Síntesis de éster a partir del uso de enzima

“lipasa”como catalizador

Joel Enrique Pincay Rivera, Barbara Elizabeth Guerrero Galvez, 𝐼𝑛𝑔𝑒𝑛𝑖𝑒𝑟í𝑎 𝐴𝑔𝑟í𝑐𝑜𝑙𝑎2 , Silvia
Cristina Cuesta Bayas, 𝐼𝑛𝑔𝑒𝑛𝑖𝑒𝑟í𝑎 𝑒𝑛 𝐴𝑙𝑖𝑚𝑒𝑛𝑡𝑜𝑠 3 y Tabata Naomi Romero Siguenza ,
𝑁𝑢𝑡𝑟𝑖𝑐𝑖ó𝑛 𝑦 𝐷𝑖𝑒𝑡é𝑡𝑖𝑐𝑎 4
Joel Pincay,Barbara Guerrero, Tabata Romero, Silvia Cuesta, Escuela Superior Politécnica del
Litoral, Ecuador.

Abstract- Our project consists in obtaining an

ester by reacting a carboxylic acid with an
alcohol; in this case, a primary alcohol such as
butanol, using as a catalyst different samples of
the enzyme lipase, which has the trade name
CREON 10000. From stoichiometric
calculations we will obtain theoretical results,
which we will compare with the
experimentation to calculate the percentage
performance that our esterification has had and
how it has affected the increase or decrease of
the catalyst mass.
Keywords: enzyme-ester-yield-titration-
concentration
Resumen- Nuestro proyecto consiste en la
obtención de un éster mediante la reacción de un
ácido carboxílico con un alcohol; en este caso,
un alcohol primario como es el butanol,
utilizando como catalizador diferentes muestras
de la enzima lipasa, que tiene por nombre
comercial CREON 10000. A partir de cálculos
estequiométricos obtendremos resultados
teóricos, los cuáles vamos a comparar con la
experimentación para calcular el rendimiento
porcentual que ha tenido nuestra esterificación y
cómo ha afectado al aumentar o disminuir la
masa del catalizador.
Palabras Claves: Enzima-éster-rendimiento-
titulación-concentración.
INTRODUCCIÓN
La esterificación es el procedimiento
mediante el cual podemos llegar a sintetizar
un éster. Los ésteres se producen de la
reacción que tiene lugar entre los ácidos
carboxílicos y los alcoholes. Los ácidos
carboxílicos sufren reacciones con los
alcoholes cuando se encuentran en
presencia de catalizadores de la reacción,
los cuáles por lo general son un ácido fuerte,
con la finalidad de formar un éster a través
de la eliminación de una molécula de 𝐻2 𝑂.
(Méndez, La guía, 2013)
𝑅 − 𝐶𝑂𝑂𝐻 (á𝑐𝑖𝑑𝑜) + 𝑅 ′ −
𝑂𝐻 (𝑎𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙) ↔ 𝑅 − 𝐶𝑂 − 𝑂 −
𝑅 ′ (é𝑠𝑡𝑒𝑟) + 𝐻2 𝑂 (Méndez, La guía, 2013)
Debido a que los esteres son sustancias con
una gran demanda industrial por su uso
como materia prima en diferentes procesos
así como también para el tratamiento de
agua residuales, se han realizado diferentes
procedimientos para la obtención, la forma
más común es la proporción de calor a una
mezcla de sustancias, un alcohol y un ácido
conocida como esterificación de Fischer-
Speier. (Méndez, La guía, 2013).
Por otro lado y como una posible respuesta
a la gran demanda se ha estudiado el uso de
catalizadores para la producción de esteres
entre los cuales destaca la enzima lipasa, la
cual ha captado el interés de las industrias
debido a su versatilidad, estereoselectividad
y por su capacidad de catalizar reacciones
químicas tales como hidrolisis,
esterificación, interesterificación,
alcoholisis entre otras. (Jorge González,
2010). Actualmente las lipasas son el grupo
de enzimas mayormente estudiadas como
catalizadores en reacciones de síntesis
puesto que debido a su estructura están
condicionadas para actuar en medios no
convencionales. (Fernando Leiva, 2006).
En el presente trabajo, se realizó la síntesis
del acetato de butilo el cual se obtuvo a
partir de un alcohol butano y ácido acético
mediante el uso de una enzima catalizadora,
el producto que se obtuvo y se estudio fue el
acetato de butilo el cual es un líquido
inflamable, incoloro, levemente soluble en
agua con un agradable aroma a fruta, ya que
es un buen solvente orgánico y
relativamente poco toxico es empleado en
barnices, en procesamiento de cueros
artificiales, telas y plásticos así como
también en perfumes. (Haofei Chemical Co,
2018).
OBJETIVO GENERAL
 Aplicar los principios de síntesis
química para analizar el rendimiento de
la esterificación catalizada por
diferentes cantidades de enzima lipasa.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
 Sintetizar ácido acético y butanol catalizada
con diferentes cantidades de lipasa para la
obtención de un éster y análisis de sus
propiedades físicas.
 Realizar la titulación de cada producto de la
esterificación utilizando un indicador para
la determinación de la concentración de
NaOH utilizado.
 Calcular la concentración del éster
producido para la determinación del
rendimiento de cada una de las muestras.
EXPERIMENTACIÓN
Materiales y reactivos
Materiales:
 Balanza analítica (Marca: Boeco
Germany, modelo: Bas 31 plus)
 Pipeta (5 mL ± 0.025)
 Balones volumétricos 500 mL (Marca:
Witeg)
 Soporte universal
 Bureta 50 ml
 Matraz Erlenmeyer (Marca: Glassco,
250 mL ± 25 mL)
 Agitadores magnéticos
 Pipeta 1-2 mL
 Agarraderas
 Soporte Universal
Reactivos:
 Ácido acético C2H4O2 (10.85 mL)
 Butanol C4H10O (17.35 mL)
 Hidróxido de sodio NaOH(0.108g)
 Enzima Lipasa (300 mg)
 Etanol C2H5OH (5 mL)
 Fenolftaleína C20H14O4 (2 gotas)
Procedimiento
1. Pesar las muestras de la enzima, lipasa
que se encuentra en la pastilla CREON
10000: 20mg, 40mg, 60mg, 80mg,
100mg.
2. Luego en un matraz colocar 2,17 ml de
Ácido acético y 3.47 ml de Butanol
junto con los agitadores magnéticos y
luego colocarlos en la máquina
(agitador) durante 2 hora
aproximadamente para que se logre
disolver la enzima y se forme el éster.
3. Luego de las 2 horas colocar en otro
matraz 0.1 ml de éster junto con 1.1ml
de etanol que se utilizó para dejar que
la sustancia siga reaccionando.
 4. Se aplica Titulación con 0.1085 g de Moles de acetato de butilo a ácido
NaOH con una concentración de 0,1 M acético:
para un volumen de 500 ml. 1 𝑚𝑜𝑙 𝐶2 𝐻4 𝑂2
0.0380 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝐶6 𝐻12 𝑂2 𝑥
5. Se arma el sistema de titulación 1 𝑚𝑜𝑙 𝐶6 𝐻12 𝑂2
utilizando soporte universal con = 0.0380 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝐶2 𝐻4 𝑂2
agarraderas junto con las buretas con Moles de acetato de butilo a butanol:
capacidad de 50 ml. 1 𝑚𝑜𝑙 𝐶4 𝐻10 𝑂
6. Con la ayuda de un embudo coloco la 0.0380 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝐶6 𝐻12 𝑂2 𝑥
1 𝑚𝑜𝑙 𝐶6 𝐻12 𝑂2
solución en la bureta. = 0.0380 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝐶4 𝐻10 𝑂
7. Con el matraz descrito en el paso 3, se Moles a gramos de ácido acético:
añade 2 gotas fenolftaleína y se empieza 60 𝑔 𝐶2 𝐻4 𝑂2
a titular. 0.0380 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝐶2 𝐻4 𝑂2 𝑥
1 𝑚𝑜𝑙 𝐶2 𝐻4 𝑂2
8. Observar y anotar volúmenes en cada = 2.28 𝑔 𝐶2 𝐻4 𝑂2
uno de los procesos con las diferentes Moles a gramos de butanol:
cantidades de masa. 74 𝑔 𝐶4 𝐻10 𝑂
0.0380 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝐶4 𝐻10 𝑂 𝑥
Cálculos 1 𝑚𝑜𝑙 𝐶4 𝐻10 𝑂
= 2.81 𝑔 𝐶4 𝐻10 𝑂
1. Cálculos y reacciones involucradas.
Volumen del ácido acético y butanol:
Reacción del proceso de Densidad del ácido acético:
esterificación 𝑔
1.05 ⁄𝑚𝑙
𝐶2 𝐻4 𝑂2 + 𝐶4 𝐻10 𝑂 𝑚
→ 𝐶6 𝐻12 𝑂2 + 𝐻2 𝑂 𝑉=
𝜌
Cálculos estequiométricos: 2.28 𝑔
Para obtener 5 ml de acetato de butilo, 𝑉= 𝑔 = 2.17 𝑚𝐿 𝐶2 𝐻4 𝑂2
se debe calcular la cantidad de ácido 1.05 ⁄𝑚𝑙
acético y butanol que se va a utilizar
para llevar a cabo este proceso. Densidad del butanol:
Densidad del acetato de butilo:
𝑘𝑔 𝑔
882 ⁄ 3 0.81 ⁄𝑚𝑙
𝑚 𝑚
𝑉=
𝜌
Volumen del acetato de butilo: 2.81 𝑔
5𝑥10−6 𝑚3 𝑉= 𝑔 = 3.47 𝑚𝐿 𝐶4 𝐻10 𝑂
0.81 ⁄𝑚𝑙
Masa del acetato de butilo:
𝑚 = 𝜌𝑣 2. Cálculos Titulación y Concentración de
𝑘𝑔⁄ Solución
𝑚 = 882 𝑥 5𝑥10−6 𝑚3
𝑚3
= 0.00441 𝑘𝑔
1000 𝑔
𝑚 = 0.00441 𝑘𝑔 𝑥 MASA 0.02G
1 𝑘𝑔
𝑚 = 4.41 𝑔 𝐶6 𝐻12 𝑂2 Titulación
Moles de acetato de butilo:
V1 C1 = V2 C2
1 𝑚𝑜𝑙 𝐶6 𝐻12 𝑂2
4.41 𝑔 𝐶6 𝐻12 𝑂2 𝑥
116 𝑔 𝐶6 𝐻12 𝑂2 ( 1,1 𝑋10−3 𝑙 (1.58 M) = (0.1249 l NaOH) C2
= 0.0380 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝐶6 𝐻12 𝑂2
C2= 0.139 M
0.139M9(( 1,1 𝑋10−3 𝑙) =1.529𝑥10−5 moles C2= 0.0101 M

Concentración Solución 0.0101 M (( 1,1 𝑋10−3 𝑙) = 1.11𝑥10−5 moles

V1 C1 = V2 C2 Concentración Solución
(1𝑋10−4 𝐿) (17.48M) = ( 1,1 𝑋10−3 𝑙) C2 V1 C1 = V2 C2

C2= 1,58 M (1𝑋10−4 𝐿) (17.48M) = ( 1,1 𝑋10−3 𝑙) C2

C2= 1,58 M
Ácido Acético inicial – Éster X = Titulación Ácido Acético inicial – Éster X = Titulación
2.17 ml =0.0379 moles ácido 2.17 ml =0.0379 moles ácido

0.0379 moles- 1.529𝑥10−5 moles = 0.0379 moles - 1.11𝑥10−5 moles = 0.03788889

0.03788471 moles X moles X

MASA 0.04G MASA 0.1G

Titulación Titulación
V1 C1 = V2 C2 V1 C1 = V2 C2
( 1,1 𝑋10−3 𝑙 (1.58 M) = (0.1283 l NaOH) C2 ( 1,1 𝑋10−3 𝑙 (1.58 M) = (0.1255 l NaOH) C2
C2= 0.0140 M C2= 0.013848 M

0.0140 M (( 1,1 𝑋10−3 𝑙) =1.54𝑥10−5 moles 0.013848 M (( 1,1 𝑋10−3 𝑙) =1.5232𝑥10−5

moles
Concentración Solución
Concentración Solución
V1 C1 = V2 C2
V1 C1 = V2 C2
(1𝑋10−4 𝐿) (17.48M) = ( 1,1 𝑋10−3 𝑙) C2
(1𝑋10−4 𝐿) (17.48M) = ( 1,1 𝑋10−3 𝑙) C2
C2= 1,58 M
C2= 1,58 M
Ácido Acético inicial – Éster X = Titulación
Ácido Acético inicial – Éster X = Titulación
2.17 ml =0.0379 moles ácido
2.17 ml =0.0379 moles ácido
0.0379 moles - 1.54𝑥10−5 moles = 0.0378846
moles X 0.0379 moles - 1.5232𝑥10−5 moles =
0.037884767 moles X

MASA 0.08G
3. Cálculo Concentración- molaridad
Titulación ácido acético
V1 C1 = V2 C2
99.9%
−3
( 1,1 𝑋10 𝑙 (1.58 M) = (0.1722 l NaOH) C2 1.05g/ ml x 10ml/ 1L x 1 mol/60g x 99,9/100 =
17.38 M
 4. Porcentaje de rendimiento

RESULTADOS

Titulación ANALISIS DE RESULTADOS

RECOMENDACIONES
Masa Volumen CONCLUSIONES
20 mg- 0.2g 124.9 ml
40mg- 0.4 g 128.3 ml
80mg- 0.8 g 172.2 ml
100mg- 0.1 g 125.5 ml
Tabla 1. Resultados Titulación REFERENCIAS

Soluciones – Titulación y Concentración 1. Fernando Leiva, L. B. (2006). Estudio

de la cinetica de la reaccion de sintesis
de Acetato de butilo . Bogota,
Mas Titula Titulación X Conce Ést
a ción Volumen ntració er Colombia: Revista Ingenieria e
M n mol investigacion .
Soluci
ón 2. Haofei Chemical Co. (25 de Abril de
20 0.013 1.529𝑥10−5 1.58 M 0,0 2018). Haofei Chemical. Obtenido de
mg- 9M moles 378 Propiedades quimicas y uso del
0.2g 847 acetato de butilo:
1 http://www.haofeichemical.com/info/
chemical-properties-and-uses-of-
butyl-acetate-25565766.html
40mg 0.014 1.54𝑥10−5 moles 1.58 M 0.0 3. Jorge González, V. R. (23 de Junio de
- 0.4 0 M 378 2010). Universidad nacional de
g 846
Colombia. Obtenido de Revista
80mg 0.010 1.111𝑥10−5 1.58 M 0.0 Colombiana de Biotecnología:
- 0.8 1 M moles 378 https://revistas.unal.edu.co/index.php
g 888 /biotecnologia/article/view/15574/38
9
075
100m 0.013 1.5232𝑥10−5 1.58 M 0.0
g- 848 M moles 378 4. Méndez, Á. (15 de Octubre de 2013).
0.1 g 847 La guía. Obtenido de
67
https://quimica.laguia2000.com/reacci
Tabla 2. Titulación y concentración ones-quimicas/esterificacion
 ANEXOS

1. Agitador

3. Proceso de los reactivoss con agitadores magnéticos

4. Formación de éster más etanol

2. Balanza Analítica
5. Titulación con 80 mg de enzima

7. Titulación con 20 mg de enzima

6. Titulación con 100 mg y 20 mg