Sunteți pe pagina 1din 4

Oezul de aur-

Introducerea căii de biosinteză a β-carotenului în endospermul de orez prin ingineria


genetică pentru a învinge deficitul de vitamină A

Peter Beyer
University of Freiburg, Center for Applied Biosciences, D-79104 Freiburg, Germany and the
Institute for Plant Sciences, Swiss Federal Institute of Technology, CH-8092 Zurich, Switzerland

Conform datelor de care dispune Organizaţia Mondială a Sănătăţii (OMS), carenţa de


vitamina A face ca un număr de 250.000-500.000 de copii de vârstă preşcolară să orbească anual, iar jumătate
dintre ei nici nu supravieţuiesc. Aceşti copii provin în majoritate din sudul Asiei sau din unele zone ale Africii şi
aparţin acelei populaţii a cărei tradiţie este să se hrănească în principal sau chiar exlusiv cu orez, informeaza
Project Syndicate.
Orezul este o cereală hrănitoare, cu un conţinut ridicat de calorii, cu hidrocarbonaţii necesari organismului
nostru, cu multe calităţi nutritive, dar lipsit total de vitamina A. Această vitamină este însă esenţială pentru
epiderma noastră şi, mai ales, pentru ochi. Alimentele bogate în vitamina A sunt uşor de recunoscut prin
culoarea lor specifică, relativ portocalie: morcovi, caise, portocale, porumb şi multe altele. Orezul, alb după
decorticare şi cenuşiu înainte, nu ne oferă această vitamină. Consumând exclusiv de orez privează ochii, pielea
şi alte organe vitale de un nutrient vital. Ca urmare, în ţările unde orezul este singura bază de nutriţie, oamenii
suferă de avitominoza A, cu toate consecinţele de rigoare. Până de curând, problema părea a fi una fără soluţie,
dar, în urmă cu vreo 15 ani, s-a experimentat în laboratoare elveţiene un nou sortiment de orez, modificat
genetic, astfel încât să nu-i lipsească preţioasa vitamină. Datorită culorii sale galben-roşcate, noul sortiment de
orez a ajuns cunosut sub denumirea de "orezul de aur".

Abstract

Pentru a obține provitamina A (β-caroten) pe cale biosintetică în endospermul de orez, s-a introdus într-un
singur efort de transformare combinat codificarea cADN pentru phytoen sintaza (psy) și lycopen β-ciclaza (β-
lcy) ambele din Narcissus pseudonarcissus, și ambele sub controlul promotorului de glutelină specific
endospermului, împreună cu o desaturază fitoenă bacteriană (crtI, de la Erwinia uredovora sub control promotor
constitutiv 35S) .
Această combinație acoperă cerințele pentru sinteza β-carotenului și, asa cum s-a sperat, a fost obtinut
endospermul de orez galben purtator β-caroten in generatia T0.
Experimente suplimentare au arătat că nu este necesară prezența β-lcy, deoarece psy și crtI singure au fost
capabile să conducă sinteza β-carotenului, precum și formarea de xantofile ulterioare în aval.
Explicații plauzibile pentru această constatare sunt că aceste enzime din aval sunt exprimate constitutiv în
endospermul de orez sau sunt induse de transformare, de exemplu prin produse formate enzimatic.
Rezultatele utilizând N. pseudonarcissus ca sistem model au condus la dezvoltarea unei ipoteze,
conform căreia trans-licopenul sau derivatul de trans-licopen acționează ca un inductor într-un fel de mecanism
de feedback care stimulează genele carotenogene endogene.
Orezul este alimentul major de bază pentru sute de milioane de oameni. Este în general consumat în forma
sa măcinată, cu straturi exterioare (pericarp, tegmen și straturi aleurone) îndepărtate.
Motivul principal al măcinării este eliminarea stratului de aleuron bogat în ulei, care devine rânced la
depozitare, în special în zonele tropicale și subtropicale. Ca rezultat, partea comestibilă a boabelor de orez
constă din endospermă, umplută cu granule de amidon și corpuri de proteine, dar nu are mai multe substanțe
nutritive esențiale pentru menținerea sănătății, cum ar fi carotenoidele care arata activitatea provitaminei A.
Astfel, dependența de orez, ca bază alimentară primară, contribuie la deficiența de vitamina A, o problemă
serioasă de sănătate publică în cel puțin 26 de țări, inclusiv în regiunile foarte populate din Asia, Africa și
America Latină.
O intervenție complementară la strategiile existente pentru reducerea deficiențelor de vitamina A în țările cu
cele mai mari riscuri este de a fortifica majoritatea alimentelor de bază, orez, cu provitamina A prin creșterea
plantelor. Acest lucru poate fi realizat numai prin tehnologii recombinante, mai degrabă decât prin creșterea
convențională, datorită lipsei oricărui soi de orez care produce această provitamină în endospermă. Atât pentru
că transformarea orezului este bine stabilită, cât și datorită faptului că întreaga cale biosintetică carotenoidă a
fost recent identificată molecular, a fost posibil să se introducă calea biosintetică a provitaminei A (β-caroten)
complet în endospermul de orez prin inginerie genetică.
Pentru a institui calea către formarea a β-carotenului, este necesar să se completeze patru enzime de plante, și
anume fitozen sintaza, desaturaza fitoene, desaturaza ζ -carotenă (desaturazele care catalizează introducerea a
două duble legături, fiecare) și lycopen β-ciclaza. Alternativ, efortul de transformare poate fi simplificat prin
reducerea numărului de enzime necesare și utilizarea unei desaturaze carotene bacteriene capabile să introducă
toate cele patru legături duble necesare (Figura 1).

Calea biosintetică a Provitaminei A. Sunt date numele enzimelor.


CrtI desemnează o desaturază de caroten bacteriană capabilă să efectueze toate reacțiile de desaturare necesare
pentru care sunt necesare două enzime în plante. Săgețile indică capacitatea biosintetică prenyllipidă a
endospermului de orez de tip sălbatic și secvența de reacție necesară pentru a se obține provitamina A.
Inițial, s-a încercat să se introducă toate genele în embrioni de orez imaturi (TP 309) în etape, adică singuri
prin bombardarea particulelor, urmărind unificarea ulterioară a tuturor transgenelor într-o singură plantă prin
crossing ulterior.
Cu toate acestea, această abordare nu a avut succes, în principal datorită modelului de integrare dăunătoare
produs frecvent de această tehnică de transformare, așa cum a reieșit din analiza de hibridizare Southern.
Prin urmare, a fost utilizată transformarea mediată de Agrobacterium a embrionilor imaturi din orez de
precultura, proiectată astfel încât să instaleze întreaga cale biosintetică a β-carotenului în endospermul de orez
într-un singur efort de transformare.
S-au construit trei vectori, reprezentați schematic în Figura 2.
pB19hpc combină secvențele pentru fitoen sintaza din plante (psy) provenite de la daffodil (Narcissus
pseudonarcissus, nr. de aderare X78814) cu secvența care codifică o desaturază fitoenică bacteriană (crtl)
provenită de la Erwinia uredovora (numărul de acces D90087) cele două fiind plasate sub controlul glutelinei
specifice endospermei (Gt1) și respectiv a promotorului constitutiv CaMV 35S.
ADN-ul fitoen sintazei a conținut o secvență 5 'care codifică o peptidă funcțională de tranzit, așa cum s-a
demonstrat anterior , în timp ce gena crtI a fost fuzionată cu secvența de peptidă de tranzit a subunității mici de
tip Rubisco de mazăre (tp) et al. Această plasmidă, astfel, ar trebui să dirijeze formarea de licopen în plastidele
endospermului, locul de formare a GGPP.

FIGURA 2

Construcții ADN utilizate în transformări și cotransformări unice.


RB, frontiere dreapta; LB, frontiere stânga; tp, peptida de tranzit din mazăre ribuloză bis-fosfat carboxilază; !, terminator ;
p, promotor; gt; glutelină; psy, fitonen sintaza; crtl, desaturaza de caroten; lcy, licopen β-ciclaza.
Secvența ADN care codifică enzimele biosintetice carotenoide este dată în negru.
Pentru a completa calea de biosinteză a β-carotenului, co-transformările s-au efectuat folosind doi vectori, unul
(pZPsC) purtând psy și crtI, ca în pB19hpc, dar fără caseta de expresie pentru markerul selectabil aphIV și
celălalt (pZCycH) controlul promotorului, secvența care codifică enzima lycopen β-ciclaza, provenind din N.
pseudonarcissus (nr. de acces X98796) Ca phytoen sintaza, lycopen β-ciclaza a transportat o peptidă funcțională
de tranzit, permițând importul plastid (
Combinația ambelor plasmide, prin urmare, ar trebui să fie capabilă să direcționeze formarea β-carotenului în
endospermul de orez.
Un număr total de 800 de embrioni imaturi de orez precultivați au fost inoculați cu Agrobacterium LBA 4404 /
pB19hpc. Cincizeci de plante rezistente la higromicină au fost apoi analizate prin analiza de hibridizare
Southern.
Toate liniile testate au transportat transgenele și majoritatea plantelor au prezentat inserții simple, dar în unele
cazuri s-au observat inserții multiple.Pentru co-transformare, 500 de embrioni imaturi precultivati au fost
inoculați cu un amestec Agrobacterium de LBA4404 / pZPsC care transporta genele psy și crtI și lcy conținând
LBA4404 / pZCycH împreună cu aphIV ca marker selectabil. Plantele cotransformate au fost identificate prin
hibridizarea Southern. Toate cele 60 de linii regenerate selectate aleatoriu au fost pozitive pentru lcy, dintre care
12 plante au fost cotransformate cu pZPsC.Ca și transformarea de mai sus, 1-3 copii transgene au fost
predominante în plantele co-transformate.
Zece plante care adăpostesc toate cele patru gene introduse au fost transferate în seră pentru a obține semințe.
Toate plantele din toate transformările descrise aici au prezentat un fenotip normal, precum și o fertilitate
normală.

Semințele de F0 mature din linii transformate și de la plantele de control au fost uscate în aer, deshidratate și,
pentru a izola endospermul, lustruite cu hârtie de șmirghel timp de 8 ore intr un agitator (shaker).
În cele mai multe cazuri, endospermele transformate au prezentat o culoare galbenă evidentă, indicând formarea
carotenoidului.

Exemple de linii de orez galben noi obținute utilizând PMI ca o genă marker selectabilă.

Continuarea lucrărilor în curs are drept scop creșterea cantității de provitamină A prin identificarea blocajelor
metabolice care limitează blocajele în Orezul de Aur.
Noi transformări sunt în curs de desfășurare folosind diferiți promotori specifici endospermelor, o genă crtI
optimizată cu codon și gene de cale timpurie a așa-numitei căi nonmevalonate a biosintezei izoprenoide. Sunt în
curs de desfășurare alte lucrări de demonstrare a conceptului care vizează măsurarea și îmbunătățirea
biodisponibilității și bioeficacității provitaminei A.
O altă abordare vizează unificarea liniilor de orez bogate in fier cu linii de provitamină A, deoarece este
cunoscut faptul că provitamina A este capabilă să mărească biodisponibilitatea fierului.
Nu este de așteptat ca Orezul de Aur să furnizeze 100% din vitamina A în dietă, ci să imbogateasca continutul
pentru a ajunge la suficientă vitamină A.
Desigur, o prioritate ridicată pentru cercetare este o evaluare a biodisponibilității și bioeficacității pro-vitaminei
A conținute în orezul de aur.
Această cercetare a fost puternic împiedicată în trecut de necesitatea producerii unei cantități suficiente de
cereale care să fie utilizate în studiile de hrană în sistemele de model acceptate (porci, viței și dihori) în sere de
siguranță din Europa și restricții care interzic încercări în afara serelor.

S-ar putea să vă placă și