Introducción

Los ácidos orgánicos son preservantés en alimentación animal y humana, Por lo tanto se basa en las
propiedades antimicrobianas del ácido láctico generado por la fermentación de las bacterias, se
encuentran inmersa en la naturaleza tanto en plantas como en animales.
Actualmente los ácidos orgánicos son utilizados de múltiples manera en diferentes industrias que
destacan como la acuicultura agricultura y química.
En el ámbito de la acuicultura, estos compuestos son empleados para controlar la alcalinidad, es decir
reducir el pH su función principal es la de biorremediador, para mejorar la salud del organismo
cultivado principalmente el tracto digestivo, usando una combinación de bacterias, acido lítico y
levadura. El presente trabajo pretende determinar la efectividad del ácido orgánico en la sensibilidad
microbiana. Yull 2014 alcivar 2015
Título de la investigación
Efecto de ácido orgánico y su incidencia en la sensibilidad de la carga bacteriana en tanques de
reservorio para la producción de moluscos bivalvo.
Planteamiento del problema
La acuicultura en el ecuador se ah desarrollado de una manera exponencial del 95% en producción
acuícola, y ala vez genera preocupación en los productos motivando a los frecuentes problemas de
enfermedades que se presentan a su vez causas importantes de perdidas económicas keong y Bonn
2016
Sistematización del problema

La dosis de ácido orgánico será suficiente para determinar la carga bacteriana

Que sensibilidad tendrán las cargas bacterianas frente a los ácidos orgánicos

Formulación del problema central

Como evaluar el efecto de ácidos organices su incidencia en la sensibilidad de la carga bacteriana en

tanques de reservorio para la producción de moluscos bivalvos

Justificación

El desarrollo de la acuicultura, ha permitido conocer que existen varios factores que inciden en una
baja producción, motivado a la presencia de enfermedades especialmente las generadas por una
mayor susceptibilidad a la baja calidad del agua.

Los productores acuícolas se están orientado al uso de los ácidos orgánicos, motivado a que
presentan ciertas ventajas frente a otras sustancias acidificantes como el cloro. Los ácidos orgánicos
no presentan ningún efecto residual, además mejora el proceso digestivo en el estómago y aumenta
la ingestión. Algunas investigaciones señalan que los ácidos orgánicos inhibir el crecimiento de
microorganismos patógenos, debido a que disminuye el pH del tracto digestivo y cumple el rol de
bactericida. (Yull, 2014).

Con este proyecto de investigación podremos determinar qué tan efectivos son los ácidos orgánicos
en carga bacteriana para así disminuir a tiempo organismos patógenos en un cultivo.

Objetivo

Conocer el efecto de dos concentraciones de ácidos orgánicos y su incidencia en la sensibilidad de

la carga bacteria en tanques reservorio para la reproducción de moluscos bivalvos

1.4.2 Objetivo especifico

• Determinar la carga bacteriana a través de medios de cultivo TCBS y CETRIMIDE en muestras

de agua procedentes de los tanques de reproducción
• Determinar la sensibilidad de carga bacteriana en agar Müller, posterior a la inoculación de
discos con dos concentraciones de ácido orgánico.

• Interpretación de los resultados.

3. Metodología

3.1. Niveles y diseños de la investigación

Para alcanzar los objetivos de la presente investigación se incluirán niveles de investigación de

tipo exploratorio, que permitió identificar los conceptos de las variables de estudio y conocer el
contexto de la investigación, así mismo se utilizó la investigación descriptiva para definir las
características de las variables.

3.2. Variables, dimensiones e indicadores

Las respectivas investigaciones de las variables son los objetivos específicos que originan
dimensiones y sus medidas.

Materiales de laboratorio Equipos de laboratorio Sustancias y reactivos

Agitador Autoclave Ácido nítrico

Barra de siembra Cocineta eléctrica Agar TCBS

Cajas de Petri Gramera Agua destilada

Gradilla incubadora Alcohol isopropílico

Hisopos de madera Refrigerador de laboratorio Cloruro de sodio

Jeringas de insulina

Mechero de alcohol

Papel filtro

Papel toalla

Plástico de embalaje

Tubos de ensayo

Autores (2019)

Desarrollo del proyecto

Preparación de agar TCBS

Se procedió a esterilizar la solución salina (300ml) con ayuda del autoclave a una temperatura de 15
atm (121oC) y 15 atm durante 15 min, mediante una regla de tres se realizó el cálculo de la cantidad
de gramos que se necesitan, el proceso se efectuó en una área aséptica y siempre con el mechero
de alcohol encendido, la metodología señala en cada 1000ml se debe añadir 89gr de agar TCBS.
En la presente investigación se vertió 300ml de solución salina y 26,7gr de agar TCBS y así también
se añadió 6 gramos de cloruro de sodio ClNa para compensar la salinidad

Posteriormente se lo llevo a la estufa y con ayuda del agitador procedimos a homogenizar hasta
alcanzar el punto de ebullición para comprobar si su consistencia se solidifica tiende donde se colocó
una pequeña muestra sobre el mesón y se esperó unos minutos, si no tiene ningún problema al
deslizarse se ha comprobado el punto de consistencia luego se procede a verter el agar en las placas
Petri distribuyéndolo de forma uniforme evitando generar burbujas de aire.

Las placas se las dejan semiabiertas para evitar que se genere humedad dentro y luego de que se
solidifiquen se procede a sellar y guardar en el refrigerador con una temperatura de 30ºC.

Al momento de realizar la siembra se tiene que considerar que el agar se encuentre a una
temperatura al ambiente, al momento de tomar la muestra nos ayudamos con una jeringa de
insulina se tomó la muestra (Kobayashi. T., 1963).

Toma de muestra

Se procedió a tomar una cantidad de 0.1ml para posteriormente inocular en el agar y luego con la
barra de siembra lo esparcimos (rayado) por todo el agar luego sellamos y procedemos a guardar en
la incubadora a 35oC durante un tiempo estimado de 24 horas.

3.1.1. Preparación de agar Cetrimide.

Al igual que en el TCBS debemos de purificar la solución salina (300ml) con ayuda del autoclave con
el mismo tiempo y temperatura, se aplica la metodología recomendada por el fabricante que señala
que en cada 1000ml de solución salina se debe añadir 46gr de agar.

Para la presente investigación se aplicó la regla de tres y para el caso de 300ml, se añade 13,8gr de
agar, 3ml de glicerina, posteriormente se llevó a la estufa hasta alcanzar el punto de ebullición luego
lo retiramos y lo volvemos a auto clavar por temperatura de 15 atmosfera de presión (121°C)
durante 15 minutos.

Posteriormente se vierte el agar en placas de Petri estériles y se distribuir el agar en una forma
que cubran toda la superficie, así mismo dejamos semi abiertos hasta que ocurra la solidificación,
posteriormente procedemos a sellar y guardar en el refrigerador de laboratorio a una temperatura
de 30ºC (Ballows, 1991).

3.1.2. Preparación de ácidos orgánicos.

Para la elaboración de ácidos orgánicos se aplica la metodología señalada por el fabricante, en la que
establece que se debe colocar 5ml de ácido por 1000ml

En la presente investigación se preparó 3 concentraciones diferentes la primera concentración

tendrá 5ml/l; la segunda concentración 2.25ml/l; y la última concentración 10ml/l, para obtener el
cálculo de ácido para la investigación se muestra a continuación:

Tabla III Concentración de ácidos orgánicos

1000ml 5ml = 0.025ml de Ácido Orgánico

5ml X

Preparación de antibiograma.
 Con ayuda de un hisopo de madera tomamos las UFC y las esparcimos por toda nuestra placa de
TCBS, posteriormente con la ayuda de las pinzas tomamos un disco de papel filtro y se sumerge en
tres porcentajes de ácido orgánicos de concentración de (1:2500ppm) (2:50000ppm-3:10000ppm) y
procedemos a rotular. Para la ubicación de los discos se debe considerar una distancia hará
establecer diferencias entre los discos, luego de esto las sellamos y llevamos a la incubadora (Picazo,
2000).

Dando respuesta a la primera variable: Determinar la carga bacteriana en un medio de cultivo TCBS,
Cetrimide, en muestras procedentes de los tanques reservorio.

Dando respuesta a la segunda variable: Determinar la sensibilidad de carga bacteriana en agar

Müller, posterior a la inoculación de discos con dos concentraciones de ácido orgánico.

Dando respuesta a la tercera variable: Interpretación de los resultados

En la fecha del 9 de diciembre del presente año sembramos las bacterias y empezamos con el conteo
al siguiente día, que fue el 10 de diciembre que obtuvimos 30, el 11 de diciembre con 40 UFC, el día
siguiente obtuvimos de nuevo la misma cantidad, el 13 de diciembre obtuvimos la mayor cantidad
de colonias con 800 UFC, continuamos el conteo en el día 16 que obtuvimos 600 UFC y el ultimo día
17 del presente año se contó 40.

Según Cervera (2011), afirma que el diámetro de los Halos es de 0.1mm a 0.5mm quiere decir que
son resistentes a diferencia de un Halo con un diámetro de 06mm a 1mm, que tiene una resistencia
intermedia y de 1.1mm a 4mm se convierten en sensible. Se tienen tres concentraciones A1 de
2.5/1000, A2 de 5/1000 y A3 de 10/1000 de ácidos orgánicos que añadimos en los antibiogramas y
asi conocer si los halos fueron resistentes

Conclusiones

Se determinó que en el medio de cultivos de agar TCBS con muestras procedentes de los tanques
reservorio presento crecimiento de colonias amarillas, mientras que en el medio de cultivo
Cetrimide no se obtuvo crecimiento de colonias.

Posterior a la inoculación de los discos sensibilidad, el medio de cultivo TCBS se logró determinar
resistencia por el crecimiento de 1 mm.

Recomendaciones

A futuras investigaciones es necesario analizar el aumento la dosis de ácidos orgánicos para así
comprobar la sensibilidad (antibiograma) en medios de cultivos.

Antes que nada es primordial tener una buena asepsia para evitar cualquier tipo de contaminación
en el proceso de realizar el medio de cultivo.