Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
CHAPTER VIII
8. 1. SCOPUL EXPERIMENTULUI
8. 1. EXPERIMENT SCOPE
Creșterea interesului pentru conservarea materialului seminal diluat, obținut de la vieri, în special
pentru mărirea duratei de conservare în zile, a ridicat numeroase întrebări cu privire la alegerea
diluantului [Vyt, Ph și colab., 2004].
Diluanții trebuie selectați în termenii performanțelor optime (traduse prin fertilitate și mărimea
lotului de purcei), care depind și de condițiile particulare din fiecare fermă; alegerea lor este crucială,
datorită efectelor economice pe care le produce asupra programului de însămânțare artificială [Gadea, J.,
2003].
Scopul acestui experiment a fost acela de a testa trei diluanți comerciali folosiți la diluarea
materialului seminal obținut de la vieri, în ceea ce privește durata de păstrare a mobilității
spermatozoizilor. Mobilitatea spermatozoizilor din materialul seminal diluat a fost estimată pe o perioadă
de 7 zile după diluare.
8. 2. MATERIALE ŞI METODE
8. 2. MATERIALS AND METHODS
Înainte de fiecare nouă examinare, în fiecare zi din cele șapte zile în care s-a efectuat evaluarea, o
fracțiune de materialul seminal diluat a fost încălzit la 37 ºC; mobilitatea şi procentul de spermatozoizi
anormali au fost determinate vizual la microscop, folosind un obiectiv de 100x. Un scor de la 0 (fără
mobilitate) la 5 (cu mobilitate excelentă) a fost atribuit fiecărei doze în parte [Nevo, A. C. și colab.,
1970]. Estimările s-au făcut de către aceeși persoană, pentru a minimiza apariția unor interpretări
subiective.
Rezultatele obţinute în urma analizării mobilității spermatozoizilor și procentului de
spermatozoizi anormali au fost înregistrate şi prelucrate statistic. Ca metode de prelucrare a datelor s-a
folosit analiza varianţei, iar pentru compararea grupurilor s-a utilizat testul neparametric „Mann -
Whitney”, pentru a evalua dacă unul din cele două eşantioane de observaţii independente tinde să aibă
valori mai mari decât celelalt. Prelucarea statistică a fost efectuată cu ajutorul softului informațional Stat
Win.
8. 3. REZULTATE ŞI DISCUŢII
8. 3. RESULTS AND DISCUSSIONS
Tabelul 8. 3
Scorul pentru mobilitatea spermatozoizilor din materialul seminal diluat, estimată timp de 7 zile,
în funcție de diluantul utilizat
The score for sperm cells mobility from the diluted semen with each one of the three extenders,
estimated during 7 days
Nr. Perioada de conservare (zile)
matricol Diluant folosit 1 2 3 4 5 6 7
vier Scorul acordat
5087 M III 5 5 5 4 4 4 4
5095 M III 5 5 4 4 4 4 4
8511 M III 5 4 4 4 4 3 3
5520 M III 5 5 5 4 4 4 4
5806 M III 5 5 5 4 4 3 3
5809 M III 5 4 4 4 4 4 4
3756 M III 5 4 4 4 4 4 4
4543 M III 4 3 3 3 3 2 2
8021B M III 5 4 4 4 4 4 4
Scorul mediu M III 4,9 4,3 4,2 3,9 3,9 3,6 3,6
5088 Androhep 4 4 4 4 3 3 2
5349 Androhep 3 3 3 3 2 2 1
5410 Androhep 3 3 3 3 2 1 1
5519 Androhep 2 2 1 1 1 1 1
5546 Androhep 4 4 4 2 2 2 2
5818 Androhep 3 3 2 2 2 1 1
8021A Androhep 3 3 2 2 2 2 1
14210 Androhep 2 2 2 2 1 1 1
14438 Androhep 4 4 4 4 3 3 2
Scorul mediu Androhep 3,1 3,1 2,8 2,6 2,0 1,8 1,3
5086 BTS 5 5 5 4 4 3 2
5350 BTS 4 4 4 4 3 3 2
5406 BTS 4 4 3 3 2 2 2
5517 BTS 3 3 3 2 1 1 1
5787 BTS 2 1 1 1 1 1 1
5807 BTS 5 4 4 4 4 4 3
3778 BTS 5 5 4 4 4 3 3
3861 BTS 4 4 4 4 4 3 2
4544 BTS 4 4 3 3 2 2 2
Scor mediu BTS 4,0 3,8 3,4 3,2 2,8 2,4 2,0
Scorul mediu al mobilității înregistrat pentru cei trei diluanți considerați în cadrul experimentului
pe o perioadă de 7 zile a scăzut semnificativ odată cu ziua de conservare (figura 8. 2). Cel mai mare scor
s-a putut oberva la diluantul M III, la care și scăderea mobilității a fost cea mai scăzută de-a lungul celor
7 zile (de la 4,89 în ziua 1 la 3,56 în ziua 7).
În cazul dozelor de material seminal diluate cu Androhep, la acestea s-a înregistrat cel mai mic
scor al mobilității, scorul mediu în ziua 1 fiind 3,11, iar în ziua 7 de 1,33. În cazul celui de-al
treilea diluant, scorul acordat parametrului mobilitate a fost de 4 în ziua 1 și de 2, în ziua 7.
6.00
5.00 4.89
4.33 4.22
4.00 4
Scorul mediu
0.00
1 2 3 4 5 6 7
Ziua după diluare
Figura 8. 2. Mobilitatea spermatozoizilor din materialul seminal diluat cu cei trei diluanți, estimată timp de 7
zile, în funcție de media scorului obținută
Figure 8. 2. The average score for sperm cells mobility from the diluted semen with each one of the three
extenders, estimated during 7 days
8 8 8
Doze material seminal diluat (n) 8
5 (mobilitate foarte bună)
7
6 6
6
4 (mobilitate bună)
5 5
4 4 4
3 3 (mobilitate satisfăcătoare)
3
2 2
2 2 (mobilitate slabă)
1 1 1 1
1 1 1 1
0 1 (fără mobilitate)
1 2 3 4 5 6 7
Ziua după diluare
Figura 8. 3. Mobilitatea spermatozoizilor din materialul seminal diluat cu diluantul M III, estimată timp de 7
zile, în funcție de scorul obținut
Figure 8. 3. The score for sperm cells mobility from the diluted semen with M III, estimated during 7 days
7
6
6
Doze material seminal diluat (n)
5 5
4
4 4 4
4 5 (mobilitate foarte bună)
3 3 3 4 (mobilitate bună)
3 3 3
3 3 (mobilitate satisfăcătoare)
2 2 2 22 2 2 2 2 (mobilitate slabă)
2
1 (fără mobilitate)
1 1
1
0
1 2 3 4 5 6 7
Ziua după diluare
Figura 8. 4. Mobilitatea spermatozoizilor din materialul seminal diluat cu diluantul Androhep, estimată timp
de 7 zile, în funcție de scorul obținut
Figure 8. 4. The score for sperm cells mobility from the diluted semen with Androhep, estimated during 7
days
6
5 5 5
5
Doze material seminal diluat (n)
4 4 4 4
4
5 (mobilitate foarte bună)
3 3
3 4 (mobilitate bună)
3 (mobilitate satisfăcătoare)
2 2 22 22 2 2
2 2 (mobilitate slabă)
1 (fără mobilitate)
11 1 1 1 1 11 1 1
1
0
1 2 3 4 5 6 7
Ziua după diluare
Figura 8. 5. Mobilitatea spermatozoizilor din materialul seminal diluat cu diluantul BTS, estimată timp de 7
zile, în funcție de scorul obținut
Figure 8. 5. The score for sperm cells mobility from the diluted semen with BTS, estimated during 7 days
Din reprezentările grafice de mai sus se poate observa că, în cazul diluantului M III, mobilitatea
spermatozoizilor a înregistrat scorul maxim la majoritatea ejaculatelor în zilele 1, 2 și 3, iar scorul 4 a
fost acordat la majoritatea ejaculatelor de-a lungul celor 7 zile, scorul 1 fiind complet absent de-a lungul
întregii perioade analizate. La diluantul Androhep, scorul 5 a fost complet absent, scorul 2 fiind prezent
de-a lungul întregii perioade analizate, iar scorul 1 a fost într-un trend ascendent începând cu ziua 4. În
cazul diluantului BTS, mobilitatea spermatozoizilor a înregistrat scorul 4 la majoritatea ejaculatelor de-a
lungul celor 7 zile, scorul 1 căpătând un trend ascendent după ziua 4.
Tabelul 8. 4
Semnificația diferențelor între diluantul M III și diluantul Androhep, în funcție de ziua estimării
mobilității spermatozoizilor din materialul seminal diluat
Difference semnification between M III and Androhep, base on the estimation day of the sperm
cells mobility from the diluted semen
Androhep
Diluant Ziua
1 2 3 4 5 6 7
1 0,000** X X X X X X
2 X 0,009** X X X X X
3 X X 0,010* X X X X
M III
4 X X X 0,009** X X X
5 X X X X 0,000*** X X
6 X X X X X 0,001** X
7 X X X X X X 0,000***
test t, NS – p > 0,05; * p < 0,05;** p < 0,01;*** p < 0,001
Din tabelul de mai sus rezultă că în urma comparării diluantului M III cu Androhep, folosind
testul neparametric Mann – Whitney, s-au înregistrat diferențe semnificative din punct de vedere statistic
în fiecare zi din cele 7 zile ale experimentului. În ziua 3 s-a înregistrat diferență semnificativă la pragul p
> 0,05, în zile 1, 2, 4 și 6 la pragul p < 0,01, iar în zilele 5 și 7 la pragul p < 0,001.
Tabelul 8. 5
Semnificația diferențelor între diluantul M III și diluantul BTS, în funcție de ziua estimării
mobilității spermatozoizilor din materialul seminal diluat
Difference semnification between M III and BTS, base on the estimation day of the sperm cells
mobility from the diluted semen
M III
Diluant Ziua
1 2 3 4 5 6 7
1 0,037* X X X X X X
2 X 0,331NS X X X X X
3 X X 0,122NS X X X X
BTS
4 X X X 0,200NS X X X
5 X X X X 0,077NS X X
6 X X X X X 0,024* X
7 X X X X X X 0,002**
test t, NS – p > 0,05; * p < 0,05;** p < 0,01;*** p < 0,001
Din tabelul 8. 5 rezultă că în urma comparării diluantului M III cu diluantul BTS, s-au înregistrat
diferențe semnificative din punct de vedere statistic doar în zilele 1, 6 (p > 0,05) și 7 (p < 0,01) din cele 7
zile ale experimentului. În restul zilelor analizate nu s-au înregistrat diferențe semnificative din punct de
vedere statistic (p > 0,05).
Tabelul 8. 6
Semnificația diferențelor între diluantul BTS și diluantul Androhep, în funcție de ziua estimării
mobilității spermatozoizilor din materialul seminal diluat
Difference semnification between BTS and Androhep, base on the estimation day of the sperm cells
mobility from the diluted semen
Androhep
Diluant Ziua
1 2 3 4 5 6 7
1 0,057NS X X X X X X
2 X 0,093NS X X X X X
3 X X 0,216NS X X X X
BTS
4 X X X 0,185NS X X X
5 X X X X 0,200NS X X
6 X X X X X 0,171NS X
7 X X X X X X 0,063NS
test t, NS – p > 0,05; * p < 0,05;** p < 0,01;*** p < 0,001
Din tabelul 8. 6 rezultă că în urma comparării diluantului Androhep cu diluantul BTS nu s-au
înregistrat diferențe semnificative din punct de vedere statistic (p > 0,05) în nici una din zilele în care s-a
estimat mobilitatea spermatozoizilor din materialul seminal diluat.
Alegerea diluantului potrivit trebuie făcută cu cea mai mare grijă; în cazul în care durata de
conservare planificată este sub 72 de ore se recomandă folosirea diluanților pe termen scurt (care sunt
mai ieftini și oferă rezultate asemănătoare cu cele obținute în cazul folosirii diluanților pe termen lung),
iar dacă conservarea se dorește să fie mai lungă de 4 zile (din cauza distanțelor, a procedurilor de control
a bolilor, etc.) se recomandă folosirea diluanților pe termen lung, precum și a unor concentrații în
spermatozoizi mai mari, care să compenseze pierderea viabilității datorate învechirii materialului seminal
[Gadea, J., 2003].
De regulă, prima categorie de diluanţi este utilizată de către fermele care işi produc singure
materialul seminal, iar cea de-a doua de fermele care achiziţionează material seminal de la distanţe mai
mari [Huțu, I., 2005].
L. J. Huo și colaboratorii au determinat viabilitatea spermatozoizilor din materialul seminal
diluat cu Beltsville Thaw Solution (BTS) în ziua 9 de la diluare și au identificat mai mult de 50 % din
spermatozoizi ca fiind viabili; mobilitatea nu a fost apreciată în urma acestui experiment [Huo, L. J. și
colab., 2002].
Mobilitatea este, însă, un parametru foarte important pentru evaluarea calității spermei. J. H.
Britt a afirmat că ejaculatele cu mobilitate ≤ 60 % conduc la fecundarea a mai puține ovocite [Britt, J. H.
și colab., 1999]. L. A. Johnson și colaboratorii a susținut ideea că este nevoie de mobilitate de minim 60
% pentru ca fecundația să se desfășoare în condiții optime [Johnson, L. A. și colab., 2000].
Pe baza acestor criterii de apreciere a mobilității un scor ≥ 3 (60 % spermatozoizi mobili) este
considerat un scor bun în sistemul folosit de noi în cadrul acestui experiment.
Mobilitatea a fost dependentă de durata de conservare a materialului seminal diluat. În cazul
diluantului BTS, care este un diluant pe termen scurt, spermatozoizi au manifestat o mobilitate bună timp
de 3 – 4 zile, după care mobilitatea a scăzut, fiind totuși, încă prezentă în ziua 7. Aceste date confirmă
prezumția duratei de conservare a diluanților pe termen scurt.
În mod similar, Z. Machaty și colaboratorii nu au obținut diferențe în ceea ce privește mărimea
lotului de purcei după însămânțarea artificială cu material seminal diluat cu diluantul BTS, după folosirea
dozelor în ziua 0 sau 4 de la diluare; de remarcat însă faptul că au folosit două doze de material seminal
în ziua 4, ceea ce nu constituie o practică comună în ferme [Machaty, Z. și colab., 1992].
Evaluarea vizuală a mobilității pare să fie un indicator bun al capacității fecundante după
folosirea diluanților pe termen scurt pentru diluare.
Rezulatele obținute de noi sunt asemănătoare cu cele obținute de J. P. Laforeste și P. Allard în
ceea ce privește scorul mediu înregistrat la diluanții BTS și Androhep. Nici în ceea ce privește estimarea
mobilității spermatozoizilor, timp de 7 zile, nu au fost observate diferențe semnificative din punct de
vedere statistic între experimentul efectuat de aceștia și cel efectuat de către noi [Laforeste, J. P., Allard,
D., 1995].
Nici D. Waberski și colaboratorii nu au obținut diferențe în ceea ce privește mobilitatea între
materialul seminal diluat cu BTS și cel diluat cu Androhep [Waberski, D. și colab., 1994].
În ceea ce privește diluanții pe termen lung, doar diluantul M III a înregistrat un scor ≥ 3 de-a
lungul întregii perioade analizate, rezultatele fiind asemănătoare cu cele obținute de către Ph. Vyt, care a
înregistrat un scor mediu de 4,9 în ziua 1 și de 3,7 în ziua 7, în cazul aceluiași diluant [Vyt, Ph., 2007].
C. Kuster și G. C. Althouse au identificat, de asemenea, o scădere a fecundității materialului
seminal diluat cu Androhep și conservat o perioadă mai lungă de 3 zile [Kuster, C., Althouse, G. C.,
1997].
8. 4. CONCLUZII PARȚIALE
8. 4. PARTIAL CONCLUSIONS
1. Scorul mediu al mobilității înregistrat pentru cei trei diluanți considerați în cadrul
experimentului pe o perioadă de 7 zile a scăzut semnificativ odată cu perioada de conservare. Cel mai
mare scor s-a putut oberva la diluantul M III, la care și scăderea mobilității a fost cea mai scăzută de-a
lungul celor 7 zile (de la 4,89 în ziua 1 la 3,56 în ziua 7). Acesta a fost singurul diluant la care s-a
înregistrat o mobilitate a spermatozoizilor estimată peste 3 în ziua 7.
2. În cazul dozelor de material seminal diluate cu Androhep, la acestea s-a înregistrat cel mai mic
scor al mobilității, scorul mediu în ziua 1 fiind de 3,11, iar în ziua 7 de 1,33. Deși este un diluant pe
termen lung, după ziua 2 de la diluare mobilitatea spermatozoizilor din materialul seminal diluat cu
Androhep a scăzut sub scorul de 3, ceea ce cataloghează acest material ca fiind nerecomandat pentru
utilizare la însămânțarea artificială după această zi.
3. În cazul celui de-al treilea diluant (BTS), scorul acordat parametrului mobilitate a fost de 4 în
ziua 1 și de 2, în ziua 7, scorul scăzând sub 3 abia în ziua 4, deși este un diluant pe termen scurt.
4. Putem afirma că, pe baza experimentului efectuat, cel mai bun diluant este M III, care poate fi
utilizat cu încredere timp de 7 zile, fără a fi afectată mobilitatea spermatozoizilor din materialul seminal
diluat. Diluantul Androhep este recomandat doar pentru diluarea materialului seminal pentru o perioadă
de maxim 3 zile de conservare, în general pentru fermele care-și produc singure materialul seminal.
Diluantul BTS poate fi folosit fără probleme timp de 4 zile, din ziua 5 fiind imperativă verificarea
mobilității pentru a evita rezultatele dezamăgitoare cu privire la fecunditate.
5. Dacă durata de conservare dorită este de maxim 3 zile se recomandă folosirea diluanților pe
termen scurt (BTS), al căror cost de achiziție este inferior celor pe termen lung, nefiind observate
diferențe față de aceștia nici în ceea ce privește fecunditatea obținută.
6. Alegerea diluanților potriviți pentru fiecare fermă în parte trebuie să constituie întotdeauna o
preocupare a managementului, pentru a optimiza fecunditatea și mărimea lotului de purcei, deoarece
repercursiunile economice asupra producției de purcei pot fi devastatoare.