Manual Del Laboratorio de Bacteriologiģa I

Benemérita
Universidad Autónoma de Puebla

Vicerrectoría de Docencia
Dirección General de Educación Superior
Facultad de Ciencias Químicas

PLAN DE ESTUDIOS (PE): Licenciatura en Químico Farmacobiólogo
ÁREA: Químico-Biológica
ASIGNATURA: Laboratorio de Bacteriología I
CÓDIGO: QFBM258L
CRÉDITOS: 0
FECHA: OTOÑO 2019
Laboratorio de Bacteriología I
Benemérita Universidad Autónoma de Puebla

1. DATOS GENERALES
Nivel Educativo: Licenciatura
Nombre del Plan de Estudios: Licenciatura en Químico Farmacobiólogo
Modalidad Académica: Presencial
Nombre de la Asignatura: Laboratorio de Bacteriología I
Ubicación: Nivel Formativo.
Correlación:
Asignaturas Precedentes: SIN REQUISITOS

Bacteriología II, Microbiología Sanitaria, Genética
Asignaturas Consecuentes:
Microbiana, Microbiología Diagnóstica
2. CARGA HORARIA DEL ESTUDIANTE

Total de horas por
Concepto Horas por semana
periodo
Horas práctica 3 48

3. REVISIONES Y ACTUALIZACIONES
D.C. Fausto Tejeda Trujillo
M.S.P. Carlos Cabrera Maldonado
D.C. Alma López García
M.C. María Susana Pérez Fernández
Autores: M.C. Patricia Guadalupe Suárez Albores
M.S.P. María de la Cruz Meneses Sánchez
D.C. Juan Carlos Benítez Serrano
D.E.D. Reyna del Consuelo Almiray Pinzón de Dios
D.E.D. Edith Díaz Cabrera
Fecha de diseño: Mayo 2014
Fecha de la última actualización: Otoño 2019

Fecha de aprobación por parte de la
academia de área, departamento u Otoño 2019
otro:
D.E.D. Claudy Lorena Villagrán Padilla
M.C. Patricia Guadalupe Suárez Albores
D.E.D. Ana Bertha Escobedo López
M.C. Gloria León Tello
M.S.P María de la Cruz Meneses Sánchez
Revisores: D.E.D.Edith Díaz Cabrera
M.C. Laura Martínez Pérez
M.C. Alejandro César Ruiz Tagle
D.E.D. Reyna del Consuelo Almiray Pinzón
D.C. Alma López García
D.C. Juan Carlos Benítez Serrano
Se definió el propósito de las prácticas de laboratorio, se
establecieron las competencias profesionales, se realizó la
Sinopsis de la revisión y/o actualización de bibliografía y se adaptó al formato APA, se
actualización: revisaron los contenidos temáticos. Se establecieron nuevas
estrategias y técnicas didácticas, así como los nuevos
criterios de evaluación.
4. PERFIL DESEABLE DEL PROFESOR (A) PARA IMPARTIR LA ASIGNATURA:

Disciplina profesional: Químico Farmacobiólogo, Microbiólogo o área afín
Nivel académico: Maestría o Doctorado
Experiencia docente: Mínima 5 años

Experiencia profesional: Mínima 3 años
3

5. PROPÓSITO: Evalúa las características morfológicas, fisiológicas y bioquímicas de las bacterias
para identificar y diferenciar la etiología bacteriana, infiriendo su composición antigénica, estructural y
sus mecanismos de patogenicidad utilizando diversas metodologías para apoyar en el conocimiento
de dichas bacteria en el diagnóstico de una infección bacteriana, asimismo elige dentro de las
diferentes técnicas inmunológicas y de biología molecular para la realización de un buen diagnóstico
que conlleve un tratamiento certero.
6. COMPETENCIAS PROFESIONALES:
1. Emplea herramientas de informática y bases de datos para buscar, recuperar y analizar
información relevante de las características generales de los distintos grupos bacterianos
para identificar y diferenciar a aquellos de importancia médica.
2. Relaciona la epidemiología de los diferentes grupos bacterianos con la finalidad de

apoyarse y orientarse hacia un buen diagnóstico clínico, oportuno y certero, para el
pronóstico, seguimiento y control de pacientes.
3. Evalúa los diferentes mecanismos de patogenicidad y virulencia que poseen las bacterias
con la finalidad de interpretar y establecer los factores que provocan las enfermedades
bacterianas y así poder prevenirlas.
4. Interpreta las características morfológicas (microscópicas y coloniales), fisiológicas y

bioquímicas necesarias para identificar género y especie de las bacterias con base al
género y especie de importancia médica.
5. Implementa la metodología para la identificación y diferenciación de las distintas especies

bacterianas de importancia médica que integran los diversos géneros bacterianos y
seleccionando las técnicas adecuadas con el propósito de contribuir con un buen
diagnóstico que conlleve a la mejora del estado de salud de las personas. Realiza procesos
de análisis microbiológicos apegados a la normatividad y buenas prácticas de laboratorio
para asegurar la validez y confiabilidad de los resultados de las pruebas .
6. Aplica los métodos de las distintas técnicas inmunológicas y de biología molecular para
apoyar en el análisis microbiológico conforme a protocolos establecidos para contribuir a la
prevención, diagnóstico, seguimiento y el control de enfermedades bacterianas, utilizando
controles pertinentes que garanticen la calidad de las pruebas conforme a protocolos y
normas vigentes.
4

7. CONTENIDOS TEMÁTICOS
ÍNDICE
NÚMERO DE LA TÍTULO DE LA PRÁCTICA PÁGINA

PRÁCTICA
Práctica 1 Introducción al trabajo de laboratorio en 3

bacteriología
Práctica 2 Aplicación de los criterios de Cowan y Steel 5
para la identificación de bacterias
Práctica 3 Caracterización de bacterias no 9
fermentadoras
Práctica 4 Caracterización del género Pseudomonas 12
Práctica 5 Caracterización de bacterias de los géneros 14

Haemophilus y Brucella
Neisseria y Moraxella
Práctica 7 Caracterización de enterobacterias: lactosa 19

positivas
Práctica 8 Caracterización de enterobacterias: lactosa 22

negativas
Práctica 9 Caracterización del género Vibrio 26

Streptococcus y Enterococcus
Práctica 11 Caracterización de bacterias del género 31

5
Staphylococcus
Práctica 12 Caracterización de Bacilos Grampositivos: 34

Bacillus

PRACTICA No.1
INTRODUCCIÓN AL TRABAJO DE LABORATORIO EN BACTERIOLOGÍA
Introducción
El laboratorio bacteriológico es el espacio físico donde se efectúa gran diversidad de procedimientos
médicos, científicos, técnicos, etc. que en conjunto representan un valioso recurso de la clínica al
documentar el estado de salud (medicina preventiva) o de enfermedad (medicina curativa). La razón
por la que el médico envía al paciente al laboratorio es sólo una: necesita información para tomar
decisiones adecuadas. Los estudios microbiológicos tienen la característica de ser eminentemente
etiológicos, lo cual permite brindar al paciente el tratamiento específico, generando un impacto
significativo en la humanidad.
El laboratorio bacteriológico ha tenido una evolución de varios siglos, desde el surgimiento del
microscopio hasta el advenimiento de la biología molecular, la cual se ha ido ampliando gradualmente.
Objetivo
Utilizar los recursos actuales del laboratorio de Microbiología para poder realizar la identificación de
bacterias de importancia médica.
Material
El necesario para el desarrollo de las diferentes prácticas
Metodología
6
Mostrar cada uno de los medios con que cuenta el laboratorio para la identificación de las bacterias,
explicar su funcionamiento, así como reafirmar el reglamento del laboratorio para evitar cualquier
accidente.

Observaciones
Resultados
Interpretación
Cuestionario
1.- ¿Cuál es la importancia de cumplir un reglamento dentro de un laboratorio práctico?
2.- ¿Cuáles son los cuidados que se deben tener en el momento de trabajar con las bacterias?
3.- ¿Qué desinfectantes se deben utilizar para destruir a las bacterias, menciona las concentraciones y el
tiempo de acción de dichos desinfectantes?
4.-¿Qué es un nivel de bioseguridad y cuántos niveles existen y cuál es su utilidad?
5.-Describe cada uno de estos niveles de bioseguridad.

PRACTICA No.2
APLICACIÓN DE LOS CRITERIOS DE COWAN Y STEEL PARA LA
IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS
Introducción
La identificación de una bacteria es la asignación a un taxón según una clasificación dada y consiste en
la determinación de las características fenotípicas y/o genotípicas y la comparación de estas
características con los diferentes taxones de la clasificación considerada. Las características a
determinar y su número depende principalmente del tipo de bacteria y del fin que se persigue en la
identificación.
Cowan y Steel establecen un grupo de pruebas, denominadas pruebas primarias, con las cuales
se puede determinar el género, grupo de géneros o en algún caso, familia a la que pertenece un
aislamiento. Dichas pruebas son:
1.- Tinción de Gram.

2.- Tinción de Shaeffer-Fulton (sólo en caso de tener bacilos grampositivos (BGP)).
3.- Tinción de Ziehl-Neelsen (sólo en caso de tener bacilos BGP).
4.- Metabolismo (Oxidativo/Fermentativo/Inerte).
5.- Producción de catalasa.
6.- Producción de oxidasa.
7.- Movilidad.
8.- Requerimientos de aerobiosis.
9.- Requerimientos de anaerobiosis.
10.- Producción de ácido a partir de glucosa.
8

También se pueden incluir pruebas secundarias y terciarias a efectos de llegar a especie. Estas
dependerán del género o familia determinado. (ej: producción de pigmentos, producción de indol a
partir de triptófano, producción de coagulasa, de fenilalanina desaminasa, etc.)
Objetivo
Realizar tomando como base los criterios establecidos por Cowan y Steel, las pruebas bioquímicas
fundamentales, que permiten la identificación presuntiva de las bacterias de interés médico.
Material
Equipos de tinción de Gram Tubos con O/F con glucosa
Sensidiscos de oxidasa Placas con agar nutritivo o soya tripticasa
Reactivo para catalasa
Portaobjetos
Benzal
Algodón
Caldos con bacilos gramnegativos no fermentadores (BGNnF)
Metodología
Tomar una cepa problema a la cual se le realizará lo siguiente:
1.- Tinción de Gram.
2.- Tinción de Shaeffer-Fulton (sólo en caso de tener BGP).
3.- Tinción de Ziehl-Neelsen (sólo en caso de tener BGP).
4.- Inocular por estría cruzada una placa de agar.
5.- Inocular por picadura el medio O/F.
6.- Inocular por picadura el medio MIO.
7.- Inocular por picadura una base de CTA con un carbohidrato.
8.- Incubar todos los medios a 37°C por 24 horas. 9
9.- Leer morfología colonial de la placa.
10.- Del crecimiento en placa realizar las pruebas de oxidasa y catalasa.

11.- Leer bioquímicas.
12.- Comparar los resultados en tablas.
13.- Identificar familia o género (ver tabla 1).
Observaciones
Resultados
Interpretación
Cuestionario
1.- ¿Cuál es la importancia de los criterios de Cowan y Steel?
2.- ¿Para que sirve la tinción de Ziehl-Neelsen y cuál es su fundamento?
3.- ¿Cuál es el fundamento de la prueba de oxidasa y de catalasa y cómo se realiza en el laboratorio?
4.- ¿En que medios se puede realizar la prueba de movilidad y cómo se interpreta?
5.- De cada uno de los criterios de Cowan y Steel efectuados a la cepa de estudio durante la práctica,
realiza dibujos y menciona tus resultados.
10

Tabla 1. Identificación de bacterias heterótrofas según Cowan y Steel
Tinción gram
+ + + + + + + + – – – – –
(cultivo fresco)
Forma coco Coco coco coco bastón bastón bastón bastón bastón bastón bastón bastón coco
Agrupación racimos Racimos cadenas tetradas pares
Crecimiento
+ + + + + – + + + + + + +
aerobio
Crecimiento
– + + + + + + – – – + + –
anaerobio
Esporas – – – – – + + + – – – – –
Movilidad – – – – – +o– +o– +o– +o– +o – +o- + –
Catalasa + + – – – – + + + + + + +
Oxidase + + – + +
Fermentación de
glucosa a acido – + + + + + (o –) + – – – + + –
o a acido+gas
O/F – O F F O
Micrococcus X
Staphylococcus X
Streptococcus X
Lactococcus X
Enterococcus X
Leuconostoc X
Pediococcus X X
Aerococcus X
Lactobacillus X
Clostridium X
Bacillus X X
Alcaligenes X
Pseudomonas X
Enterobacterias X
Aeromonas X
Chromobacterium X
Neisseria X
11


PRACTICA No. 3
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS NO FERMENTADORAS
Introducción
Este grupo abarca microorganismos aerobios, no esporulados, que no utilizan a los carbohidratos como
fuente de energía o los utilizan a través de vías metabólicas diferentes a la fermentación.
La importancia de estas bacterias radica fundamentalmente en su capacidad para infectar

hospederos inmunocomprometidos, por lo que cobran especial interés a nivel intrahospitalario, donde
además es común la presencia de cepas con marcadas características de resistencia a los
antimicrobianos de uso convencional. Dentro de este grupo se encuentran los siguientes géneros:
Pseudomonas, Acinetobacter, Moraxella, Alcaligenes, Flavobacterium, Agrobacterium, entre otros.
Algunos de los indicios tempranos para detectar a un microorganismo no fermentador serían los
siguientes:
1.- Falta de evidencias de fermentación de la glucosa.

2.- Positiva la prueba de oxidasa.
3.- Carencia de crecimiento en el agar de Mac Conkey.
En la rutina bacteriológica es necesario rapidez y bajo costo en la identificación de este grupo

de bacterias, por lo que se sugiere se siga el esquema de King-Weaver para su identificación, el cual se
basa en 4 pruebas (ver tabla 2):
1.- Utilización de glucosa (fermentador (F), oxidador (O) o no sacarolítico (NS)).

2.- Capacidad de crecer en Mac Conkey.
12
3.- Producción de citocromo oxidasa.
4.- Movilidad.

Tabla 2. Características de algunos géneros gramnegativos no fermentadores

CREC
OTRAS
GÉNERO METABOLISMO MOVILIDAD OXIDASA MAC
CARACTERÍSTICAS
CONKEY
+
Desnitrifican nitratos
Pseudomonas O flagelos polares + +
a N2
Acinetobacter O ó NS - - + Parecen diplococos
V
algunos
Escaso o
Flavobacterium O presentan + Requieren complejo B
negativo
flagelos
perítricos
Escaso o Requiere factores de
Bordetella O V +
negativo crecimiento
Escaso o Cocobacilar, difícil de
Moraxella O ó NS - +
negativo crecer.
Prueba de DNasa +
+ Producción de ácido a
Stenotrophomonas O - +
un solo flagelo partir de O/F con
maltosa
+
Alcaligenes O ó NS flagelos + - Aerobio estricto
perítricos
Objetivo
Comprobar por medio de análisis de laboratorio, el comportamiento característico de cepas bacterianas
no fermentadoras de carbohidratos.
Material
Sensidiscos de oxidasa Placas con agar sangre de carnero
Reactivo para catalasa Placas con agar Mac Conkey
Portaobjetos Tubos con agar MIO
13
Benzal
Algodón

Caldos con BGNnF
Metodología
1.- Sembrar por estría cruzada los medios en placa, procurando perforar el medio en la parte del
estriado masivo, en el caso del agar sangre carnero.
2.- Sembrar por picadura los medios O/F y MIO.
3.- Incubar 24 horas a 37° C.
4.- Leer morfología colonial.
5.- Realizar a partir de una colonia aislada, las pruebas de catalasa, oxidasa y tinción de Gram.
6.- Leer pruebas bioquímicas.
Observaciones
Resultados
Interpretación
Cuestionario
1.- ¿Por qué es importante identificar a los BGNnF y qué géneros conforman dicho grupo?
2.- ¿Cuáles son las pruebas claves para sospechar de un BGNnF?
3.- Mencione un esquema diferente al de King-Weaver para identificar a los BGNnF
4.- ¿De los BGNnF que géneros dan la prueba de oxidasa negativa, quiénes movilidad negativa y
quiénes son capaces de crecer en Mac Conkey?
5.- De la cepa problema responde lo siguiente con ayuda de dibujos:
a) Morfología colonial
b) Tinción de Gram
c) Pruebas de catalasa y oxidasa
d) Pruebas bioquímicas
e) Establecer si la cepa pertenece al grupo de BGNnF 14

PRÁCTICA No.4
CARACTERIZACIÓN DEL GÉNERO Pseudomonas
Introducción
Este género se encuentra ubicado dentro del grupo de BGNnF y ocupa dentro de éstos, el primer lugar
como agente causal de infecciones intrahospitalarias, resaltando la capacidad de resistencia presente en
algunas cepas a desinfectantes elaborados a partir de sales cuaternarias de amonio. De las especies que
integran este género destacan: Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas
alcaligenes, Burkholderia cepacia (anteriormente llamada Pseudomonas cepacia). Siendo en el
ambiente clínico P. aeruginosa la especie aislada con mayor frecuencia (ver tabla 3).
Objetivo
Demostrar las particularidades bioquímicas y de cultivo, del género Pseudomonas.
Material
Sensidiscos de oxidasa Placas con agar sangre de carnero
Reactivo para catalasa Placas con agar Mac Conkey
Portaobjetos Tubos con agar MIO
Benzal Tubos con agar Seller’s
Algodón
Caldos con diferentes especies de Pseudomonas
Metodología
1.- Sembrar por estría cruzada los medios en placa, procurando perforar el medio en la parte del
estriado masivo, en el caso del agar sangre carnero.
15
2.- Sembrar por picadura los medios O/F y MIO.
3.- Sembrar por picadura y estría el medio Seller’s.

Observaciones
Resultados
Interpretación
Cuestionario
1.- ¿Cuál es la importancia del género Pseudomonas?
2.- ¿Qué pruebas de laboratorio permiten diferenciar una enterobacteria del género Pseudomonas?
3.- ¿Para qué es útil el medio O/F y cuál es su fundamento?
4.- ¿Por qué es importante utilizar el medio Seller´s, en la identificación de Pseudomonas?
5.- ¿Qué pruebas de laboratorio son útiles para diferenciar especies de Pseudomonas?
Tabla 3. Características importantes del grupo fluorescente
Prueba Pseudomonas Pseudomonas Pseudomonas

aeruginosa fluorescens putida
Piocianina + - -
Pioverdina + + +
Reducción de nitratos V (74 %) V (19 %) -
Desarrollo a 42 °C + - -
16

PRÁCTICA 5
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS Haemophilus Y
Brucella
Introducción
Los miembros del género Haemophilus son bacilos gramnegativos pequeños, inmóviles, que requieren
de factores de crecimiento presentes en la sangre como el factor X, que es un grupo de compuestos
tetrapirrólicos termoestables, como la hemina. Mientras que el factor V, es el dinucleótido de
nicotinamida adenina (NAD). Estos dos factores están contenidos en los eritrocitos, por lo tanto el agar
chocolate es un buen medio de cultivo para la recuperación de Haemophilus. Las especies de
Haemophilus humanos, están vinculadas en su mayoría con infecciones del tracto respiratorio superior
a excepción de H. ducreyi que es un patógeno de tracto genital.
El género Brucella abarca un grupo de microorganismos que son cocobacilos diminutos de

tinción débil y desarrollo lento en agar sangre. Son responsables de la brucelosis, la cual es difícil de
diagnosticar, debido al amplio espectro de manifestaciones clínicas asociadas.
Objetivo
Identificar los géneros Haemophilus y Brucella.
17

Material
Equipos de tinción de Gram Placas de agar chocolate
Sensidiscos de oxidasa Placas con agar soya tripticasa
Reactivo para catalasa Sensidiscos con factores V y X
Portaobjetos Benzal
Algodón Botellas para hemocultivo
Caldos con Haemophilus sp Placas con agar sangre de carnero
Caldos con Brucella sp Tubos con medio urea
Colorantes fucsina básica, tionina y azul de tionina.
Metodología
Para Haemophilus:
1.- Sembrar por estría cruzada una placa de agar chocolate.
2.- Incubar 48-72 horas a 37° C.
5.- Realizar pruebas de identificación de especie en agar soya tripticasa con sensidiscos impregnados
de los factores V y X.
Para Brucella
1.- Sembrar en botellas para hemocultivo.
2.- Incubar a 35° C durante 4-6 semanas.
3.- Hacer subcultivos en agar sangre y chocolate.
4.- Identificar especies, mediante pruebas bioquímicas como necesidad de CO2, producción de ureasa y
sensibilidad a los colorantes fucsina básica, tionina y azul de tionina.
Observaciones 18
Resultados
Interpretación

Cuestionario
1.- ¿Cuál es la importancia clínica de Haemophilus?
2.- ¿Existe algún agar comercial para el aislamiento de Haemophilus?
3.- Menciona la(s) especies de Haemophilus que requieran el factor V, la(s) que requiera el factor X y
la(s) que requiera ambos factores.
4.- ¿Cuál es la importancia clínica del género Brucella?
5.- ¿Qué especies de Brucella requieren C02 para crecer, cuales producen H2S y cuales ureasa?
19

PRÁCTICA No.6
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS Neisseria y
Moraxella
Introducción
Los miembros del género Neisseria son microorganismos gramnegativos cocoides o baciliares que
pueden encontrarse en pares o en cadenas cortas. Son inmóviles, no forman esporas y producen ácido a
partir de carbohidratos lo que permite identificar especies. Neisseria gonorrhoeae es la especie de
importancia en salud publica ya que se adquiere por transmisión sexual
Neisseria catarrhalis ahora conocida como Moraxella catarrhalis, puede ser responsable de
infecciones respiratorias principalmente en niños y ancianos, crece en agar chocolate y agar nutritivo,
no produce ácido a partir de glucosa, maltosa, fructosa, sacarosa no lactosa.
Objetivo
Identificar los géneros Neisseria y Moraxella.
Material
Equipos de tinción de Gram Placas de agar Thayer-Martin
Sensidiscos de oxidasa Placas con agar chocolate
Reactivo para catalasa Placas con agar nutritivo
Portaobjetos Benzal
Algodón Placas con agar DNasa
Caldos con Neisseria sp
Caldos con Moraxella sp
Tubos con CTA con diferentes carbohidratos
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Metodología
Para Neisseria
1.- Sembrar una placa de Thayer-Martin en forma de Z y luego estriar.
5.- Realizar pruebas de identificación de especie en bases de CTA con diferentes carbohidratos.
Para Moraxella
1.- Sembrar en agar chocolate y agar nutritivo.
4.- Realizar a partir de una colonia aislada, las pruebas de catalasa, oxidasa, tinción de Gram y DNasa.
Observaciones
Resultados
Interpretación
Cuestionario
1.- ¿Cuál es la importancia clínica de Neisseria gonorrhoeae?
2.- ¿Que tipo de medio es el Thayer-Martin?
3.- Menciona las especies de Neisseria y su comportamiento frente a los diferentes carbohidratos.
4.- ¿Cuál es la importancia clínica de Moraxella catarrhalis?
5.- Que tipo de muestra debe utilizarce para la identificación de Neisseria gonorrhoeae y cual para
Moraxella . catarrhalis?
21

PRÁCTICA No.7
CARACTERIZACIÓN DE ENTEROBACTERIAS: LACTOSA POSITIVAS
Introducción
La familia Enterobacteriaceae está conformada por un número importante de especies, que incluyen
bacilos gramnegativos, con metabolismo fermentador, anaerobios facultativos, catalasa positivos,
oxidasa negativos, la mayoría son móviles, reducen los nitratos a nitritos, y no presentan condiciones
nutritivas exigentes, crecen muy bien en agar Mac Conkey.
La familia Enterobacteriaceae tiene como nicho ecológico el tracto intestinal de gran variedad
de seres vivos, incluyendo al hombre, lo cual facilita su presencia prácticamente en todo lugar. La
mayoría de las enterobacterias son parte importante de la microbiota intestinal, comportándose como
patógenos solo en el caso de pacientes inmunocomprometidos (patógenos oportunistas).
Con el objeto de facilitar la caracterización de esta familia se ha dividido con base a la

capacidad de fermentar lactosa en dos grupos: lactosa positivos, los que la fermentan y los lactosa
negativos los que no poseen el sistema enzimático que les permite llevar a cabo el proceso. También es
necesario el empleo de pruebas bioquímicas y fisiológicas para establecer el grupo bacteriano.
La fermentación bacteriana de la lactosa es más compleja que la de la glucosa. La lactosa es un

disacárido compuesto por glucosa y galactosa, unidas entre si por un enlace glucosídico. Para que una
bacteria pueda metabolizar a la lactosa debe tener a la enzima beta-galactósido permeasa, que
transporta a la lactosa al interior de la bacteria y la beta-galactosidasa, necesaria para hidrolizar el
enlace glucosídico y liberar a la glucosa y galactosa, finalmente la glucosa entra a la ruta de Embden-
Meyerhof para la formación de ácidos mixtos los cuales pueden ser detectados en un medio de cultivo
con un indicador de pH (ver tabla 4).
22

Objetivo
Determinar por medio de ensayos de laboratorio las características bioquímicas que definen a la familia
Enterobacteriaceae y a las enterobacterias lactosa positivas.
Material
Equipos de tinción de Gram Placas de agar Mac Conkey
Sensidiscos de oxidasa Placas con agar EMB
Reactivo para catalasa Benzal
Portaobjetos
Algodón
Caldos con Escherichia coli, Klebsiella, Enterobacter
Tubos con medios TSI, LIA, MIO, CITRATO Y UREA para pruebas bioquímicas
Metodología
1.- Sembrar por estría cruzada placas de Mac Conkey y EMB.
2.- Inocular pruebas bioquímicas.
3.- Inocular galerías.
4.- Incubar.
5.- Leer morfología colonial, pruebas bioquímicas, realizar tinción de Gram, catalasa, oxidasa.
6.- Comparar resultados con tablas y establecer género y especie.
Observaciones
Resultados
Interpretación
23

Cuestionario
1.- ¿Cuál es la importancia de las enterobacterias?
2.- Las enterobacterias se han clasificado en dos grupos: lactosas (+) y lactosas (-), ¿qué géneros de
importancia médica se encuentran en cada uno de estos grupos?
3.-De las bacterias lactosa positivas menciona a las inmóviles y a las que son capaces de producir H2S?
4.-¿Cuáles son las pruebas bioquímicas que permiten identificar a las enterobacterias y menciona el
fundamento bioquímico de cada una de ellas?
a) Morfología colonial.
b) Tinción de Gram.
c) Pruebas de catalasa y oxidasa.
d) Pruebas bioquímicas.
e) Establecer género y especie de la cepa problema.
24

PRÁCTICA No.8
CARACTERIZACIÓN DE ENTEROBACTERIAS: LACTOSA NEGATIVAS
Introducción
Dentro de las bacterias lactosa negativas se encuentran los patógenos primarios como es el caso de
Salmonella spp., Shigella spp. y Yersinia spp.
La tribu Salmonelleae contiene un único género Salmonella y reciben el nombre del biólogo
estadounidense Salmon. Esta tribu está relacionada con la salmonelosis que es una causa importante de
enfermedad entérica bacteriana en seres humanos y animales. Se estima que ocurren 1.4 millones de
casos anuales de salmonelosis en seres humanos en los Estados Unidos. Estas infecciones son causadas
por ingesta de alimentos, agua o leche contaminados con excremento de animales o humanos. Las
salmonelas son patógenos primarios de los animales inferiores como vacas, cerdos, mascotas, etc. que
constituyen la fuente principal de salmonelosis no tifoidea en los humanos. Mientras que Salmonella
typhi es específico del humano y causa fiebre tifoidea.
La shigelosis es la más contagiosa de las diarreas causada por Shigella, la enfermedad es

transmitida por vía fecal-oral y se requieren tan solo 200 bacterias viables para producir la enfermedad.
Se conocen 3 especies del género Yersinia: Y. pestis, Y, pseudotuberculosis y Y. enterocolitica.

La peste bubónica es causada por Y. pestis, es una enfermedad de la antigüedad que persiste en los
tiempos modernos, es una enfermedad zoonótica, transmitida por un roedor a otro o del roedor al
hombre a través de las pulgas (ver tabla 4).
Objetivo
25
Determinar por medio de ensayos de laboratorio las características bioquímicas que definen a la familia
Enterobacteriaceae y a las enterobacterias lactosa negativas.

Material
Sensidiscos de oxidasa Placas con agar Salmonella-Shigellla (SS)
Portaobjetos Caldos con Salmonella sp, Shigella sp, Proteus sp
Algodón
Metodología
1.- Sembrar por estría cruzada placas de Mac Conkey y SS.
2.- Inocular pruebas bioquímicas.
3.- Inocular galerías.
5.- Leer morfología colonial, pruebas bioquímicas, realizar tinción de Gram, catalasa, oxidasa.
6.- Comparar resultados con tablas y establecer género y especie.
Observaciones
Resultados
Interpretación
26

Cuestionario
1.- ¿Qué géneros son lactosa negativas?
2.- ¿Cuál es la importancia de las enterobacterias lactosa negativas?
3.- De las lactosa negativas, menciona a las enterobacterias inmóviles y a las que son capaces de
producir H2S?
4.- ¿Cuál es una característica importante de la tribu Proteae?
b) Tinción de Gram
e) Establecer género y especie de la cepa problema
Tabla 4. Diferenciación de enterobacterias mediante pruebas bioquímicas

Sección Entérica y Rama de Entrenamiento Bacteriológico. CDC
27

28
Fuente: Bergey's Manual

PRÁCTICA No.9
CARACTERIZACIÓN DEL GÉNERO Vibrio
Introducción
Este género se define como bacilos gramnegativos, fermentadores, móviles, catalasa y oxidasa
positivas. Algunas especies se caracterizan por ser halofílicas. Todos los géneros se consideran
patógenos, resaltando en particular Vibrio cholerae por ser el agente causal del cólera, enfermedad
que se presenta comúnmente en forma epidémica, sobre todo en países en vías de desarrollo (ver tabla
5).
Objetivo
Determinar con base a las pruebas de laboratorio correspondientes, las características bioquímicas más
relevantes de este género.
Material
Sensidiscos de oxidasa Placas de agar TCBS
Portaobjetos Caldos con Vibrio cholerae y V. parahaemolyticus
Algodón
Metodología
1.- Sembrar por estría cruzada los medios en placa.
2.- Sembrar las pruebas bioquímicas convencionales.
3.- Incubar 24 horas a 37° C. 29

Observaciones
Resultados
Interpretación
Cuestionario
1.- ¿Qué géneros conforman a la familia Vibrionaceae?
2.- ¿Cuál es la importancia clínica del género Vibrio?
3.- Indique el mecanismo de patogenicidad de Vibrio cholerae.
4.-¿Qué pruebas permiten diferenciar entre las especies de Vibrio?
5.-De la cepa problema responde lo siguiente con ayuda de dibujos:
b) Tinción de Gram
e) Establecer género y especie de la cepa problema
Tabla 5. Diferenciación entre biotipos de Vibrio cholerae
Prueba Clásica El Tor

Prueba del filamento + +
β-hemólisis en agar sangre de carnero - +
Prueba de CAMP - +
Prueba de Voges-Poskauer - +
Aglutinación de eritrocitos de pollo - +
Sensibilidad a 50 U de polimixina B S R
Susceptibilidad al fago IV S R
30

PRÁCTICA No.10
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS Streptococcus y
Enterococcus
Introducción
Estos géneros se caracterizan por ser cocos grampositivos agrupados en pares o cadenas, generalmente
inmóviles, catalasa negativos en general, no esporulados, aerobios y anaerobios facultativos con
metabolismo fermentativo en el que producen ácido láctico, fórmico, etanol y CO2, crecen
óptimamente a 37° C.
Los Enterococcus se encuentran de manera natural en muchos organismos, incluidos los
humanos, como parte de su flora intestinal. Son microorganismos muy resistentes, capaces de tolerar
concentraciones relativamente altas de sales y ácidos.
El género de mayor interés médico son los Streptococcus. Algunas especies forman parte de la
flora normal del hombre y otras están relacionadas con cuadros clínicos de amigdalitis, celulitis,
erisipela, faringitis, rinitis, fiebre escarlatina, sepsis puerperal, neumonía, endocarditis bacteriana,
caries, meningitis, infecciones en vías urinarias y heridas, fiebre reumática, glomérulo nefritis y
conjuntivitis purulenta.
Objetivo
Caracterizar bioquímicamente a las especies más importantes de ambos géneros.
Material
Equipos de tinción de Gram Placas con agar sangre de carnero
Sensidiscos de oxidasa Caldos BHI con Streptococcus pyogenes
Reactivo para catalasa Caldos BHI con Streptococcus agalactiae
31
Portaobjetos Caldos con Staphylococcus aureus
Algodón Caldos BHI con Enterococcus sp

Benzal Caldos con BHI con 6.5 % de NaCl
Placas con agar bilis-esculina Sensidiscos con bacitracina (0.04 UI)
Sensidiscos con optoquina
Metodología
HEMÓLISIS
ALFA BETA NO HEMÓLISIS

(GAMA)
Crece en 6.5% NaCl
Soluble en bilis Sensible a bacitracina: S. pyogenes
Ennegrece la bilis
Sensible a optoquina esculina
CAMP +
Hidrólisis del hipurato +: S. agalactiae
S. pneumoniae Enterococcus
1.- Sembrar por estría cruzada una placa de agar sangre carnero.
2.- Realizar pruebas de CAMP.
3.- Realizar pruebas de sensibilidad a bacitracina.
4.- Realizar pruebas de sensibilidad a optoquina.
5.- Realizar tinción de Gram y observar al microscopio.
6.-Incubar 24 horas a 37° C. 32
8.- Interpretar resultados.

Observaciones
Resultados
Interpretación
Cuestionario
1.- ¿Cuál es la definición del género Streptococcus?
2.- ¿Cuál es el fundamento de la prueba de CAMP?
3.- ¿Para que se utiliza la prueba de sensibilidad a bacitracina y optoquina?
b) Tinción de Gram
d) Otras pruebas
e) Establecer si la cepa en estudio pertenece al género de Streptococcus, de ser positiva la respuesta,
menciona la especie.
5. Menciona las especies más importantes de Streptococcus y qué enfermedad producen.
33

PRÁCTICA No.11
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DEL GÉNERO Staphylococcus
Introducción
Este género está constituido por cocos grampositivos, agrupados en racimos, catalasa positiva con
metabolismo fermentativo. Son responsables principalmente de infecciones supurativas de la piel y
tejidos blandos. Así como de infecciones oportunistas. Se reconocen 3 especies: Sta. aureus, Sta.
epidermidis, Sta. Saprophyticus (ver tabla 6).
Objetivo
Observar las características más relevantes del género, resaltando aquellas que permiten su
diferenciación con otros cocos grampositivos de cercana filiación.
Tabla 6.
PRUEBAS DE S. aureus S. epidermidis S. saprophyticus Diferenciación de
LABORATORIO las especies de
Color de las colonias Amarillo- Blanco Blanco Staphylococcus
blanco
Hemólisis en agar sangre + +/- -
Crecimiento anaerobio + + +/-
Coagulasa y DNasa + - -
Fermentación de la glucosa + + +
Fermentación del manitol + - -/+
Novobiocina Sensible Sensible Resistente
34

Material
Sensidiscos de oxidasa Caldos con Staphylococcus aureus
Reactivo para catalasa Caldos con Staphylococcus epidermidis
Portaobjetos Caldos con Staphylococcus saprophyticus
Algodón Placas con agar DNasa
Benzal Plasma de conejo
Sensidiscos con novobiocina
Placas con agar sal y manitol
Metodología
1.- Sembrar por estría cruzada una placa de agar sangre y una de agar sal y manitol.
3.- Leer morfología colonial y microscópica.
4.- Realizar pruebas de identificación de especie.
Observaciones
Resultados
Interpretación
35

Cuestionario
1.- ¿Cuál es la definición e importancia del género Staphylococcus?
2.- ¿Qué prueba permite diferenciar entre el género Streptococcus y Staphylococcus?
3.- ¿Cuál es el fundamento de la prueba de coagulasa y cómo se realiza en el laboratorio?
4.- ¿Cuáles son los ingredientes del agar de sal y manitol y por qué es importante utilizarlo para la
identificación de este género y no de otros?
b) Tinción de Gram
d) Otras pruebas
e) Establecer si la cepa en estudio pertenece al género de Staphylococcus, de ser positiva la respuesta,
menciona la especie.
36

PRÁCTICA 12
CARACTERIZACIÓN DE BACILOS GRAMPOSITIVOS: Bacillus
Introducción
Los microorganismos del género Bacillus son bacilos grampositivos, formadores de endosporas,
catalasa positivos, son móviles excepto B. anthracis y β-hemolíticos excepto B. anthracis. Este género
es ubicuo en la naturaleza ya que posee endosporas y éstas pueden permanecer en campos
contaminados por periodos de 10 hasta 30 años. B. anthracis es el agente causal de ántrax en animales,
principalmente vacas y ovejas (ver tabla 7).
Objetivo
Identificar por pruebas de laboratorio al género Bacillus.
Material
Placas con agar nutritivo Equipo para tinción de Shaeffer-Fulton
Reactivo para catalasa Caldos con Bacillus sp
Portaobjetos Sensidiscos de oxidasa
Algodón Caldo nutritivo
Benzal Tubos con gelatina
Metodología
1.- Inocular una placa de agar sangre carnero.
2.- Inocular un tubo de caldo nutritivo e incubarlo a 42° C.
3.- Inocular un tubo con gelatina e incubarlo a 4° C por 7 días.
37
4.- Leer morfología colonial, buscar hemólisis, hacer tinción de Gram y Shaeffer-Fulton

Observaciones
Resultados
Interpretación
Cuestionario
1.- ¿Cuál es el fundamento de la tinción de Shaeffer-Fulton y cómo se realiza en el laboratorio?
2.- Menciona otras pruebas para diferenciar especies de Bacillus.
3.- Menciona medios de cultivo para el aislamiento de Bacillus.
4.- Menciona las medidas de seguridad que debe tener el laboratorio para poder trabajar con Bacillus
anthracis.
b) Tinción de Gram
d) Otras pruebas
38

Tabla 7. Caracteres mínimos para diferenciar Bacillus anthracis de Bacillus cereus
Bacillus anthracis Bacillus cereus
Lecitinasa + +
Colonias rugosas + +
Bacilar; extremos bacilar; extremos

Morfología
rectangulares redondeados
Movilidad - +
Cápsula -
+
Hemólisis +
-
Colonias lisas (capsulación en agar

-
bicarbonato de sodio 0.7%) +
Sensibilidad a penicilina -
+
39

Bibliografía
1. In Whitman, W. B., Bergey's Manual Trust,, & Wiley Online Library (Online service),. (2015).
Bergey's manual of systematics of archaea and bacteria.
2. Koneman, E. W. (2013). Koneman diagnóstico microbiológico: Texto y atlas en color. Buenos

Aires [etc.: Panamericana.
3. Mac, F. J. F., Rondinone, S., & Giovanniello, O. (2003). Pruebas bioquímicas para la
identificación de bacterias de importancia clínica. Buenos Aires: Médica Panamericana.
4. Molina, L. J. (2010). Microbiología: Bacteriología y virología. México, D.F: Méndez Editores.

Ed.2003.
5. Murray, P. R., Rosenthal, K. S., Pfaller, M. A., & Azzi, A. (2010). Microbiologia medica.
Milano: Elsevier Masson.
6. NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002.
7. Willey, J. M., Sherwood, L., Woolverton, C. J., Prescott, L. M., & Willey, J. M. (2011).
Prescott's microbiology. New York: McGraw-Hill.
40

8. ESTRATEGIAS, TÉCNICAS Y RECURSOS DIDÁCTICOS
Estrategias y técnicas didácticas Recursos didácticos
• Lluvia de ideas • Impresos (textos): libros, fotocopias,

• Círculo de expertos periódicos, documentos...
• Técnica de debate • Materiales manipulativos:
• Método de casos • Juegos:
• Estado del arte • Materiales de laboratorio
• Redes de palabras o mapas mentales • Materiales audiovisuales:
• Grupos de discusión • Imágenes fijas proyectables (fotos)-
• Técnica de concordar-discordar diapositivas, fotografías
• Técnica de Jerarquización • Materiales audiovisuales (vídeo):
• Solución de Problemas montajes audiovisuales, películas,
• Aprendizaje Basado en Problemas vídeos, programas de televisión…
• Aprendizaje Basado en Proyectos • Páginas Web, Weblog, tours virtuales,
• Estudio de casos webquest, correo electrónico, chats,
foros, unidades didácticas y cursos on-
line
41

9. EJES TRANSVERSALES
Eje (s) transversales Contribución con la asignatura
Formación Humana y Social Promover dentro y fuera del laboratorio un clima
de convivencia plural y responsable; con libertad
de expresión y pensamiento buscando la
equidad, sin discriminación y respeto a los
derechos de los demás.
Desarrollo de Habilidades en el uso de las Se promoverá para el logro de los objetivos de
Tecnologías de la Información y la Comunicación aprendizaje, que los productos académico de los
estudiantes sean diseñados a través de las
TIC´s, utilizando los laboratorios de cómputo y
disciplinarios, bibliotecas, auditorios, plataformas
virtuales y áreas de esparcimiento.
Desarrollo de Habilidades del Pensamiento Se promoverá la reflexión y toma de decisiones

Complejo de manera crítica, creativa, flexible, adaptativa y
propositiva a partir de analizar y relacionar
elementos desde una visión compleja e
interdisciplinaria para generar alternativas de
solución de acuerdo a las necesidades de su
contexto y afrontar la incertidumbre.
Lengua Extranjera Se implementarán estrategicas para que el
estudiante desarrolle habilidades para
comunicarse a través de la expresión oral y
escrita en una lengua extranjera y en la lengua
materna, para la comprensión de textos y/o
artículos.
Innovación y Talento Universitario Desarrollar talentos de emprendimiento e
innovación para integrar y conducir equipos de
alto desempeño con base a una metodología de
autoconocimiento y trabajo colaborativo; se
emprenderán proyectos de impacto social de
calidad para generar valor en los diferentes
ámbitos sociales con base en metodologías de
innovación y se transferirán propuestas de
solución a situaciónes donde se mostrará
responsabilidad social y compromiso ciudadano.
Educación para la Investigación Se implementarán estrategias para desarrollar en
el estudiante las habilidades de investigación,
con el fin de mejorar las experiencias de
aprendizaje, generando una cultura de la
indagación, el descubrimiento y la construcción
de nuevos conocimientos. 42

10. CRITERIOS DE EVALUACIÓN
Criterios Porcentaje
Examen teórico 30
Examen práctico 40
Manual de laboratorio 10
Reportes 10
Exposición 10
Total 100
11. REQUISITOS DE ACREDITACIÓN

Estar inscrito como alumno en la Unidad Académica en la BUAP
Asistir al 100% de las sesiones para tener derecho a calificación
La calificación mínima para considerar un curso acreditado será de 6.
Cumplir con las actividades académicas y cargas de estudio asignadas que señale el PE
43

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Benemérita

Universidad Autónoma de Puebla

PLAN DE ESTUDIOS (PE): Licenciatura en Químico Farmacobiólogo

ASIGNATURA: Laboratorio de Bacteriología I

FECHA: OTOÑO 2019

Nivel Educativo: Licenciatura

Nombre del Plan de Estudios: Licenciatura en Químico Farmacobiólogo

Modalidad Académica: Presencial

Nombre de la Asignatura: Laboratorio de Bacteriología I

Ubicación: Nivel Formativo.

Asignaturas Precedentes: SIN REQUISITOS

2. CARGA HORARIA DEL ESTUDIANTE

Fecha de diseño: Mayo 2014

Fecha de la última actualización: Otoño 2019

4. PERFIL DESEABLE DEL PROFESOR (A) PARA IMPARTIR LA ASIGNATURA:

Nivel académico: Maestría o Doctorado

Experiencia docente: Mínima 5 años

2. Relaciona la epidemiología de los diferentes grupos bacterianos con la finalidad de

4. Interpreta las características morfológicas (microscópicas y coloniales), fisiológicas y

5. Implementa la metodología para la identificación y diferenciación de las distintas especies

NÚMERO DE LA TÍTULO DE LA PRÁCTICA PÁGINA

Práctica 1 Introducción al trabajo de laboratorio en 3

Práctica 5 Caracterización de bacterias de los géneros 14

Práctica 7 Caracterización de enterobacterias: lactosa 19

Práctica 8 Caracterización de enterobacterias: lactosa 22

Práctica 9 Caracterización del género Vibrio 26

Práctica 10 Caracterización de bacterias de los géneros 28

Práctica 11 Caracterización de bacterias del género 31

Práctica 12 Caracterización de Bacilos Grampositivos: 34

1.- Tinción de Gram.

Tabla 1. Identificación de bacterias heterótrofas según Cowan y Steel

Agrupación racimos Racimos cadenas tetradas pares

La importancia de estas bacterias radica fundamentalmente en su capacidad para infectar

1.- Falta de evidencias de fermentación de la glucosa.

En la rutina bacteriológica es necesario rapidez y bajo costo en la identificación de este grupo

1.- Utilización de glucosa (fermentador (F), oxidador (O) o no sacarolítico (NS)).

Tabla 2. Características de algunos géneros gramnegativos no fermentadores

Acinetobacter O ó NS - - + Parecen diplococos

Tabla 3. Características importantes del grupo fluorescente

Prueba Pseudomonas Pseudomonas Pseudomonas

El género Brucella abarca un grupo de microorganismos que son cocobacilos diminutos de

Con el objeto de facilitar la caracterización de esta familia se ha dividido con base a la

La fermentación bacteriana de la lactosa es más compleja que la de la glucosa. La lactosa es un

La shigelosis es la más contagiosa de las diarreas causada por Shigella, la enfermedad es

Se conocen 3 especies del género Yersinia: Y. pestis, Y, pseudotuberculosis y Y. enterocolitica.

Tabla 4. Diferenciación de enterobacterias mediante pruebas bioquímicas

Fuente: Bergey's Manual

CARACTERIZACIÓN DEL GÉNERO Vibrio

Tabla 5. Diferenciación entre biotipos de Vibrio cholerae

Prueba Clásica El Tor

ALFA BETA NO HEMÓLISIS

Tabla 7. Caracteres mínimos para diferenciar Bacillus anthracis de Bacillus cereus

Bacillus anthracis Bacillus cereus

Bacilar; extremos bacilar; extremos

Colonias lisas (capsulación en agar

2. Koneman, E. W. (2013). Koneman diagnóstico microbiológico: Texto y atlas en color. Buenos

4. Molina, L. J. (2010). Microbiología: Bacteriología y virología. México, D.F: Méndez Editores.

Estrategias y técnicas didácticas Recursos didácticos

• Lluvia de ideas • Impresos (textos): libros, fotocopias,

Desarrollo de Habilidades del Pensamiento Se promoverá la reflexión y toma de decisiones

11. REQUISITOS DE ACREDITACIÓN

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