UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO

FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERIA EN ALIMENTOS Y

BIOTECNOLOGÍA

NOMBRES: Alex Guijarro

CARRERA: Ingeniería Bioquímica
CICLO ACADÉMICO: Septiembre 2019- febrero 2020
ASIGNATURA: Ingeniería genética
NIVEL: Octavo PARALELO: U
PROFESOR: PhD. Mario García
FECHA: 12/11/2019

Electroforesis de ácidos nucleicos

Práctica virtual de electroforesis de ácidos nucleicos

Para empezar, nos indican que estamos sujetando una muestra de líquido transparente que contiene hebras de ADN
y nuestro trabajo es descubrir cuáles son sus longitudes.
Como se puede observar las diferentes hebras de ADN
que contiene la muestra son de distintas longitudes, por
lo que nuestro trabajo será identificar las medidas
estimadas para cada una en pb
Dado que las hebras de ADN no se pueden ver con la
ayuda de microscopios, la forma más usada y sencilla de
poder clasificar y medir las hebras es mediante la técnica
de electroforesis.
Cabe recalcar que esta técnica es utilizada por lo
científicos no solo para clasificar de acuerdo a la longitud
el ADN sino también es utilizada para separar proteínas
Esto gracias a un gel filtro, parecida a una esponja hecha de gelatina, es decir, con
muchos agujeros pequeños. Que contiene orificios en el extremo del gel para poder
colocar la muestra de ADN.
Y entonces al aplicar una corriente
eléctrica el ADN se va a desplazar, las
hebras mas pequeñas se mueven mas
rápidamente que las hebras largas, es
decir las hebras cortas se van a mover
lejos que las hebras más largas
Y por último podemos observar
grandes grupos de hebras de ADN
teñidas, que aparecen como bandas
en el gel. De esta manera ->

Los pasos para poder efectuar lo mencionado anteriormente (ELECTROFORESIS EN GEL) en el laboratorio son los
siguientes:
1. Elaboración del gel.
Los materiales que vamos a necesitar para la preparación del gel de agarosa son los siguientes: Agarosa en Polvo,
tampón, un matraz, un microondas, el molde del gel y el ‘’peine del gel’’ para marcar los sitios en donde se colocará
posteriormente las hebras de ADN.

Una vez que contamos con

todos los materiales, el
primer paso es colocar una
pequeña cantidad de
agarosa (
Parecida a la gelatina pero
de algas) y el buffer, el
cual nos va a permitir que
las cargas eléctricas fluyan
a través del gel.
Se coloca una envoltura de plástico para que el líquido no hierba, sino que al introducirlo al microondas, este se caliente
hasta que la agarosa quede totalmente derretida en el buffer.

Después quitamos la envoltura de plástico y vertimos

la mezcla en el molde, que deberá contener cinta
adhesiva para retener la agarosa derretida. Y además
tenemos que asegurarnos de introducir el ‘’peine del
gel’’ para obtener los agujeros en donde
posteriormente introduciremos las hebras de ADN.
Una vez que el gel esté solido (30 min) se retira el
peine y nos habrán quedado los pozos en donde
colocaremos las muestras.

2. Configuración del aparato que contiene

el gel
Para la correcta disposición del aparato
necesitaremos el gel que acabamos de hacer, la caja
de electroforesis y otra botella de tampón.
El primer paso que vamos a realizar es introducir
el buffer en la caja de electroforesis, así como
también el
gel en el que anteriormente habíamos retirado las cintas adhesivas para que este
no se derrame por toda la mesa. Cabe recalcar que este gel debe estar apenas
sumergido en el buffer, ya que, este conduce la corriente eléctrica de un extremo
del gel al otro y evitará que el gel se seque durante el experimento.

3. Colocar la muestra de ADN en el gel.

Para poder colocar la muestra de ADN en el gel vamos a necesitar: Carga de buffer, tubos de ADN, El estándar de ADN,
una micropipeta, la caja de electroforesis que armamos anteriormente con el buffer y el gel y las puntas para la
micropipeta.
 El primer paso es es muy importante, ya que, con una pipeta limpia
debemos coger una cantidad de buffer de carga sobre el ADN para que la
muestra de ADN tenga un tinte que nos permita identificarlo en el gel
además de aumentar la densidad de la muestra permitiendo de esta manera
que la muestra de ADN caiga en el pozo.
Es importante saber que el ADN estándar por lo general ya contiene el
buffer de carga.

Posteriormente, cogemos cierta cantidad de la

muestra de ADN y lo colocamos en el pozo del gel.
Y por último hacemos lo mismo con el ADN
estándar, este nos ayudará a tener una referencia
de las longitudes de ADN presentes en nuestra
muestra.

4. Conectar a la corriente eléctrica el aparato

Para poder poner en marcha nuestro ADN sobre el gel, es necesario conectar el equipo a la fuente de alimentación. Para
ello necesitaremos la ayuda del cable negro, el cual nos va a proporcionar la carga negativa y del cable rojo que nos va
a generar una carga positiva a nuestro equipo de electroforesis. De la siguiente manera:

Por último lo encendemos y verificamos la presencia de burbujas en el buffer, señal de que nuestro equipo está
correctamente conectado. Entonces se podrá observar el tinte que habíamos introducido en la muestra de ADN como se
mueve a través del gel hacia la carga positiva, en el otro extremo, como habíamos mencionado al principio de esta
práctica.
5. MANCHAR EL GEL Y ANALIZAR LOS RESULTADOS
En el quinto y último paso vamos a retirar el gel del aparato de electroforesis y tenemos que analizar la muestra para
estimar la longitud de las hebras de ADN. Para ello debemos teñir el ADN durante una media hora, usando un compuesto
llamado bromuro de etidio, el cual se une al ADN y nos va a permitir apreciar las diferentes bandas de longitudes de
ADN presentes en la muestra inicial.
Después, y ya casi para acabar retiramos el gel del DNA Staining solution para colocarlo en la Ultra -UV

Esta máquina nos va a permitir observar algo parecido a esto:

Un gráfico en el cual podemos determinar las longitudes de

aproximadas de las cadenas de ADN que teníamos en la
muestra inicial. Es decir, los resultados que obtuvimos
fueron de aproximadamente 5000 pb en la banda superior, la
banda del medio es de 3500 pb aproximadamente y por
último la banda inferior y más pequeña es de 1500 pb
aproximadamente.

BIBLIOGRAFIA
Fierro, F. F. (2014). Electroforesis de ADN. Herramientas moleculares aplicadas en ecología: aspectos teóricos y
prácticos, 27.
Coronado, A. C. M., Coronado, Y. M., Villarreal, Y. C., Arana, A. C., Vásquez, J. J., Rivera, O. J. M., ... & Flores, J. E.
M. (2009). Caracterización de la diversidad genética en naranja y comparación del polimorfismo de microsatélites
amplificados al azar (RAMs) usando electroforesis de poliacrilamida y agarosa. Acta Agronómica, 58(4), 234-244.