Tabla 1). Se encontró desprendimiento de BKPyV en pacientes
con un período posterior al trasplante más corto (3.86 + 5.25, p = 0,103) (Tabla 2). Cincuenta y
dos pacientes habían emparejado muestras de sangre y saliva, y de estos, solo 11 (21.1%) tenían
viremia y desprendimiento salival de BKPyV al mismo hora. De estos 52 individuos, la carga viral
media en saliva fue de 1,079 + 2,916 cp / mL, y en sangre fue de 28.801 + 202.289. La carga viral
en la saliva fue correlacionado con la sangre de estas muestras, y se observó una correlación
débil entre la saliva derramamiento y viremia sanguínea de BKPyV (Spearman’s correlación =
0.193, p = 0.170).

Discusión

BKPyV se reactiva frecuentemente en el trasplante de riñón receptores debido a

inmunosupresión. En orina, el BKPyV tuvo una prevalencia entre 20.4% y 40% 7,8,10- 13, con
BKPyV viruria detectada en 4-5% de los receptores de trasplante de riñón. La monitorización por
PCR de BKPyV con muestras de orina y sangre es rápida y beneficiosa. método para prevenir
complicaciones renales a largo plazo cuidado de receptores de trasplante de riñón10,13,14. Sin
embargo, los fluidos orales (por ejemplo, saliva) han exhibido alta prevalencia de BKPyV, siendo
también eficiente detectado en comparación con orina y sangre 2. Además, porque la saliva
contiene varios marcadores biológicos que también se puede detectar en orina o análisis de
sangre, los fluidos salivales se pueden usar para detectar y controlar varias patologías con la
misma efectividad1,15. Aunque la saliva es un material potencial para el diagnóstico, También
es un medio importante de contaminación, que debe considerarse en el trasplante de riñón
pacientes Los estudios han demostrado que la prevalencia de BKPyV en la saliva de estos
pacientes alcanza el 91,7% 2, y se puede detectar en la saliva de VIH positivo pacientes también
16. Los fluidos orales exhiben una alta prevalencia de BKPyV y son igualmente eficientes en
comparación con la orina y sangre Cuando se usan fluidos orales en la detección ensayos para
detectar poliomavirus, los resultados son altamente positivo y especialmente indicado para
pacientes que no puede orinar Esta positividad en fluidos orales. ocurre incluso cuando el
paciente tiene viremia negativa, lo que indica que la saliva puede ser un medio temprano
detección de BKPyV2,3.

En nuestro estudio, el 46.8% de los participantes excretaron el virus en sus fluidos orales, que
es un porcentaje menor que la observada en la literatura. Enfermedades relacionadas con BKPyV
puede estar asociado con un sistema inmune específico deficiencia como resultado del uso de
inmunosupresores drogas3,17. El BKPyV se detectó en fluidos orales y infecciones, con su
replicación ocurriendo in vitro en células de las glándulas salivales, lo que justifica la presencia
de BKPyV en la saliva18. Estos resultados respaldan los nuestros, especialmente

cuando la presencia de BKPyV en la saliva del riñón los receptores de trasplantes son
significativamente mayores que en su sangre

En nuestro estudio, las cargas virales fueron mayores en sangre (93,604 + 364,227cp / mL) que
en la saliva (4,761 + 11,105cp / mL). A pesar de la presencia de valores atípicos, creemos que
hay fuertes indicios de que existen diferencias en la cuantificación entre saliva y sangre, lo que
significa que otros estudios deberían ser realizado para confirmar esta hipótesis. Un incremento
La replicación de BKPyV ocurre en inmunosuprimidos pacientes, lo que resulta en la destrucción
de infectados células uroepiteliales y aumento de la inmunidad inflamatoria células19. En
receptores de trasplante renal, esta destrucción afecta al 5-8% de los trasplantes de riñón y se
llama Nefropatía asociada a BKPyV, que puede provocar fracaso del injerto en los receptores
trasplantados18,20,21. En En este sentido, la saliva podría ser útil para detectar virus niveles
que predisponen al desarrollo de este tipo de nefropatía Sin embargo, nuestros resultados
demuestran que La saliva no es confiable para esta evaluación. Por lo tanto, Los estudios clínicos
y prospectivos son necesarios para confirmar esta hipótesis Una correlación débil entre la
cuantificación viral en Se observó saliva y sangre en nuestro estudio, mostrando dos
compartimentos diferentes e independientes de BKPyV replicación. Un estudio reciente de
poliomavirus miRNA La expresión en saliva ha demostrado que la cavidad oral es un región de
infección persistente de BKPyV, más frecuentemente que el plasma 22. El hecho de que no hubo
concordancia implica que la sustitución de las pruebas utilizadas tradicionalmente para No se
recomienda la detección de orina y sangre. Sin embargo, el uso de fluidos orales concomitantes
con otros fluidos mejora la detección positiva y es útil como prueba complementaria para
detectar poliomavirus2. Aunque este estudio sugiere que el desprendimiento de saliva de BKPyV
no se correlaciona con la enfermedad activa, Una de sus limitaciones era que no buscábamos
asociar la enfermedad activa con el desprendimiento salival de BKPyV. Por lo tanto, estudios
clínicos con métodos similares. se sugieren en pacientes con trasplante renal con un enfermedad
activa La eliminación de BKPyV se encontró en pacientes con menor período posterior al
trasplante, pero sin estadísticas significado. Sin embargo, este resultado es consistente con el
concepto de que las infecciones en pacientes con trasplante renal son más común en los
primeros meses después del trasplante,

cuando tienen inmunosupresión máxima5,23. El enjuague bucal con Listerine® se ha utilizado

como Un método alternativo para recolectar saliva, siendo efectivo en preservación viral para
análisis por PCR en tiempo real.

Un estudio mostró una alta frecuencia de detección y cuantificación de BKPyV con enjuague
bucal (23 de 46 sujetos), lo que sugiere que dicho método también es una buena alternativa
para detectar y monitorear esto virus2. Utilizamos el método de saliva no estimulada
colección, y los resultados fueron similares a los de la colección de enjuague bucal con
Listerine® con respecto a análisis a través de PCR en tiempo real. Estos resultados sugieren que
la forma de recolección de saliva no tiene influencia en El análisis de laboratorio para BKPyV.

Conclusión

En conclusión, BKPyV fue más común en la saliva. que en la sangre, especialmente en los
trasplantados recientemente pacientes Una correlación débil entre el desprendimiento de
saliva y se observó viremia en sangre. Por lo tanto, este estudio sugirió que, aunque la saliva
excreta más BKPyV que la sangre, no existe una correlación confiable entre derramamiento
salival y viremia sanguínea, mostrando dos compartimentos independientes de replicación
viral. Expresiones de gratitud Este estudio fue apoyado por el Gobierno de Brasil a través del
Consejo Nacional de Tecnología Desarrollo (CNPq) según números de subvención 443004 /
2014-5 y 455173 / 2014-1, por el São Paulo State Research Support Foundation (FAPESP)

según el número de concesión 2015 / 07727-9, y por la Coordinación de Educación Superior y

Posgrado Capacitación - Brasil (CAPES) - Código de Finanzas 001.

Evaluación clínica y radiográfica oral en

pacientes con virus congénito del Zika
Introducción

Virus Zika (ZIKV), un mosquito emergente flavivirus, fue aislado inicialmente de un mono Rhesus
en el bosque de Zika en Uganda en 1947. El virus es transmitido por varias especies de mosquitos
Aedes. En 2015, hubo un aumento dramático en los informes de ZIKV infección en las Américas.
Brasil es el país más afectado por esta enfermedad, con estimaciones preliminares de 440,000
a 1.3 millones de casos de ZIKV autóctono infección reportada hasta diciembre de 2015.1 El
cuadro clínico clásico de la infección por ZIKV se parece al dengue y al chikungunya. Los síntomas
clínicos conocidos son: fiebre, dolor de cabeza, artralgia, mialgia y erupción maculopapular, un
complejo de síntomas que dificultan la diferencia diagnóstico.

La evidencia de la relación entre ZIKV infección y anomalías en el nacimiento cerebral, a saber,

microcefalia, se describió por primera vez en enero de 2015 y ha estado creciendo.2 Las celdas
directas dirigidas por ZIKV En el feto humano en desarrollo no están claros. Reciente Los estudios
han demostrado que una cepa del ZIKV, MR766, que se transmite en serie del mono y el
mosquito células, infecta eficazmente las células progenitoras neurales humanas (hNPC)
derivadas de células madre pluripotentes inducidas. Como la cara está formada principalmente
por el primer branquial arco, que se divide en maxilar y mandibular procesos, algunos cambios
en el oral y craneofacial el desarrollo puede ocurrir, porque las infecciones, como la sífilis, son
contratados por la madre durante el embarazo4-6. Además de la microcefalia, otros cambios
relacionados a la infección congénita por ZIKV se han detectado en niños infectados, como
lesiones oculares graves, pérdida de audición, falta de tono muscular y artrogriposis. Por esta
razón, los expertos han sugerido la creación. del término "síndrome congénito del virus Zika"
7,8. En enero de 2017, el boletín epidemiológico de El Ministerio de Salud mostró un total
nacional de 9.770 casos de microcefalia reportados desde marzo hasta octubre de 2016. De
estos, 2,334 casos fueron confirmados ser infecciones por ZIKV, mientras que los demás
permanecieron bajo investigación o fueron descartados.9 En el estado de Ceará, el boletín
epidemiológico de la Secretaría de Estado de El Gobierno del Estado de Ceará publicó en mayo
2017 mostró 163 casos confirmados de microcefalia sugerente de infección congénita por ZIKV,
mientras que los otros permaneció bajo investigación o fueron descartados. Cincuenta y siete
los casos confirmados se concentraron en la capital de Fortaleza.10

Recientemente, los estudios mostraron alteración en el cronología de la primera erupción del

diente caducifolio en niños brasileños con microcefalia asociada con ZIKV Además, se ha
sugerido que estos niños tienen grandes dificultades en el cuidado dental microcefalia
debida.11,12 Entonces, considerando la corriente panorama que implica una severa
propagación del ZIKV síndrome, el objetivo de este estudio fue investigar posibles
malformaciones en el hueso, hueso y / o dental tejidos en pacientes con ZIKV congénito por
clínica y evaluación de rayos x.

Metodología

Este estudio se dividió en dos fases: una inicial estudio observacional transversal que incluyó 30
niños nacidos con ZIKV congénito y microcefalia; y un estudio de casos y controles en el que más
30 controles se analizaron niños nacidos sin ZIKV congénito para comparacion. El diagnóstico de
microcefalia se basó en la directriz del Ministerio de Salud de Brasil, que define a los bebés con
microcefalia como los recién nacidos con 37 semanas o más de edad gestacional y cefálica
perímetro ≤31.5 cm para niñas y ≤31.9 cm para niños.13 Todos los niños fueron derivados de
servicios médicos. a la Escuela de Odontología Centro Universitario Christus (Unichristus)
departamento de atención dental para pacientes con necesidades especiales. Una muestra de
conveniencia de 30 niños con ZIKV fue evaluado. Después de la formulario de consentimiento
informado se obtuvo, los niños fueron examinados y seguidos durante 24 consecutivos meses.
Los criterios de inclusión fueron niños con ZIKV y microcefalia, nacido a término y con
disponibilidad para evaluaciones orales cada tres meses durante el tiempo de seguimiento Niños
con microcefalia debido a Se excluyeron otras causas. La recolección de datos comenzó en Abril
de 2016 y finalizó en abril de 2018. Después de la anamnesis y la verificación del pasado médico
historia, se realizó un examen clínico. Posible cambios de tejidos blandos y duros y desarrollo
dental, cronología de la erupción y posibles malformaciones, fueron observados. Primero, un
examen extrabucal de la cervicofacial región [palpación de los ganglios linfáticos cervicofaciales,
(posición del sujeto: el niño se sentó en el regazo de los padres al frente del examinador)] y
examen de glándulas parótidas (posición del sujeto: niño acostado en una silla dental con la
cabeza ligeramente inclinada hacia atrás). Durante El examen intraoral, el niño permaneció
acostado en el regazo de los padres para inspección visual y bidigital palpación. Dado que las
deficiencias neurológicas causaron por microcefalia desequilibra la postura lingual, esto el
resultado se evaluó cuando el niño estaba en reposo posición14 (Figuras 1 y 2).
En bebés con infección congénita por ZIKV, radiografías fueron utilizados para diagnosticar
posibles anomalías dentales en el número, forma o posición de los dientes y visualizar la
extensión de los posibles defectos alveolares óseos en los pacientes Una técnica periapical
modificada fue realizado con una placa de fósforo para adultos (número 2) en una posición
oclusal, en un intento de visualizar una imagen más grande cantidad de elementos dentales y
huesos adyacentes en Ambos arcos. Se posicionó el eje largo de la película. en la cavidad oral;
perpendicular a la mediana sagital plano y estabilizado con las comisuras labiales, con la
asistencia de los padres.15 Esta técnica de modificación fue adoptado como un método fácil que
requiere menos cooperación infantil Se realizaron dos radiografías. por niño, uno para el arco
maxilar y otro para el arco mandibular Para radiografías periapicales del arco maxilar, el haz
central de radiación dirigido a la glándula región con una angulación horizontal de 0 grados y
una angulación vertical de 65 grados. Para la mandibular arco, la viga central se dirigió a la
mediana región del piso vestibular con angulación horizontal de 0 grados y una angulación
vertical perpendicular al eje largo de la placa. Los pacientes fueron colocados en el regazo de los
padres, usando toda la protección necesaria barreras para realizar las pruebas correctamente.15
Se sabe que el uso de imágenes digitales es más beneficioso que el uso de imágenes
convencionales, tanto para operadores de exámenes y para pacientes. Dado que Los receptores
digitales son más sensibles a la radiación, un se debe usar una dosis más baja de radiación para
reducir El riesgo de posibles efectos nocivos de la radiación. para pacientes La facilidad de
almacenamiento de las imágenes y la capacidad de alterar el brillo y el contraste para mejorar
las imágenes y el diagnóstico también son importantes factores; 16 en este contexto, el
dispositivo utilizado fue el Escáner de placa de imagen digital Express (Express, Instrumentarium
Dental Inc., Willwaukee, Wisconsin, ESTADOS UNIDOS). El tiempo de exposición para cada salida
de rayos X fue 0.25 s. Después de la adquisición y el procesamiento de la imagen, el Se utilizó el
software Cliniview para la interpretación de imágenes. y ajustes de brillo y contraste según sea
necesario En este estudio, un retraso en la primera erupción dental fue considerado si los niños
tenían 9 meses de edad o más en

El momento de la primera erupción. Estos datos se basaron en estudios sobre las edades medias
de erupción: para el incisivos centrales inferiores la edad media de erupción fue entre 7 y 9
meses; para los incisivos laterales inferiores fue entre 12 y 14 meses; para la parte superior
incisivos centrales fue entre 9 y 11 meses; y para los incisivos laterales superiores fue entre 10
y 12 meses.17-19 Los datos categóricos se expresaron como el absoluto. y porcentaje de
frecuencia y en comparación con el La prueba de chi-cuadrado de Pearson y los datos
cuantitativos se expresaron como la media y la desviación estándar y comparado con la prueba
t de Student. Multinomial La regresión logística se utilizó en variables que mostraron asociación
significativa en la fase de control de casos de la estudio a partir de factores clínicos ajustados
que pueden interferir en la administración oral y resultados sistémicos. Todos los análisis fueron
realizados con el paquete estadístico de software para lo social Ciencias versión 17.0 para
Windows, adoptando un 95% nivel de confianza. El estudio fue aprobado por el Comité de Ética
de la institución educativa de los participantes, según al protocolo CEP: 60740616.4.0000.50.49.
Un libre y el formulario de consentimiento informado fue leído y firmado por los padres de los
participantes antes de la investigación fue realizado.

Resultados

Resultados de la observación transversal estudiar Entre los pacientes evaluados, 14 (46,7%)

estaban mujeres y 16 (53,3%) eran hombres. Al final de estudio, 18 niños (60%) tenían menos
de 25 meses de edad y 12 niños (40%) tenían 25 meses o más. La edad media de la primera
erupción dental de los niños. en este estudio fue de 10.8 ± 3.8 meses, con casi dos tercios de los
niños (n = 18, 60%) experimentan erupciones de su primer diente después de los 9 meses de
edad. En en todos los casos, las primeras erupciones fueron del centro inferior incisivos (Figura
3 y Tabla 1). Además, el último niño en presentar una erupción Tenía 19 meses de edad. Por otra
parte, tres niños que tenían 12 meses de edad no tenían dientes en sus cavidades orales Al final
del estudio. Doce niños en la muestra. tuvieron sus primeras erupciones hasta los 9 meses de
edad (Figura 3).

Ningún paciente tenía paladar hendido o lesiones de tejidos blandos. Solo un niño (3.3%) tenía
hiperplasia del alveolar cresta. Más de la mitad de los niños (n = 18, 60%) tenía frenillos labiales
o linguales cortos. Nueve niños (30%) tenía una postura lingual inadecuada en reposo, y dos
niños (6.7%) tenían micrognatia. Diez niños (33.3%) tenían bóvedas palatinas estrechas. Cuatro
niños (13.3%) tuvo cambios en la forma y / o número de dientes. Tres pacientes mostraron
agenesia de hojas caducas / incisivos permanentes inferiores y superiores y un paciente
presenta microdoncia asociada a cúspides accesorias (incisivo central superior izquierdo).
Cuatro niños (13.3%) tuvieron una secuencia alterada de erupción dental Doce niños (56.7%)
presentaron espasmos, nueve (30%) tuvieron convulsiones y cinco (16.7%) tenía otras
comorbilidades como audición severa y problemas visuales (Figura 3) En términos de retrasos
en la primera erupción dental, solo hubo una asociación significativa en pacientes con postura
lingual inadecuada en reposo. Nueve niños habían alterado las posturas y ocho de ellas tenían
su erupciones tardías de los primeros dientes (Figura 3 y Tabla 1). La frecuencia de postura
inadecuada fue de 7.3 (95% IC = 1.1 - 68.9) veces mayor en pacientes con retraso erupciones
dentales que en pacientes que no tuvieron retraso erupciones Los cambios en la secuencia de
erupción dental fueron encontrado en 4 niños, en quienes los primeros molares de hoja caduca
estalló antes de que todos los incisivos inferiores estuvieran presentes en La cavidad bucal.

En este estudio, la micrognatia se asoció con retrasos en la primera erupción dental. Una
asociación Se observó un 38% más de micrognatia en pacientes quien presentó retraso en la
primera erupción dental cuando en comparación con pacientes sin demora. Adicionalmente,

pacientes con mala formación dental tuvieron retrasos en el primera erupción dental que fue
en promedio 20% mayor en comparación con pacientes sin esta afección. Ahí no hubo diferencia
estadísticamente significativa entre el tiempo medio hasta la primera erupción dental y la otra
variables Las pacientes femeninas tuvieron una alta prevalencia de bóvedas palatinas estrechas
en comparación con el macho pacientes (p = 0,010). Las otras variables no mostraron asociación
con el sexo (tabla 1).

Pacientes con frenillos labiales y / o linguales cortos. fueron remitidos a un departamento

especializado en pediatría odontología para tener una frenectomía o una frenotomía realizado,
cuando se indique. Resultados del estudio de casos y controles Un total de 30 bebés nacidos sin
ZIKV fueron utilizado para la comparación de características clínicas y cálculo de la influencia de
ZIKV en la prevalencia de alteraciones dentales. No hay diferencia estadística entre distribución
por sexo en los dos grupos (p = 1.000) y la mayoría de los niños eran niños en ambos grupos. En
el fin de la recopilación de datos, la edad del grupo de control fue significativamente menor que
el grupo ZIKV (p = 0.015). La edad a la que ocurrió la primera erupción dental. fue
significativamente más tarde en el grupo ZIKV (10.8 ± 0.7 meses) en comparación con el grupo
control (6.3 ± 0.3 meses) (p <0,001) (Figura 4). La prevalencia de la erupción tardía fue de 43.5
(IC 95% = 5.2 - 363.7) veces mayor en el grupo ZIKV que en el grupo control (n = 1, 3,3%) (p
<0,001). Ningún paciente tenía paladar hendido o blando lesiones tisulares, similares al grupo
control (p = 1.000); y ningún niño en el grupo control mostró hiperplasia de la cresta alveolar,
similar al grupo ZIKV en este parámetro (p = 1.000) (Tabla 2). Los frenillos labiales o linguales
cortos fueron 4.9 (IC 95% = 1.6 - 15.1) veces mayor en el grupo ZIKV que grupo control (p =
0.004), postura lingual inadecuada en reposo mostró una prevalencia de 26.9 (IC 95% = 1.5 -
488.7) veces mayor en niños con ZIKV (p = 0.002) y la micrognatia no fue diferente para el grupo
control (p = 0,492). Las bóvedas palatinas estrechas fueron 14.5 (IC 95% = 1.7 - 122.5) veces
mayor en bebés con infección congénita por ZIKV y cambios en la forma y / o número de dientes
no mostró diferencia en comparación con el grupo control (p = 0.112) (Tabla 2).

Los espasmos y las convulsiones fueron significativamente más frecuente en bebés con infección
congénita por ZIKV con un prevalencia 79.1 (IC 95% = 4.4. - 1414.0) y 26.9 (IC 95% = 1.5 - 488.7)
más alto que el grupo control (p <0.001 y p = 0,003, respectivamente). Otras comorbilidades
como como problemas auditivos y visuales severos no diferían del grupo de control (p = 0.052)
(Tabla 2).
Resultados del análisis multivariante

En el análisis multivariado (ajuste por edad) el factores más prevalentes en bebés con ZIKV
congénito infección fueron erupción tardía (p = 0.006) y estrecha bóvedas palatinas (p = 0.008).
Los odds ratios ajustados fueron 26.6 (IC 95% = 2.5 - 279.5) y 24.8 (IC 95% = 2.3 - 270.1) más alto
que en el grupo de control, respectivamente. Los las alteraciones sistémicas no mostraron
diferencias significativas en ZIKV y grupos de control cuando se ajusta por edad (Tabla 3). Por lo
tanto, la edad es un factor determinante de alteraciones sistémicas, desarrollo de corto labial o
frenillos linguales y postura lingual inadecuada en reposo mientras que la erupción retrasada y
las bóvedas palatinas estrechas son independientemente más frecuente en bebés congénitos
Infección por ZIKV (tabla 4).

Discusión

Este es el primer estudio de dos fases sobre ZIKV que consiste en un estudio observacional
transversal y Un estudio de casos y controles que evaluó oral y dental cambios en niños con ZIKV
y microcefalia. La principal limitación de este estudio es la dificultad de reclutar grandes
cantidades de pacientes, ya que el total el número de pacientes en la ciudad de Fortaleza es bajo
(N = 56) Además, estos pacientes presentan una gran dificultad para acceder al servicio de salud,
así como dificultad durante los exámenes y la evaluación de rayos X debido a deterioro
neurológico. Sin embargo, este estudio mostró algunas contribuciones iniciales relevantes sobre
el desarrollo de estructuras orales en bebés con ZIKV. La literatura brasileña existente, de
acuerdo con la literatura mundial indica que la edad promedio de la primera erupción dental es
de 9 meses y un retraso en la erupción se considera después de este período.17 En este estudio,
considerando niños congénitos de ZIKV, aproximadamente dos tercios de los pacientes (n = 18,
60%) tuvieron erupciones del primer diente después de los 9 meses de edad. En el control
grupo, algunos pacientes tuvieron retrasos dentales considerables,

con erupciones a los 15, 17 y 19 meses.

El resultado más significativo en este estudio fue el retraso en la erupción dental, que fue 26.6
veces más prevalente en el grupo ZIKV que en el grupo control, con un promedio
significativamente más alto para la primera erupción. La sugerencia de este estudio es que los
retrasos en la odontología

erupción están asociadas con ZIKV congénito síndrome. Una de las hipótesis de por qué
retrasado la erupción dental ocurre debido al fracaso de la precisión

mecanismos de desarrollo de la dentición como resultado de la infección de células progenitoras

neurales humanas por el ZIKV, que culmina en microcefalia y puede afectar

Los procesos fisiológicos para la erupción4,6 La bóveda palatina estrecha fue 24.8 veces más
frecuente en el grupo ZIKV que en el grupo control, afectando preferentemente a las niñas.
Además, el la postura lingual inadecuada en reposo fue más frecuente en niños con ZIKV con
erupción dental tardía. Los la bóveda palatina estrecha puede provocar una postura oral
inadecuada debido a la hipotonía de la musculatura orofacial. El ZIKV infecta las células
progenitoras neurales humanas. (hNPC) derivadas de células madre pluripotentes inducidas que
conducen a alteraciones neurológicas.3 Se sugiere que las alteraciones neurológicas conducen
a hipotonía de musculatura orofacial, seguida de lengua inadecuada postura, y que resulta en
un pobre reflejo de deglución, y respiración bucal frecuente.20,21 Cuando se deja la boca
entornado por largos períodos, existe una limitación de la adecuada crecimiento transversal del
maxilar, que conduce a una tendencia hacia atresia maxilar y paladar ojival22,23 En términos de
la existencia de otras anormalidades, un postura lingual inapropiada en reposo se observó en 9
de los 30 niños ZIKV y era significativamente más prevalente que en el grupo control. De estos
9 niños, 8 también tuvo erupciones dentales retrasadas (p = 0.047) (Figura 3) Este hallazgo puede
estar relacionado con la presencia. de una afección neurológica más grave, como microcefalia;
así, además de una inadecuada postura lingual en reposo, un retraso en el primer dental se
produce erupción Las estructuras de la cara son principalmente compuesto de células derivadas
de la cresta neural de la embrión.6,20,21

Más de la mitad de los niños tenían labio corto o frenillos linguales con una prevalencia 4.9 veces
mayor en el grupo ZIKV que en el grupo control. Sin embargo cuando esas variables se ajustaron
por edad en multivariante análisis, la asociación no fue significativa. Los puede ocurrir
prevalencia de frenillos labiales o linguales cortos en recién nacidos, pero tiene una incidencia
significativamente menor en niños mayores.24 Porque este estudio evaluó el ZIKV pacientes por
un corto período de tiempo, los resultados no pueden garantizar que estas anormalidades de
los tejidos blandos persistir a lo largo de los años. Aunque no hubo diferencia significativa entre
el grupo control, 4 niños después de clínica y Las evaluaciones de rayos X mostraron alteraciones
en la forma y/o número de dientes o cambio en la secuencia del diente erupción. Tales
ocurrencias también pueden estar vinculadas al ZIKV infección de células que causan el
desarrollo de dental tejidos, afectando así el correcto desarrollo de la dientes, tanto en forma
como en número.4,6 Adicionalmente, considerando las otras características examinado, como
la presencia / ausencia de labio leporino / paladar, lesiones de tejidos blandos, hiperplasia de la
cresta alveolar y micrognatia, sin hallazgos concluyentes relacionados con Se observó infección
por ZIKV. Teniendo en cuenta que el virus infecta los nervios humanos células progenitoras y
que estas mismas células son responsable de migrar y formar el oral y estructuras faciales
durante la embriogénesis, 4 más las complicaciones pueden ocurrir tarde en el curso de la
enfermedad;

por lo tanto, los niños serán seguidos por medio y largo plazo períodos para monitorear el
crecimiento y el desarrollo de sus estructuras orales. Así, en el futuro, un completo crecimiento
del cráneo y facial y perfil de desarrollo relacionado al síndrome congénito ZIKV se propondrá.

Conclusiones

Los resultados obtenidos en este estudio demuestran que los niños con síndrome congénito del
ZIKV mostraron una mayor tendencia a retrasar la erupción de su primer diente deciduo, postura
inadecuada de la lengua, bóvedas palatinas estrechas y cortas labiales y linguales frenillos
Aunque los hallazgos son preliminares, el presencia de cambios dentales en el número y la forma
de dientes y alteraciones en la secuencia de erupción son Otro hallazgo importante de este
estudio.