Proteínas de transporte de

hierro de cloroplasto:
función e impacto en la
fisiología vegetal
 1 Departamento de Pediatría, Centro de Investigación de Nutrición Infantil, Baylor
College of Medicine, Departamento de Agricultura de los Estados Unidos / Servicio de
Investigación Agrícola, Houston, TX, EE. UU.
 2 Transporte de hierro y ácido graso plastídico - Bioquímica y fisiología vegetal,

Departamento de Biología I, Ludwig-Maximilians-University of Munich, Munich,

Alemania

Los cloroplastos se originaron hace unos tres mil millones de años por la
endosimbiosis de un ancestro de las cianobacterias actuales con una célula huésped
que contiene mitocondrias. Durante la evolución, los cloroplastos de las plantas
superiores se establecieron como el sitio para la fotosíntesis y, por lo tanto, se
convirtieron en la base de toda la vida dependiente del suministro de oxígeno y
carbohidratos. Para cumplir con esta tarea, los orgánulos plástidos se cargan con los
metales de transición hierro, cobre y manganeso, que debido a sus propiedades
redox son esenciales para el transporte de electrones fotosintéticos. En
consecuencia, los cloroplastos, por ejemplo, representan el sistema más rico en
hierro en las células vegetales. Sin embargo, la mejora de la fotosíntesis oxigenada a
su vez requirió la adaptación del transporte de metales y la homeostasis ya que la
generación catalizada por metales de especies reactivas de oxígeno (ROS) causa daño
oxidativo. Esto es más agudo en cloroplastos, donde los radicales y los metales de
transición están uno al lado del otro y la producción de ROS es una característica
habitual del transporte de electrones fotosintéticos. Por lo tanto, por un lado, cuando
están unidos por proteínas, los metales intrínsecos al cloroplasto son un requisito
previo para la vida fotoautotrófica, pero por otro lado se vuelven tóxicos cuando
están presentes en sus formas iónicas libres, altamente reactivas y generadoras de
radicales. En consecuencia, el transporte, el almacenamiento y el ensamblaje de
cofactores de iones metálicos en los plástidos deben controlarse estrictamente y son
cruciales durante todo el crecimiento y desarrollo de las plantas. En los últimos años,
las proteínas para el transporte de hierro se han aislado de las membranas de la
envoltura de cloroplasto. Aquí, discutimos sus supuestas funciones e impacto en la
homeostasis del metal celular, así como el rendimiento fotosintético y el
metabolismo de la planta.

Introducción
Los cloroplastos, que son orgánulos únicos y altamente especializados, se originaron
a partir de la endosimbiosis de un antepasado de las cianobacterias actuales con una
célula huésped que contiene mitocondrias ( Gould et al., 2008) En las plantas
superiores, los cloroplastos realizan funciones esenciales del metabolismo primario
y secundario, pero ante todo son el sitio de la fotosíntesis y, por lo tanto, representan
la base de toda la vida que depende del suministro atmosférico de oxígeno y
carbohidratos. Además del cloroplasto autótrofo maduro de las hojas verdes, la
familia de los orgánulos plástidos incluye muchos tipos de especialistas con
múltiples funciones biosintéticas en ciertos tejidos y etapas de desarrollo (p. Ej.,
Proplastidos, etioplastos, elaioplastos, gerontoplastos o cromoplastos). Sin
embargo, dado que debido a la accesibilidad experimental, la mayor parte de la
investigación se ha realizado en cloroplastos, en lo siguiente simplemente nos
referiremos a los plástidos, si además de los cloroplastos están involucrados otros
tipos de orgánulos. Sin embargo,

En las células vegetales, el hierro de metal de transición (Fe) juega un papel

importante en las reacciones redox y como cofactor de muchas proteínas debido a su
potencial de cambios de valencia ( Raven et al., 1999 ). En los cloroplastos, el Fe es
un componente importante del aparato fotosintético, es decir, se encuentra en todos
los complejos de transferencia de electrones (PSII, PSI, complejo de citocromo b 6 f y
ferredoxinas), y se requiere para la biogénesis de cofactores como el hemo y el Fe-S
cluster (para una visión general, ver Balk y Schaedler, 2014 ; Briat et al.,
2015) Además de ser componentes esenciales del transporte de electrones
fotosintéticos, las proteínas que contienen cofactores de Fe también están
involucradas en la importación de proteínas y la biosíntesis de clorofila. Los
cloroplastos representan el orgánulo más rico en Fe en las células vegetales que
contienen 80-90% del Fe encontrado en las células de las hojas ( Terry y Low,
1982 ). Sin embargo, el exceso de Fe genera ROS, que causan daño oxidativo (para
una descripción general de Briat et al., 2010b ). En los cloroplastos, esta situación es
más prominente, ya que Fe y ROS, como el peróxido de hidrógeno (H 2 O 2 )
producido por la cadena de electrones fotosintéticos están muy cerca ( Asada,
1999 ; Mubarakshina et al., 2010) En consecuencia, el Fe libre no unido conduce a la
formación de radicales hidroxilo a través de la reacción de Fenton ( Halliwell y
Gutteridge, 1992 ). Por otro lado, la deficiencia de Fe en plástidos altera la biosíntesis
de clorofila, conduce a la clorosis foliar y requiere la remodelación del aparato
fotosintético ( Spiller y Terry, 1980 ; Moseley et al., 2002 ). Los cloroplastos que
sufren de inanición de Fe están específicamente afectados en la función adecuada
del fotosistema I (PSI), que contiene 12 átomos de Fe por monómero. Por lo tanto,
para mantener la homeostasis del Fe celular y garantizar el desarrollo y el
crecimiento adecuados de la planta, el transporte de Fe dentro y fuera de los
plástidos, así como el almacenamiento de Fe y el almacenamiento de Fe libre dentro
de estos orgánulos deben controlarse estrictamente ( Abadía et al., 2011; Briat et al.,
2015 ). Además, además de en la familia de los plástidos, el control estricto de la
homeostasis del Fe ocurre dentro de la célula vegetal, otros orgánulos y en todos los
órganos (ver Thomine y Vert, 2013 ).

En esta revisión, primero presentaremos una descripción general de las

características de la adquisición de cloroplasto Fe conocidas hasta ahora. A
continuación describimos las características y la función de las proteínas
involucradas en el transporte de cloroplasto Fe. Dado que este metal de transición
juega un papel importante no solo en muchos procesos en los orgánulos de plástidos,
sino también en el rendimiento de la planta en general, discutimos el impacto de la
homeostasis y el transporte de Fe en los plástidos en la fisiología de la planta.

Adquisición de cloroplasto de hierro

Los mecanismos por los cuales los cloroplastos obtienen el Fe no son tan conocidos
como las dos estrategias de adquisición de Fe, basadas en la reducción (estrategia I)
y en la quelación (estrategia II), a través de la membrana plasmática de las células
de la raíz (para una visión general, ver Morrissey y Guerinot, 2009 ; Kobayashi y
Nishizawa, 2012 ; Brumbarova et al., 2015 ). Hace casi dos décadas, los
experimentos de absorción con cloroplastos intactos aislados y vesículas de
membrana IE purificadas describieron la existencia de una absorción de plastidios
dependiente de la luz de 59 Fe (III), quelado por ácido epihidrohimugínico en cebada,
una planta de estrategia II ( Bughio et al., 1997) La absorción de Fe por los
cloroplastos iluminados fue inhibida por 3- (3,4-diclorofenil) -1,1-dimetilurea, un
inhibidor del fotosistema II, lo que sugiere que la absorción de Fe depende del
transporte de electrones o del ATP generado en los tilacoides. Por otro lado, en la
estrategia I plantar guisantes, se describió un transporte interno de Fe 2+ a través del
IE del cloroplasto ( Shingles et al., 2001 , 2002 ). Este transporte de Fe 2+ fue
inhibido por Zn 2+ , Cu 2+ y Mn 2+ de manera competitiva, y fue activado por
protones, similar al hierro basado en reducción (Fe 2+) mecanismo de adquisición en
raíces. Más recientemente, los experimentos de absorción de Fe con disulfonato de
batofenantrolina (BPDS) en cloroplastos aislados de remolacha azucarera ( Beta
vulgaris ) describieron que se prefería el citrato férrico (Fe [III]) al citrato ferroso
(Fe [II]) como fuente de hierro ( Solti et al. al., 2012 ). Esta absorción de Fe estaba
fuertemente relacionada con el rendimiento fotosintético del cloroplasto y se
sometió a una regulación de retroalimentación negativa. Existen evidencias de un
mecanismo basado en la reducción para la adquisición de cloroplastos de Fe en las
plantas de estrategia I y II, ya que se ha demostrado la existencia de un quelato
férrico de cloroplasto oxidorreductasa (FRO) a nivel de actividad enzimática
( Mikami et al., 2011 ; Solti et al., 2014 ). En cebada intacta (Hordeum vulgare )
cloroplastos, la actividad FRO fue inducida por la deficiencia de Fe bajo la luz,
mientras que fue reprimida en condiciones de oscuridad ( Mikami et al.,
2011 ). En fracciones aisladas de envoltura de cloroplasto de B. vulgaris , Solti et
al. (2014) mostraron que, de manera similar a la estrategia de absorción de Fe en las
raíces, una enzima FRO, que se localiza claramente en el IE, y no en la membrana
OE, fue responsable de la reducción compleja de Fe (III) y la producción de
Fe 2+ librepara la captación de Fe. Esta actividad enzimática fue mayor con NADPH
que con NADH, lo que nuevamente sugiere la dependencia del mecanismo de
adquisición de Fe en la fotosíntesis. La cinética bifásica y su modificación en
condiciones deficientes de Fe también indicaron la existencia de mecanismos de alta
y baja afinidad para la reducción de Fe. Dado que en la planta modelo Arabidopsis
thaliana es probable que solo un miembro de la familia FRO esté localizado en
cloroplastos, esta cinética podría estar relacionada con modificaciones
postraduccionales, empalmes diferenciales o con la existencia de un mecanismo de
reducción de Fe aún desconocido.
En Arabidopsis , la proteína FRO7 etiquetada con GFP se localiza en la envoltura del
cloroplasto ( Jeong et al., 2008 ; Figura 1 ). Aquí, se requiere At-FRO7 para la
supervivencia en condiciones limitantes de Fe, para una fotosíntesis eficiente y para
la adquisición adecuada de Fe de cloroplasto en plántulas jóvenes ( Jeong et al.,
2008 ). Los mutantes de pérdida de función fro7 acumulan aproximadamente un
33% menos de hierro por microgramo de clorofila, muestran menos actividad
reductora de quelato de Fe (III) en cloroplastos aislados que los de tipo salvaje y
tienen un aspecto clorótico cuando se cultivan en condiciones limitantes de Fe. Sin
embargo, FRO7 no está regulado por Fe ( Mukherjee et al., 2006 ), el fro7los
mutantes con pérdida de función no muestran fenotipos de crecimiento visibles en
condiciones estándar y su fenotipo bajo deficiencia de Fe puede rescatarse mediante
la adición de Fe, lo que sugiere la existencia de sistemas de absorción de Fe
redundantes en cloroplastos y / o plastidios especializados. Además, la tinción de las
líneas indicadoras del promotor FRO7-GUS reveló una baja expresión en las hojas
maduras ( Jeong et al., 2008 ), lo que respalda que su papel puede atribuirse a ciertas
etapas tempranas del desarrollo. Los últimos hallazgos también podrían explicar por
qué, aunque contienen varios dominios que abarcan la membrana (Tabla 1 ), FRO7
no se encuentra en las membranas de la envoltura dentro de la base de datos
AT_CHLORO, que representa un resumen exhaustivo de los análisis proteómicos en
proteínas de cloroplastos con anotación subplastidial (Ferro et al., 2010 ).

FIGURA 1. Transporte de hierro y homeostasis en cloroplastos. Las

proteínas y sus posibles funciones en el transporte de Fe en plástidos y la
homeostasis se describen a lo largo del texto. Tenga en cuenta que, por conveniencia,
todas las proteínas de transporte se representan en la membrana de la envoltura
interna (IE), aunque solo PIC1 podría localizarse de manera inequívoca en el IE. Las
proteínas de transporte de Fe en la envoltura externa (OE) aún se desconocen. Para
detalles sobre localización y estructura de proteínas, compare la Tabla 1 . Me-bind,
dominio de unión al metal; THY, membranas tilacoides.

TABLA 1. Proteínas involucradas en la adquisición de cloroplasto Fe y la

homeostasis como se describe a lo largo del texto.
En resumen, estas observaciones indican que el transporte de Fe del cloroplasto a
través de la membrana de la envoltura externa (OE) ocurre más probablemente a
través de quelatos de Fe (III), preferiblemente citrato de Fe (III). Sin embargo, la
absorción en todo el IE parece ocurrir principalmente en forma de Fe 2+ gratuitoy se
logra mediante un mecanismo basado en la reducción y basado en protones similar
a la estrategia de absorción de Fe en las raíces. Sin embargo, otros mecanismos de
adquisición de Fe no pueden excluirse y también pueden depender de especies de
plantas, que prefieren mecanismos de estrategia I o II, diferentes tipos de plastidios
y / o etapas de desarrollo de tejidos y órganos. Ya se ha descrito una cierta
diversificación para la absorción de Fe en las cianobacterias Gram negativas, los
progenitores evolutivos de los cloroplastos, que importan quelatos u óxidos de Fe
(III) a través de la membrana externa, pero en su membrana plasmática, o bien usan
una absorción de Fe 2+ basada en la reducción mediante el transportador de FeoB o
transporta directamente Fe 3+ oxidado unido a proteínas de unión periplásmicas
a través del complejo transportador Fut ABC (verKranzler et al., 2013 , 2014 ).

Proteínas de transporte de hierro cloroplasto

Debido a su origen endosimbiótico, los cloroplastos y las mitocondrias son únicos,
ya que están rodeados por dos membranas similares a sus antepasados procariotas
gramnegativos. Los transportadores de solutos en la membrana IE de los
cloroplastos se derivaron principalmente de las endomembranas de la célula
huésped eucariota, y solo unas pocas proteínas tienen un origen procariota,
proveniente de las membranas del endosimbionte o de parásitos bacterianos
intracelulares ( Tyra et al., 2007 ; Fischer, 2011 ). Sorprendentemente, en contraste,
el OE de cloroplasto se originó en gran medida y aún se parece a la membrana
externa del endosimbionte de tipo cianobacteriano Gram negativo ( Block et al.,
2007) En el cloroplasto IE, numerosas proteínas transportadoras de iones y
metabolitos han sido identificadas y caracterizadas a fondo con respecto a su papel
fisiológico y mecanismos moleculares ( Weber y Linka, 2011 ; Finazzi et al.,
2015 ). Estos canales y transportadores son hidrofóbicos, principalmente proteínas
de membrana α-helicoidales que facilitan el intercambio de iones y productos
metabólicos con el citoplasma. Sin embargo, los canales característicos de la
membrana externa en las bacterias Gram-negativas y el cloroplasto OE abarcan la
membrana en forma de cadenas β que están organizadas para formar una estructura
de poro en forma de barril ( Duy et al., 2007a ; Zeth y Thein , 2010 ).

El transporte de Fe a través de las dos membranas envolventes de cloroplastos

(importación y exportación) aún no se comprende bien (para una visión general,
véase Nouet et al., 2011 ; Finazzi et al., 2015 ). Sin embargo, la investigación en la
última década ha proporcionado evidencia creciente, lo que sugiere que varias
familias de proteínas pueden desempeñar un papel en el transporte de Fe en los
cloroplastos. Hasta la fecha, las proteínas que transportan Fe a través del OE no se
han identificado, sin embargo, podrían ser similares a los canales del receptor β-
barril dependientes de TonB dependientes de ligando en la membrana externa de las
bacterias Gram negativas, es decir, FecA para Fe ( III) citrato en E. coli o TBDT
(transportadores dependientes de TonB) en cianobacterias (para una visión general,
ver Chakraborty et al., 2007 ; Duy et al., 2007a; Kranzler et al., 2013 ). La evidencia
experimental directa e inequívoca para la integración en la membrana de cloroplasto
IE hasta ahora solo se proporciona para la permeasa PIC1 (ver más abajo). Sin
embargo, varios otros transportadores de Fe, que se han localizado en la envoltura
del cloroplasto, probablemente también están dirigidos a la membrana IE, mientras
que ninguno de ellos se ha atribuido a ser parte integral de los tilacoides. El
conocimiento actual sobre el transporte de Fe y las proteínas de la homeostasis en
cloroplastos se describe a continuación y se resume en la Figura 1 y la Tabla 1 .

PIC1 participa en la absorción de cloroplasto Fe y la homeostasis de la planta Fe

La proteína PIC1 (permeasa en cloroplastos 1) en Arabidopsis se identificó en una

pantalla para proteínas de transporte de metales como el primer componente
molecular involucrado en el transporte de Fe en plastidios (Figura 1 ; Duy et al.,
2007b ). Esta proteína de membrana integral contiene cuatro hélices α que abarcan
la membrana y se localizó en la membrana IE de los cloroplastos por medio
de análisis de inmunotransferencia y focalización GFP in vivo (ver
Tabla 1 ). Curiosamente, PIC1 representa una permeasa antigua, claramente
originada a partir de las pocas proteínas que fueron heredadas por el endosimbionte
de tipo cianobacteriano (ver arriba; Duy et al., 2007b ; Fischer, 2011) La función de
PIC1 en el transporte de Fe se verificó mediante la complementación del crecimiento
de una cepa de levadura deficiente en la absorción de Fe donde PIC1 podría
aumentar los niveles de Fe celular de levadura. Además, las líneas de sobreexpresión
de PIC1 (PIC1ox) acumulan aproximadamente 2,5 veces más Fe en cloroplastos que
las plantas de tipo silvestre ( Duy et al., 2011 ). Por lo tanto, los análisis funcionales
en la levadura y los fenotipos de pic1 mutantes de pérdida de función y líneas PIC1ox
muestran claramente que participa pic1 en plástido Fe-absorción, así como las vías
de Fe-homeostasis toda la planta. Las plantas que carecen de PIC1 se caracterizan
por un fenotipo enano fuerte enano que se asemeja a los síntomas de deficiencia de
Fe en las plantas. Además, pic1Las plantas mutantes muestran una organización
alterada del mesófilo foliar y un desarrollo gravemente deteriorado de cloroplastos,
lo que sugiere una escasez de Fe dentro del orgánulo ( Duy et al., 2007b ). Solo
recientemente, la función de PIC1 en el transporte de Fe en plástidos ha sido
respaldada por estudios de líneas de derribo y sobreexpresión de PIC1 en plantas
de tabaco ( Nicotiana tabacum ), que mostraron fenotipos similares a
los mutantes Arabidopsis PIC1 ( Gong et al., 2015 ). Además, Nt-PIC1 también pudo
complementar el crecimiento de levadura deficiente en Fe.

Sorprendentemente, por un lado, los plastidios / cloroplastos knockout

de Arabidopsis pic1 en meristemas y hojas muestran una acumulación de grupos de
proteínas de ferritina, que probablemente están cargados de Fe ( Duy et al.,
2007b ). Además de su papel como proteínas de almacenamiento de Fe durante la
germinación, las ferritinas intrínsecas a los plástidos funcionan en el secuestro de Fe
cuando el Fe está presente en exceso, protegiendo así las células contra el daño
oxidativo ( Ravet et al., 2009a ; Briat et al., 2010b ). Por otro lado, el fenotipo de los
mutantes PIC1ox se asemeja claramente al de las plantas con pérdida de función de
ferritina en exceso de Fe, mostrando defectos severos en el desarrollo de flores y
semillas que resultan en un rendimiento reducido de la semilla y tasas de
germinación ( Ravet et al., 2009a; Duy et al., 2011 ). Las flores de los mutantes
PIC1ox contienen más Fe, mientras que otros metales de transición no se ven
afectados, mientras que las semillas muestran una reducción significativa en la
concentración de este metal. Además, los niveles de transcripción de PIC1 están
ligeramente regulados por aumento en los noqueados de ferritina de la hoja ( Ravet
et al., 2009a ). Todos estos hallazgos detallados anteriormente apuntan hacia una
estrecha correlación recíproca entre PIC1 y ferritina que podría explicarse de la
siguiente manera: (i) En las hojas de las plantas con pérdida de función pic1 , los
niveles de Fe intrínsecos al cloroplasto son bajos y, por lo tanto, los sistemas de
membrana tilacoide se degradan . Sin embargo, al menos en los tejidos de semillas y
meristemas, existe una vía de derivación de absorción de Fe plástida, que permite la
germinación y el crecimiento lento de pic1líneas. Cuando las hojas maduran, la
absorción de Fe mediada por PIC1 se vuelve dominante, y los niveles de Fe citosólicos
aumentan transitoriamente debido al bloqueo en la absorción de Fe por cloroplasto
de las plantas pic1 , lo que a su vez conduce al estrés oxidativo y a la inducción de la
expresión de ferritina. La ferritina intrínseca plastidiana que se acumula en pic1por
lo tanto, los knockouts son inducidos por una vía de transducción de señal citosólica
y almacena Fe proveniente de tilacoides degradados. (ii) Por el contrario, los niveles
de plastidios de iones Fe libres aumentan significativamente en ambas líneas, PIC1ox
bajo Fe suficiente y noqueos de ferritina en condiciones de crecimiento de exceso de
Fe. En esta situación, las plantas tienen que hacer frente al estrés oxidativo
intrínseco a los plástidos que conduce a fenotipos similares relacionados con el
desarrollo de las flores y, en particular, de las semillas. El perfil transcripcional de
las plantas pic1 y PIC1ox reveló que ocurrieron cambios importantes en los genes
relacionados con el transporte de metales y la homeostasis y los estudios futuros
podrían contribuir a desentrañar los procesos de señalización impulsados por
plastidios y núcleos bajo homeostasis de Fe perturbada ( Vigani et al., 2013 ).

La permeasa PIC1 también se ha descrito como Tic21 (translocon en la membrana

IE de cloroplastos de 21 kDa), un supuesto componente translocon IE, que podría
participar en la importación de proteínas de plastidios codificadas nuclearmente
desde el citosol ( Teng et al., 2006 ) . La proteína Arabidopsis Tic21, que es idéntica
a PIC1, se identificó mediante genética avanzada utilizando una pantalla de mutantes
defectuosos en la importación de proteína cloroplástica ( Sun et al., 2001 ). La
función propuesta de Tic21 / PIC1 como componente translocon esencial en el
cloroplasto IE por Teng et al. (2006) se basa principalmente en la acumulación de
proteínas precursoras de plastidios no procesadas en tic21 / pic1líneas inactivadas ,
defectos en la translocación de la proteína IE en cloroplastos aislados de
un mutante sub-letal tic21 / pic1 , y co-inmunoprecipitación de Tic21 / PIC1 con
otros componentes principales de translocon de importación de proteínas. Sin
embargo, falta un análisis funcional directo de Tic21 / PIC1 para el transporte de
proteínas, y los análisis de Duy et al. (2007b) no pudieron detectar proteínas
precursoras de plastidios residuales en líneas mutantes pic1 /
tic21 idénticas . Además, la ferritina localizada en plastidios no solo se acumulaba en
los plástidos pic1 / tic21 , sino que también se procesaba adecuadamente, lo que
indica que PIC1 / Tic21 no está involucrado en la translocación de proteínas (para
una discusión detallada, ver Duy et al., 2007b) En 2009, se identificó un complejo
de proteínas de aproximadamente 1 MDa en la membrana de cloroplasto IE que
contiene el supuesto canal translocon Tic20, una gran fracción (aproximadamente
900 kDa) de proteínas de membrana aún no identificadas, y también pequeñas
cantidades de Tic21 / PIC1 ( Kikuchi et al. ., 2009 ). Los autores plantearon la
hipótesis de que este complejo podría funcionar como un complejo central de
translocación de proteínas TIC general, donde Tic21 / PIC1 se asocia libremente a la
periferia. Sin embargo, publicaciones más recientes, que conducen a la identificación
de otras proteínas en este supuesto núcleo de translocación de proteínas TIC,
demostraron que Tic21 / PIC1 no co-purifica con este complejo de 1 MDa ( Kikuchi
et al., 2013 ; Nakai, 2015) Por lo tanto, la unión previamente descrita de PIC1 / Tic21
a las proteínas del componente de translocón TIC como Tic20 podría haber sido
generada por la alta densidad de proteínas de membrana en el cloroplasto IE, en
lugar de por interacciones específicas de proteínas.

PIC1 / Tic21 muestra una estrecha relación filogenética con las proteínas
cianobacterianas anotadas como componentes de permeasa putativos que funcionan
en el transporte de solutos y / o iones a través de las membranas ( Duy et al.,
2007b ). El ortólogo de PIC1 / Tic21 en Synechocystis sp. PCC 6803, Sll1656, puede
complementar funcionalmente las plantas con pérdida de función pic1 / tic21 ( Lv
et al., 2009 ) y el crecimiento de mutantes de levadura deficientes en la absorción de
Fe ( Duy et al., 2007b ). En contraste, PIC1 / Tic21 comparte poca similitud de
secuencia con los canales de translocon de proteínas en el cloroplasto IE (por
ejemplo, Tic20) o con aquellos en la membrana interna de las mitocondrias (Tim17
y Tim23; Inaba y Schnell, 2008 ;Balsera et al., 2009 ), aunque todos ellos comparten
una estructura similar que contiene cuatro dominios de membrana α-helicoidales
predichos. Según Gross y Bhattacharya (2009) , sin embargo, una posible función
dual de PIC1 / Tic21 en el transporte de hierro y la importación de proteínas no es
mutuamente excluyente, argumentando que el efecto beneficioso de las nuevas
propiedades funcionales (como la importación de proteínas) sería una adición
evolutiva a su función como un antiguo soluto permease de origen cianobacteriano.

Además de la función PIC1 en la acumulación de Fe en células de levadura ( Duy et

al., 2007b ; Gong et al., 2015 ), y en los cloroplastos de Arabidopsis cuando se
sobreexpresan ( Duy et al., 2011 ), la interacción de PIC1 con la supuesta proteína de
transporte de metal NiCo ( Eitinger et al., 2005 ) en la membrana plástica de IE,
apunta a un papel en el transporte de Fe ( Duy et al., 2011 ). Además, los niveles de
transcripción de At2g16800, uno de los dos genes de Arabidopsis NiCo, aumentaron
en las flores mutantes PIC1 ox (Mutante Duy et al., 2011 ). En vivoEl objetivo de GFP
de la proteína correspondiente muestra señales características en forma de anillo de
las proteínas de la envoltura de cloroplasto, lo que está respaldado por la aparición
de At2g16800 en la proteómica de IE (ver Tabla 1 ; Eitinger et al., 2005 ; Ferro et al.,
2010 ; Duy et al., 2011 ). Una mutación puntual del ortólogo de NiCo en el arroz
(llamado Os-ZN, para la proteína de necrosis de cebra) dio como resultado una
proteína que, aunque probablemente se localizó erróneamente en los tilacoides (ver
arriba y Tabla 1 ), causó un fenotipo de hoja necrótica de rayas amarillas. ( Li et al.,
2010), que dependía de la luz y estaba relacionada con la producción de ROS. Por lo
tanto, es muy probable un papel de PIC1-NiCo en un complejo de translocón de
hierro en el IE de los plastidios (ver Figura 1 ; Duy et al., 2011 ). Dado que las
proteínas NiCo contienen dominios de unión a metales específicos ( Eitinger et al.,
2005 ), un posible mecanismo molecular para la interacción PIC1-NiCo en
las membranas de Arabidopsis IE, podría implicar la unión de Fe por At-NiCo y su
posterior transferencia a la permeasa PIC1. Sin embargo, aún es necesario establecer
ensayos funcionales más directos para el transporte de metales para estudiar los
mecanismos moleculares en detalle.

Otras proteínas que participan en el transporte de Fe a través del sobre de

cloroplasto

Dos transportadores de la familia de Arabidopsis "franja amarilla 1-like" , YSL4 e

YSL6, se han caracterizado como potenciales transportadores de eflujo de Fe de
plastidio (Figura 1 ; Divol et al., 2013 ). Ambos genes están sobrerregulados en
respuesta al exceso de Fe y al menos uno de ellos, YSL6, se localizó de manera
inequívoca en la envoltura del cloroplasto mediante análisis de inmunotransferencia
y fluorescencia (Tabla 1 ; Divol et al., 2013 ). Sin embargo, si YSL6 se integra en el
OE o IE, sigue siendo una pregunta abierta, ya que la proteína no se pudo identificar
en los análisis proteómicos de las proteínas de cloroplasto. Además, ni YSL4 ni YSL6
contienen un péptido de selección de cloroplasto N-terminal clásico (ver Tabla 1),
una característica que es más común para OE que para las proteínas IE. La
caracterización fenotípica de mutantes knockout simples y dobles mostró que Fe se
acumuló en los cloroplastos, y esto ocurrió concomitantemente con un aumento de
ferritina, mientras que la sobreexpresión ubicua de YSL4 e YSL6 causó sensibilidad
a Fe y una disminución de Fe en cloroplastos ( Divol et al. ., 2013 ). Además, la
expresión coordinada de estos genes YSL con genes de ferritina en embriones y hojas
senescentes llevó a los autores a proponer su papel fisiológico en la desintoxicación
de Fe durante la diferenciación de plastidios en embriogénesis y senescencia ( Divol
et al., 2013) Sin embargo, el papel de estos transportadores sigue siendo
controvertido ya que debido a los datos proteómicos y a la focalización GFP también
se han asociado al transporte de iones metálicos a través de las membranas de
tonoplasto y ER (ver Tabla 1 ; Conte et al., 2013 ).

La proteína Arabidopsis “resistencia múltiple a antibióticos 1 / hierro regulado 3”

(MAR1 / IREG3), que probablemente transporta antibióticos aminoglucósidos a
plastidios y se ha localizado en cloroplastos a través de una etiqueta YFP (Tabla 1 ),
también juega un papel en homeostasis de Fe celular ( Conte et al., 2009 ; Conte y
Lloyd, 2010 ). Debido a que la expresión de MAR1 / IREG3 está regulada por la
deficiencia de Fe y las plantas que sobreexpresan MAR1 muestran clorosis de las
hojas que pueden ser rescatadas mediante la adición de Fe, se ha propuesto que
MAR1 / IREG3 puede desempeñar un papel en la quelación, almacenamiento o
secuestro de Fe ( Conte et al., 2009) Además, MAR1 / IREG3 pertenece a la familia
de transportadores IREG / ferroportin que incluye IREG1 / FPN1 e IREG2 / FPN2,
que median el transporte de metal a través de la membrana plasmática en la estela
radicular y el tonoplasto, respectivamente ( Schaaf et al., 2006 ; Morrissey et al. al.,
2009 ). Curiosamente, los aminoglucósidos pueden usar sistemas de transporte
hacia adentro de la poliamina para ingresar a las células eucariotas ( Van Bambeke
et al., 2000 ), y uno de los quelantes naturales más importantes del Fe, la
nicotianamina (NA) es una poliamina (para una descripción general, ver Curie et al.
, 2009 ). Estas observaciones han impulsado la hipótesis de que MAR1 / IREG3
puede transportar NA o un complejo Fe-NA al plastidio (Figura 1 ; Conte et al.,
2009 ;Conte y Lloyd, 2010 ). Se encontraron más indicaciones sobre el papel de esta
proteína en la homeostasis del Fe en un estudio de mapeo de locus de rasgos
cuantitativos (QTL) para las concentraciones minerales de semillas de Arabidopsis ,
donde este gen se encontró en dos QTL asociados con el rasgo Fe de semillas ( Waters
y Grusak, 2008 )
Un enfoque bioinformático utilizando genes transportadores de Fe cianobacterianos
como consultas reveló la existencia de una proteína transportadora ABC no
intrínseca localizada en plastidios, NAP14 en Arabidopsis . At-NAP14 (también
denominado ABCI11 de acuerdo con la nomenclatura del transportador ABC
[ Verrier et al., 2008 ]) codifica para una subunidad de dominio de unión a
nucleótidos (NBD) intrínseca sin membrana de un complejo transportador ABC,
similar a la unidad FutC del FutABC Transportador de Fe en cianobacterias
( Shimoni-Shor et al., 2010 ). Aunque el objetivo de GFP in vivo por Shimoni-Shor
et al. (2010) muestra señales en el estroma de cloroplasto, la base de datos
At_CHLORO ( Ferro et al., 2010) asocia esta proteína a la membrana IE, lo que
indica una unión de NAP14 a un componente de proteína intrínseca a la membrana
(ver Figura 1 , Tabla 1 ). La concentración de hierro en los brotes de mutantes
de pérdida de función de nap14 aumenta drásticamente (18 veces más que en las
plantas de tipo silvestre), mientras que en las raíces es aproximadamente un 50%
más baja. Además, este mutante mostró daños en las estructuras de cloroplastos,
exhibió graves defectos de crecimiento, clorosis fuerte y una desregulación de los
genes de la homeostasis de Fe ( Shimoni-Shor et al., 2010) En base a estos hallazgos,
se ha propuesto una función en la regulación de la homeostasis de Fe de plastidio o
un papel directo como parte de un complejo transportador ABC de Fe de
plastidio. NAP14 también podría estar involucrado en la biogénesis de clúster Fe-S
similar a NAP7 / SufC, una proteína NBD-NAP localizada en estroma ( Xu y Möller,
2004 ; Balk y Schaedler, 2014 ). Además, los estudios proteómicos de alto
rendimiento han demostrado la presencia de varios transportadores ABC de función
aún desconocida en la membrana de IE, incluidas algunas proteínas de "medio
tamaño" como NAP8 / ABCB28 (que consta de 1 permeasa intrínseca a la membrana
y 1 dominio NBD soluble [ Verrier et al., 2008 ]), así como NAP13 / ABCI10, un
pariente de NAP14 ( Ferro et al., 2010 ;Gutiérrez-Carbonell et al., 2014 ), cuyos
papeles en la homeostasis del Fe plástido merecen más estudios. Estos estudios
proteómicos también indicaron la presencia del transportador ABC de tamaño
medio STA1 / ATM3 / ABCB25 en la envoltura de cloroplasto. Inicialmente, este
transportador se asoció a la exportación de racimos de Fe-S desde las mitocondrias
(véase Bernard et al., 2013 ) pero recientemente, se ha descrito su papel en la
exportación de polisulfuro de glutatión desde las mitocondrias para el ensamblaje de
grupos de Fe-S en el citosol ( Schaedler et al., 2014 ). Aunque STA1 / ATM3 /
ABCB25 está claramente localizado en la membrana mitocondrial interna, su
presencia en proteomas de la envoltura de cloroplastos sugiere una posible
localización dual que puede verificarse en futuros estudios.

Otro candidato razonable para la importación de Fe en plastidios es At-Mfl1

(mitoferritin-like1). Este gen se encontró en un intento de descubrir transportadores
de Fe mitocondriales en Arabidopsis utilizando la plantilla mitoferrina 2 (MFRN2),
un importador de Fe mitocondrial en células no eritroides de Danio rerio (pez
cebra; Tarantino et al., 2011 ). At-Mfl1 pertenece a la familia de portadores
mitocondriales, está anotado como una proteína IE en la base de datos
AT_CHLORO, se ha detectado en el proteoma de la envoltura de varias especies de
plantas [ver Ferro et al., 2010 , Tabla suplementaria S10 y referencias allí], y contiene
un péptido dirigido a cloroplasto predicho (Tabla 1) La expresión de este gen se
localiza principalmente en hojas de roseta, se regula al alza con exceso de Fe y se
correlaciona con la de los genes que codifican proteínas involucradas en el
metabolismo del cloroplasto, incluido PIC1 ( Tarantino et al., 2011 ). Las líneas
mutantes de pérdida de función de At-Mlf1 presentan concentraciones más bajas de
Fe en plántulas y hojas que las plantas de tipo silvestre y una expresión reducida
de At-ferritina1 ( Tarantino et al., 2011 ), lo que sugiere un supuesto papel para Mfl1
como cloroplasto Fe- transportador (Figura 1 ). La observación de que los mutantes
con pérdida de función son viables y fértiles implica que el papel de At-Mfl1 es
redundante o que desempeña una función específica solo cuando el Fe es excesivo.

En el maíz, el cribado de visualización diferencial permitió la identificación del gen

inducible por deficiencia de Fe Zm-FDR3 ( relacionado con la deficiencia de Fe
de Zea mays 3; Yin et al., 2000 ). Los estudios de complementación de levadura
indicaron que esta proteína puede transportar Fe y / o Cu ( Han et al., 2009 ). Debido
a que no se encontraron ortólogos de este gen en ninguna estrategia que yo plantara,
incluida Arabidopsis , se usó tabaco para estudiar la función Zm-FDR3. En el tabaco
transgénico, que sobreexpresa un Zm-FDR3 marcado con MYC, esta proteína se
localizó presumiblemente en cloroplastos mediante un marcado de
inmunofluorescencia dirigido contra la etiqueta (Tabla 1) Dado que la proteína no
contiene dominios de membrana que se predigan, podría ser más probable en el
estroma o la luz tilacoidea. Basado en una predicción in silico , Han et
al. (2009) (Figura 1 ). Las plantas de tabaco transgénicas que expresan Zm-FDR3
mostraron una mayor concentración de Fe en las semillas, menor concentración de
clorofila pero un mayor rendimiento fotosintético, lo que sugiere un papel en la
homeostasis del Fe en los plástidos. Esta proteína no tiene homología con otras
proteínas en plantas superiores, pero contiene dominios similares a los miembros
del sistema de secreción bacteriana tipo III, involucrados en la secreción de
proteínas efectoras en una célula huésped, lo que podría implicar la participación de
Zm-FDR3 en el transporte de una proteína que contiene Fe (Han et al., 2009 ). La
existencia de dicho mecanismo en plantas y específicamente en tilacoides es atípica
pero plausible. Por ejemplo, la proteína reunida Rieske Fe-S del complejo citocromo
b6 / f puede utilizar la vía de importación de proteínas TAT para su translocación a
la membrana tilacoide ( Molik et al., 2001 ). Sin embargo, el conocimiento sobre la
estructura de Zm-FDR3 y la localización exacta es muy limitado, ya que la proteína
no contiene dominios predichos que abarcan la membrana ni péptido dirigido al
cloroplasto (ver Tabla 1 ).

Plastidia Fe Homeostasis
Como sumidero de la mayoría del Fe celular, es probable que los plastidios participen
en la detección y regulación de la concentración de Fe en toda la planta y los cambios
en el estado de Fe del plastidio pueden desencadenar diferentes respuestas de
adaptación dependiendo de la etapa de desarrollo de la planta ( Vigani et al .,
2013 ). A pesar de este importante papel putativo, se sabe poco acerca de los procesos
que gobiernan la homeostasis del Fe y la señalización en los orgánulos plástidos y en
su comunicación con otros compartimentos celulares. Para la distribución de Fe
subcelular general y específica del tejido, ver ( Kim et al., 2006 ; Roschzttardtz et al.,
2013 ; Mary et al., 2015 ).

Fe Tráfico y almacenamiento en plastidios

Las ferritinas son proteínas eucariotas conservadas y su estructura homo-
oligomérica de 24 subunidades ensambladas forma un núcleo hueco que puede
acomodar hasta 4.000 iones Fe (III) (para una visión general, ver Briat et al.,
2010a , b ). Las ferritinas vegetales están codificadas nuclearmente
y Arabidopsis contiene cuatro genes de ferritina (Tabla 1 ), tres de los cuales
codifican proteínas dirigidas al cloroplasto y una para una proteína dirigida a los
plástidos de semillas ( Petit et al., 2001 ; Ravet et al., 2009b ). Para una visión
general sobre la localización del estroma plastídico de las proteínas de ferritina
(Figura 1 ) en varias especies de plantas, nos referimos a Briat et
al. (2010a). Además, las ferritinas, en particular At-FER4 a través de
inmunotransferencias (ver Tabla 1 ), también se han descrito en las mitocondrias
( Tarantino et al., 2010 ; Murgia y Vigani, 2015 ). A diferencia del tejido de la semilla,
en los cloroplastos de las hojas maduras las proteínas de ferritina son menos
abundantes, sin embargo, se acumulan en cloroplastos en condiciones de exceso de
Fe ( Briat et al., 2010b ) y, por lo tanto, juegan un papel importante en el
almacenamiento de Fe en su forma iónica libre y en la prevención estrés oxidativo
( Ravet et al., 2009a ). Mientras que en los humanos se ha descubierto la chaperona
involucrada en el suministro de Fe a la ferritina ( Shi et al., 2008 ), en las plantas se
desconoce en gran medida la maquinaria involucrada en el suministro de Fe a la
ferritina (Briat et al., 2010a , b ). Dada la naturaleza redox activa del Fe, la
participación de metalo-chaperonas o moléculas quelantes en este proceso es más
que probable, y podría ser similar a la chaperona CCS que suministra Cu a la
superóxido dismutasa de Cu / Zn (SOD) en los plástidos ( Cohu et al., 2009 ). El
mecanismo subyacente a la liberación de Fe de la ferritina es aún más
enigmático. Por un lado, los estudios in vitro con ferritinas animales sugieren que
esta liberación requiere quelantes de Fe o agentes reductores. Por otro lado,
los estudios in vivo han demostrado la liberación de Fe por degradación proteolítica
de la proteína (ver Briat et al., 2010a , bpara detalles). Con respecto a la correlación
observada de PIC1 y la función de ferritina en cloroplastos (ver arriba), también
podría ser posible un papel para PIC1 en la transferencia de Fe importado a la
cubierta de proteína de ferritina.

Los orgánulos de plástidos albergan una vía independiente para el ensamblaje de

grupos de Fe-S, el sistema SUF (movilización de azufre), que se deriva de su ancestro
cianobacteriano ( Balk y Pilon, 2011 ). Se han dilucidado varios componentes de esta
vía e incluyen una cisteína desulfurasa (NFS2), proteínas de armazón que incluyen
el complejo SUFBCD y las proteínas NFU, y las proteínas de transferencia e inserción
de racimo (SUFA, HCF101, GRXS14 y GRXS16; ver Couturier et al., 2013 ; Balk y
Schaedler, 2014para resumen). Sin embargo, aún se desconoce la fuente proteica de
Fe para la síntesis de clúster Fe-S plástido. Otra proteína del grupo Fe – S que se ha
descrito que desempeña un papel en la homeostasis del Fe en el cloroplasto
pertenece a la familia NEET, que está involucrada en una gran variedad de procesos
biológicos en células de mamíferos. Aunque su modo de función es ampliamente
desconocido, su grupo 2Fe-2S es lábil, lo que permite un papel en la transferencia de
Fe-S / Fe dentro de las células ( Zuris et al., 2011 ). La proteína Arabidopsis , At-
NEET, probablemente está involucrada en la transferencia de clúster Fe-S / Fe a una
proteína aceptora y, en un principio, se localizó de forma dual en cloroplastos y
mitocondrias mediante el objetivo de GFP y el análisis de inmunotransferencia
(Tabla 1 ; Nechushtai et al., 2012) Esta proteína ha sido categorizada como una
proteína plastídica en AT_CHLORO, y su localización suborganolar dentro del
estroma del cloroplasto (etiquetado de inmunogold) se ha informado recientemente
( Su et al., 2013 ). Las plantas de eliminación en At-NEET obtenidas por
interferencia de ARN (ARNi) acumulan más Fe y presentan niveles más altos de ROS
( Nechushtai et al., 2012 ). El crecimiento de las plántulas derribadas de At-NEET es
insensible a los niveles altos de Fe, pero sensible a los niveles bajos de Fe, lo que
sugiere que esta proteína está involucrada en la transferencia, distribución y / o
manejo del Fe. Además, los mutantes de eliminación de At-NEET presentan una
disminución dramática en la abundancia de catalasa, una enzima hem que
desintoxica ROS, lo que sugiere también un papel de esta proteína en el suministro
de hem Fe ( Nechushtai et al., 2012 ).

Otro candidato para mantener la homeostasis del Fe en el plastidio es NA. Esta

poliamina tiene un papel en la quelación de metales en la savia del floema, las
vacuolas y el citoplasma ( Pich et al., 1997 ; Haydon et al., 2012 ). La presencia de NA
en los plástidos no se ha estudiado hasta ahora. Sin embargo, como lo señala Divol
et al. (2013) , las hojas de la cloronerva mutante del tomate , que no contiene NA,
presentan inclusiones densas de electrones de Fe y fósforo en el cloroplasto que están
ausentes en el tipo salvaje y no corresponden a la ferritina ( Becker et al., 1995 ) . Por
lo tanto, estas inclusiones podrían indicar un papel de NA en el mantenimiento de
Fe en forma soluble en plastidios.

Charla cruzada con vacuolas y mitocondrias

Tanto los cloroplastos como las mitocondrias son ricos en proteínas que contienen
Fe y, aunque probablemente son los principales puntos de control en la red de
homeostasis de Fe, se sabe poco sobre los mecanismos involucrados en su
comunicación (ver Vigani et al., 2013 ). En estos dos compartimentos, el Fe es un
componente principal de las proteínas que pertenecen a sus respectivas cadenas de
transferencia de electrones y, por lo tanto, la deficiencia de Fe tiene un fuerte
impacto en sus rendimientos. Bajo la deficiencia de Fe, la cadena de transporte de
electrones mitocondriales sufre modificaciones con el objetivo de evitar los
complejos ricos en Fe, principalmente el complejo I, por la acción de
deshidrogenasas NAD (P) H alternativas ( Vigani et al., 2009 ; Vigani y Zocchi,
2010 ) y esto ocurre concomitantemente con aumentos en la vía glucolítica (López-
Millán et al., 2000 ; Zocchi et al., 2007 ). Al mismo tiempo, la deficiencia de Fe tiene
un fuerte impacto en la PSI tilacoidea, el sumidero de Fe más alto de la cadena de
electrones fotosintéticos, y provoca una remodelación de los complejos de antena
que altera la estequiometría de la PSI y la PSII ( Abadia, 1992 ; Moseley et al. .,
2002 ). Mientras que en las microalgas verdes Chlamydomonas reinhardtii , las
mitocondrias son más resistentes que los cloroplastos a la deficiencia de Fe, lo que
sugiere una preferencia por el suministro de Fe a las mitocondrias bajo el hambre de
Fe ( Naumann et al., 2007 ; Nouet et al., 2011), no se sabe nada acerca de la
preferencia por la asignación de Fe entre estos compartimentos en las plantas
vasculares. Existen evidencias indirectas para respaldar la existencia de una
conversación cruzada entre las mitocondrias y los cloroplastos, ya que, por ejemplo,
la pérdida de la función de los mutantes del MIT, el transportador de hierro
mitocondrial para la captación de Fe, muestran un contenido de clorofila más bajo y
una expresión alterada del gen de ferritina ( Bashir et al., 2011 ) .

El fenotipo del mutante de doble desactivación ysl4ysl6 sugiere una estrecha

comunicación entre las vacuolas y los plastidios en el tejido embrionario durante la
germinación de la semilla. En este mutante, la expresión de los transportadores
NRAMP3 y NRAMP4, que son responsables de la exportación de Fe vacuolar durante
la germinación, se regula drásticamente ( Divol et al., 2013 ). Además,
el mutante nramp3 nramp4 doble no contiene FER2, la isoforma de ferritina
estable en la semilla, lo que sugiere una disminución de Fe en el plastidio ( Ravet et
al., 2009b ), y esto se ha explicado por la prevención de que Fe salga del vacuola
( Divol et al., 2013) Sin embargo, como se discutió anteriormente en la misma
publicación, la expresión de estos genes puede no ocurrir en las mismas células y,
por lo tanto, la conversación cruzada entre el NRAMP3 / 4 vacuolar y el plastidio
YSL4 / 6 debe involucrar la detección de Fe en el plastidio y la señalización para
ajustar la liberación de Fe de la vacuola.

El papel de los plastidios en el relleno de semillas de Fe

La carga de metal en las semillas depende tanto de la absorción de la raíz como de la
removilización de los tejidos de origen, incluidas las hojas senescentes. Los órganos
senescentes son una fuente importante de nitrógeno, pero se sabe poco sobre su
contribución a la removilización de metales. Como sumidero de la mayor parte del
Fe de la planta, es tentador especular que los plastidios pueden desempeñar un papel
al proporcionar Fe en este proceso. Durante la senescencia de la hoja, el cloroplasto
es uno de los primeros orgánulos en degradarse. Esto ocurre gradualmente:
inicialmente, la degradación del pigmento ocurre en el cloroplasto, mientras que la
degradación de las proteínas del estroma tiene lugar en la vacuola. Estos procesos
reducen la cantidad y el tamaño de los plástidos y permiten una mayor degradación
a través de la clorofagia ( Wada e Ishida, 2009 ; Pottier et al., 2014) RuBisCo del
estroma de cloroplasto de las células de hojas senescentes es una fuente importante
de nitrógeno removilizado para el llenado de semillas. En este contexto, se debe
explorar más a fondo el papel de las proteínas de plastidios ricas en Fe en la
remodelación del Fe. Además, los cloroplastos también podrían proporcionar Fe
cuando este metal está limitado en el medio ambiente debido a que la autofagia para
la removilización de nutrientes puede desencadenarse por falta de nutrientes y estrés
( Pottier et al., 2014 ). Estas hipótesis son consistentes con la fuerte expresión de
YSL6 en las hojas senescentes y su supuesto papel en el control de la liberación de
Fe del plastidio durante la senescencia ( Divol et al., 2013 ). Por otro lado, los análisis
transcriptómicos también han demostrado que la senescencia ocurre
concomitantemente con una regulación positiva de los transportadores de Fe
vacuolar como NRAMP3 (Thomine et al., 2003 ; Pottier et al., 2014 ), lo que sugiere
que, en condiciones fisiológicas, tanto la vacuola como el plastidio pueden participar
en la movilización de Fe.

Observaciones finales
En resumen, la investigación en la última década ha llevado al descubrimiento de
varias proteínas de transporte de Fe en los plástidos. Los análisis fenotípicos
detallados de los mutantes correspondientes en la planta modelo Arabidopsis , ya
nos permiten obtener una descripción bastante precisa del papel de estas proteínas
en la homeostasis de la planta Fe y la fisiología general. Desafortunadamente, la
localización exacta e inequívoca a nivel subcelular y suborgánico aún falta para la
mayoría de estas proteínas de membrana. La investigación futura, por lo tanto,
definitivamente requiere enfoques imparciales e independientes,
como la focalización GFP in vivo en combinación con inmuno-localización
específica y análisis proteómicos de membrana, así como predicciones in silico de
señales de focalización e in vitro.Importar ensayos en orgánulos. Además, las
proteínas de transporte de Fe en el cloroplasto OE aún esperan su
descubrimiento. Las principales preguntas a responder incluyen los mecanismos de
transporte exactos, sus respectivas relaciones estructura / función y la naturaleza de
sus sustratos, como los iones libres o los quelatos. Establecidos, por ejemplo,
levadura, E. coli , pero también nuevos sistemas heterólogos para ensayos de
transporte funcional como Lactococcus lactis Gram-positivo , podrían conducir a
respuestas más detalladas en investigaciones futuras.

Contribuciones de autor
AFL-M, DD y KP escribieron el manuscrito.

Fondos
Este trabajo es apoyado por la Deutsche Forschungsgemeinschaft (subvención DFG
no. PH73 / 3–3 a KP). DD fue financiado en el marco de la Cooperación
Transnacional (Alemania, Francia, España) dentro de la Iniciativa PLANT-KBBE
financiada por el Bundesministerium für Bildung und Forschung (subvención BMBF
no. FKZ: 0315458A a KP, marco de la iniciativa GABI), y KP está financiado por una
beca Heisenberg de la DFG (subvención no. PH73 / 6-1).

Declaracion de conflicto de interes

Los autores declaran que la investigación se realizó en ausencia de relaciones
comerciales o financieras que pudieran interpretarse como un posible conflicto de
intereses.

Expresiones de gratitud
Primero nos disculpamos con los investigadores cuyas contribuciones al transporte
de plastidios de Fe o la homeostasis no se han citado directamente en esta revisión.