Sunteți pe pagina 1din 47

Anatomia si functia unei gene: disectia prin mutatie

Cromozomul uman 3 constă din aproximativ 220 de milioane de perechi


de baze și transportă 1000-2000 de gene. Undeva pe brațul lung al
cromozomului se află gena pentru rodopsină, o proteină sensibilă la
lumină activă în celulele din cordonul retinei noastre. Sub microscop,
un cromozom individual 3 eliberat din nucleul unei celule umane arată
ca un șir de ADN lung și nediferențiat de ADN (figura 7.1). La o mărire
foarte mare - din păcate, mai mare decât asta obținută cu ajutorul
microscoapelor de astăzi - aceasta sfoară genetică ar apărea ca o dublă
helix compusă din două fire antiparalerale de nucleotide ținute
împreună de legăturile de hidrogen ale perechilor complementare de
bază. Dar care nucleotide în cadrul combaterii alcătuiesc gena
rhodopsinei și ce arată gena? Cunoașterea faptului că ADN-ul este
molecula eredității nu răspunde în sine la întrebarea "Ce este o genă?"
De la Mendel, geneticienii care gene delimitate prin studii de
reproducție și analize pedigree considerând o genă a fi o unitate de
informație care afectează fenotipul; dar șirul de ADN din cromozomul 3
nu se rezolvă în 1000-2000 de unități observabile. Studiile detaliate
privind mutațiile au ajutat la rezolvarea acestei dileme.
Gena rhodopsinei determină percepția luminii cu intensitate scăzută.
oameni care poartă alela normală, de tip sălbatic al genei, se vede bine
într-o lumină slabă cameră și pe timp de noapte pe șosea. O simplă
schimbare - o mutație - în Rhodopsin gena, totuși, diminuează
percepția luminii suficientă pentru a duce la orbire de noapte; alte
modificări ale genei cauzează distrugerea celulelor tijelor, ducând la
orbire totală.Cercetatorii medicali au identificat pana acum mai mult de
30 de mutatii ale genei rhodopsin care afecteaza viziunea. Cum poate o
genă să susțină atât de multe mutații diferite?Și cum pot muta aceste
mutații efecte fenotipice diferite?În acest capitol, descriem modul în
care geneticienii au examinat relația dintre mutații, gene și fenotip, pe
măsură ce au încercat să înțeleagă, la nivel molecular, ce gene sunt și
cum funcționează acestea. Cercetătorii au considerat mutații ca fiind
schimbări ereditare în secvența de bază care afectează fenotipul. Din
experimente ingenioase proiectate pentru a arăta cât de diferite
mutații pot apărea în diferite părți ale aceleiași gene și cum diferite
mutații din aceeași genă pot avea efecte fenotipice diferite, cercetătorii
au dedus că fizic, o genă este de obicei un segment specific ADN-ului o
regiune discretă a unui cromozom (acum vedem că unele gene codifică
diferite tipuri de ARN care nu se transformă în proteine). Din aceleași
studii, anchetatorii au concluzionat că o genă nu este pur și simplu o
mărgele pe șir, schimbabilă doar ca un întreg și numai într-un fel, după
cum credeau unii. Mai degrabă, genele sunt divizibile, iar fiecare
subunitate a genei - perechile individuale de nucleotide ale ADN-ului
poate muta independent și se recombina între ele.Aceste descoperiri
au oferit o perspectiva proaspata asupra functiei genetice, clarificand ca
secventa de nucleotide a majoritatii genelor specifica aminoacizii care
trebuie imprastiati impreuna pentru a face o proteina. Ordinea
aminoacizilor determină structura tridimensională a fiecărei proteine -
cum se îndoaie în spațiu - care, la rândul ei, determină modul în care
proteinele funcționează în celulă.
O temă generală rezultă din discuția noastră. Cunoașterea genelor și
modul în care acestea lucrează adâncește înțelegerea noastră de
genetică Mendelian prin furnizarea unei explicații biochimice pentru
modul în care genotipul influențează fenotipul. O mutație a genei
rhodopsin, de exemplu, provoacă înlocuirea unui aminoacid specific cu
altul în construcția proteinei rhodopsin și această substituție specifică
schimbă capacitatea proteinei de a absorbi fotonii și, astfel, capacitatea
unei persoane de a percepe lumina.
În prezentarea noastră despre felul în care genele guvernează relația
dintre mutație și fenotip, analizăm
• Ce mutații sunt; cât de des apar; unele dintre evenimentele care le
provoacă; Sisteme de reparare a ADN care minimizează apariția
acestora; și modul în care acestea afectează supraviețuirea unui individ
și evoluția speciilor.
• Ce mutații ne spun despre structura genelor: o genă este o secvență
specifică de perechi de nucleotide într-o regiune discretă a ADN-ului
care acționează ca o unitate de funcție, de obicei prin codificarea
instrucțiunilor pentru realizarea unei anumite polipeptide.
• Ce ne spun despre mutații despre funcția genetică: Genele codifică
proteine prin direcționarea ansamblului corect al aminoacizilor care
compun fiecare polipeptidă; una sau mai multe polipeptide compun o
proteină; mutațiile care modifică instrucțiunile genei pentru o secvență
de aminoacizi modifică structura și funcția proteinei.
• Modul în care mutațiile genetice afectează proteinele care primesc
lumină și viziunea: un exemplu cuprinzător.
Mutații: Instrumente primare de analiză genetică
Mutațiile sunt modificări aleatorie în secvențele de bază care modifică
informațiile Conținutul ADN
Am văzut în capitolul 3 că orice alelă care există la o frecvență mai mare
de 1% într-o populație naturală aflată în studiu este cunoscută ca o
alelă de tip sălbatic. Mulți geneticieni experimentali, cu toate acestea,
au o definiție ușor diferită a unei "alele de tip sălbatic", considerând că
aceasta este singura alelă care dictează cel mai frecvent descoperit
fenotip dintr-o populație; cu această definiție, toate celelalte alele -
indiferent de frecvența lor în populație - ar fi alele mutante. Sub o
definitie, o mutatie care modifica o alela de tip salbatic al unei gene la o
alela diferita se numeste mutatie inainte. Rezultatul alelei mutante
roman poate fi fie recesiv, fie dominant la tipul sălbatic original.
Geneticienii deseori fac diagrame de transmitere ca A? → a când
mutația este recesivă și ca b? → B atunci când mutația este dominantă.
Mutațiile pot determina, de asemenea, o alelă mutantă nouă să se
întoarcă înapoi la tipul sălbatic (a → A?, Sau B → b?) Într-un proces
cunoscut sub numele de mutație inversă sau reversiune. În acest
capitol, desemnează tipul sălbaticalele, recesive sau dominante, cu un
"?".
Mendel inițial a definit genele prin efectele fenotipice vizibile - galbene
sau verzi, rotunde sau încrețite - alelele lor alternative. De fapt, singura
modalitate în care știa că genele există în realitate este că alele
alternative pentru șapte gene de mazăre particulare au apărut prin
mutații înainte în materialul genetic. Aproape un secol mai târziu,
cunoașterea structurii ADN a clarificat faptul că astfel de mutații sunt
schimbări ereditare în secvența bazei ADN. ADN-ul posedă astfel
potențialul de schimbare genetică în același loc în care transporta
informația genetică - secvența bazelor sale.

Geneticienii cu o singură cale clasifică mutațiile


Prin efectul lor asupra moleculei ADN
O substituție apare atunci când o bază la o anumită poziție într-o
catenă a moleculei ADN este înlocuită de una din celelalte trei baze
(figura 7.2a); în timpul replicării ADN, o substituție de bază într-o
singură catenă va determina apariția unei noi perechi de baze în
molecula fiicei generate de acea catenă. Substituțiile pot fi împărțite în
tranziții, în care o purină (A sau G) înlocuiește cealaltă purină sau una
pirimidina (C sau T) inlocuieste cealalta si transversiile in care o purina
se schimba la o pirimidina sau invers. Alte tipuri de mutatii produc
rearanjari mai complicate ale secventei ADN. O deleție apare când un
bloc al uneia sau mai multor perechi de nucleotide este pierdut dintr-o
moleculă de ADN; o inserție este doar inversa - adăugarea uneia sau
mai multor perechi de nucleotide (figurile 7.2b și c). Ștergerile și
inserțiile pot fi la fel de mici ca perechea de bază unică sau la fel de
mare ca și megabazele (adică, milioane de perechi de baze).
Cercetătorii pot vedea modificările mai mari la microscop atunci când
observă cromozomi în contextul unui cariotip, cum ar fi cel prezentat în
figura 4.4 de la pag. 85. Mai multe mutații complexe includ inversii,
180? rotațiile unui segment al moleculei ADN (Fig.7.2d) și translocațiile
reciproce, în care părțile a două cromozomi neomologi schimbă locurile
(Fig.7.2e). Reorganizările ADN pe scară largă, inclusiv ștergerile și
inserțiile megabazelor, precum și inversiunile și translocările, determină
reorganizări genetice majore care pot schimba fie ordinea genelor de-a
lungul unui cromozom, fie numărul de cromozomi dintr-un organism.
Discutăm despre aceste rearanjamente cromozomiale, care afectează
multe
genele la un moment dat, în capitolul 14. În acest capitol, ne
concentrăm asupra mutațiilor care modifică numai o singură genă la un
moment dat. Doar o mică parte din mutații dintr-un genom de fapt
modifică secvențele de nucleotide ale genelor într-un mod care
afectează funcția genei. Prin schimbarea unei alele în alta, aceste
mutații modifică structura sau cantitatea de produs proteic al genei, iar
modificarea structurii sau a cantității de proteine influențează
fenotipul. Toate celelalte mutații fie modifică genele într-un mod care
nu le afectează funcția, nici nu schimbă ADN-ul între gene. În capitolele
10 și 11 discutăm despre mutații fără consecințe fenotipice bservabile;
astfel de mutații sunt foarte utile pentru cartografierea genelor și
pentru urmărirea diferențelor dintre indivizi. În restul acestui capitol, ne
concentrăm asupra acelor mutații care au un impact asupra funcției
genei și influențează astfel fenotipul.
Mutațiile spontane care influențează fenotipurile apar la o rată foarte
scăzută

Mutațiile care modifică funcția genelor se întâmplă atât de rar încât


geneticienii trebuie să examineze un număr foarte mare de indivizi
dintr-o populație anterior omogenă pentru a detecta noile fenotipuri
care reflectă aceste mutații. Într-un studiu în curs de desfășurare,
anchetatorii dedicați au monitorizat culorile stratului de milioane de
șoareci special crescuți și au descoperit că, în medie, o anumită genă se
transformă într-o alelă recesivă în
aproximativ 11 din fiecare 1 milion de gameți (figura 7.3). Studiile unor
alte rganisme au dat rezultate similare: o rată medie spontană de 2-12?
10 p6 mutații pe genă pe gamă.
Privind la rata de mutație dintr-o perspectivă diferită, puteți întreba ce
mutații ar putea exista în genele unui individ. Pentru a afla, pur și
simplu
înmulți rata de 2-12? 10 p6 mutații pe gene de 30.000 ori, o estimare
generalizată a numărului de gene în genomul uman, pentru a obține un
răspuns între 0,06-0,36 mutații pe genomul haploid. Acest calcul foarte
dur ar însemna că, în medie, 1 nouă mutație care afectează fenotipul ar
putea apărea la fiecare 4-20 gameți umane.
Rata de mutație variază de la Gene la Gene

Deși rata medie de mutație pe gene este de 2-12? 10 6, acest număr


maschează variații considerabile ale ratelor de mutație pentru diferite
gene. Experimentele cu multe organisme arată că ratele de mutație
variază de la mai puțin de 10,9 până la mai mult de 10 pg per gena per
gameț. Variația ratei de mutație a diferitelor gene din cadrul aceluiași
organism reflectă diferențele în dimensiunea genei (genele mai mari
sunt ținte mai mari care susțin mai multe mutații), precum și
diferențele în sensibilitatea anumitor gene față de diferitele mecanisme
care determină mutații capitol).
Estimările ratelor medii de mutație în bacterii variază de la 10-8 la 10-7
mutații pe genă pe diviziune celulară.
Deși unitățile de aici sunt ușor diferite de cele utilizate pentru
eucariotele multicelulare (deoarece bacteriile nu produc gameți), rata
medie de mutație a eucariotelor care produc eter este încă considerabil
mai mare decât cea din bacterii. Principalul motiv este că există
numeroase diviziuni celulare între formarea unui zigot și a meiozei,
astfel încât mutațiile care apar într-un gamete pot avea de fapt multe
generații de celule înainte de formarea jocului. Cu alte cuvinte, există
mai multe șanse de acumulare a mutațiilor. Unii oameni de știință
speculează că genomurile diploide ale organismelor multicelulare le
permit să tolereze rate relativ ridicate de mutație în gameții lor,
deoarece un zigot va trebui să primească mutații recesive în aceeași
genă din ambele gameți pentru orice efecte dăunătoare care pot să
apară. În schimb, bacteriile ar fi afectate de o singură mutație care a
perturbat singura copie a genei.
Mutațiile viitoare apar de obicei mai mult
Adesea, decât mutările inverse
În studiul culorii stratului de șoarece, atunci când cercetătorii au permis
șoarecilor frate și soră homozigoți pentru o alelă mutantă recesivă a
uneia dintre cele cinci gene mutante de culori de acoperire, să se poată
împerechea între ei, ar putea estima rata de reversiune examinând
descendenții F1. Orice descendent care exprimă fenotipul dominant de
tip sălbatic pentru o anumită culoare de acoperire a necesitat o gena
care a susținut o mutație inversă. Calculele bazate pe observațiile
câtorva milioane de descendenți F1 au relevat o rată de mutație inversă
variind de la 0-2,5% 10 pg per gena per gamă; rata de reversie a variat
oarecum de la gene la gene. În acest studiu, atunci, rata de reversiune a
fost semnificativ mai mică decât rata de mutație înainte, cel mai
probabil deoarece există multe modalități de a întrerupe funcția genei,
dar există doar o
câteva moduri de a restabili funcția odată ce aceasta a fost întreruptă.
Concluzia că rata de reversiune este semnificativ mai mică decât rata de
mutație înainte este valabilă pentru majoritatea tipurilor de mutații.
Într-un exemplu extrem, ștergerile din
mai mult de câteva perechi de nucleotide nu pot reveni niciodată,
deoarece informațiile ADN care au dispărut din genom nu pot reapărea
în mod spontan.
Deși toate aceste estimări ale ratelor de mutație sunt extrem de grave,
ele sprijină totuși trei concluzii generale:
(1) Mutațiile care afectează fenotipul apar foarte rar;
(2) diferite gene mutante la diferite rate; și (3) rata de mutație înainte
(o întrerupere a funcției genei) este aproape întotdeauna mai mare
decât rata de reversiune (care necesită o restaurare a funcției unei gene
anterioare perturbate).
Mutațiile spontane provin din multe tipuri de evenimente aleatorii
Deoarece mutațiile spontane care afectează o genă apar atât de rar,
este foarte dificil de studiat evenimentele care le produc. Pentru a
depăși această problemă, cercetătorii s-au transformat în bacterii ca
organisme experimentale alese. Cu acești microbi cu o singură celulă,
este ușor să crească multe milioane de indivizi și apoi să căutați rapid
prin populații enorme pentru a găsi pe cei câțiva care poartă o mutație
nouă. Într-un studiu, anchetatorii răspândesc bacterii de tip sălbatic pe
suprafața agarului care conține suficiente substanțe nutritive pentru
creștere, precum și o cantitate mare de bacterii-ucidere substanță, cum
ar fi un antibiotic sau un bacteriofag. În timp ce majoritatea celulelor
bacteriene au murit, câțiva au demonstrat rezistență la substanța
bactericidă și au continuat să crească și să se împartă. Descendenții
unei singure bacterii rezistente, produse de multe runde de fisiune
binară, au format o movilă de celule identice genetic, numită colonie.
Cele câteva colonii rezistente la bactericide care au apărut au prezentat
un puzzle. Dacă celulele din colonii au modificat într-o oarecare măsură
biochimia internă pentru a produce un răspuns de salvare a
antibioticului sau a bacteriofagului? Sau au purtat mutații ereditare
care conferă rezistență la bactericid?
Și dacă au făcut mutații, acele mutații au apărut din întâmplare din
evenimente aleatorii spontane care au loc în mod continuu, chiar și în
absența unei substanțe bactericide sau au apărut doar ca răspuns la
semnalele de mediu (în acest caz, adăugarea bactericid) care provoacă
o schimbare compensatorie a informațiilor genetice?
Mutațiile sunt întâmplări de șanse Modificarea genomului la
întâmplare
În 1943, Salvador Luria și Max Delbrück au elaborat un experiment
pentru a examina originea rezistenței bacteriene (figura 7.4).
Conform raționamentului lor, dacă coloniile rezistente la bacteriofagi
apar în răspuns direct la infecția cu bacteriofagi, suspensiile separate de
bacterii care conțin un număr egal de celule vor genera un număr mic
de colonii rezistente similare atunci când sunt răspândite în plăci petri
separate pe agar nutritiv umflat cu fagi. Prin contrast, dacă rezistența
provine din mutații care apar în mod spontan chiar și atunci când fagii
nu sunt prezenți, culturile lichide diferite, atunci când sunt răspândite
pe plăci petri separate, vor genera un număr foarte diferit de colonii
rezistente. Acest lucru se datorează faptului că mutația care conferă
rezistență poate, în teorie, să apară în orice moment în timpul creșterii
culturii. Dacă se întâmplă devreme, celula în care apare va produce
mulți descendenți mutanți înainte de petrizare; dacă se întâmplă mai
târziu, vor fi mult mai puțini descendenți mutanți atunci când
timpul de acoperire sosește. După placare, aceste diferențe numerice
vor apărea ca fluctuații ale numărului de colonii rezistente care se
dezvoltă în plăcile petri diferite.
Rezultatele acestui test de fluctuație au fost clare: Cele mai multe plăci
au susținut zero la câteva colonii rezistente, dar câteva au adus sute de
colonii rezistente. Din această observație privind o fluctuație
substanțială a numărului de colonii rezistente în diferite plăci Petri,
Luria și Delbrück au concluzionat că rezistența bacteriană apare din
mutațiile care există înainte de expunerea la bacteriofag. După
expunere, actericidul din placa Petri devine un agent selectiv care
distruge celulele nerezistente, permițând doar supraviețuirea celor
rezistenți preexistenți. Figura 7.5 ilustrează modul în care cercetătorii
au folosit o altă tehnică, cunoscută sub denumirea de replicare, pentru
a demonstra chiar mai direct
că mutațiile care conferă rezistență bacteriană apar înainte ca celulele
să "vadă" bactericidul care le selectează pentru rezistența lor. Aceste
experimente cheie au arătat că rezistența bacteriană la fagi și alte
bactericide este rezultatul mutațiilor.
Iar aceste mutații nu apar în special în gene ca răspuns direct la
schimbările de mediu; în schimb, acestea apar în mod spontan, ca
rezultat al proceselor aleatorii care se pot întâmpla în orice moment și
pot afecta genomul în orice loc. Odată se produc schimbări aleatorii,
însă acestea rămân de obicei stabile.
Dacă mutanții rezistenți ai experimentului Luria-Delbrück, de exemplu,
au fost crescuți pentru mai multe generații în mediu care nu conține
bacteriofagi, aceștia totuși ar rămâne rezistenți la acest virus bactericid.
Descriim acum câteva din cele mai multe tipuri de evenimente aleatorii
care provoacă mutații; după aceea discutăm despre modul în care
celulele se descurcă cu daunele.
Hidroliza, radiația, lumina ultravioletă și oxidarea pot modifica
informațiile stocate în ADN
Actele chimice și fizice ale ADN sunt destul de frecvente.
Geneticienii estimează, de exemplu, că hidroliza unei baze purine, A sau
G, de la coloana vertebrală a deoxiribozo-fosfatului apare de 1000 de
ori pe oră în fiecare celulă umană. Acest tip de alterare a ADN-ului se
numește depurație (figura 7.6a).
Deoarece situl apurinic rezultat nu poate specifica o bază
complementară, procesul de replicare a ADN introduce uneori o bază
aleatorie opusă situsului apurinic, provocând o mutație în catena
complementară nou sintetizată, în trei sferturi din timp. Un alt proces
natural care poate modifica conținutul informațional al ADN-ului este
deaminarea: îndepărtarea unei grupări amino (-NH2). dezaminare
poate modifica citozina la uracil (U), baza de azot găsită în ARN, dar nu
în ADN. Deoarece perechile U cu A mai degrabă decât G, deamina
urmată de replicare poate modifica o pereche de bază C-G la o pereche
T-A în generațiile viitoare de molecule de ADN (Fig.7.6b); o astfel de
modificare C-G la T-A este o mutație de tranziție. Alte atacuri includ
radiațiile naturale, cum ar fi razele cosmice și razele X, care rup fosfatul
de zahăr
coloana vertebrală (figura 7.6c); lumină ultravioletă, care determină
legarea chimică a resturilor de timină adiacente în dimeri de timină-
timină (figura 7.6d); și leziuni oxidative la oricare dintre cele patru baze
(figura 7.6e). Toate aceste modificări modifică conținutul informațional
al moleculei ADN.

Greșelile în timpul replicării ADN pot modifica, de asemenea,


informațiile genetice

Dacă aparatul celular dintr-un anumit motiv încorporează o bază greșită


în timpul replicării, de exemplu, un C opus unui A în loc de T așteptat,
atunci în timpul următorului ciclu de replicare, una dintre ADN-urile
fiice va avea perechea de bază A-T normală, în timp ce cealaltă va avea
un mutant G-C. Măsurătorile atente ale fidelității replicării in vivo, atât
în bacterii, cât și în celulele umane, arată că astfel de erori sunt extrem
de rare, aparând mai puțin de o dată la fiecare 109 de perechi de baze.
Aceasta este echivalentă cu tastarea întregii cărți de 1000 de ori făcând
doar o singură eroare de introducere a textului. Având în vedere
complexitatea răsucirii helixului, perechea de bază și polimerizarea,
acest nivel de precizie este uimitor. Cum o realizează celulele?
Mașinile de replicare minimizează erorile prin etapele succesive de
corecție. În eprubeta, ADN-polimerazele replică ADN-ul cu o rată de
eroare de aproximativ o greșeală din fiecare 106 baze copiate. Această
rată este de aproximativ 1000 de ori mai slabă decât cea obținută de
celulă. Chiar și așa, este impresionant scăzută și este atinsă numai
pentru că moleculele polimerazice furnizează împreună cu funcția lor
de polimerizare o funcție de corectare / editare sub forma unei
nucleaze care este activată ori de câte ori polimeraza face o greșeală.
Această porțiune de nuclează a moleculei polimerazice, numită 3p-la-5a
exonucleaza, recunoaște o bază necorespunzătoare și o excizează,
permițând polimerazei să copieze corect nucleotida în următoarea
încercare (figura 7.7). Fără porțiunea de nuclează, ADN polimeraza ar
avea o rată de eroare a unei greșeli la fiecare 104 de baze copiate,
astfel încât funcția de editare a acesteia îmbunătățește fidelitatea
replicării de 100 de ori. ADN-polimeraza in vivo face parte dintr-un
sistem de replicare care include multe alte proteine care imbunatatesc
colectiv rata de eroare inca de 10 ori, aducand-o la aproximativ 100 de
ori mai mare decat fidelitatea obtinuta de celula.
Acuratețea de 100 de ori mai mare a celulei depinde de un sistem de
rezervă numit metil-îndreptat repararea nepotrivire care observa și
corectează erorile reziduale în ADN nou reproduse. Prezentăm detaliile
acestui sistem de reparații mai târziu în capitol atunci când descriem
diferitele moduri în care celulele încearcă să corecteze mutațiile odată
ce apar.
Trecerea inegală și transposonii pot rearanja ADN-ul
Unele mutații apar din alte evenimente decât atacurile chimice și fizice
sau erorile de replicare. Semnificativ printre mecanismele care
generează astfel de mutații este recombinarea eronată.
De exemplu, în trecerea inegală, două secvențe ADN apropiate strâns,
localizate în diferite locuri pe două cromozomi omologi, se pot
împerechea între ei în timpul meioză. Dacă are loc o recombinare între
secvențele necorespunzătoare, un cromozom omogen se termină cu o
dublare (un fel de inserție), în timp ce celălalt omolog susține o
ștergere. Așa cum se arată în figura 7.8a, unele forme de culori roșu-
verde sunt rezultatul eliminărilor și duplicărilor din gene care ne permit
să percepem lungimile de undă roșii și verzi de lumină; aceste schimbări
informaționale reciproce
sunt rezultatul trecerii inegale.
Un alt mecanism notabil pentru modificarea secvenței ADN implică
unitățile de ADN cunoscute ca elemente transpozabile (TE). TE sunt
segmente de ADN câteva sute
la câteva mii de perechi de baze care se mișcă (sau "transpun" sau
"săriți") de la un loc la altul în genom. Dacă un TE sare într-o genă,
poate întrerupe funcția genei și poate provoca o mutație. Anumite TE
se inserează frecvent în anumite gene și nu altele; acesta este motivul
pentru care ratele de mutație variază de la gene la gene. Deși unele TE
se mișcă făcând o copie nouă, care poate fi inserată într-o altă variant
locația cromozomială în timp ce copia inițială rămâne pusă, alte tipuri
de TE își părăsesc de fapt poziția inițială atunci când se mișcă (Fig.7.8b).
Mutațiile cauzate de TE care transpun prin acest al doilea mecanism
sunt excepții de la regula generală că rata de reversiune este mai mică
decât rata de mutație înainte. Acest lucru se datorează faptului că
transpunerea TE poate să apară relativ frecvent și atunci când este
însoțită de excizia TE, se restabilește secvența și funcția inițială a genei.
Capitolul 14 discută consecințele genetice suplimentare ale
comportamentului TE.

Instabilitatea anumitor repetări ale trinucleotidelor cauzează mutații


În 1992, un grup de geneticieni moleculari a descoperit un tip
neobișnuit și complet neașteptat de mutație la om: amplificarea
excesivă a unui triplet de bază CGG repetat în mod normal de numai
câteva până la 50 de ori succesiv. Dacă, de exemplu, o alelă normală a
unei gene generează 5 repetiții consecutive ale CGG triplă de bază
(adică CGGCGGCGGCGGCGG pe o catenă), o alelă anormală care rezultă
din mutația ar putea avea 200 repetări la rând. Investigațiile ulterioare
au arătat că repetarea mai multor trinucleotide - CAG, CTG și GAA, în
plus față de CGG - poate fi instabilă, astfel încât numărul de repetări
crește sau scade adesea în diferite celule ale aceluiași individ.
Instabilitatea poate apărea, de asemenea, în timpul producției de
gameți, ceea ce duce la modificări ale numărului repetat de la o
generație la alta. Extinderea și contracția repetițiilor trinucleotidice au
fost găsite acum nu numai la oameni, ci și în multe alte specii.
Regulile care reglementează instabilitatea repetată a trinucleotidelor
par a fi destul de complicate, însă o caracteristică generală este aceea
că cu cât este mai mare numărul repetărilor la o anumită locație, cu
atât este mai mare probabilitatea ca expansiunea și contracția să aibă
loc. În mod obișnuit, tracturile cu mai puțin de 30-50 repetări ale unei
modificări triplete a dimensiunii doar rareori, iar mutațiile care apar nu
cauzează decât mici variații ale numărului repetat.
Tracturile mai mari care implică sute de repetări se modifică mai
frecvent și au ca rezultat o mai mare variație a numărului de repetări.
Cercetătorii nu au stabilit încă mecanismul precis al amplificării
repetate triplete.
O posibilitate este ca regiunile cu repetitii lungi de trinucleotide sa
formeze structuri neobisnuite de ADN care sunt greu de replicat
deoarece obliga aparatele de copiat sa se scurga, apoi sa se duca
inapoi, sa alunece, apoi sa se duca inapoi cand ajunge in aceasta
secventa. O astfel de oprire și pornire poate produce o replicare
"stutter" care provoacă sinteza aceleiași repetiții triplete din nou și din
nou, extinderea numărului de copii. Acest tip de eroare ar putea
diminua, dimpotrivă, mărimea tractului repetat de trinucleotide dacă,
după alunecare, aparatul de replicare reîncepe copierea la o repetare
mai departe în secvența șablonului. Oricare ar fi mecanismul, mutații
ale lungimilor trinucleotidice lungi apar destul de des, sugerând că
enzimele pentru repararea exciziei sau nepotrivirea nu sunt foarte
eficiente în repararea acestora.
Expansiunea repetițiilor trinucleotidice se află la originea sindromului
fragil X, una dintre cele mai comune forme de retard mintal uman,
precum și boala Huntington și multe alte tulburări ale sistemului
nervos. Rubrica Genetica si Societatea "Repetarea trinucleotidelor
amplificate poate avea consecinte edicale", pp. 216-217, discuta
implicatiile fascinante ale acestui tip de instabilitate a secventei ADN
pentru genetica si medicina umana.
Repetarea repetată a trinucleotidului poate avea consecințe medicale
Extinderea tripletului de bază CGG provoacă o afecțiune ereditară
cunoscută sub numele de sindrom X fragil. Adulții afectați de acest
sindrom manifestă mai multe anomalii fizice, incluzând un cap
neobișnuit de mare, o față lungă, urechi mari, iar la bărbați, testicule
mari. De asemenea, aceștia prezintă o întârziere mentală moderată
până la severă.
Sindromul Fragil X a fost găsit la bărbați și femei de toate rasele și
mediile etnice. Mutația fragilă X este, de fapt, o cauză genetică
principală a retardului mintal la nivel mondial, în al doilea rând doar la
trisomia 21 care are ca rezultat sindromul Down.
Cariotipurile special pregătite de celule de la persoane cu simptome
fragile X prezintă un loc ușor fragil, așa-numit fragil, în apropierea
vârfului brațului lung al cromozomului X (figura A). În unele imagini ale
acestor karyotypes, X are de fapt
rupte la acest loc, eliberând o bucată mică care conține capătul
cromozomului (nereprezentat). Tracturile lungi de trinucleotide CGG,
care alcătuiesc mutația fragilă X, aparent produc o regiune localizată
constrictă care se rupe ușor.
Geneticienii au numit tulburarea X fragilă pentru acest punct de
precizie specific de fragilitate cu mai mult de 20 de ani înainte de a
identifica mutația care dă naștere la ea.
Gena în care are loc mutația fragilă X se numește FMR-1 (pentru
retardarea mentală asociată cu fragil-X). Aproape un capăt al genei,
diferiți oameni poartă un număr diferit de repetări ale secvenței CGG,
iar geneticienii au acum instrumentele moleculare pentru a cuantifica
aceste diferențe. Alelele normale conțin 5-54 din aceste repetate
triplete, în timp ce gena FMR-1 la persoanele cu sindrom fragil X
conține
200-4000 repetări ale aceluiași triplet (Figura B.1). Restul secvenței de
bază a genei este aceeași în alele normale și anormale.
Mutația triplă a repetării care stă la baza sindromului fragil X are o
caracteristică surprinzătoare de transmisie. Alelele cu mutație completă
sunt prefigurate de alelele prematura care poartă un număr
intermediar de repetări - mai mult de 50, dar mai puțin de 200 (Figura
B.1). Alelele premutării nu generează ele însele simptome X fragile în
majoritatea purtătorilor, dar prezintă instabilitate semnificativă și,
astfel, prognoză riscul bolilor genetice la descendenții transportanților.
Cu cât este mai mare numărul de repetări dintr-o alelă de prematura,
cu atât este mai mare riscul de îmbolnăvire în cazul copiilor acelei
persoane. De exemplu, dacă o femeie poartă o alelă de prematura cu
60 repetări CGG, 17% dintre descendenții ei prezintă riscul de a
prezenta sindromul fragil X. Dacă poartă o alelă prematura cu 90 de
repetări, aproape 50% dintre descendenții ei vor avea simptome. Pe
scurt,schimbarea care produce o alelă prematura crește probabilitatea
ca genele FMR-1 să suporte mai multe mutații; și cu cât este mai mare
numărul inițial de repetări CGG adiționale, cu atât este mai mare
numărul de adăugări ulterioare. Interesant,extinderea alelelor
prematura FMR-1 are o relație inexplicabilă față de originea parentală a
repetițiilor. În timp ce majoritatea transportatorilor de sex masculin își
transmit FMR-1.
Mutagentele induc mutațiile
Mutațiile fac posibilă analiza genetică, dar cele mai multe mutații apar
spontan la o rată atât de scăzută încât cercetătorii au căutat modalități
controlate de a crește
apariție. H.J. Muller, membru inițial al grupului Drosophila de la Thomas
Hunt Morgan, a arătat mai întâi că expunerea la o doză de raze X
superioare nivelului natural crește rata de mutație a muștelor de fructe
(Fig.7.9).
Muller a expus masculul Drosophila la doze din ce în ce mai mari de
raze X și apoi a îmbătat acești bărbați cu femele care aveau un
cromozom X care conținea o mutație dominantă ușor de recunoscut,
provocând ochii barului. Acest cromozom X (numit balancer) a dus, de
asemenea, rearanjamente cromozomiale cunoscute sub denumirea de
inversiuni care i-au împiedicat să treacă cu alte cromozomi X. (Capitolul
14 explică
detalii despre acest fenomen.) Unele dintre fiicele F1 ale acestei
împerecheri erau heterozygote care purtau un X mutagenizat de la tatăl
lor și un bar X marcat de mama lor. Dacă razele X au indus o mutație
letală recesivă oriunde pe
paternally derivate din cromozomul X, atunci aceste femele F1 ar fi
incapabile să producă fii fără ochi de Bar. Astfel, pur și simplu
observând prezența sau absența unor fii fără ochi cu bară, Muller ar
putea stabili dacă o mutație a avut loc în oricare dintre cele peste 1000
de gene de pe cromozomul X care sunt esențiale pentru viabilitatea
Drosophila. El a concluzionat că cu cât este mai mare doza de raze X, cu
atât este mai mare frecvența mutațiilor letale recesive.
Orice agent fizic sau chimic care ridică frecvența mutațiilor deasupra
ratei spontane se numește mutagen. Cercetătorii folosesc mai mulți
mutageni diferiți pentru a produce mutații pentru studiu. Cu modelul
Watson-Crick al structurii ADN ca ghid, ei pot înțelege acțiunea celor
mai mulți mutageni la nivel molecular. Razele X folosite de Muller
pentru a induce mutații pe cromozomul X, de exemplu,
poate rupe coloana vertebrală a zahărului-fosfat al firelor de ADN,
uneori în aceeași poziție pe cele două fire ale dublului helix. Sunt create
mai multe pauze duble
Fragmentarea ADN-ului și coaserea necorespunzătoare a fragmentelor
pot provoca inversiuni, ștergeri sau alte rearanjamente (vezi figura
7.6c). Un alt exemplu de mecanism molecular al mutagenezei implică
mutageni cunoscuți ca analogi de bază, care sunt atât de asemănători
în structura chimică cu bazele normale azotate pe care mecanismele de
replicare le pot încorpora în ADN în loc
a bazelor normale (figura 7.10a). Deoarece un analog de bază poate
avea proprietăți de împerechere diferite de cele ale bazei pe care o
înlocuiește, poate provoca substituții de bază pe lanțul complementar
sintetizat în următoarea rundă de replicare a ADN-ului.
Alte mutagene chimice generează substituții care modifică în mod
indirect structura și proprietățile chimice ale unei baze (figura 7.10b).
Din nou, efectele acestor schimbări devin
fixată în genom când baza modificată determină încorporarea unei baze
complementare incorecte în timpul unei runde ulterioare de replicare.
Cu toate acestea, o altă clasă de mutageni chimici constă în compuși
cunoscuți ca intercalatori: molecule plane, plane, care se pot sandwich
între perechi succesive de bază și perturba mecanismele de replicare,
recombinare sau reparare (Fig.7.10c). Disfuncția
pot genera în cele din urmă deleții sau inserții de perechi de bază
asingle.
Organismele folosesc multe mecanisme de reparare a ADN pentru a
minimiza mutațiile
Mediile naturale expun genomul la multe tipuri de substanțe chimice
sau radiații care pot modifica secvențele de ADN; efectele secundare
ale metabolismului normal al ADN-ului în celule, cum ar fi inexactitățile
în replicarea ADN-ului sau mișcarea TE, pot fi, de asemenea, mutagene.
Celulele au dezvoltat o varietate de sisteme enzimatice care localizează
și repararea ADN deteriorat și, prin urmare, diminuează dramatic
potențialul ridicat de mutație. Combinația dintre aceste sisteme de
reparații trebuie să fie extrem de eficientă, deoarece ratele de mutație
spontană observate pentru aproape toate genele sunt foarte scăzute.
Enzimele pot inversa direct unele modificări ale bazelor ADN
Enzimele alchiltransferazei pot elimina grupările metil sau etil adăugate
din guanină pentru a recrea baza inițială (a se vedea figura 7.10b). Alte
enzime remediază alte modificări ale structurii de bază. De exemplu,
enzimă fotolază recunoaște dimerii thymine-thymine produse prin
expunerea la lumina ultravioletă (revizuirea Fig.7.6d) și inversează
daunele prin împărțirea legăturii chimice dintre timine.
Interesant este faptul că enzima fotolază funcționează numai în
prezența luminii vizibile. În realizarea sarcinilor sale de reparare a ADN-
ului, se asociază cu o moleculă mică numită cromofor care absoarbe
lumina în spectrul vizibil al spectrului; enzima utilizează apoi energia
captată de cromofor pentru a împărți dimerii timmin-timină. Deoarece
nu funcționează în întuneric, mecanismul de fotoliză se numește
reparație ușoară sau fotoreparare.
Unele sisteme de reparare elimină bazele sau nucleotidele deteriorate
Multe sisteme de reparații utilizează strategia generală de reparare
dependentă de omologie, în care mai întâi îndepărtează o regiune mică
din lanțul ADN care conține nucleotidul modificat și apoi utilizează
cealaltă catenă ca șablon pentru reintegrarea regiunii îndepărtate.
Această strategie utilizează unul dintre marile avantaje ale structurii cu
două elici: dacă o componentă susține deteriorarea, celulele pot folosi
baza complementară
împerecherea cu firul nedeteriorat pentru a re-crea secvența originală.
Reparația de excizie de bază este un mecanism dependent de
omologie. În acest tip de reparare, enzimele numite glicozilaze ADN
scindează o bază alterată de azot din zahăr
din nucleotidul său, eliberând baza și creând un situs apurinic sau
apirrimidinic (AP) în lanțul ADN (figura 7.11).
Diferite enzime de glicozilază creează baze deteriorate specifice.
Repararea bazei de excizie este deosebit de importantă în eliminarea
uracilului din ADN (reamintind că uracilul rezultă adesea din
deaminarea naturală a citozinei, revizuirea Fig.7.6b). În acest proces de
reparare, după ce enzima glicozilaza uracil-ADN a eliminat uracilul din
zahărul său, lăsând un situs AP, enzima AP endonuclează face o porecla
în coloana vertebrală a ADN
la site-ul AP. Alte enzime (cunoscute sub numele de exonucleaze ADN)
atacă piciorul și elimină nucleotidele din vecinătatea sa pentru a crea
un spațiu în fâșia deteriorată anterior.
ADN-polimeraza umple golul prin copierea benzii nedeteriorate,
restabilind nucleotida originala in proces. În cele din urmă, ADN ligaza
sigilarea lanțului ADN nou reparat.
Reparația de excizie a nucleotidelor (Fig.7.12) elimină modificările pe
care excizia de bază nu le poate repara deoarece nu există o glicozilază
ADN care să recunoască baza de probleme.
Reparația de excitare a nucleotidelor depinde de complexele
enzimatice care conțin mai mult de o moleculă de proteină. În E. coli,
aceste complexe sunt formate din două din trei posibile proteine: UvrA,
UvrB și UvrC. Unul dintre complexe (UvrA? UvrB) patrulează ADN-ul
pentru nereguli, detecând leziuni care perturbe perechea de bază
Watson-Crick și distorsionează dublul helix (cum ar fi dimerii thymine-
thymine care nu au fost corectați prin reparația fotografiei). Un al
doilea complex (UvrB? UvrC) taie firele deteriorate în două locuri care
leagă daunele. Această tăiere dublă excizează o regiune scurtă a benzii
deteriorate și lasă un spațiu care va fi umplut cu ADN polimerază și
sigilat cu ligază ADN.
Mecanismul de remediere a necorespunzãtorilor corecte corecteazã
erorile în replicarea ADN-ului

ADN-polimeraza este remarcabil de precisă în copierea ADN-ului, dar


sistemul de replicare a ADN-ului produce încă 100 de ori mai multe
greșeli decât cele mai multe celule pot tolera. Un sistem de reparații de
rezervă, numit reparare a nepotrivirii direcționate cu metil, corectează
aproape toate aceste erori (figura 7.13). Deoarece reparația nepotrivită
este activă numai după replicarea ADN, acest sistem trebuie să rezolve
o problemă dificilă. Să presupunem că o pereche G-C a fost copiată
pentru a produce două molecule fiice, dintre care una are perechea de
bază G-C corectă, iar cealaltă o G-T incorectă. Sistemul de reparare a
neconcordanțelor poate recunoaște cu ușurință perechea de bază G-T
cu potrivire incorectă, deoarece perechea de bază necorespunzătoare
distorsionează spirala dublă, având ca rezultat bulgări și goluri
anormale. Dar cum știe sistemul dacă să corecteze perechea cu un G-C
sau un A-T?
Bacteriile rezolvă această problemă prin plasarea unui marcaj distinctiv
asupra lanțurilor ADN parentale în locuri specifice: Oriunde se produce
secvența GATC, enzima adenin metilă pune o grupă metil pe A (figura
7.13a).
La scurt timp după replicare, vechea șablonă de șablon poartă marca de
metil, în timp ce noua fâșie a fiicei - care conține nucleotidul greșit - nu
este încă marcată (figura 7.13b). O pereche de proteine în E. coli,
numite MutL și MutS, detectează și se leagă de nucleotidele
necorespunzătoare.
MutL și MutS direcționează o altă proteină, MutH, pentru a scuti lanțul
nou de sinteză a ADN-ului într-o poziție de la cel mai apropiat GATC
metilat; MutH poate să discrimineze fâșia nou sintetizată deoarece
GATC nu este metilat (Figura 7.13c). Exonucleazele ADN îndepărtează
apoi toate nucleotidele între porecla și o poziție imediat dincolo de
nepotrivire, lăsând un gol pe noua catenă nemethylată (Fig.7.13d).
ADN-polimeraza poate resinteza acum informația utilizând vechea
catenă metilată ca șablon și ligaza ADN-ul apoi sigilează catena
reparată. Cu
completarea replicării și reparației, enzimele marchează noua catenă cu
grupări metil, astfel încât originea parentală va fi evidentă în
următoarea rundă de replicare (Fig.7.13e).
Celulele eucariote au, de asemenea, un sistem de corecție a
neconcordanțelor, dar nu știm încă cum diferențiază șabloanele de
celelalte componente, deoarece, spre deosebire de
prokaryotes, GATC-urile lor nu sunt marcate cu grupe metil, iar
eucariotele nu par să aibă o proteină strâns legată de MutH.
Sistemele de reparare a defectelor sunt o ultimă stațiune
Sistemele de reparații descrise mai sus sunt foarte precise în repararea
daunelor ADN, deoarece sunt capabile să înlocuiască nucleotidele
deteriorate cu o copie complementară a benzii nedeteriorate. Cu toate
acestea, celulele devin uneori expuse unor niveluri sau tipuri de
mutageni pe care nu le pot gestiona cu aceste sisteme de reparații de
înaltă fidelitate. Doze puternice de lumină UV, de exemplu, ar putea
face mai mulți dimeri de timină-timină decât celula poate fixa. Orice
deteriorare nereparată are consecințe grave pentru diviziunea celulară:
ADN polimerazele utilizate în mod normal în replicare se vor opri la
astfel de leziuni, astfel încât celulele să nu poată prolifera. Deși celulele
pot iniția răspunsuri de urgență care le permit să supraviețuiască și să
se împartă în ciuda încetinirii, capacitatea lor de a proceda în astfel de
circumstanțe are loc pe seama introducerii de noi mutații în genom.
Un tip de reparare de urgență în bacterii, numit sistemul SOS (după
semnalul de primejdie al codului Morse), se bazează pe ADN polimeraze
predispuse la erori (sau "nedorite"). Aceste
ADN polimerazele nedorite nu sunt disponibile pentru replicarea ADN
normală; ele sunt produse numai în prezența daunelor ADN. ADN
polimerazele induse de leziuni, care sunt predispuse la erori, sunt
atrase de furcile de replicare care au devenit blocate în locurile de
nucleotide nereparate, deteriorate. Acolo ei adaugă nucleotide
aleatoare la lanțul care este sintetizat opus bazelor deteriorate. SOS-
polimeraza
enzimele permit astfel celulei cu ADN deteriorat să se împartă în două
celule fiice, dar deoarece polimerazele nedorite restaurează nucleul
adecvat numai 1/4 din timp,
genomul acestor celule fiice poartă mutații noi.
În bacterii, efectul mutagen al multor mutageni fie depinde sau este
amplificat de sistemul SOS.
Un alt tip de sistem de reparații de urgență se ocupă cu un tip
deosebit de periculos de leziuni ale ADN-ului: pauze cu două căi, în
care ambele fire ale spiralei duble sunt rupte la locurile din apropiere
(fig.7.14). Reamintim din capitolul 6 că pauzele duble sunt reprezentate
ca prima etapă a recombinării meiotice.
Nu considerăm acest tip de spargere dublă, deoarece mecanismul de
recombinare le repară cu fidelitate și eficiență ridicată, folosind
complementare asocierea de bază (revederea din figura 6.23 la pp. 196-
199).
Cu toate acestea, pauzele duble sunt, de asemenea, rezultatul
expunerii la radiații de mare energie, cum ar fi raze X (fig.7.6c) sau
specii de oxigen puternic reactive. Dacă sunt lăsate nereparate, aceste
pauze pot duce la o varietate de cromozomi potențial letale aberații,
cum ar fi ștergeri mari, inversiuni sau translocații. Celulele pot restitui
capetele formate prin pauze duble cu ajutorul unui mecanism numit
nonhomolog care se bazează pe un grup de trei proteine care se leagă
de capetele firului și le aduc în apropiere (Fig.7.14). După legare, aceste
proteine recrutează alte proteine care reduc (sau resetează) orice
nucleotide care depășesc capetele care nu au o nucleotidă
complementară la care să se asocieze și apoi se îmbină împreună cu
cele două capete. Din cauza etapei de rezecție, îmbinarea finală
neomologică poate duce la pierderea ADN și, prin urmare, este
predispusă la erori. Evident, efectele mutagene ale îmbinărilor finale
neomologe sunt mai puțin dăunătoare celulei decât leziunile genomice
cauzate de neregulări.
Mutațiile în genele care codifică proteinele de reparare a ADN
afectează sănătatea umană
Deși există diferențe de detaliu între sistemele de reparare a ADN ale
diferitelor organisme (cum ar fi prezența sau absența etichetelor de tip
metil pe GATC pentru a discrimina între lanțurile de ADN vechi și recent
sintetizate), este surprinzător faptul că mecanismele de reparare a ADN
apar într- toate organismele. De exemplu, oamenii au șase proteine ale
căror compoziții de aminoacizi sunt aproximativ 25% identice cu cele
ale proteinei MutS de reparare a nepotrivirii E. coli.
Sistemele de reparare a ADN sunt foarte vechi și trebuie să fi evoluat
imediat după ce viața a apărut aproximativ 3,5 miliarde de ani în urmă.
Unii cercetători cred că repararea ADN-ului a devenit esențială
când plantele au început să depoziteze oxigen în atmosferă, deoarece
oxigenul favorizează formarea radicalilor liberi care pot deteriora ADN-
ul.
Multe dintre bolile ereditare umane cunoscute asociate procesării
defectuoase a ADN-ului dăunează cât de importante sunt mecanismele
de reparare a ADN-ului pentru supraviețuire. Într-un exemplu, celulele
pacienților cu Xeroderma pigmentosum nu au capacitatea de a efectua
repararea exciziei nucleotidelor deoarece sunt homozigote pentru
mutații în una din cele șapte gene care codifică enzime care
funcționează în mod normal în acest sistem de reparare. Acești pacienți
nu pot îndepărta eficient dimerii timminului-timinei, cauzate de lumina
ultravioletă. Dacă nu evită orice expunere la lumina soarelui, celulele
lor pielii încep să acumuleze mutații care în cele din urmă duc la apariția
cancerului de piele (Fig.7.15). Într-un alt exemplu, cercetătorii au aflat
recent că formele ereditare de cancer colorectal la oameni sunt
asociate cu mutații în genele umane care sunt strâns legate de genele E.
coli care codifică proteinele MutS și MutL de reparare a nepotrivirilor.
Capitolul 19 discută legăturile fascinante dintre repararea ADN-ului
și cancerul în detaliu.
Mutațiile au consecințe pentru evoluția speciilor și supraviețuirea
organismelor
Capacitatea de a ghici usor este adevarata minune a ADN-ului. Fără
acest atribut special, am fi fost totuși bacterii anaerobe și nu aveam
muzică "
două fraze, eminentul om de știință medicală și "biologul care
supraveghează", Lewis Thomas recunoaște că schimbările în ADN se
află în spatele variațiilor fenotipice care sunt materia primă pe care
selecția naturală a acționat de miliarde de ani pentru a conduce
evoluția. Variația variantă largă a formării genetice a populației umane -
și a altor populații - este, de fapt, rezultatul unui echilibru între
introducerea continuă a noilor mutații, pierderea mutațiilor dăunătoare
din cauza dezavantajului selectiv pe care îl impun indivizii care le
transporta și creșterea frecvenței mutațiilor rare care oferă un avantaj
selectiv indivizilor care le transporta (sau care se răspândesc printr-o
altă populație, vezi capitolul 21 pentru detalii privind genetica
populației).
În reproducerea sexuală a organismelor multicelulare, numai mutațiile
germline care pot fi transmise generației următoare joacă un rol în
evoluția unei specii. Cu toate acestea, mutațiile din celulele somatice
pot avea încă un impact asupra bunăstării și supraviețuirii indivizilor.
Mutațiile somatice în gene care ajută la reglarea ciclului celular pot
duce, de exemplu, la cancer. Administrația SUA pentru Alimente și
Medicamente
încearcă să identifice agenții potențiali de cancer (cunoscuți sub numele
de carcinogeni), utilizând testul Ames pentru a examina substanțele
chimice care provoacă mutații în celulele bacteriene (Fig.7.16). Acest
test întreabă dacă o anumită substanță chimică poate induce histidina?
(lui?) revertanții unei histidine speciale? (his?) mutantă a bacteriei
Salmonella typhimurium. A lui? revertanții pot sintetiza toate histidina
de care au nevoie de compuși simpli în mediul lor, în timp ce originalul
lui? mutanții nu pot face histidină, astfel încât ei pot supraviețui numai
dacă histidina este furnizată în mediul înconjurător. Avantajul testului
este că numai revertanții pot crește pe plăci petri care nu conțin
histidină, astfel încât este posibil să se examineze un număr mare de
celule dintr-un inițial lui? cultura pentru a găsi rară lui? revertanți indus
de substanța chimică în cauză. Pentru a crește sensibilitatea detectării
mutației, a lui? tulpina folosita in sistemul de testare Ames contine oa
doua mutatie care inactiveaza sistemul de reparare a exciziei
nucleotidelor si astfel previne repararea gata a mutatiilor si oa treia
mutatie care cauzeaza defecte in peretele celular care permite accesul
usor la interiorul celulei.
Deoarece majoritatea agenților care cauzează mutații în bacterii ar
trebui, de asemenea, să deterioreze ADN-ul organismelor eucariote
superioare, orice mutagen care crește rata de mutație în
este de așteptat ca bacteriile să provoace cancer la oameni și la alte
mamifere. Mamiferele au totuși complicate procese metabolice
capabile să inactiveze substanțele chimice periculoase. Alte evenimente
biochimice la mamifere pot crea o substanță mutagene de la substanțe
chimice non-periculoase.
Pentru a simula acțiunea metabolismului mamiferelor, toxicologii
adesea adaugă o soluție de enzime hepatice la șobolan la substanța
chimică analizată prin testul Ames (figura 7.16). Deoarece această
simulare nu este perfectă, agenții de administrare a alimentelor și
medicamentelor evaluează în cele din urmă dacă mutagenii bacterieni
identificați prin testul Ames pot cauza cancer la rozătoare când sunt
incluse în regimul animalelor.
Pe scurt, erorile aleatorii care modifică conținutul informațional al ADN-
ului sunt sursa ultimă de variație în cadrul și între specii. Mutațiile care
ajută organismele să se adapteze mai bine la schimbările din mediul lor
vor fi menținute în populații de mai multe generații. Dar, chiar dacă
mutațiile întâmplătoare furnizează materia primă a evoluției, cele mai
multe modificări ale genelor sunt dăunătoare organismului
sau descendența acestuia. Celulele au evoluat în mai multe sisteme
enzimatice care fie împiedică formarea mutațiilor, fie eliminarea celor
care o fac. Aceste măsuri de protecție permit organismelor să mențină
mutații la un nivel scăzut care echilibrează nevoia lor de a evolua cu
necesitatea de a evita deteriorarea genomului lor.
7.2 Ce mutații ne spun despre structura genei
Știința geneticii depinde absolut de mutații, deoarece putem urmări
genele în cruci numai prin efectele fenotipice ale variantelor lor
mutante. În anii 1950 și 1960, oamenii de știință au realizat că ar putea
folosi și mutații pentru a afla cum secvențele ADN de-a lungul unui
cromozom constituie gene individuale. Acești anchetatori au vrut să
colecteze o serie mare de mutații în aceeași genă și să analizeze modul
în care aceste mutații sunt aranjate unul față de celălalt. Pentru ca
această abordare să aibă succes, a fost necesar să se stabilească că
diferite mutații au fost, de fapt, în aceeași genă. Acest lucru nu a fost un
exercițiu banal, așa cum este ilustrat în următoarea situație.
Geneticienii de la Drosophila genetică au identificat un număr mare de
mutații recesive legate de X care afectează culoarea ochilor de culoare
sălbatică de culoare roșie (Figura 7.17). Primul dintre acestea să fie
descoperit a produs celebrele ochi albi studiați de grupul lui Morgan.
Alte mutații au provocat apariția în ochi a unei palete întregi de nuanțe:
nuanțe întunecate, cum ar fi granat și rubin; culori vii, cum ar fi
vermilion, cireșe și corali; și pigmentări mai ușoare cunoscute sub
numele de caisă, bovină și garoafă. Această mare varietate de
fenotipuri de culori ale ochilor au reprezentat un puzzle: Au fost
mutațiile care le-au provocat alele multiple ale unei singure gene sau au
afectat mai mult de o genă?
Testul de completare arată dacă două mutații sunt în genele aceleași
sau diferite
Cercetătorii definesc de obicei o genă ca o unitate funcțională care
orientează apariția unui produs molecular care, la rândul său,
contribuie la un anumit fenotip. Aceștia pot utiliza această definiție
pentru a determina dacă două mutații sunt în genele aceleași sau
diferite. Dacă doi cromozomi omologi dintr-un individ poartă fiecare o
mutație recesivă de tip sălbatic, va rezulta un fenotip normal dacă
mutațiile sunt în gene diferite. Fenotipul normal apare deoarece
aproape toate mutațiile recesive perturbează funcția unei gene (așa
cum este explicat în Capitolul 8). Alelele dominante de tip sălbatic de pe
fiecare dintre cei doi omologi poate compensa sau să completeze
defectul celuilalt cromozom prin generarea suficientă a ambelor
produse genetice pentru a obține un henotype normal
(Figura 7.18a, stânga). Dimpotrivă, dacă mutațiile recesive de pe cele
două cromozomi omologi sunt în aceeași genă, în ale individului nu
există o alelă de tip sălbatic a genei respective și nici o copie mutantă a
genei nu va putea să îndeplinească funcția normală. Ca urmare, nu va
exista nici o completare și nici un produs genetic normal și va apărea un
fenotip mutant (Fig.7.18a, dreapta). În mod ironic, o colecție de
mutații care nu se completează reciproc sunt cunoscute ca un grup de
complementare. Geneticienii folosesc adesea "grupul de
complementare" ca sinonim pentru "gena" deoarece mutațiile dintr-un
grup de complementare afectează aceeași unitate de funcție, astfel,
aceeași genă. Un test simplu bazat pe ideea unei gene ca o unitate de
funcție poate determina dacă două mutații sunt sau nu alele ale
aceleiași gene.
Pur și simplu examinați fenotipul unui individ heterozygos în care un
omolog al unui anumit cromozom poartă o mutație recesivă, iar celălalt
omolog poartă o altă mutație recesivă. Dacă fenotipul este de tip
sălbatic, mutațiile nu pot fi în aceeași gena. Această tehnică pentru a
determina dacă doi cromozomi omologi poartă mutații nonalelice de
gene diferite
se completează reciproc sau mutațiile alele ale aceleiași gene care nu
se completează reciproc sunt cunoscute ca teste de complementare. De
exemplu, deoarece o femeie Drosophila heterozigotă pentru granat și
rubin (rubin de granat / granat - rubin) are ochi roșii de cărămidă, este
posibil să se concluzioneze că mutațiile care provoacă granat și rubin
sunt în gene diferite.
Testele de completare au arătat, de fapt, că granatul, rubinul,
vermilionul și pigmentarea garoafelor sunt guvernate de gene separate.
Dar cromozomii care transporta mutații care dau naștere fenotipurilor
albe, cireșe, corali, caise și bivoli nu se completează reciproc. Aceste
mutații formează, prin urmare, alele diferite ale unei singure gene.
Geneticienii de la Drosophila au numit această genă gena albă sau w,
după prima mutație observată; ele desemnează alela de tip sălbatic ca
w? și diferitele mutații ca W1 (mutația inițială albă descoperită de T. H.
Morgan, deseori pur și simplu desemnată ca w), wcherry, wcoral,
wapricot și wbuff. De exemplu, ochii unei femei w1 / wapricot sunt o
culoare cairă diluată; deoarece fenotipul acestui heterozygote nu este
de tip sălbatic, cele două mutații sunt alelice. Figura 7.18b ilustrează
modul în care cercetătorii colectează date din mai multe teste de
completare într-un tabel de completare. Un astfel de tabel ajută la
vizualizarea relațiilor dintre un grup mare de mutanți.
În Drosophila, mutațiile din harta genei w sunt foarte apropiate
împreună în aceeași regiune a cromozomului X, în timp ce mutațiile din
alte gene ale culorii ochilor se află în altă parte
cromozomului (figura 7.18c). Acest rezultat sugerează că genele nu sunt
entități disjuncte cu părți care se întind de la un capăt al unui
cromozom la altul; fiecare genă, de fapt, ocupă doar o zonă relativ
mică, discretă a unui cromozom.
Studiile care definesc genele la nivel molecular au arătat că majoritatea
genelor constau în 1000-20 000 de perechi de baze continue (bp). La
om, printre genele cele mai scurte sunt genele de aproximativ 500 bp
care guvernează producerea de proteine histone, în timp ce cea mai
lungă gena identificată până în prezent este gena distrofiei musculare
Duchenne (DMD), care are o lungime de peste 2 milioane perechi de
nucleotide. Toate genele umane cunoscute se încadrează undeva între
aceste extreme. Pentru a pune aceste cifre în perspectivă, un
cromozom uman mediu este de aproximativ 130 de milioane de perechi
de baze în lungime.
Cu toate că testarea de complementare face posibilă diferențierea
mutațiilor în gene diferite de mutațiile din aceeași genă, nu clarifică
modul în care structura unei gene poate găzdui diferite mutații și modul
în care aceste mutații diferite pot modifica fenotipul în moduri diferite.
Fiecare mutație schimbă întreaga genă la un singur accident vascular
cerebral într-un anumit mod, sau schimbă doar o parte specifică a unei
gene, în timp ce alte mutații modifică alte părți?
O gene este o secvență liniară a perechilor de nucleotide care pot
muta independent și recombina cu fiecare
La sfarsitul anilor 1950, geneticianul american Seymour Benzer a folosit
analiza recombinarii pentru a arata ca doua mutatii diferite care nu s-au
completat unul pe celalalt si de aceea au fost cunoscute ca fiind in
aceeasi gena pot de fapt schimba diferite parti ale acelei gene. El a
motivat că, dacă se poate produce recombinarea nu numai între gene,
ci și în cadrul unei gene, încrucișările între cromozomi omologi
mutații diferite cunoscute că se află în aceeași genă ar putea, în teorie,
să genereze o alelă de tip sălbatic (figura 7.19). Deoarece mutațiile care
afectează o singură genă se află foarte aproape împreună pe un
cromozom, este necesar să examinăm un număr foarte mare de
descendenți pentru a vedea chiar și un eveniment încrucișat între ei.
Rezoluția sistemului experimental trebuie deci să fie extrem de ridicată,
permițând detectarea rapidă a evenimentelor genetice rare. Pentru
organismul experimental, Benzer a ales bacteriofagul T4, un virus ADN
care infectează celulele Escherichia coli (Fig.7.20a.1). Deoarece fiecare
fag T4 care infectează o bacterie generează 100-1000 de descendenți
de fagi în mai puțin de o oră, Benzer ar putea produce cu ușurință
destule recombinante rare pentru analiza sa (Fig.7.20a.2). Mai mult
decât atât, prin exploatarea unei particularități a anumitor mutații T4,
el a conceput condiții care au permis doar proliferarea fagilor
recombinanți și nu a fagilor parentale.
Sistemul experimental: Analiza rII multiple? Mutațiile bacteriofagei T4
Chiar dacă bacteriofagii sunt prea mici pentru a fi văzuți fără ajutorul
unui microscop electronic, o tehnică simplă face posibilă detectarea
prezenței lor cu ochiul liber (Fig.7.20a.3). Pentru a face acest lucru,
cercetătorii amestecă o populație de particule bacteriofage cu un
număr mult mai mare de bacterii și apoi se toarnă acest amestec pe o
placă petri, unde celulele sunt imobilizate într-un agar nutritiv. Dacă un
singur fag infectează o singură celulă bacteriană undeva pe peluza de
bacterii numită bacterie, celula produce și eliberează particule virale
descendente care difuzează pentru a infecta bacteriile adiacente, care,
la rândul lor, produc și eliberează încă mai multe descendenți de fagi.
Cu fiecare eliberare a particulelor de virus, celula gazdă bacteriană
moare. Astfel, mai multe cicluri de infecție cu fagi,
replicarea și eliberarea produc o suprafață circulară curățată în placă,
numită placă, lipsită de celule bacteriene vii. Restul suprafeței plăcii
Petri este acoperită cu o suprafață
peluza opalescentă a bacteriilor vii. Cele mai multe plăci conțin de la 1
milion la 10 milioane de descendenți virale ai bacteriofagei singulare
care a infectat inițial o celulă în acea poziție
pe placa petri. Diluarea secvențială a soluțiilor care conțin fag face
posibilă măsurarea numărului de fagi într-o anumită placă și ajunge la
un numar numar de particule virale (Fig.7.20a.4).
Când Benzer a căutat pentru prima dată trăsături genetice asociate cu
bacteriofagul T4, a găsit mutanți care, atunci când au fost adăugați într-
o peluză de bacterii de tulpină E. coli B, au produs mai mari
placi cu marginile mai clare, mai rotunjite decât cele produse de
bacteriofagul de tip sălbatic (Fig.7.20b).
Deoarece aceste modificări în morfologia plăcii păreau a fi rezultatul
unei lizări anormal de rapide a bacteriilor gazdă.
Benzer a numit mutațiile care au dat naștere acestui fenotip r pentru
"liza rapidă". Multe mutații r se referă la o regiune a cromozomului T4
cunoscut ca regiunea rII; acestea sunt numite rII? mutații. O proprietate
suplimentară a rII? mutațiile le face ideale pentru cartografierea
structurii fine a genei (cartografierea mutațiilor în cadrul unei gene)
efectuate de Benzer. Tipul sălbatic rII? bacteriofagii formează plăci de
formă și mărime normală pe celule ale tulpinii B de E. coli și o tulpină
cunoscută sub numele de E. coli K (a). RII? Cu toate acestea, mutanții au
un domeniu alterat al gazdei: Ei nu pot forma plăci cu celule E. coli K (a),
deși așa cum am văzut, ele produc plăci mari, neobișnuit de distincte,
cu celulele E. coli B (Fig.7.20b). Motivul pentru care rII? mutanții nu pot
să infecteze celulele tulpinii K (?) nu a fost clar pentru Benzer, dar
incapacitatea lor de a face acest lucru ia permis să dezvolte un test
extrem de simplu și eficient pentru rII? funcția genei pe care ar putea să
o folosească pentru a înțelege structura genelor.
Regiunea rII are două gene
Înainte de a putea verifica dacă două mutații din aceeași genă s-ar
putea recombina, Benzer trebuia să fie sigur că se uita cu adevărat la
două mutații din aceeași genă. Pentru a verifica acest lucru, a efectuat
teste personalizate de complementare adaptate la două caracteristici
semnificative ale bacteriofagului T4: Ele sunt haploide (adică, fiecare
fag poartă un singur cromozom T4), și ele se pot replica doar într-o
bacterie gazdă. pentru că
Fazele T4 sunt haploide, Benzer trebuie să se asigure că două
cromozomi T4 au intrat în aceeași celulă bacteriană pentru a testa
complementarea între mutații.
În testele sale de completare, el a infectat simultan celulele E. coli K (?)
Cu două tipuri de cromozomi T4 - unul purtând un rII? mutația, cealaltă
a avut o mutație diferită rIIa - și apoi a căutat liza celulară (Fig.7.20c).
Pentru a se asigura că cele două tipuri de fagi ar infecta aproape fiecare
celulă bacteriană, el a adăugat mult mai mulți fagi de fiecare tip decât
bacteriile. Dacă cele două rII? mutațiile au fost în gene diferite, fiecare
dintre cromozomii mutanți T4 ar furniza un rII de tip sălbatic? funcția
genei,compensând lipsa acelei funcții în celălalt cromozom și ducând la
liză. Pe de altă parte, dacă cele două rII? mutațiile au fost în aceeași
genă, fără plăciar apărea, deoarece nici un cromozom mutant nu ar fi
capabil să furnizeze funcția lipsă. Benzer trebuia să satisfacă o cerință
experimentală finală:Pentru ca testul de completare să aibă sens, el a
trebuit să se asigure că cele două rII? mutațiile analizate au fost fiecare
recesive la tip sălbatic și nu au interacționat unele cu altele pentru a
produce un rII? fenotipul dominant la tip sălbatic. A verificat aceste
puncte printr-un experiment de control în care a pus cele două rII?
mutații la fel cromozomul și apoi infectate simultan E. coli K (?) cu
aceștia dublu rII? mutanți și cu fagi de tip sălbatic (figura 7.20c). Dacă
mutațiile au fost recesive și nu au interacționat una cu cealaltă, celulele
ar lise, caz în care testul de completare ar fi interpretabil.
Distincția semnificativă între testul actual de complementaritate și
experimentul de control este plasarea celor două rII? mutații. În
completarea
test, un rII? mutația este pe un cromozom, în timp ce cealaltă rII?
mutația este pe celălalt cromozom; două mutații aranjate în acest mod
sunt considerate a fi în configurația trans.
În experimentul de control, cele două mutații sunt pe același
cromozom, în așa-numita configurație cis.
Testul complet, inclusiv testul de complementare și experimentul de
control, este cunoscut ca un test cis-trans. Benzer a numit orice grup de
complementare identificat prin testul cistrans un cistron, iar unii
geneticieni folosesc încă termenul "cistron" ca sinonim pentru "gena".
Teste ale mai multor perechi diferite de rII? mutațiile au arătat că
acestea se încadrează în două grupuri de complementare: rIIA și rIIB. Cu
această cunoaștere, Benzer ar putea să caute două mutații în aceeași
genă și apoi să vadă dacă se recombonează vreodată să producă
descendenți de tip sălbatic.
O gene este compusă din subunități mutabile care se pot recombina
Când Benzer a infectat bacteriile de tulpină E. coli B cu un amestec de
fagi care transporta mutații diferite în aceeași genă (de exemplu, rIIA1
și rIIA2), el a observat
apariția lui rII? descendenți (figura 7.20d). Știa acești descendenți de tip
sălbatic, rezultând din recombinare și nu din mutații inverse, deoarece
frecvențele rII? particulele de fag pe care le-a observat au fost mult mai
mari decât frecvențele rII? revertanți văzuți în rândul descendenților
produși prin infectarea bacteriilor cu tulpină B fie cu un singur mutant.
Pe baza acestor observații, el a tras trei concluzii despre structura
genetică: (1) o genă constă din diferite părți care pot muta fiecare; (2)
recombinarea între diferitele situsuri mutabile din aceeași genă poate
genera o alelă normală, de tip sălbatic; și (3) o genă își îndeplinește
funcția normală numai dacă toate componentele sale sunt de tip
sălbatic.
Din ceea ce știm acum despre structura moleculară a ADN-ului, acest
lucru are sens perfect. Locurile separate mutabile sunt nucleotide
diferite în interiorul genei și recombinarea poate să apară între
nucleotide în cadrul unei gene, precum și între gene.
Dar cum sunt perechi de nucleotide care alcătuiesc o genă aranjată -
într-un rând continuu sau dispersată în modele precise în jurul
genomului? Și faceți diferitele mutații
care afectează funcția genetică alterează numeroase nucleotide diferite
sau doar un subset mic în cadrul fiecărei gene?
O gene este un set liniar discret de perechi de nucleotide
Pentru a raspunde la aceste intrebari despre aranjarea nucleotidelor
intr-o gena, Benzer a obtinut in cele din urma mii de rII induse spontan
si mutagene? mutații pe care le-a cartografiat unul cu celălalt. Pentru a
mapa locația unei mii de mutanți prin compararea tuturor posibilelor
cruci în două puncte, ar fi trebuit să stabilească un milion de
împerecheri. Dar, profitând de mutații de ștergere, el putea obține
aceleași informații cu mult mai puține cruci.
Utilizând ștergerea mutațiilor de hartă și definirea unei gene
După cum am văzut, ștergerile sunt mutații care elimină perechile de
nucleotide contigue de-a lungul unei molecule de ADN. La intersecțiile
dintre bacteriofagii care poartă o mutație și bacteriofagii care poartă
deleții ale regiunii corespunzătoare, nu poate apărea descendenți
recombinanți de tip sălbatic, deoarece nici un cromozom nu poartă
informațiile corespunzătoare la locul mutației. Cu toate acestea, dacă
mutația se află în afara regiunii șterse din cromozomul omologic, pot
apărea descendenți de tip sălbatic (figura 7.21a). Acest lucru este
valabil dacă mutația este o mutație punctuală, adică o mutație a unei
nucleotide sau este ea însăși o ștergere. Crucificări între orice
necharacterized
mutația și o deleție cunoscută dezvăluie imediat dacă mutația se află
sau nu în regiunea eliminată de la celălalt cromozom al fagului. Această
metodă de maparea cu ștergerea oferă o modalitate rapidă de a găsi
locația generală a unei mutații. Folosind o serie de ștergeri suprapuse,
Benzer împărțea regiunea rII într-o serie de intervale. Apoi ar putea
atribui orice punct de mutație într-un interval, observând dacă sau nu
recombinarea de a da rII? descendenți atunci când sunt încrucișați cu
seria de ștergeri (figura 7.21b).
Benzer a reprezentat 1612 mutații punctuale spontane și câteva deleții
în locusul rII al bacteriofagului T4 prin analiză de recombinare. Mai întâi
a folosit recombinarea pentru a determina relația dintre ștergeri.
El a găsit în continuare locația aproximativă a mutațiilor punctuale
individuale, observând care deleții s-ar putea recombina cu fiecare
mutant pentru a obține descendenți de tip sălbatic. Apoi a efectuat
teste de recombinare între toate mutațiile de puncte cunoscute că se
află în aceeași regiune mică a cromozomului.
Aceste rezultate au produs o hartă a "structurii fine" a regiunii (figura
7.21c).
Din observația că numărul de situsuri mutabile din regiunea rII este
foarte apropiat de numărul de nucleotide estimat a fi în această
regiune, Benzer a dedus că o mutație poate să apară din schimbarea
unei singure nucleotide și că se poate produce o recombinare între
nucleotidele adiacente perechi. Din observația că mutațiile
în regiunea rII formează o hartă a recombinării liniare auto-
consecvente, a concluzionat că o genă este compusă dintr-o secvență
liniară continuă de perechi de nucleotide în
ADN-ul. Și din observațiile conform cărora pozițiile mutațiilor din gena
rIIA nu se suprapun cu cele ale genei rIIB, el a dedus că secvențele
nucleotidice care compun cele două gene sunt separate și distincte. O
genă este astfel un set liniar de perechi de nucleotide, localizat într-o
regiune discretă a unui cromozom, care servește ca unitate de funcție.
Locurile fierbinți sunt mai predispuse la mutare
Unele situri dintr-o genă se mută în mod spontan mai frecvent decât
altele și, ca rezultat, sunt cunoscute ca pete fierbinți (Figura 7.21c).
Existența unor puncte fierbinți sugerează că anumite nucleotide pot fi
modificate mai ușor decât altele.
Tratamentul cu mutageni se transformă, de asemenea, pe puncte
fierbinți, dar deoarece mutagenii au specificități pentru anumite
nucleotide, locurile extrem de mutabile care apar cu diferite mutagene
sunt adesea în poziții diferite într-o genă decât petele fierbinți care
rezultă din mutația spontană. Nucleotidele sunt chimic aceleași
indiferent dacă acestea se află într-o genă sau în ADN-ul dintre gene și
așa cum arată experimentele lui Benzer, mecanismele moleculare
responsabile pentru mutație și recombinare nu discriminează între
acele nucleotide care sunt intragenice (în interiorul unei gene) și cele
care sunt intergenice (între gene) . Distincția principală dintre DNA în
interiorul și
ADN-ul în afara unei gene este că gama de nucleotide care compun o
genă a evoluat o funcție care determină fenotipul.
Acum descriem modul în care geneticienii au descoperit ce este această
funcție.
7.3 Ce mutații ne spun despre funcția de gene
Experimentele lui Mendel au stabilit că o genă individuală poate
controla o caracteristică vizibilă, dar legile sale nu explică modul în care
genele guvernează de fapt aspectul trasaturilor.
Anchetatorii care lucrează în prima jumătate a secolului al XX-lea au
studiat cu atenție modificările biochimice cauzate de mutații într-un
efort de a înțelege conexiunea enotypephenotype.
Într-unul din primele studii realizate în 1902, medicul britanic Dr.
Archibald Garrod a arătat că o tulburare genetică umană cunoscută sub
numele de alkaptonurie este determinată de alela recesivă a unei gene
autosomale. Garrod a analizat pedigramentele de familie și a efectuat
analize biochimice asupra membrilor familiei cu și fără traiect. Urina
persoanelor cu alcaptonurie devine negru la expunerea la aer. Garrod a
constatat că o substanță cunoscută sub numele de acid homogentisic,
care înnegrește în contact cu oxigenul, se acumulează în urină de
pacienți cu alcaponurie. Aceiași oameni elimină tot acidul homogentisic
pe care îl ingesc, în timp ce oamenii care nu suferă de această afecțiune
nu au acid urinar homogentisic în urină chiar și după ingerare
substanța. Din aceste observații, el a concluzionat că persoanele cu
alcaptonurie nu sunt capabile să metabolizeze acidul homogentisic la
produsele de degradare
generate de indivizi normali (figura 7.22). Deoarece multe reacții
biochimice din celulele organismelor sunt catalizate de enzime, Garrod
a emis ipoteza că lipsa enzimei care descompune acidul homogentisic
este cauza alcaptonurii; în absența acestei enzime, acidul se
acumulează și determină urina să devină negru la contactul cu oxigenul.
El a numit această condiție o "eroare inbornică a metabolismului".
Garrod a studiat mai multe alte erori inbornate ale metabolismului și a
sugerat că toate au apărut din mutații care au împiedicat o anumită
genă să producă o enzimă
necesare pentru o reacție biochimică specifică. În terminologia de
astăzi, alela de tip sălbatic a genei ar permite producția de enzime
funcționale (în cazul alcaptonurii, enzima este oxidaza acidă
homogentisică), în timp ce alela mutantă nu ar fi. Deoarece alela unică
de tip sălbatic din heterozygote generează o enzimă suficientă pentru a
preveni acumularea de acid homogentisic și, prin urmare,
alcaptonurie,alela mutantă este recesivă.
One Gene, o enzimă Ipoteza: o genă conține informația pentru
producerea unei enzime specific
George Beadle și Edward Tatum au efectuat o serie de experimente cu
privire la mucegaiul de pâine Neurospora crassa (al cărui ciclu de viață a
fost descris în capitolul 5) în anii 1940 care au demonstrat o relație
directă între gene și enzyme care catalizează reacțiile biochimice
specifice. Strategia lor era simplă. Ei au izolat mai întâi un număr de
mutații care au rupt sinteza argininei aminoacide, un compus necesar
pentru creșterea Neurospora.
Ei au emis ipoteza că mutații diferite au blocat diferite etape într-o
anumită cale biochimică: seriile ordonate de reacții care permit
Neurospora să obțină molecule simple din mediul înconjurător și să le
transforme treptat în molecule succesive mai complexe, culminând cu
arginina. Un studiu care arată că mutațiile pot bloca etapele biochimice
discrete în calea rezultată în arginină ar constitui o dovadă puternică că
diferite gene controlează apariția diferitelor enzime, fiecare dintre
acestea catalizând o reacție specifică în calea biochimică.
Dovezile experimentale pentru "o singură genă, o singură enzimă"
Figura 7.23a ilustrează experimentele efectuate de Beadle și Tatum
pentru a-și testa ipoteza. Au obținut mai întâi un set de mutații induse
de mutagene care au împiedicat Neurospora să sintetizeze arginina.
Celulele cu oricare dintre aceste mutații nu au putut să producă
arginină și, prin urmare, ar putea crește pe un mediu minim care
conține sare și zahăr numai dacă ar fi fost suplimentat cu arginină. Un
microorganism mutant
care poate crește pe mediu minimal numai dacă a fost suplimentat cu
unul sau mai mulți factori de creștere care nu sunt solicitați de tulpini
de tip sălbatic, este cunoscut ca un auxotrof.
Celulele menționate au fost auxotrofele argininice. (În contrast, o celulă
de tip sălbatic care poate sintetiza un factor de creștere particular și
astfel crește în absența sa pe mediu minim este un prototip pentru
acest factor. Într-un sens mai general, prototipul se referă la o celulă de
tip sălbatic care poate sintetiza toate factorii de creștere necesari și,
astfel, cresc doar pe mediul minim.) Analizele de recombinare au
localizat mutațiile auxotrofice ale argininei blocante în patru regiuni
distincte ale genomului, iar testele de complementare au arătat că
fiecare dintre cele patru regiuni se corelează cu o complementare
diferită
grup. Pe baza acestor rezultate, Beadle și Tatum au concluzionat că cel
puțin patru gene susțin calea biochimică pentru sinteza argininei. Ei
au numit cele patru gene ARG-E, ARG-F, ARG-G și ARG-H.
Ei au întrebat apoi dacă oricare dintre tulpinile mutante de Neurospora
ar putea crește într-un mediu minim suplimentat cu oricare dintre un
număr de compuși care sunt intermediari în calea biochimică care
conduce la arginină, în loc cu arginina însăși. Dacă un mutant a crescut
pe mediu suplimentat în așa fel încât ar indica faptul că Neurospora
este capabil să transforme compusul intermediar în arginină. Dupa
gasirea a trei astfel de intermediari - ornitina, citrulina si
argininosuccinatul - Beadle si Tatum au compilat o tabela care descrie
care mutante auxotrofice arginine au fost capabile sa creasca pe mediu
minimal suplimentat cu fiecare dintre intermediari (figura 7.23b).
Interpretarea rezultatelor: Genele codifică enzime
Pe baza acestor rezultate, Beadle și Tatum au propus un model al
modului în care celulele Neurospora sintetizează arginina (Fig.7.23c). În
progresia liniară a reacțiilor biochimice prin care o celulă construiește
arginina din constituenți
din mediul minim, fiecare intermediar este atât produsul dintr-o etapă,
cât și substratul pentru următorul. Fiecare reacție în secvența precis
ordonată este catalizată de o enzimă specifică, iar prezența fiecărei
enzime depinde de una din cele patru gene ARG. O mutație într-o
singură genă blochează calea la un anumit pas deoarece celula nu are
enzima corespunzătoare; această lipsă împiedică creșterea celulei în
absența argininei. Suplimentarea mediului cu orice intermediar care
apare dincolo de reacția blocată va restabili creșterea datorită
organismului
are toate enzimele rămase necesare pentru a transforma intermediarul
în arginină. Suplimentarea cu un intermediar care are loc înainte ca
enzima lipsă să nu funcționeze deoarece celula nu este capabilă să
transforme intermediarul în arginină.
Prin inferență, deoarece fiecare mutație elimină capacitatea celulei de a
produce o enzimă capabilă să catalizeze o anumită reacție, fiecare genă
controlează sinteza sau activitatea
a unei enzime sau după cum se arată de Beadle și Tatum: o genă, o
enzimă. Desigur, gena și enzima nu sunt același lucru; mai degrabă,
secvența de nucleotide dintr-o genă conține informații care codifică
cumva structura unei molecule de enzimă. În timp ce analiza căii de
arginină studiată de Beadle și Tatum a fost simplă, studiile de căi
biochimice nu sunt întotdeauna atât de ușor de interpretat deoarece
unele biochimice căile nu sunt progresii lineare ale reacțiilor treptate.
De exemplu, o cale de ramificație apare dacă diferite enzime acționează
asupra aceluiași intermediar pentru al transforma în două produse
finale diferite. În cazul în care
celula necesita ambele aceste produse finale pentru crestere, o mutatie
intr-o gena care codifica oricare dintre enzimele necesare pentru a
sintetiza intermediarul ar face ca celulele sa depinda de adaosul la
mediul minimal al ambelor produse finale. O a doua posibilitate este ca
o celulă să utilizeze oricare dintre două căi independente, paralele,
pentru a sintetiza un produs final necesar. Într-un astfel de caz, o
mutație într-o genă care codifică o
enzima în una dintre căi ar fi fără efect. Numai o celulă cu mutații în
gene care specifică enzimele în ambele căi ar prezenta un fenotip
aberant.
Chiar și cu progresii neliniare ca acestea, analizele genetice atente pot
dezvălui natura căii biochimice pe baza înțelegerii lui Beadle și Tatum că
genele codifică proteinele.
Genele specifică identitatea și ordinea aminoacizilor în lanțurile de
polipeptide
Deși o singură genă, o ipoteză enzimatică a fost un progres critic în
înțelegerea modului în care genele influențează fenotipul, este o
simplificare excesivă. Nu toate genele guvernează construcția de
enzime active în căile biochimice.
Enzimele sunt o clasă a moleculelor cunoscute sub numele de proteine,
iar celulele conțin multe tipuri diferite de proteine, dintre care numai
unele se comportă ca enzime. Printre altele
tipuri sunt proteine care oferă formă și rigiditate unei celule, proteine
care transportă molecule în și din celule, proteine care ajută ADN-ul în
cromozomi și proteine care acționează ca mesageri hormonali. Genele
direcționează sinteza tuturor proteinelor, enzimelor și nonenzimelor
deopotrivă. Mai mult, după cum vedem în continuare, genele
determină de fapt construirea de polipeptide și, deoarece unele
proteine sunt compuse din mai mult de un tip de polipeptidă, mai mult
de o genă determină construcția lor.

Proteinele sunt polimeri liniari ai aminoacizilor legați de legăturile


peptidice
Pentru a înțelege modul în care informațiile dintr-o genă specifică
producția unei anumite proteine, este necesară revizuirea compoziției
chimice a proteinelor. Sunt proteinele
polimeri compuși din blocuri de construcții cunoscute sub denumirea
de aminoacizi. Celulele folosesc în principal 20 de aminoacizi diferiți
pentru a sintetiza proteinele de care au nevoie. Toți acești aminoacizi
au anumite caracteristici de bază, încapsulate de formula NH2-CHR-
COOH (figura 7.24a). Componenta -COOH, cunoscută și sub numele de
acid carboxilic, este, așa cum sugerează și numele, acidă; componenta -
NH2, cunoscută și ca o grupare amino, este bazică. R se referă la
lanțurile laterale care disting fiecare dintre cei 20 de aminoacizi (figura
7.24b). Un grup R poate fi la fel de simplu ca un atom de hidrogen (în
glicina aminoacidă) sau ca un complex ca un inel benzenic (în
fenilalanină). Unele lanțuri laterale sunt relativ neutre și nereactive,
altele sunt acide, iar altele sunt de bază.
În timpul sintezei proteinelor, o mașină de construire a proteinelor a
celulei leagă aminoacizii prin construirea legăturilor peptidice covalente
care se alătură grupării -COOH a unui aminoacid cu grupa -NH2 din
următoarea (figura 7.24c). O pereche de aminoacizi conectați în acest
mod este o dipeptidă; mai mulți aminoacizi legați împreună formează o
oligopeptidă.
Proteinele sunt astfel polimeri liniari ai aminoacizilor. Ca lanțurile de
nucleotide din
ADN-ul, polipeptidele au o polaritate chimică. Un capăt al unei
polipeptide este numit N terminus deoarece conține o grupare amino
liberă care nu este conectată la nici un alt aminoacid. Celălalt capăt al
lanțului polipeptidic este capătul C, deoarece conține un grup de acid
carboxilic liber.
Afacerea primară a majorității genelor trebuie să precizeze secvența de
aminoacizi
a unei polipeptide
Fiecare proteină este compusă dintr-o secvență unică de aminoacizi. De
fapt, proprietățile chimice care permit proteinei structurale să dea o
formă celulară sau enzimelor pentru a cataliza reacții specifice sau
hormoni care să acționeze ca mesageri sunt o consecință directă a
identității, numărului și ordinii liniare a aminoacizilor în proteină.
Dacă genele codifică proteine, atunci cel puțin unele mutații ar putea fi
schimbări într-o genă care modifică secvența corespunzătoare a
aminoacizilor în proteina codificată de acea genă. La mijlocul anilor
1950, Vernon Ingram a început să stabilească ce fel de schimbări
provoacă mutații particulare în proteina corespunzătoare. Folosind
tehnicile recent dezvoltate pentru determinarea secvenței
aminoacizilor într-o proteină, el a comparat secvența de aminoacizi a
formei normale de hemoglobină (HbA) cu cea a hemoglobinei în fluxul
sanguin al oamenilor homozigoți pentru mutația care cauzează secera
anemie (HbS). În mod remarcabil, el a găsit doar o singură diferență de
aminoacizi între proteinele de tip sălbatic și cele mutante (figura 7.25a).
Al șaselea aminoacid de la capătul N al unuia dintre cele două tipuri de
lanțuri de polipeptide care alcătuiesc hemoglobina a fost acid glutamic
la indivizi normali, dar valină la pacienții cu sicilă. Ingram a stabilit astfel
că o mutație care înlocuiește un aminoacid cu altul a avut puterea de a
schimba structura și funcția hemoglobinei și, prin urmare, modifică
fenotipul de la anemie normală la seceră (Fig. 7.25b). Acum știm că
acidul glutamic-tovalină
schimbarea afectează solubilitatea hemoglobinei în interiorul celulei
roșii din sânge. Molecula de hemoglobină constă din două lanțuri alfa
(a) și două beta (a) complexate într-un tetramer al patru lanțuri. La
concentrații scăzute de oxigen, forma de hemoglobină în formă de
seceră mai puțin solubilă se agregă în lanțuri lungi care deformează
celulele roșii din sânge (figura 7.25a).
Deoarece oamenii care suferă de o varietate de anemii moștenite au de
asemenea molecule de hemoglobină defectuoase, Ingram și alți
geneticieni au putut determina modul în care un număr mare de
mutații diferite afectează secvența de aminoacizi a hemoglobinei
(figura 7.25c). Majoritatea hemoglobinelor modificate au o schimbare
într-un singur aminoacid. La diferiți pacienți, modificarea este, în
general, în aminoacizi diferiți, dar, ocazional, două mutații
independente au ca rezultat substituții diferite pentru același
aminoacid. Geneticienii folosesc termenul mutație missense pentru a
descrie o modificare genetică care provoacă substituirea unui
aminoacid cu altul.
Secvența aminoacizilor din polipeptide determină forma
tridimensională a proteinei și astfel funcția acesteia
În ciuda naturii uniforme a construcției de proteine - o linie de
aminoacizi legați de legăturile peptidice - fiecare tip de polipeptidă se
îndoaie într-o formă tridimensională unică.
Secvența liniară a aminoacizilor din cadrul unei polipeptide este
structura sa primară. Fiecare structură primară unică plasează
constrângeri cu privire la modul în care poate fi organizat un lanț
spațiu tridimensional. Deoarece grupurile R care disting 20 de
aminoacizi au proprietăți chimice diferite, unii aminoacizi formează
legături de hidrogen sau
legăturile electrostatice atunci când sunt aduse în proximitate cu alți
aminoacizi. Aminoacizii nonpolari, de exemplu, pot deveni asociați unul
cu altul prin interacțiuni hidrofobe care le "ascund" de apă, în timp ce
doi aminoacizi cisteinici pot forma punți covalent disulfidice (-S-S-) prin
oxidarea grupărilor lor -SH. Toate aceste interacțiuni (Fig.7.26a) ajută la
stabilizarea polipeptidei într-o conformație tridimensională specifică.
Structura primară (figura 7.26b) determină forma tridimensională prin
generarea de regiuni localizate cu o geometrie caracteristică
cunoscută sub denumirea de structură secundară (figura 7.26c),
precum și celelalte pliuri și răsuciri care, împreună cu structura
secundară, produc terțiarul final tridimensional
structura întregii polipeptide (figura 7.26d). Structura terțiară normală -
modul în care un lanț lung de aminoacizi se îndoaie în mod natural în
spațiul tridimensional în condiții fiziologice - este cunoscut ca o
configurație nativă a polipeptidei. Diferitele forțe, inclusiv legăturile de
hidrogen, legăturile electrostatice, interacțiunile hidrofobe și punțile
disulfidice, ajută la stabilizarea configurației native. Merită repetat
faptul că structura primară - secvența aminoacizilor dintr-o polipeptidă
- determină direct structurile secundare și terțiare, deoarece sunt
inerente secvența liniară a aminoacizilor este informația necesară
pentru ca lanțul să se orienteze în configurația sa nativă.
Merită repetat faptul că structura primară - secvența aminoacizilor
dintr-o polipeptidă - determină direct structurile secundare și terțiare
deoarece inerentă în secvența liniară a aminoacizilor sunt informațiile
necesare pentru ca lanțul să se orienteze în configurația sa nativă.
Câteva exemple ilustrează acest fapt. Biologii biologici știu că un lanț
polipeptidic nu este capabil să formeze un anumit tip de structură
secundară numită helix în vecinătate
a unei proline. Pe baza acestei informații și a altor informații
structurale, au conceput programe de calculator care examinează
secvența primară a unei proteine pentru aminoacizii care favorizează
perturbarea formării de helix. Aceștia pot utiliza aceste programe
pentru a prezice compoziția helicoasă a unei polipeptide în starea sa
nativă cu o precizie considerabilă. Într-un alt exemplu, multe proteine
se desfășoară sau devin denaturate atunci când sunt expuse
la uree și mercaptoetanol sau la creșterea căldurii sau a pH-ului,
deoarece aceste tratamente perturbă interacțiunile dintre aminoacizii
care stabilizează în mod normal structurile secundare și terțiare. Atunci
când condițiile revin la normal, multe proteine se revigorează spontan
în configurația lor nativă fără ajutorul altor agenți. Nicio altă informație
dincolo de structura primară nu este necesară pentru a realiza
proprietatea
forma tridimensională a unor astfel de proteine.
Unele proteine conțin mai mult de o polipeptidă
Anumite proteine, cum ar fi rhodopsina care promovează vederea alb-
negru, constau într-o polipeptidă. Mulți alți, totuși, cum ar fi proteina
cristalină a lentilei, care
asigură rigiditatea și transparența lentilelor ochilor noștri sau molecula
hemoglobinei care transportă oxigenul către și din țesuturile noastre,
sunt compuse din două sau mai multe lanțuri de polipeptide care se
asociază într-un mod specific (Fig.7.27a).
polipeptidele individuale dintr-un agregat sunt cunoscute ca subunități,
iar complexul de subunități este adesea denumit un multimer.
Configurația tridimensională a subunităților într-un multimer este o
structură cuaternară a unei proteine complexe.
Aceleași forțe care stabilizează forma nativă a unei polipeptide (adică
legăturile de hidrogen, legăturile electrostatice, interacțiunile hidrofobe
și punțile disulfidice) contribuie, de asemenea, la menținerea structurii
cuaternare. După cum arată figura 7.27a, în unele multimeri, cele două
sau mai multe subunități interacționante sunt polipeptide identice.
Aceste lanțuri identice sunt codificate de o singură genă. În alte
multimeri, prin contrast, mai mult de un tip de polipeptidă formează
proteina (Figura 7.27b). Diferitele polipeptide din aceste multimeri sunt
codificate de gene diferite.
Modificările într-un singur tip de subunitate, cauzate de o mutație într-
o singură genă, pot afecta funcția unui multimer. Molecula
hemoglobinei adulte, de exemplu, constă din două și două? subunități,
cu fiecare tip de subunitate determinat de o altă genă-una pentru lanț
și una pentru " lanţ. O mutație a genei Hbß rezultând un comutator de
aminoacizi în poziția 6 din lanțul ß cauzează anemia celulelor secerate.
În mod similar, dacă mai multe proteine multimerice au o subunitate
comună, o singură mutație în gena care codifică acea subunitate poate
afecta simultan toate proteinele.
Un exemplu este o mutație legată de X la șoareci și la oameni care
incapacită mai multe proteine diferite, toate cunoscute ca receptori de
interleukină (IL). Deoarece toți acești receptori
sunt esentiale pentru functionarea normala a celulelor sistemului
imunitar care lupta impotriva infectiilor si genereaza imunitate, aceasta
mutatie provoaca starea de viata in pericol, cunoscut sub numele de
XSCID;
Polipeptidele proteinelor complexe se pot asambla în structuri extrem
de mari, capabile să se schimbe cu nevoile celulei. De exemplu,
microtubulele care
alcătuiesc arborele în timpul mitozei sunt asamblaje gigantice de în
principal două polipeptide: tubulină și? tubulină (figura 7.27d). Celula
poate organiza aceste subunități în tuburi tubulare foarte lungi care
cresc sau se micsorează după cum este necesar în diferite stadii ale
ciclului celular.
Sumarul: Cele mai multe gene direcționează sinteza unei polipeptide
particulare
Deoarece mai mult de o genă reglementează producerea unor proteine
multimerice și deoarece nu toate proteinele sunt enzime, ipoteza "o
singură genă, o enzimă" nu este suficient de largă pentru a defini
funcția genei. O afirmație mai precisă este "o genă, o polipeptidă":
Fiecare genă guvernează construcția unei anumite polipeptide. După
cum vom vedea în capitolul 8, chiar și această reformulare nu include
funcția tuturor genelor, deoarece câteva gene din toate organismele nu
determină construcția de proteine; în schimb, ele codifică ARN care nu
sunt traduse în polipeptide.
Experimentele Beadle și Tatum s-au bazat pe conceptul că, dacă fiecare
genă codifică o polipeptidă diferită și dacă fiecare polipeptidă joacă un
rol specific în dezvoltarea, fiziologia sau comportamentul unui
organism, atunci o mutație a genei va bloca un proces biologic arginină
în Neurospora) într-un mod caracteristic.
Alți oameni de știință au realizat curând că ar putea folosi această
abordare pentru a studia aproape orice problemă interesantă din
domeniul biologiei. În caseta Fast Forward "Utilizarea mutagenesis
pentru a uita la procese biologice", pp. 240-241, vom descrie modul în
care un biolog a găsit un mare
grup de mutații care au perturbat asamblarea particulelor de
bacteriofag T4; prin studierea cu atenție a fenotipurilor cauzate de
aceste mutații, a dedus calea complexă care produce un întreg
bacteriofag.
Cunoasterea faptului ca genele codifica proteine prin determinarea
secventei de aminoacizi intr-o polipeptida a permis geneticistilor sa
analizeze cat de diferite mutatii intr-o singura gena poate produce
fenotipuri diferite. Dacă fiecare aminoacid are un efect specific asupra
structurii tridimensionale a unei proteine, atunci schimbarea
aminoacizilor în poziții diferite într-un lanț polipeptidic poate altera
funcția proteinei în moduri diferite. De exemplu, majoritatea enzimelor
au un situs activ care îndeplinește o sarcină specială, în timp ce alte
părți ale proteinei suportă forma și poziția acelui sit. Mutațiile care
schimbă identitatea aminoacizilor la locul activ pot avea consecințe mai
grave decât cele care afectează aminoacizii în afara locului activ. Unele
tipuri de substituții de aminoacizi, cum ar fi înlocuirea unui aminoacid
având o catenă secundară bazică cu un aminoacid având o catenă
laterală acidă, ar fi mult mai probabil să compromită funcția proteică
decât substituțiile care rețin caracteristicile chimice ale aminoacidului
inițial.
Unele mutații nu afectează compoziția de aminoacizi a unei proteine,
dar generează în continuare un fenotip anormal. După cum vedem în
capitolul 8, astfel de mutații modifică cantitatea de polipeptidă normală
produsă prin generarea de secvențe nucleotidice modificate care
perturbă procesele biochimice responsabile pentru decodificarea unei
gene într-o polipeptidă.
Modul în care mutațiile genetice afectează proteinele și viziunea de
primire a luminii: un exemplu cuprinzător
Cercetătorii au descris mai întâi anomalii ale percepției culorilor la
oameni, aproape 200 de ani în urmă. De atunci, au descoperit un
număr mare de mutații care modifică viziunea umană. Prin examinarea
fenotipului asociat cu fiecare mutație și apoi a privi direct la
modificările ADN moștenite cu mutația, au învățat multe despre genele
care influențează percepția vizuală umană și funcția proteinelor pe care
le codifică.
Mai multe atribute ale subiecților umani facilitează analiza
experimentală a vederii. În primul rând, oamenii pot recunoaște și
descrie variațiile în modul în care văd, de la banalitate
diferențele în ceea ce privește culoarea roșie, să nu vadă nici o
diferență între roșu și verde, să nu vadă nici o culoare. În al doilea rând,
știința avansată a psihofizicii oferă teste sensibile, neinvazive pentru
definirea și compararea exactă a fenotipurilor. Un test de diagnosticare,
de exemplu, se bazează pe faptul că oamenii percep fiecare culoare ca
un amestec de trei lungimi de undă diferite de lumină-roșu, verde și
albastru și pot ajusta rapoartele de lumină roșie, verde și albastră cu
intensități diferite de se potrivesc cu o a patra lungime de undă aleasă
în mod arbitrar, cum ar fi galben.
amestecul de lungimi de undă nu se combină pentru a forma a patra
lungime de undă; tocmai se pare că până la ochi. O persoană cu viziune
normală, de exemplu, va selecta o proporție bine determinată de lumini
roșii și verzi pentru a se potrivi cu un anumit galben, însă o persoană
care nu poate spune roșu din verde va permite oricărei proporții din
aceste două lumini color să facă același meci . În cele din urmă,
deoarece variațiile moștenite ale sistemului vizual rar afectează
fecunditatea sau longevitatea în societățile umane moderne, mutațiile
care generează multe din alelele noi care schimbă percepția vizuală
rămân într-o populație în timp.
Bazele Celulare și Moleculare ale Viziunii Celulele
Oamenii percep lumina prin neuroni în retină în partea din spate a
ochiului (figura 7.28a). Acești neuroni sunt de două tipuri: tije și conuri.
Tijele, care reprezintă 95% din toate
lumina care primeste neuroni, sunt stimulate de lumina slaba pe o
lungime de unda. La intensități mai mari ale luminii, tijele devin
saturate și nu mai trimit informații semnificative creierului. Acesta este
momentul în care conurile preiau, procesând lungimi de undă ale
luminii puternice, care ne permit să vedem culoarea. Conurile vin în trei
forme - unul este specializat în recepția de lumină roșie, al doilea în
recepția verde și al treilea în recepția de albastru. Pentru fiecare celulă
fotoreceptor, actul de recepție constă în absorbția fotonilor din lumina
unei anumite lungimi de undă, transducând
informații despre numărul și energia acelor fotoni la semnalele electrice
și transmiterea semnalelor prin intermediul nervului optic către creier.

S-ar putea să vă placă și