CHAPITRE 7 : LE COMPETUR D’HEMATOLOGIE

CHAPITRE 7 LE COMPETUR D’HEMATOLOGIE

Objectifs pédagogiques :

- Décrire les principes de fonctionnement des automates

d’hématologie
- Décrire les principales parties d’un
’ compteur d’hématologie
’
- Décrire les bonnes pratiques d’utilisation d’un automate
d hématologie
d’hématologie
- Décrire les procédures d’entretien courant des compteurs
d’hématologie
g
I- Généralités

Les compteurs d’hématologie ou automates d’hématologie sont des

appareils plus ou moins complexes utilisés pour la réalisation de
l hémogramme.
l’hémogramme
L’hémogramme est l'étude cytologique quantitative et qualitative du
sang circulant. Il comprend :
- la
l dét
détermination
i ti d des nombres
b absolus
b l d de globules
l b l rouges, d de globules
l b l
blancs et des plaquettes ;
- Lee dosage de l’hémoglobine
é og ob e ;
- la mesure de l’hématocrite ;
- le calcul des constantes érythrocytaires : VGM, TCMH et CCMH ;
- l’établissement po
pourr les glob
globules
les blancs de la form
formule
le le
leucocytaire
coc taire
donnant les pourcentages des différents types de leucocytes :
polynucléaires
p y neutrophiles,
p p
polynucléaires,
y éosinophiles,
p basophiles,
p
lymphocytes.
Il faut noter que la plupart des automates calcule l'hématocrite à partir
de la numération des globules rouges et du volume globulaire moyenmoyen.
 II‐ Principes de comptage et de mesure des compteurs d’hématologie
• Il existe essentiellement deux principes de comptage utilisés par les 
automates d'hématologie utilisés par les laboratoires.
'hé l l é l l b
II‐1‐ La variation d’impédance
• AAppelé encore, principe Coulter du nom de son inventeur:  Elle est la      
lé i i C l d d i Ell l
méthode de référence. 
• LL'appareil
appareil utilise les variations d
utilise les variations d’une
une résistance électrique afin de déterminer 
résistance électrique afin de déterminer
la taille des cellules sanguines.
• Les cellules en passant à travers une ouverture déplacent un volume égal de 
fluide conducteur. De plus un courant électrique est appliqué au niveau de 
cette ouverture. Chaque passage d'une cellule à travers l'ouverture provoque
alors une augmentation de la résistance électrique Cette augmentation est
alors une augmentation de la résistance électrique. Cette augmentation est 
traduite en impulsions électriques dont la hauteur est directement 
proportionnelle au volume cellulaire. La détermination de la taille de la cellule
est donc basée sur le déplacement du liquide et on obtient par conséquent   
la mesure du volume cellulaire (c'est‐à‐dire le VGM) directement.
• Le nombre de globules rouges est déterminé par le total d
Le nombre de globules rouges est déterminé par le total d’impulsions
impulsions 
enregistrées. Le taux d’hématocrite est alors déduit selon la formule : 
Ht = GRxVGM/10.
 PRINCIPE DE MESURE PAR LA VARIATION D’IMPEDANCE

Légende
1 : Electrode Positive
2 : Electrode Négative
3 : Capillaire de mesure
4 : Globule
5 : Flux aspirant
6 : Sang entier dilué

BGB BGR
 PRINCIPE DE MESURE PAR LA VARIATION D’IMPEDANCE
La valeur de l’impulsion U est proportionnelle au volume cellulaire

El t d iinterne
Electrode t I= constante
I= constante

Vide régulé U= R I et  R = l / s

Bac de 
comptage Electrode
externe 1 impulsion U = 
1 particule
l

Saphir percé 
d’un micro‐
orifice U

Fl de
Flux d diluant
dil t conducteur
d t

Micro‐orifice,  Impulsion Temps

surface s
surface s

Diamètre 4mm
II-2: La mesure optique

Elle associe la cytométrie en flux et la diffraction lumineuse. La

source de lumière peut être un laser ou une lampe au tungstène
La cytométrie en flux consiste globalement à faire défiler une à
une des cellules devant un faisceau laser. Plus p précisément,, on
utilise d'abord un système d'hydrofocalisation qui va permettre de
canaliser les cellules et de les faire passer en file indienne. Lors
d leur
de l passage à travers
t le
l llaser, elles
ll é émettent
tt t ddes signaux
i
lumineux qui sont analysés par l'ordinateur associé au cytomètre.
Ces signaux peuvent être de plusieurs natures comme par
exemple une diffraction de la lumière par la cellule qui est alors
liée à sa taille ou un signal
g de fluorescence émis spontanément
p
par la cellule ou parce qu'elle a été marquée par un antigène, une
coloration...
PRINCIPE DE MESURE PAR METHODE OPTIQUE

Diluant Diluant

Cellule  SOURCE
photoélectrique

Diluant
l Diluant
Echantillon
 H d f
Hydrofocalisation
li ti

Flux FOCALISATION
de
HYDRODYNAMIQUE
gainage
Flux Flux
de d
de
gainage gainage
Flux échantillon Flux 
échantillon
Diffraction lumineuse
Intensité de la lumière diffractée peut être corrélée à des caractéristiques 
morphologiques cellulaires:
‐ Intensité de la lumière diffractée par la cellule, recueillie dans l'axe de la lumière 
incidente dite "diffraction
incidente, dite  diffraction aux petits angles
aux petits angles" (2 à 6°), (FALS Forward Angle Light 
(2 à 6°) (FALS Forward Angle Light
Scatter, ou FSC Forward Scatter Channel),  est en relation proportionnelle avec la 
taille cellulaire , la  forme cellulaire, et l’indice de réfraction cellulaire
‐ Intensité de la lumière diffractée par la cellule, recueillie de 8° à  90° de l'axe de la 
lumière incidente, "diffraction aux grands angles", (RALS Right Angle Light Scatter, ou 
SSC Side Scatter Channel) est relation proportionnelle avec l'hétérogénéité
SSC Side Scatter Channel), est relation proportionnelle avec l hétérogénéité du 
du
contenu cellulaire, présence/absence et taille de granulation cytoplasmique, forme 
et taille du noyau, rapport N/C, densité chromatinienne du noyau, ce Paramètre est 
appelé « Granularité »
appelé «

Détection aux petits angles : 
p g
Taille

Détection aux grands angles: « Granularité »
 II‐3: Mesure de l’hémoglobine
g
• L’hémoglobine est dosée par méthode 
spectrophotométrique (525 à 550 nm) après la  lyse 
h é i (525 à 550 ) è l l
des hématies.

Echantillon Diluant + lyse

LED Optique Cellule de mesure Photodétecteur

 II-4: Principe de mesure de l’hématocrite
La hauteur de l’impulsion
l impulsion engendrée par le passage d’une
d une cellule dans le
micro orifice est directement proportionnelle au volume de la cellule analysée.
L’hématocrite est mesurée en fonction de l’intégration numérique du volume
globulaire moyen (VGM)
(VGM).

Total volume VT

Centrifuge

VT
HCT (%) = V / VT x100

V
III‐ PRESENTATION DE COMPTEURS D’HEMATOLOGIE 
ET DE QUELQUES PARTIES  IMPORTANTES

Figure 2
Figure 1

SYSMEX XP‐300 SYSMEX XT 
Figure 3 : Modèle de bacs de comptage de GR et GB
 a. Présenter verticalement
le tube d’échantillon
d échantillon et
actionner en même temps
l’aspiration

Figure 4 : Aspiration automatique de l’échantillon

 b. Attendre la rentrée
b
de l’aiguille
d’aspiration
p et retirer
verticalement le tube
d’échantillon

Figure 5 : Retrait du tube d’échantillon de l’aiguille d’aspiration

Figure 6 : Modèles de systèmes d’aspiration

6-a- Assemblage de seringues

sans cartouche de protection

6-b- Assemblage de seringues avec

cartouche de protection à soufflets

6- c- Pompes péristaltiques
Figure 7 : Modes de présentation des réactifs du compteur 
d’hématologie

7-a : Un compartiment de l’appareil peut

contenir une solution de lyse et de
nettoyage Le diluant étant a l’extérieur
nettoyage. l extérieur

7-b
7 b : Un pack ou carton de réactifs
peut contenir le diluant, la lyse et la
solution de nettoyage
 IV‐ Les bonnes pratiques d’utilisation des compteurs 
d’hé t l i
d’hématologie

•Utiliser toujours un onduleur avec prise de terre pour ll’alimenter

alimenter
•Permettre une bonne circulation d’air autour de l’appareil
(50 cm du mur)
•Allumer l’appareil et attendre environ 10 minutes avant son emploi
•Vérifier qu’il n’y a pas de bulles d’air dans les tuyauteries de réactifs
•Vérifier toujours les fuites de réactifs dans le circuit hydraulique
•Vérifier toujours les fuites d’air ou de vide dans le circuit
•Eviter les allumages et extinctions intempestives
•Eviter la pollution des réactifs par la poussière
•Ne pas tirer sur le bec d’aspiration après aspiration
•Mélangez
Mélangez soigneusement ll’échantillon
échantillon avant emploi
•Passer de temps à autre le sang de contrôle
•Observer toujours la procédure d’arrêt de l’appareil
V‐ Procédures d’entretien d’un compteur d’hématologie
Se conformer toujours aux recommandations du fabricant
• 5‐1‐ Entretien journalier
j
• Nettoyer régulièrement le corps de l’appareil
• Nettoyer l’appareil avant et après l’analyse avec de l’eau distillée
• Nettoyer l’appareil avec la solution de nettoyage préconisée
• Essuyer toute trace de sang
• 5 2 Entretien hebdomadaire
5‐2‐ Entretien hebdomadaire
• Effectuer un rinçage avec une solution détergente ou fongicide
• Nettoyage et rinçage des bacs de mesure
y g ç g
• 5‐3 ‐ Entretien semestriel
• Remplacer les cordons des pompes de l’appareil 
• 5‐4 ‐ Entretien annuel
• Remplacer les tuyauteries hydrauliques
• Remplacer les cordons des pompes
Remplacer les cordons des pompes
• Remplacer les joints des seringues
VI PRATIQUE :
VI-

•Présentation
Pé t ti d’un
d’ automate
t t d’hématologie
d’hé t l i
•Instructions avant et après utilisation quotidienne
•Instructions
I t ti h bd
hebdomadaires
d i
•Instructions mensuelles
•Instructions
I t ti t
tous l six
les i mois
i
•Changement de réactifs
•Remplacement
R l t de
d tuyaux
t
•Nettoyage général