Estrategias mejoradas de escalamiento de biorreactores

Abstracto. La ampliación efectiva es esencial para un bioprocesamiento exitoso. Si bien es

deseable mantener tantos parámetros operativos constantes como sea posible durante la
ampliación, el número de parámetros constantes realizables está limitado por los grados de
libertad en el diseño de la operación a gran escala. La ampliación de las fermentaciones
aeróbicas a menudo se lleva a cabo sobre la base de un coeficiente de transferencia de oxígeno
constante, k L a, para garantizar la misma tasa de suministro de oxígeno para apoyar el
crecimiento y el metabolismo normales de las poblaciones de células altas deseadas. En este
artículo, se propone reemplazar el criterio de aumento de escala de kL constante por un
criterio más directo y significativo de velocidad de transferencia de oxígeno igual a un valor
predeterminado de concentración de oxígeno disuelto. Esto se puede lograr usando diferentes
presiones parciales de oxígeno en las corrientes de gas influyente para diferentes escalas de
operación. Por lo tanto, se agrega un grado más de libertad, es decir, presión parcial de
oxígeno en fase gaseosa, al proceso de aumento de escala. En consecuencia, un factor
operativo más se puede mantener constante durante la ampliación. Se puede utilizar para
regular el consumo de energía en fermentadores a gran escala por razones económicas o para
describir la mezcla de fluidos con mayor precisión. Se dan ejemplos para mostrar que los
resultados de optimización logrados en el estudio a escala de banco se pueden traducir al
fermentador a escala de producción con más éxito con solo un pequeño cambio en la presión
parcial de oxígeno en fase gaseosa empleada en la operación a escala de banco.
Lista de símbolos
a m2 / m 3 Área interfacial específica de gas / líquido
C z moles / m 3 Concentración de oxígeno disuelto en fase líquida a granel
C * mol / m 3 Concentración de equilibrio de oxígeno en la interfaz gas / líquido
D i m Diámetro del impulsor
D T m Diámetro del biorreactor
H L mole / m 3 - atm constante de la ley de Henry
k L m / s Coeficiente de transferencia de masa en fase líquida
N 1 / s Velocidad de agitación del impulsor
N, - Número de impulsores
OTR moles / s - m 3 Velocidad de transferencia de oxígeno por unidad de volumen del medio
Pg kW Potencia de entrada en fermentación aireada
Po kW Potencia de entrada en fermentación sin gas
pg atm Presión parcial de oxígeno en fase gaseosa
Q m3 / s Caudal volumétrico de gas
Re i Impeller número de Reynolds
TQ Joule Torque aplicado al eje del mezclador
V m 3 Volumen líquido
v s m / s Velocidad superficial del gas
# kg / m "s Viscosidad del líquido
kg / m 3 Densidad líquida

1. Introducción
Los bioprocesos generalmente se desarrollan en tres etapas o escalas:
(1) Banco o escala de laboratorio, donde se llevan a cabo los procedimientos básicos de
detección; (2) planta piloto, donde se determinan las condiciones óptimas de operación; y (3)
escala planta, donde el proceso se lleva a buen término económico. Ampliar significa
reproducir en equipos a escala de planta los resultados de una fermentación exitosa realizada
en equipos a escala de laboratorio o piloto [1]. El proceso de ampliación influye directamente
en la capacidad de producción y la eficiencia de un bioproceso.

2 Criterios de ampliación
Las fermentaciones en general pueden evaluarse mediante las siguientes características
físicas: tiempo de mezcla, cizallamiento, pH, transferencia de calor y transferencia de masa.
Aunque las características físicas están relacionadas entre sí, en la escala y el diseño del
reactor, los aspectos de tiempo de mezcla, cizallamiento y transferencia de masa se acoplan,
mientras que el pH y la transferencia de calor [2] se consideran por separado. A diferencia
de la transferencia de masa que tiene lugar en todo el caldo, la transferencia de calor se
produce solo en las superficies límite del intercambio de calor. Es posible proporcionar la
capacidad de transferencia de calor requerida de un fermentador a gran escala mediante
métodos independientes de la ampliación del proceso, como el uso de un refrigerante en lugar
de agua de enfriamiento o el uso de un intercambiador de calor externo. En consecuencia, la
capacidad de transferencia de calor igual tradicionalmente no se ha utilizado como base para
traducir los resultados experimentales entre diferentes escalas de operación. Del mismo
modo, se puede lograr un control adecuado del pH de forma independiente mediante la
adición automática de ácidos y bases concentrados en sistemas de fermentación con un
mecanismo de dispersión adecuado. Por lo tanto, el pH no restringe el aumento de escala.

Las características del proceso que se ha sugerido que se mantengan constantes durante la
ampliación incluyen [3-13]:
1. Geometría del reactor;
2. coeficiente de transferencia de oxígeno volumétrico, k L a;
3. cizallamiento máximo;
4. entrada de energía por unidad de volumen de líquido, Po / ld
5. caudal volumétrico de gas por unidad de volumen de líquido,
O / v o VVM;
6. velocidad superficial del gas, v ~;
7. tiempo de mezcla;
8. número de Reynolds del impulsor, Rei = ~ ND ~ / #, y
9. factor de impulso.

Para combatir los problemas de mezcla pobre en fermentadores grandes, especialmente con
sistemas viscosos no newtonianos, Fox y Gex [4] propusieron emplear tiempos de mezcla
iguales en fermentadores de diferentes "escalas". Aunque es importante para reacciones
químicas rápidas, el requisito de una mezcla constante el tiempo es innecesario para
fermentaciones normales que implican reacciones biológicas lentas Además, se ha
demostrado que la entrada de potencia volumétrica requerida para mantener el tiempo de
mezcla igual aumenta a medida que la potencia de 2/3 del volumen del sistema [5] y puede
volverse prohibitiva a escala -up. La experiencia demuestra que la entrada de energía así
determinada es mucho más de lo necesario para la ampliación práctica. Una reducción de la
entrada de energía volumétrica con el aumento de la escala del sistema en la práctica real se
ha confirmado en un estudio de plantas de fermentación europeas [6] Los criterios 8 y 9,
sugeridos por Rushton [7] y Blakebrough y Sambamurthy [8] respectivamente, generalmente
no han funcionado para las fermentaciones. Una razón principal es que no se considera Se da
efecto al efecto de la aireación en los resultados del proceso. En consecuencia, solo los
criterios 1-6 se consideran comúnmente para la ampliación de biorreactores.

El criterio 1 se basa en el hecho de que casi todas las correlaciones empíricas o semiempíricas
existentes para la ampliación se desarrollan experimentalmente con reactores
geométricamente similares de diferentes escalas. Al traducir los resultados experimentales
entre reactores con diferentes geometrías, uno debe considerar la validez de las correlaciones
elegidas de la literatura y la necesidad de desarrollar o modificar las correlaciones para la
situación especial. Para el escalado no geométrico, Oldshue ha sugerido un rango de DI / DT,
la relación entre el diámetro del impulsor y el diámetro del fermentador, capaz de entregar
una dispersión de gas aceptablemente buena.
El rendimiento final de la mayoría de las fermentaciones aeróbicas es a menudo limitado por
oxígeno. Para asegurar velocidades de transferencia de oxígeno iguales en varias escalas de
operación, el aumento de escala de las fermentaciones aeróbicas se realiza más comúnmente
con el criterio de constante k L a. El criterio 3 es de importancia crítica para las
fermentaciones de organismos sensibles al cizallamiento. Por ejemplo, se ha encontrado que
las fermentaciones miceliales se ven afectadas por el cizallamiento o el valor absoluto de la
velocidad de la punta del impulsor [9]. Se ha utilizado la misma potencia por unidad de
volumen de líquido (Po / V) en muchas fermentaciones de antibióticos como parámetro
primario de aumento de escala. Típicamente, se utiliza un valor Po / V de 1.0 a 2.0 kW / m 3
[10, 11]. Se ha encontrado que es la regla de ampliación más exitosa para mezclar en
operaciones sensibles al cizallamiento, como la dispersión de gases en líquidos, que es una
de las características más importantes de las fermentaciones aeróbicas [5, 12].
Los criterios 5 y 6 abordan la importancia de la tasa de aireación para aumentar las
fermentaciones aeróbicas. El caudal de gas volumétrico por unidad de volumen de líquido
(VVM), debido a su influencia en la transferencia de masa en biorreactores sometidos a
aireación de burbujas sin agitación mecánica [10], ha sido aceptado como un criterio de
escalamiento tradicional incluso para recipientes con agitación mecánica [3] . Por otro lado,
la velocidad superficial del gas también es un factor importante en el diseño del biorreactor.
Afecta fuertemente la energía de mezcla requerida para dispersar la corriente de gas y, en
todos los casos, tiene un límite superior antes de que comience la sobrecarga del impulsor o
la acción de expulsión de líquido [13]. El límite superior de v s depende en gran medida del
sistema. De acuerdo con Cooper et al. [15], la sobrecarga ocurre a vs> 2.5 x 10 -2 m / s para
los impulsores de disco compacto. Cuando se sobrecarga, el impulsor no puede dispersar
todo el gas suministrado, se produce un cortocircuito, el gas se eleva a medida que grandes
burbujas salen a la superficie y disminuye la acción de bombeo del impulsor.
Desafortunadamente, los criterios 5 y 6 son contradictorios entre sí cuando se aplican a la
ampliación de biorreactores geométricamente similares. Si es deseable mantener una VVM
igual, entonces la velocidad superficial del gas a través del recipiente aumentará directamente
con la relación de escala y, en consecuencia, puede conducir a la sobrecarga del impulsor o
al estallido del líquido. Por lo tanto, la elección y / o el compromiso entre los criterios 5 y 6
deben sopesarse cuidadosamente para el proceso individual involucrado.

3 Estrategias de escalamiento convencionales

Si bien todos estos criterios son importantes, se ha señalado que cuando se lleva a cabo una
estrategia de escalamiento particular manteniendo constante un conjunto específico de
parámetros, otros parámetros no pueden controlarse y pueden cambiar sustancialmente de
manera inesperada [14, 16]. Esto puede tener efectos no deseados en el rendimiento, porque
hay muchos factores que afectan el crecimiento microbiano y / o la formación del producto.
Obviamente, primero se debe analizar el bioproceso y enumerar las características físicas que
se desean mantener constantes durante la ampliación en el orden de importancia para el
rendimiento del bioproceso. Sin embargo, el número de factores realizables está limitado por
los grados de libertad disponibles en la ampliación del proceso. En general, se han reconocido
tres grados de libertad. Ellos son: N, la velocidad del impulsor; Q, el caudal volumétrico de
gas; y Di / D T, la relación del diámetro del impulsor al diámetro del fermentador (o, en un
sentido más amplio, la geometría del reactor). En consecuencia, el número máximo de
criterios que se pueden mantener constantes en una estrategia de ampliación convencional es
tres. Por ejemplo, las siguientes combinaciones de criterios de ampliación han sido sugeridas
en la literatura:
Combinación I [~]:
- Similitud geométrica (o constante DI / DT), constante k L a y constante Q / V (o VVM);
- N determinado por la correlación k L a.

Combinación 2 [1]:
- Similitud geométrica, ICE a constante y cizallamiento máximo constante (o velocidad de
punta del impulsor constante NDi);
- Q calculado a partir de la correlación k z a.

Combinación 3 [3]:
- Constante kL a, velocidad constante de la punta del impulsor NDi y Q / V constante;
- D t / D T ajustado dentro de los límites sugeridos por Oldshue [141.
Si bien se pueden generar otras combinaciones a partir de la lista anterior de criterios de
ampliación, es evidente que la constante k L a se ha incluido en todos los enfoques anteriores
informados en la literatura. Sin embargo, se han realizado sacrificios en otros factores de
diseño importantes, como la similitud geométrica, la sensibilidad al cizallamiento de los
organismos y la velocidad superficial del gas en vista de la sobrecarga del impulsor o la fuga
de líquido. Además, la entrada de potencia, que influye fuertemente en el costo operativo y
la mezcla del fermentador, no se ha considerado seriamente Ered.

4 Estrategias mejoradas de escalamiento para biorreactores aeróbicos

La razón por la que se ha puesto un fuerte énfasis en mantener un coeficiente de transferencia

de oxígeno volumétrico constante, k z a, en la ampliación del proceso es para asegurar la
misma tasa de suministro de oxígeno para satisfacer la demanda de oxígeno de la población
celular deseada. Sin embargo, la tasa de transferencia de oxígeno en un fermentador aeróbico
sumergido típico es en realidad el producto de k z a y (C * -CL); este último representa la
diferencia entre la concentración de equilibrio en la interfaz gas / líquido y la concentración
de oxígeno disuelto en la fase líquida a granel. La tasa máxima de transferencia de oxígeno
por unidad de volumen (OTRmax) se logra cuando C L- ~ 0: todo el oxígeno que ingresa a
la solución a granel se consume rápidamente, es decir,

Los efectos de la concentración de oxígeno disuelto, CL, en el crecimiento celular, el

metabolismo y la formación del producto se han investigado ampliamente en la literatura
para varios organismos [17]. En general, por encima de cierta concentración de oxígeno,
llamada "concentración crítica de oxígeno", la maquinaria metabólica celular está saturada
de oxígeno. En este caso, hay suficiente oxígeno disponible para aceptar de inmediato todos
los pares de electrones que pasan a través de la cadena respiratoria, de modo que algún otro
proceso bioquímico dentro de la célula limita la velocidad. De lo contrario, incluso el
agotamiento temporal del oxígeno disuelto en bioprocesos aeróbicos podría significar un
daño celular irreversible. A este respecto, vale la pena señalar que la misma especie
microbiana puede mostrar grandes variaciones en sus requerimientos de oxígeno,
dependiendo de la concentración de oxígeno a la que se ha adaptado [18]. En algunos casos,
como las producciones de triptófano [19] y ácido L-glutámico [20], se obtienen resultados
óptimos cuando se puede mantener una concentración constante de oxígeno durante el
transcurso de la fermentación. En lugar del coeficiente de transferencia de oxígeno constante
(k z a), un criterio de aumento de escala más significativo para las fermentaciones aeróbicas
es la tasa de transferencia de oxígeno constante por unidad de volumen a un valor
predeterminado de CL. Para muchas fermentaciones microbianas, este valor de CL puede
establecerse razonablemente en cero debido a las muy bajas concentraciones críticas de
oxígeno de los microorganismos como la levadura, Escherichia coli, Pseudomonas
denitrificans, etc. [17]. Velocidad máxima de transferencia de oxígeno igual es el criterio de
ampliación sugerido para estas fermentaciones. En otros casos, se deben determinar los
valores óptimos de CL
en el estudio a escala de banco. En este trabajo, se propone desarrollar estrategias mejoradas
de aumento de escala para fermentaciones aeróbicas manteniendo una velocidad de
transferencia de oxígeno constante, al valor predeterminado de CL, en diferentes escalas de
operación mediante el uso de diferentes presiones parciales de oxígeno en corrientes de gas
influyentes. La presión parcial de oxígeno de la fase gaseosa, pg, regula C * a través de la
ley de Henry, es decir,

donde H L es la constante de la ley de Henry del medio líquido. Además de ser más
significativo, este enfoque agrega un grado más de libertad al diseño de fermentaciones. En
consecuencia, un factor de operación más puede mantenerse constante en la ampliación.
Puede ser uno de los factores sacrificados en los enfoques mencionados anteriormente, o uno
de los siguientes criterios sugeridos en la literatura para un mejor control de la entrada de
energía y la mezcla en fermentadores grandes:
1.La potencia de entrada dada por Einsele [6], basada en datos obtenidos en una encuesta de
plantas de fermentación europeas que tienen volúmenes de 0.5 a 300 m 3, es decir,

2. Potencia constante de entrada por unidad de volumen de líquido, para la mezcla de fluidos
en operaciones sensibles al cizallamiento, como la dispersión de gases en fermentaciones
aeróbicas normales [5].
3. Intensidad de par constante, es decir, Te / V, para la mezcla de fluidos en operaciones
sensibles al flujo, tales como fermentaciones con alta viscosidad y / o suspensiones sólidas
densas [21]. En el Apéndice se dan dos ejemplos para demostrar la determinación de las
presiones parciales de oxígeno en fase gaseosa que se utilizarán en las fermentaciones a
escala de banco para la ampliación de un recipiente 10-1 a un fermentador 10,000-1. En el
primer ejemplo se emplean cuatro criterios, es decir, similitud geométrica, velocidad
constante de la punta del impulsor, entrada de potencia sugerida por Einsele [6] y velocidad
de transferencia de oxígeno máxima constante. En el segundo ejemplo, la ampliación se lleva
a cabo con el criterio de Q / V constante que reemplaza la correlación de Einsele para la
entrada de energía.
En comparación con las estrategias sugeridas en la literatura, es decir, Combinaciones 1-3
dadas en la sección anterior, el primer ejemplo ofrece un mejor control de la entrada de
energía en los procesos a gran escala; El segundo ejemplo representa una mejora directa sobre
la Combinación 3 al llevar a cabo la ampliación en fermentadores geométricamente similares
y evitar las incertidumbres en la aplicación de correlaciones de literatura a reactores con
diferentes geometrías.
Se muestra que las presiones parciales de oxígeno en la fase gaseosa más bajas (es decir, 0,19
y 0,15 atm para los Ejemplos I y 2, respectivamente) deben usarse en los experimentos de
laboratorio. En fermentaciones discontinuas, las células están expuestas a tensiones de
oxígeno variables en los medios de todos modos. No se espera que la ligera reducción de la
presión parcial de oxígeno en fase gaseosa en la fermentación a escala de banco cause ningún
efecto microbiológico significativo, como cambios en el metabolismo celular y la
morfología. Por lo tanto, las estrategias mejoradas de escalamiento reportadas en el trabajo
conducirán a una traducción más precisa de los resultados óptimos logrados en experimentos
a escala de banco a procesos a escala de producción.

Apéndice
Determinación de la relación de presiones parciales de oxígeno en fase gaseosa
empleado en diferentes escalas de fermentación para una ampliación exitosa.
Ejemplo 1

Se supone deseable ampliar un bioproceso a partir de los resultados obtenidos en un

recipiente 10-1 a un fermentador 10,000-1 basado en la siguiente combinación de criterios
de ampliación:
1. Similitud geométrica, es decir,

donde los subíndices l y s representan a gran y pequeña escala, respectivamente.

2. Velocidad constante de la punta del impulsor, es decir,

3. Entrada de potencia empírica por unidad de volumen sugerida por Einsele [6], es decir,

4. Velocidad de transferencia de oxígeno máxima constante, es decir,

donde el kL una correlación propuesta por Fukuda et al. [22, 23] para fermentaciones de baja
viscosidad bajo mezcla turbulenta, es decir,

ha sido usado. v ~ es la velocidad superficial del gas. Michel y Miller [24] demostraron que
para los fluidos newtonianos se puede obtener una buena estimación de Po a partir de la
relación:
donde Po es la entrada de potencia sin accionar y puede estimarse a partir de la siguiente
relación para recipientes geométricamente similares [7]:

Reordenando las ecuaciones. (4), (6) y (7) conduce a:

La relación de la velocidad superficial del gas es así:

(Nota: vs. ~ también debe evaluarse para determinar si es tan alto como para causar
sobrecarga del impulsor o expulsión de líquido en el fermentador a gran escala). En
consecuencia, la relación de presión parcial de oxígeno en fase gaseosa, dada en la ecuación
(5), se puede calcular como:

Si bien el uso de gas enriquecido con oxígeno en las plantas de producción puede no ser
económicamente favorable, las fermentaciones a escala de laboratorio se pueden hacer
fácilmente con aire diluido con nitrógeno con una presión parcial de oxígeno de 0.19 (= 0.21
/ 1.10) atm.
Ejemplo 2
La ampliación previa de un fermentador 10-1 a un fermentador t0,000-1 se llevará a cabo
con el criterio de Q / V constante que reemplaza la correlación de Einsele para la entrada de
potencia.
Con Q / V constante,

Combinando Eqs. (6) y (7) conduce a

donde NJN ~ = 0.1 sobre la base de la velocidad constante de la punta del impulsor. La
relación de presión parcial de oxígeno en fase gaseosa entre las dos escalas, que se requiere
para mantener una tasa de transferencia de oxígeno máxima constante, puede calcularse
utilizando la ecuación. (5):

En consecuencia, para traducir con éxito los resultados experimentales al proceso de

producción realizado con aire, la presión parcial de oxígeno en fase gaseosa de 0.15 (= 0.21
/ 1.39) atm debe usarse en la fermentación a escala de laboratorio.