Aminoglucósidos y componentes de azúcar en otros metabolitos

secundarios

Contenido
Aminoglucósidos y componentes de azúcar en otros metabolitos secundarios ................................ 1
1. Introducción .................................................................................................................................... 2
2 Aislamiento, distribución, ecología y fermentación......................................................................... 3
3 Biogénesis y vías básicas de cicitoles y componentes de azúcar ..................................................... 7
3.1 Ciclitoles .................................................................................................................................... 8
3.2 Componentes de azúcar .......................................................................................................... 12
3.2.1 6-desoxi y otras desoxihexosas ........................................................................................ 14
3.2.2 Otros componentes del azúcar ........................................................................................ 15
4 Genética y bioquímica de la biosíntesis y funciones de los aminoglucósidos............................... 16
4.1 Streptomycins y Ca Aminogl ycosides relacionados ............................................................... 24
4.1.1 Estreptomicinas ................................................................................................................ 24
4.1.2 Estreptomicina relacionada con los Aminogl ycósidos de Ca .......................................... 40
4.2 Fortimicinas, Istamicinas ......................................................................................................... 43
4.3 Aminooglucósidos que contienen 2-desoxstreptamina.......................................................... 46

1
1. Introducción
No existe una definición química o bioquímica clara del término "aminoglucósido",
que tradicionalmente se reserva para el azúcar mono o oligosacárido y / o los
derivados del ciclitol que contienen nitrógeno amino. Por lo tanto, en este capítulo
se intenta demostrar que, en términos biológicos y especialmente genéticos,
existen muchos paralelos entre los orígenes y los usos de los componentes de
azúcar fuertemente derivados en los metabolitos secundarios en general y con
respecto a los aminoglucósidos de aminociclitol en particular. Una lista de los
principales grupos químicos de aminoglucósidos (ver Tab. 1) muestra que algunas
estructuras nuevas se han descrito en la última década.

Desde la primera edición de "Biotecnología" (cf. UMEZAWA et al., 1986), el campo

de la investigación con aminoglucósidos ha experimentado un cambio significativo
caracterizado por los siguientes aspectos divergentes:

(1) cesar el interés en la búsqueda y desarrollo de nuevos antibióticos a partir de

este grupo particular de compuestos acompañados de cifras de mercado
estancadas y uso clínico;

(2) creciente interés en la investigación básica sobre los fundamentos biológicos

(moleculares) de la producción de aminoglucósidos y otros carbohidratos
metabólicos secundarios, especialmente iniciados por los nuevos métodos de
ingeniería genética en actinomicetos, bacilos y otros grupos de interés
biotecnológico;

(3) evaluación de nuevas clases de productos naturales relacionados para otros

tipos de aplicaciones, por ejemplo, inhibidores de glucosidasas y otras enzimas.

Sin embargo, esta situación podría cambiar nuevamente debido a los problemas
cada vez mayores con la resistencia a los antibióticos y la aparición de nuevas y
reapariciones de enfermedades infecciosas "antiguas" (ver discusión en DAVIES,
1992; HOTTA et al., 1995). Algunos ejemplos son los estafilococos resistentes a la
meticilina, las infecciones bacterianas en pacientes con VIH y el renacimiento
mundial de la tuberculosis como un importante problema de salud. En línea con
este desarrollo, los autores de este El capítulo se centra principalmente en los
nuevos aspectos de la genética molecular, la bioquímica y la fisiología de la
producción de aminoglucósidos y los componentes de azúcar modificados de
manera similar de otras clases químicas de metabolitos secundarios. Además, se
discuten las futuras aplicaciones biotecnológicas de este conocimiento.

Muchos detalles de la química, el modo de acción, la mejora clásica de la cepa, la

tecnología de fermentación y la farmacología, por ejemplo, de 2 aminociclitol-
aminoglucósidos que contienen desoxirresptamina, estreptomicina y otros
2
aminoglucósidos relacionados son bien conocidos por muchas revisiones
publicadas en las últimas dos décadas (DAVIES y YAGISAWA, 1983; GRAFE,
1992; LoRIAN, 1980; MALLAMS, 1988; UMEZAWA y HOOVER 1982; UMEZAWA
et al., 1986; WALLACE et al., 1979) y no se tratarán ampliamente aquí. Para el
progreso realizado en campos relacionados, como la síntesis química y enzimática
de los componentes de carbohidratos y sus análogos, por ejemplo, cicitoles,
derivados de hexosa y pentosa, imitadores de azúcar y su actividad y aplicación
biológica, se remite al lector a las siguientes publicaciones: KENNEDY, 1988;
HORTON et al., 1989; THIEM, 1990 LUKACS y OHNO, 1990 YAMAGUCHI y
KAKINUMA, 1992a; OGURA et al., 1992; BILLINGTON, 1993; HUDLICKY y
CEBULAK, 1993; COLEMAN y FRASER, 1993; LOOK et al., 1993; KROHN et al.,
1993; TESTA et al., 1993; COOK et al.1994.

2 Aislamiento, distribución, ecología y fermentación.

En la última década, se detectaron y describieron nuevos metabolitos que
claramente pertenecen al grupo aminoglucósido. Lengüeta. 1 ofrece una visión
general de la cronología de las publicaciones y la agrupación bioquímica de los
aminoglucósidos más importantes. La mayoría de los metabolitos secundarios que
contienen azúcar relevantes para este capítulo están formados por bacterias,
principalmente actinomicetos, bacilos y pseudomonas (Fig. 1). Sin embargo, los
glucósidos bioactivos

3
 Los números entre paréntesis se refieren a las figuras que muestran la
fórmula en la Sec. 10)
4
  Ver texto en la sección. 3; solo se da la fórmula básica si se caracteriza un
grupo de compuestos

Figura 1
Géneros bacterianos productores de aminoglucósidos aminociclitol (extendido
según HASEGA AC acarbosa e inhibidores de la glucosidasa relacionados; BM:
bluensomicina; BU: butirosinas; DM: destomicinas; FM: fortimicinas (astromicinas);
GM: gentamicinas; HM-A, B: higromicinas A o B; IM: istamicinas; KG
kasugamycins; KM: kanamicinas; LM: lividomicinas; NM: neomicinas; PM:
paromomicinas; RM: ribostamicinas; SE: seldomicinas; SI: sisomicinas; SM:
estreptomicinas; SP: espectinomicina; TM: toctomicina; TM: toctomicina; TM:
toctomicina; TM: TM VM: validamicinas.

de las plantas también debe ser considerado. En general, se puede suponer que
estos glucósidos comparten una base bioquímica general común con los de las
bacterias y que se utiliza un grupo genético equivalente para su producción
celular. Sin embargo, dado que se sabe poco sobre su biosíntesis, este capítulo se
concentra en los sistemas de producción de procariotas.

La investigación que cubre todos los aspectos de la biología del metabolismo

secundario de carbohidratos en organismos que producen productos
extracelulares secundarios aún se encuentra en sus etapas iniciales. Por el
contrario, los mecanismos de resistencia de los productores de antibióticos para la
autoprotección pueden considerarse exhaustivamente investigados (véase la
sección 4.5). Incluso se desconocen las bases de la fisiología en los biotopos
naturales y el papel ecológico de los aminoglucósidos y otros metabolitos
secundarios (PIEPERSBERG, 1993; MARSH y WELLINGTON, 1994).

5
Se ha demostrado que los aminoglucósidos se producen en suelos
(WELLINGTON et al., 1993). Por lo tanto, uno de los objetivos futuros de la
investigación del aminoglucósido aminociclitol es estudiar su papel ecológico en
los biotopos de organismos. Allí, estas sustancias podrían estar involucradas en la
comunicación entre diferentes organismos y en la diafonía similar a las hormonas
entre las células diferenciadas del propio productor (CHADWICK y WHELAN,
1992; PIEPERSBERG, 1993). Además, las vías de diseminación de los
mecanismos de resistencia a los aminoglucósidos que se encuentran tanto en los
productores como en las bacterias no productoras clínicamente relevantes (véase
la sección 4.5) y las presiones selectivas impulsoras en condiciones naturales
podrían ser accesibles para la investigación experimental directa.

Los componentes glucosídicos o que contienen ciclitol similares a los llamados

metabolitos secundarios de microbios y plantas se encuentran en las estructuras
de muchos polímeros extracelulares pro y eucariotas, como los polisacáridos,
lipopolisacáridos, glucolípidos y otros glucoconjugados. Hasta ahora, en bacterias
unicelulares gramnegativas, se ha encontrado muy poca evidencia de la
biosíntesis y secreción de aminoglucósidos u otras sustancias difusibles que
contienen carbohidratos (por ejemplo, las pseudomonas producen sorbistinas). Sin
embargo, estos organismos producen un rango variable y abundante de
sustancias extracelulares a base de carbohidratos, lipopolisacáridos (LPS) y otros
polisacáridos heteropoliméricos (por ejemplo, antígeno común enterobacteriano:
ECA). También hay evidencia emergente de que el mismo conjunto de genes se
usa para la producción de estos polímeros, que en muchos casos se asemejan a
metabolitos secundarios polimerizados, y para la producción de productos finales
de bajo peso molecular de, por ejemplo, el propio metabolismo secundario de
actinomicetos (ver más abajo )

Dos ejemplos recientes de compuestos similares a aminoglucósidos no

eubacterianos son (1) los glucosaminil
arcaetidil-mioinosinoles (Fig. 2)
producidos por algunos Archaea
metanogénicos (KOGA et al., 1993) y (2)
la estructura central muy similar de los
anclajes de la proteína glucosil
fosfatidilinositol para glucoproteínas
unidas a la superficie externa en
eucariotas (Fig. 3). Estos se encuentran
en una variedad de organismos, desde
tripanosomas hasta mamíferos

Figura 2 Una estructura de glicolípidos similar a 6

aminoglucósidos en Archaea.

R residuos de archaetidilo (= éteres de glicerilo)

(ENGLUND, 1993). Curiosamente, tienen el mismo contenido de glucosamina no
acetilada y comparten la 1 fosforil- 6-glucosaminil mioinositol unidad central que se
sintetiza en el sistema de mamíferos a partir de fosfoinosítidos y UDP-N-
acetilglucosamina en el lado interno de la membrana citoplasmática. Después de
la desacetilación y la acilación en el resto de inositol, se transporta a la superficie
externa donde se condensa a otros residuos glucosídicos (manosilo y, en algunos
casos, galactosilo, N-acetil-galactosaminilo, fosforiletanolamina). La unidad de
fosforiletanolamina conecta la cadena de manosilo corta con el grupo carboxilo C-
terminal de la proteína mediante la formación de un nuevo enlace amida (revisado
por ENGLUND, 1993). Estos ejemplos pueden sugerir que parte de la bioquímica
de la biosíntesis de aminoglucósidos y, por lo tanto, parte del conjunto de genes
relevante son utilizados para diferentes propósitos en el metabolismo de
compuestos principalmente dirigidos extracelularmente y que ocurren en
prácticamente todos los grupos de organismos.

Figura 3 Fig. 3. Estructura en glicosilfosfatidilinositoles que se asemejan a

aminoglucósidos. Dichas estructuras son anclas proteicas de proteínas
unidas a la superficie externa de eucariota Asp: residuo de aspartilo en la
cadena de proteína; EA: etanolamina; Hombre: residuos de manosilo; P
fosfato; R: diacilglicerol.

3 Biogénesis y vías básicas de ciclitoles y componentes de azúcar

Se desconoce cuál es el propósito general de la modificación e incorporación del
azúcar en oligómeros homogéneos (a base de azúcar) o de tipo mixto ("tipo
glucoconjugado"), en su mayoría sustancias difusibles o asociadas a la membrana
fuera de las células, y polímeros, que son en su mayoría materiales de
recubrimiento para superficies celulares o proteínas fuera de las células. Podría
ser necesario para las interacciones célula-célula que podrían llamarse
"comunicación", "propósito especial" o "metabolismo de individualización" y que
podrían ser una característica común de todos los tipos de organismos
(CHADWICK y WHELAN, 1992; PIEPERSBERG, 1992, 1993). Al menos hay

7
buena evidencia de que la mayor parte del metabolismo del azúcar más allá de la
glucosa, la fructosa y algunas pentosas básicas y su incorporación en el
almacenamiento y los materiales de la pared celular es específica para el tipo de
célula o cepa, en lugar de para una especie o taxones superiores, y parece estar
basado en el mismo común y altamente variable y conjunto de genes fluidos. Esto
se refleja en las altas variaciones en las reacciones de glicosilación en todos los
organismos y especialmente en los organismos diferenciadores. Esto da lugar a la
alta variación antigénica en las células microbianas y eucariotas superiores.
Ejemplos de esto son los diferentes marcadores de grupos sanguíneos en el
hombre y los materiales capsulares, lipopolisacáridos y diversas formas de
productos glicosilados excretados en bacterias, que se describen en este capítulo.

3.1 Ciclitoles
Según nuestro conocimiento actual, hay dos vías diferentes (amino-) ciclitol (Fig.
4).

(I) La vía del mioinositol. La primera ruta (designada Ca en este capítulo) es a

través de D-mioinositol-3-fosfato que es sintetizado por la mioinositol sintasa
dependiente de NAD +; los productos finales son, p. ej., D-quiro-inositol,
estreptidina, bluensidina, actinamina y D-mio-ldeoxi-1-amino-inositol (D-mio-
inosamina).

En la Fig. 5 se presenta una compilación de ciclocitos de Ca (FLOSS y BEALE,

1989 WALKER, 1975a; SIPOS y SZABO, 1989). Las reacciones catalizadas por
las sintasas de Dmyo-inositol-3 fosfato bacterianas y eucariotas siguen la de una
condensación aldólica intramolecular típica. Esto involucra

 apertura del anillo de piranosa y rotación del enlace C-4 / C-5 para
colocar el grupo C-6 en una posición activa,
 la oxidación reversible y la reducción de la posición C-5 por NAD +,
 la eliminación del átomo pro-R-H de C-6 y su transferencia al carbonilo
C-1, y
 el uso del anómero p de ~ -glucosa-6- fosfato como sustrato preferido
(WONG y SHERMAN, 1985; FLOSS y

BEALE, 1989).

(2) La vía del deshidroquinado. La segunda ruta hacia los cicitoles (Cb) sigue un
mecanismo similar a la deshidroquinato-sintasa dependiente de NAD + en hexosa-
6 o heptulosa-7-fosfatos de cadena abierta que producen 1-ceto-2-
desoxicicloritoles no fosforilados. Los productos finales son, por ejemplo, 6-
desoxstreptamina y valienamina / valiolamina (Fig.6; WIDLANSKI et al., 1989;

8
GODA y AKHTAR, 1992; RINEHART et al., 1992; YAMAUCHI y KAKINUMA
1992c, 1993).

Este mecanismo implica

 eliminación de electrones en C-4 de hexosefosfatos (C-5 de derivados de

heptulosa);
 la eliminación del hidroxilo fosfoéster como grupo saliente crearía un
potencial para la formación de un carbanión en C-6
 finalmente, después de la reacción de condensación, el grupo ceto en C-4
(C-5) se reduce para restaurar el grupo hidroxi (véase la Fig. 4).

Este paso es similar al que ocurre en un ácido de azúcar C7 en la reacción de

cierre del anillo durante la ruta biosintética inicial que conduce a los aminoácidos
aromáticos. La principal diferencia en los intermedios iniciales de las vías de Ca y
Cb es que en Cb puede seguir inmediatamente un primer paso de transaminación,
mientras que en Ca una reacción de fosfatasa y oxidasa (deshidrogenasa) tiene
que crear primero un ceto intermedio adecuado para un aminotransferencia
primario (ver a continuación, sección 4.1.3). El procesamiento adicional de
ciclitoles a aminociclitoles podría ser al menos en parte muy similar, es decir, el
primer aminotransfer y otros pasos intermedios posteriores, y podría ser catalizado
por enzimas relacionadas o incluso casi idénticas. Esto puede predecirse, aunque
las enzimas involucradas aún no se conocen para la mayoría de los grupos
representativos de las rutas de (amino-) ciclitol. Sin embargo, hay un detalle en el
que también difieren las etapas posteriores de la conversión del cicitol de Ca y Cb:
en la formación de 2-desoxiestraptamina (2DOS), la incorporación de grupos
amino procede estereoquímicamente en una dirección opuesta a la que se
muestra en la biosíntesis de estreptidina (WALKER, 1975a; véanse las secciones
4.1 y 4.3).

El concepto químico de las unidades alifáticas y aromáticas C7 que básicamente

constituyen derivados del ciclohexano con un grupo nitrogenado en la posición
meta (m-C7N) domina la literatura sobre la biogénesis de los bloques de
construcción en muchos metabolitos secundarios (RINEHART et al., 1992; FLOSS
y BEALE, 1989; CHIAO et al., 1995; KIM et al., 1996). Estos son formalmente
todos los derivados del ciclitol, probablemente formados a través de las vías de
Cb. Se encuentra una unidad m-C7N alifática en sustancias que contienen
valienaminehalidamina, como validoxilaminas y validamicinas (cf. Sec. 10, Fig.
A21), en acarbosa y en inhibidores de glucosidasa relacionados (ver Fig. A22;
TRUSCHE et al., 1984; MULLER, 1989).

9
Figura 4 Fig. 4. Rutas hacia la formación de (amino-) ciclitoles a través de
mioinositol- ~ -3-fosfato sintasa (Ca) y un mecanismo de enzima similar a la
deshidroquinato sintasa (Cb; cf. reacciones 8-7). Los sustratos pueden ser D
glucosa6-fosfato (1 y 3), sedoheptulosa-7-fosfato (5, o su 5-epímero), o ácido 3-
desoxiarabinoheptulosónico (7). Los productos de las rutas de Ca o Cb son
ciclofosfatos (2) que tienen que sufrir desfosforilación y oxidación adicional antes

10
de la transaminación o 1-ceto-2-desoxicicitoles (4,6 y 8) que se pueden transaminar
directamente, respectivamente. La numeración de los átomos del anillo en (2) y (4)
está de acuerdo con el sistema de conteo utilizado en los derivados de
estreptamina (estreptidina, actinamina, 2-desoxstreptamina); los números en (6) y
(8) se dan de acuerdo con la nomenclatura en valienamina y deshidroquinato,
respectivamente.  (C-1 o C-2) y Δ (C-6 o C-7) marcan los átomos de carbohidratos
originales que forman el nuevo enlace C-C en los productos de ciclitol. La vía del
deshidroquinado (7-8) también se puede iniciar con un ácido 5-amino-3,5-
desoxiarabinoheptulosónico o un intermedio se transamina después de la ciclación
para producir una unidad aromática m-C7N como se encuentra en muchos
metabolitos secundarios (para más detalles, ver FLOSS y BEALE, 1989; RINEHART
et al., 1992; YAMAUCHI y KAKINUMA, 1992c, 1993).

La ruta común de deshidroquinado / shikimato de muchos compuestos aromáticos

debe considerarse como una ruta Cb y está involucrada en la formación de
muchas unidades aromáticas m-C7N (véase la Fig. 4). Estas unidades ocurren en
muchos metabolitos secundarios bien conocidos, como muchas ansamicinas, por
ejemplo, rifamicinas, estreptovaricinas, geldanamicina (no se muestra), en
candicidinas (no se muestra) y en pactamicina (cf. Figs. 5 y A30), lo cual es
inusual porque contiene componentes que aparentemente derivan de las dos rutas
alternativas del cicitol, una siguiendo la ruta del Ca y la otra una ruta aromática de
Cb diferente de la de la familia de la ansamicina (RINEHART et al., 1981, 1992;
FLOSS y BEALE, 1989). Una descripción detallada de la ruta aromática de Cb
está más allá del alcance de este capítulo; se remite al lector a la literatura
(CHIAO et al., 1995; FLOSS, en prensa; KIM et al., 1996).

Los restos de ciclitol generalmente se pueden considerar como aglica en las

reacciones de glicosilación, por ejemplo, en estreptomicinas (ver sección 4.1),
fortimicinas e istamicinas (ver sección 4.2), la mayoría de las 2 .desoxystreptamina
(2DOS-) que contienen aminoglucósidos (ver sección . 4.3), y algunos otros
productos como el antibiótico nucleósido adenomicina (ver Fig. A27 y Sec. 5.2).
Alternativamente, son (co) sustratos en otros tipos de reacciones de
condensación, por ejemplo, con otra molécula derivada de la misma vía (por
ejemplo, validamicina, acarbosa y otros compuestos relacionados; ver sección
4.4). En casos extremos, como en la pactamicina (ver Fig. A30), pueden constituir
el bloque de construcción central que se condensa con cuatro o más grupos
laterales de diferente origen y complejidad variable. En pactamicina consisten en
dos aromas (uno derivado de la vía del deshidroquinado, una unidad m-C7N, el
otro del grupo de poliacetato / policétido), un grupo de urea dimetilada, un grupo
hidroxietilo derivado de los grupos metilo de la metionina y un C grupo metilo
unido. Además, cuatro de los cinco átomos de C del resto pentitol que parece ser
un derivado de mioinositol están sustituidos con un grupo nitrogenado.

11
Sin embargo, es dudoso que algunos de los representantes de un grupo químico
común de aminoglucósidos compartan la misma vía del ciclitol. Por ejemplo, el
grupo destomicina contiene dos compuestos con aminociclitoles derivados de la
estreptamina, uno de los cuales es idéntico a la 1-N-amidinostreptamina (ver Fig.
A16 IKEDA et al., 1985b), un intermediario en la vía de estreptomicina (vía Ca; ver
Sección 4.1.1). Los otros miembros de esta familia tienen 2-desoxi-scyllo-
streptamine (2DOS) como restos de ciclitol (vía Cb). De manera similar, las
fortimicinas (Ca) y las istamicinas (Cb) podrían clasificarse en grupos separados
(ver Fig. A10 y Sección 4.2). Esto podría sugerir incluso dos vías iniciales
diferentes para la formación de ciclitol que resulten en productos finales muy
similares o, como alternativa, una modificación posterior por oxidorreductasas
(deshidroxilación de derivados de Ca o hidroxilación de productos Cb) como rutas
opcionales para producir la categoría alternativa de bloques de construcción. , esta
última posibilidad es menos probable ya que en ningún caso se encontraron
ambas vías en el mismo productor.

3.2 Componentes de azúcar

Los derivados de azúcar que pueden unirse a los cicitoles tanto del tipo Ca como
del tipo Cb pueden provenir de precursores monoméricos activados por
nucleotidilo (reacciones de transferencia de glicosilo) o del conjunto de D-glucosa
polimerizada directamente (por ejemplo,
maltodextrinas; transglicosilaciones).

Figura 5 Fig. 5. Estructuras de

componentes (amino-) hexito1 y
pentitol en metabolitos secundarios
conocidos o supuestos formados a
través de una vía de Ca (ver Fig. 4).
Algunos ejemplos de su ocurrencia se
dan entre paréntesis. Las posiciones
conocidas o asumidas derivadas del C-
1 original (Cuadrito) y C-6 (Triangulito
jajaja lo siento César no supe poner
esas figuras en texto) del precursor de
glucosa están marcadas en los
pentitoles de trehazolina y alosamidina,
no se pueden dar sugerencias sin
Cualquier evidencia experimental
directa.

Para un análisis sistemático de las vías

involucradas, definimos aquí las
siguientes rutas generales mediante las
cuales se forman los bloques de

12
construcción de carbohidratos:

(1) la ruta de la 6-desoxihexosa (6DOH);

(2) la pentosa piranosídica o furanosídica (P), hexosa (H), heptosa (Hep), octosa
(Oct) o la vía de hexosamina (HA);

(3) algunos residuos de glucosilo ((H),) posiblemente se incorporan mediante

transglicosilación de di- u oligosacáridos tales como maltodextrinas, especialmente
cuando se encuentran restos de glucosa o maltosa unidos a 4, 4

(4) los residuos de separación no derivados de carbohidratos no están

especificados (X).

Por lo tanto, para los propósitos de la discusión aquí y para simplificar, se define
una "fórmula de ruta" para cada compuesto que contiene carbohidratos
considerado. La ruta postulada para la derivación de las estructuras mono y
oligosacáridas se da conectando las abreviaturas anteriores para las rutas
precursoras individuales donde las figuras entre paréntesis indican los puntos de
sustitución glucosídica (u otra). Por ejemplo, estreptomicina (Ca (4) -6DOH (2) -
HA) o
manosilmannosidostreptomic
ina (Ca (4) -6DOH (2) - HA
(4) - (H) J se clasificaría junto
con la espectinomicina (Ca
(4,5) -6DOH) y se separaría
de las neomicinas (HA- (4)
Cb (6) -P (3) -HA),
validamicinas (Cb (1) -Cb) y
amilostatinas ((H) ,, - (4) Cb
(l) -6DOH (l) (H) ,,) (consulte
la Sección 10 y la Tabla 1
para obtener una
compilación).

Figura 6 Estructuras de (amino-)

hexitoles y pentitoles o ácido benzoico
derivados en metabolitos secundarios
que se sabe o se supone que se
forman a través de una ruta Cb (Ver
ruta). Las posiciones conocidas o
asumidas derivadas de los C-1 o C-2
(Cuadrito) y C-6 o C-7 (Triangulito)
originales de los precursores de
glucosa o heptulosa (ácido
heptulosónico), respectivamente, están
etiquetados. 13
3.2.1 6-desoxi y otras desoxihexosas
La D-glucosa, un precursor de la mayoría o de todas las 6-desoxihexosas (6DOH)
en metabolitos secundarios formados por procariotas (similares a los antibióticos),
parece ser generalmente activada por el desoxitimidin difosfato (dTDP). La
catálisis de los dos primeros pasos en su camino se lleva a cabo mediante las
enzimas dTDP-D-glucosa sintetasa y dTDP-D-glucosa 4,6-deshidratatasa que
producen intermedios de 4-ceto-6-desoxihexosa (Fig. 7).

Los compuestos 4-ceto se pueden usar como un precursor común para ramificar
las vías adicionales en las series D y L de derivados de hexosa (Figs. 8 y 9).

Los L-6D0Hs se isomerizan a partir de los precursores configurados D por una

3,5-epimerasa (ver Fig. 7). En muchos casos, se siguen ambas rutas biosintéticas
en la misma célula productora. Con frecuencia, mediante tales rutas de
ramificación, se forman derivados D- y L-6DOH y se incorporan específicamente
en un producto final complejo particular, por ejemplo, macrólidos y algunas
anguciclinas. En los aminoglucósidos, los componentes 6DOH son relativamente
raros en comparación con el dominio y la variabilidad entre las cadenas laterales
modificadoras de azúcar en otras clases químicas de productos naturales
microbianos.

Figura 7 Vía general para la biosíntesis de 6-desoxihexosas. Los precursores

de la hexosa-1-fosfato son D-glucosa-1-fosfato o D-manosa-1-fosfato. P:
fosfato; NDP dTDP, CDP o GDP.
Tipos importantes e interesantes de modificaciones adicionales son (1) las
desoxigenaciones (formalmente: deshidroxilaciones) en C-2, C-3 y C-4, (2) las
transaminaciones (formalmente: intercambio de hidroxilo por grupos amino) en C-

14
2, C-3 y C-4, y (3) los pasos de isomerización y epi- merización. Otros tipos de
modificaciones, como las metilaciones C, N, 0 y S o reacciones de transferencia
para grupos secundarios más complejos también son comunes en las vías 6DOH.
Aquí describimos brevemente solo el primer mecanismo; Las transaminaciones y
otros tipos de reacciones de isomerización (por ejemplo, epimerización) se
analizan a continuación. Un mecanismo para los pasos de desoxigenación fue
aclarado por los estudios recientes de la vía CDP-3,6-desoxihexosa (REEVES,
1993; SHNAITMAN y KLENA, 1993; THORSON et al. 1993; THOR-SON y LIU,
1993a, b ; LIU y THORSON, 1994). Esta es una ruta alternativa que produce
6DOHs que se usa abundantemente en bacterias gramnegativas además de la
ruta dTDP, por ejemplo, en la biosíntesis de cadenas 0 de lipopolisacárido. El
sistema enzimático implicado consiste en dos proteínas de azufre de hierro, una
de las cuales (El) cataliza la deshidratación dependiente de fosfato de
piridoxamina (PMP) de la 4-ceto-6-desoxi hexosa a través de un mecanismo
radical y formando una PMP unida covalentemente -hexosa intermedia (Fig. 10).
Los electrones para este proceso se entregan a través de una segunda enzima
(E2) que contiene FAD además del grupo [2Fe-2S] y usa NADH como donante de
electrones. Este tipo de mecanismo podría fácilmente verse también involucrado
en la 2-desoxigenación de muchos otros 6DOH en metabolitos secundarios, como
los constituyentes del azúcar en el grupo de antraciclinas daunorrubicina
cytorhodin-rodomicina o algunos de los 6DOH que ocurren en las cromomicinas (
cf. Figs. 8 y 9).

3.2.2 Otros componentes del azúcar

Como se describió anteriormente, los estudios de biogénesis en las primeras fases
de la investigación con antibióticos a menudo han sugerido engañosamente que la
D-glucosa, la D-glucosamina, el glicerol o las fuentes de carbono relacionadas se
incorporan directamente a los componentes del azúcar en los metabolitos
secundarios. En la mayoría de los casos, esto se interpretó como una indicación
de que las rutas regulares de activación de azúcar y procesamiento adicional se
adoptan a partir de 'rutas metabólicas primarias, por ejemplo, la vía UDP-
hexosamina en la biosíntesis de la pared celular bacteriana. Sin embargo, nuestro
rápido conocimiento de la extrema especificidad de los rasgos metabólicos
secundarios no respalda esta opinión. Se han encontrado modos inesperados de
activación de azúcar (p. Ej., Nucleotidilación por CTP en lugar de UTP), derivación
de 2-amino-hexosa a partir de precursores distintos a la D glucosamina, y se han
encontrado mecanismos desconocidos de modificación y condensación (algunos
ejemplos se dan a continuación; ver Secciones 4.1, 4.2 y 5.1). Algunas de las
rutas generales conocidas o hipotéticas para la biosíntesis de hexosaminas se
resumen en la figura 11; Debe enfatizarse que las 6-amino-6-desoxihexosas y las
2-amino-2-desoxihexosas también podrían formarse de la misma manera que los

15
3 y 4 isómeros y que la misma ruta principal también debería producir grupos
amino. - ing pentosas, heptosis y octosas. Una variación adicional puede provenir
de la etapa de transaminación, antes o después de la activación del azúcar por
nucleotidilación o incluso después de la condensación en moléculas complejas.

Varios de los inusuales derivados de azúcar C-5 a C-9 que se encuentran en

muchos grupos de productos microbianos se encuentran en los metabolitos
secundarios relacionados con aminoglucósidos y otros microbianos. Algunos
ejemplos comprenden 2 o 3 pentosaminas piranosídicas (p. Ej., En seldomicinas y
gentamicinas, respectivamente; cf. Fig. A14 y A17), 2-desoxihexosas (p. Ej., I
citosaminomicinas; ver Fig. A27), 3-desoxihexosaminas. (p. ej., en lividomicinas;
Fig. Todas), 4-desoxihexosaminas (p. ej., en seldomicinas; ver Fig. A17), L-
hexosas (p. ej., L-manosa en desertomicina; no se muestra) y L-hexosaminas (p.
ej. , en estreptomicina; ver Sección 4.1 y Fig. Al). Es probable que estos restos
estén todos activados y modificados a través de intermedios nucleotidilados. Sin
embargo, se cree que las glucosilaciones y las manosilación simples incluyen
UDP-D glucosa y GDP-D-manosa, respectivamente. Las pentosas furanosídicas,
como la ribosa (p. Ej., En neomicinas; véase la Fig. Todas) o restos de
arabosaosa (p. Ej., En antibióticos nucleósidos), pueden introducirse a partir de 5-
fosfori-bosil-1-difosfato (PRPP) como activado precursores o, nuevamente, a
través de un mecanismo desconocido de activación y transferencia. Las
reacciones de deshidroxilación de las piranosidichexosas (que no sean 6DOH) en
las posiciones C-2, C-3 y C-4 son especialmente interesantes desde un punto de
vista mecanicista. Se conocen varios ejemplos en aminoglucósidos (ver, por
ejemplo, la discusión en la Sección 4.2 sobre el grupo fortimicina) y otros restos
derivados de hexosa en muchos grupos químicos de metabolitos secundarios
compuestos heterogéneamente.

4 Genética y bioquímica de la biosíntesis y funciones de los

aminoglucósidos
Los aminoglucósidos son en gran medida productos de actinomicetos, aunque se
conocen casos raros en otros grupos bacterianos (p. Ej., Bacillus circulans que
produce butirosina, sorbistina en pseudomonads y N metil-scil-inosamina en
rizobia; ver Fig. 1). La producción de aminoglucósidos es principalmente una
propiedad de los miembros de los géneros de actinomicetos filamentosos
Streptomyces spp., Streptoverticillium spp., Y Saccharopolyspora spp., Y de
Micromono-spora spp., Amycolatopsis spp., Y Actinoplanes sp. (WILLIAMS et al.,
1989). La biología, la bioquímica, el modo de acción, la biotecnología y las
aplicaciones clínicas de los antibióticos aminoglucósidos además de la resistencia
a los aminoglucósidos se han revisado con frecuencia (por ejemplo, KORZYBSKI

16
et al., 1978). Investigaciones recientes se han concentrado principalmente en la
biología molecular de la resistencia a aminoglucósidos clínicamente relevante y los
aspectos moleculares de la biosíntesis, resistencia y regulación de aminociclitol
aminoglucósidos en los organismos productores (principalmente con respecto a
estreptomicinas y fortimicinas; ver Sectas 4.1 y 4.2). Durante la última década, la
modificación semisinética, los nuevos métodos de detección y los nuevos campos
de aplicación han dado como resultado el descubrimiento de varios nuevos
estructuras de aminoglucósidos y, al menos en un caso, en la introducción al uso
farmacéutico. Este capítulo se centrará principalmente en los últimos aspectos.

17
18
Figura 8 Variantes estructurales de D-6-desoxihexosas (D-6DOH)
encontradas en metabolitos secundarios. Ejemplos de su ocurrencia en
productos naturales particulares se dan entre paréntesis

19
20
21
Figura 9 Variantes estructurales de L-6-desoxihexosas (L-6DOH)
encontradas en metabolitos secundarios. Ejemplos de su ocurrencia en
productos naturales particulares se dan entre paréntesis.

Figura 10 Fig. 10. Mecanismo de 3-deshidroxilación en la vía de 3,6-di-

desoxihexosa de bacterias gramnegativas. El: dependiente de PMP,

22
deshidrasa que contiene [2Fe-2S] (tipo AscCIRfbH); E2: NADH-dependiente,
FAD / [2Fe-2S] que contiene la síntesis (para detalles, ver LIU y THORSON,
1994).

Figura 11 Esquema general para la derivación de hexosas y pentosas con 2,

3 o 4 aminas. Además, las 2 y 6-aminohexosas (HA), las 2 aminopentosas
(PA) o las aminoheptosis y las aminooctosas podrían formarse en sus
formas furanosídicas o piranosídicas a través de la vía de oxidación y
transaminación.

23
4.1 Streptomycins y Ca Aminogl ycosides relacionados
Las estreptomicinas y la bluensomicina son un grupo relativamente homogéneo de
aminoglucósidos pseudotrisacáridos básicos (Fig. Al) que pueden alargarse con
uno o dos residuos glucosídicos adicionales (manosilo o ashimosilo; IKEDA y
otros, 1985a; TOHMA y otros, 1989). o escindirse en dos derivados de hexosa
como en AC4437 (dihidrostreptosil-estreptidina; AWATA et al., 1986). Los
compuestos de este grupo son producidos por una amplia gama de especies
(KORZYBSKI et al., 1978). Se han encontrado en los géneros Streptomyces,
Streptoverticillium, Amycolatopsis, y pueden estar presentes en otros. Una
encuesta de cepas productoras de estreptomicina de colecciones y un estudio
taxonómico de nuevos aislamientos que se inició recientemente (PHILLIPS et al.,
1992; MARSH y WELLINGTON1, 994) indicaron que pueden agruparse
principalmente en tres grupos dentro de familia de Streptomycetaceae. Estos
grupos están representados por S. griseus, S. hygro- scopicus y Streptoverticillium
mashuense.

Por lo tanto, la taxonomía actualmente aceptada de la familia Streptomycetaceae

(WILLIAMS et al., 1989; EMBLEY y STACKEBRANDT, 1994) asigna esas
especies productoras de estreptomicina que se han investigado en detalle a
grupos de especies claramente separadas. Recientemente, este punto de vista se
confirmó y amplió mediante la secuenciación de los genes de ARNr 16s de varios
productores de estreptomicina (MEHLING et al., 1995). Al igual que con otros
metabolitos secundarios, se desconoce la razón de esta distribución
taxonómicamente dispersa pero relativamente estable en cepas individuales en
todo el mundo.

4.1.1 Estreptomicinas
La biosíntesis de estreptomicinas, incluida la bluensomicina, se estudió
intensamente mediante la alimentación de precursores metabólicos primarios
etiquetados (DEMAIN e INAMINE1,9 70 MUNROe t al., 1975) y el análisis de las
reacciones biosintéticas de estreptomicina en sistemas libres de células y con
células purificadas. enzimas biosintéticas (WALKER, 1975a, b; GRISEBACH,
1978; RINEHART, 1980). Aunque no se han aclarado todas las reacciones
biosintéticas, se sabe que los compuestos de la familia de la estreptomicina se
sintetizan mediante 25-30 pasos catalizados por enzimas (WALKER, 1975a;
RINEHART y STRO-SHANE, 1976; GRISEBACH, 1978; RINEHART, 1980;
OKUDA e ITO, 1982; PIEPERSBERG, 1995). Las vías de biosíntesis de
estreptomicina y bluensomicina actualmente hipotetizadas se resumen en la Fig.
12. Implican la formación de los precursores activados, estreptidina (bluensidina) -
6-fosfato (cf. Sección 4.1.1.1), dTDP-dihidrostreptosa ( cf. Sect. 4.1.1.2), y NDP-N
(metil) -L-glucosamina (cf. Sect. 4.1.1.3) que están hechos más probablemente de

24
~ -glucosa-6-fosfato. Sin embargo, se ha demostrado que la D-glucosamina se
puede incorporar sin romper sus enlaces C-C en la subunidad N-metil-L-
glucosamina de estreptomicina (revisado por OKUDA e ITO, 1982). En una
segunda fase, los precursores se condensan formando fosfato de dihidro
estreptomicind (véase la sección 4.1.1.4) que se secreta y probablemente se oxida
mientras pasa a través de la membrana citoplasmática para dar estreptomicina-6-
fosfato fuera de la célula ( cf. Sección 4.1.1.4). Las estreptomicinas biológicamente
activas se liberan finalmente por una fosfatasa específica (véase la sección
4.1.1.4), y después de la absorción pueden ser fosforiladas por una estreptomicina
6 fosfotransferasa que representa el mecanismo de resistencia que protege a los
productores de sus propios productos. (cf. Sección 4.5).

Figura 12 Esquema gerneral de la vía de estreptomicina (SM). Los tres

intermedios activados formados principalmente a partir de glucosa-6 fosfato
(G-6-P) se condensan en el citoplasma a dihidro-SM 6-fosfato (DHSM-6-P)
que se oxida y desfosforila a SM durante o después del transporte a través
del membrana citoplasmática (CM).
mIP: fosfato de mioinositol; dTDPG: glucosa desoxitimidinifosfato de
glucosa; NDPG (A): nucleosidedifosfato-glucosa (o glucosamina) (NDP =
CDP o UDP).
Los estudios genéticos de la biosíntesis de estreptomicina en varios productores
comenzaron con la clonación de genes de resistencia (revisado en CUNDLIFFE,
1989; PIEPERSBERG, 1995). Inicialmente se clonaron dos genes, strA (aphD) y

25
aphE, que codifican dos estreptomicina fosfotransferasas diferentes, APH (6) y
APH (3 ”), respectivamente (WALKER, 1975b; WALKER y WALKER, 1975;
DISTLER y PIEPERSBERG, 1985 ; DISTLER et al., 1987a; HEINZEL et al., 1988).
Hasta ahora, solo el gen strA podría estar localizado en los grupos de genes de
producción de S. griseus y S. gfuucescens GLA 0. Sin embargo, el gen aphE solo
se produce en las cepas de S. griseus y no aparece en estar vinculado al grupo de
strlsts. Posteriormente, se identificaron más genes biosintéticos de estreptomicina
mediante el desplazamiento cromosómico y la complementación genética de
mutantes de diferentes cepas de S. griseus deficientes en biosíntesis de
estreptomicina (DISTLER et al., 1985; OHNUKI et al., 1985a, b). Alrededor de 30
genes para la producción de (5 '-hidroxi-) estreptomicina (strlsts) y bluensomicina
(bfu) se han clonado y analizado de varias cepas de S. griseus, de S. gfuucescens
GLA.0 (ETH 22794) y de otros Strepto - myces spp., y se encontró que todos
estaban agrupados en una región de aproximadamente 3040 kb de ADN
genómico (Tab. 2; Fig. 13; MANSOURI et al., 1989; DISTLER et al., 1990, 1992;
RETZLAFF et al. ., 1993; PIEPERSBERG, 1995). La comparación de las
estructuras primarias de los genes strl sts homólogos y sus productos génicos en
S. griseus y S. gfuucescens revelaron valores de identidad que variaban entre
58% y 86%. En contraste, las secciones de ADN intercistrónicas no codificantes
correspondientes tienen una homología significativa mucho menor o nula. El orden
de los genes strlsts identificados hasta ahora dentro de los operones respectivos
es similar, aunque la disposición de los operones difiere considerablemente entre
las especies productoras. Por lo general, los genes que codifican las enzimas para
la síntesis de una subunidad de estreptomicina (por ejemplo, estreptidina) no
están organizados en operones específicos de la vía secundaria. En cambio,
generalmente se encuentran operones mixtos que pueden reflejar la necesidad de
una regulación estrictamente coordinada de la expresión del gen strlsts para
garantizar un suministro coordinado de los precursores activados en la síntesis de
estreptomicina. Los fenómenos implicados en la regulación genética de la
biosíntesis de estreptomicina se analizan a continuación (véase la sección 4.6).

4.1.1.1 Biosíntesis de estreptidina y bluensidina

WALKERe t al evaluó la bioquímica de los once pasos involucrados en la síntesis
de estreptidina. (WALKER, 1975a, 1990) por medio de la enzimología y condujo a
la vía propuesta descrita en la Fig. 14. El paso inicial es la formación de ~ -yoyo
inositol-3-fosfato a partir de D-glucosa-1-fosfato a través de la ruta del Ca (cf. Sec.
3.1) por una sintasa de fosfato de mioinositol dependiente de ATP (WALKER,
1975a; SIPOS y SZABO, 1989). Hasta ahora, no se pudo identificar ningún gen
strlsts que codifique la mioinositol sintetasa. También fracasaron los intentos de
purificar la enzima debido a su inestabilidad (SIPOS y SZABO, 1989). El producto
final es estreptidina (SD) d-fosfato, que también parece ser el primer intermedio

26
hecho de SD suministrado externamente en SD-mutantes (OH-NUKI et al., 1985a,
b; DISTLER et al., 1985). El SD-6-fosfato se sintetiza mediante dos conjuntos de
cinco reacciones enzimáticas paralelas, cada una de las cuales se cataliza
presumiblemente por enzimas individuales: dos fosfatos fosfatosas de ciclitol, dos
deshidrogenasas ciclitol, dos aminotransferasas, dos fosfotransferasas y dos
amidinotransferasas en productores de estreptomicina (cf. Tab.2, Fig.14).

En contraste con esto, el productor de bluensomicina S. hygroscopicus forma

gfebosus carece de los pasos 8 a 11 (ver Fig. 14; WALKER, 1990) que son
reemplazados por reacciones de carbamoilación y fosforilación en las posiciones 5
y 4, respectivamente, produciendo fosfato azulado. - fato (ver Fig. 15). El producto
del gen strO tiene una similitud significativa con las fosfatasas de
inositolmonofosfato eucariotas (RETZ-LAFF et al., 1993). Por lo tanto, se supone
que esta proteína es la enzima que cataliza el paso 2 en la vía de la estreptidina
(RETZLAFF et al., 1993; ver Fig. 14). Las proteínas StrI y StsB son claramente
miembros de la clase oxidorreductasa con un sitio de unión a la coenzima
dinucleótido N-terminal (MANSOURI y PIE-PERSBERG, 1991). Por lo tanto, son
buenos candidatos para las oxi-doreductasas de cicitol del paso 3 y -8 que forman
los grupos ceto que preceden a los dos pasos de transaminación (ver Fig. 14).

La proteína StrI se asemeja significativamente a la enzima mioinositol-2

deshidrogenasa de Bacillus subtilis (EUJITA et al., 1992) y es la enzima que
cataliza el primer paso de deshidrogenación del ciclitol (J. AHLERT, W.
PIEPERSBERG; datos no publicados). La proteína StsC es la amilotransferasa de
la silo-inososa y cataliza la transferencia del grupo a-amino de la glutamina a la
silo-inosamina y la a-cetoglutar- amato que produce la silo-inososa, una reacción
de transaminación inusual en las células bacterianas (véase el paso 4 en la Fig.
14; WALKER, 1975a; LUCHER et al., 1989; J. AHLERT, J. DISTLER y W.
PIEPERSBERG, datos no publicados). Esta enzima, como los productos del gen
strlsts StrS y StsA, es miembro de una nueva clase de de aminotransferasas
dependientes de piridoxalfosfato (PLP), las llamadas aminotransferasas
metabólicas secundarias (SMAT). Varios otros aminotransferencias biosintéticos
antibióticos (ver la compilación y discusión en PIEPERSBERG, 1994), la proteína
MosB de Rhizobium meliloti involucrada en el metabolismo de la metil-silo-
inosamina L-3-0 (MUR-PHY et al., 1993), y el enzima El dependiente de PMP que
cataliza la 3-deshidroxilación durante la formación de 3,6-didesoxihexosas en la
biosíntesis de LPS bacteriana gramnegativa (THORSON et al., 1993; LIU y
THORSON, 1994) pertenecen al SMAT familia de proteínas Por lo tanto, parece
obvio que uno de los genes, ya sea sfsA o strS, codifica la N-am-indino-scil-
inosamina L-alanina amino-transferasa, la segunda transaminasa necesaria para
la formación de estreptidina-6-fosfato (cf. Fig.14, paso 9). Alternativamente, una de

27
las enzimas SMAT restantes, StrS o StsA, puede estar involucrada como una
enzima biosintética en la síntesis de la subunidad NDP-N-metil-L-glucosamina
(NMLGA) (véase la sección 4.1.1.3). Las enzimas que catalizan el
fosfotransferencia (véanse los Pasos 5 y 10, Fig. 14) parecen ser proteínas StrN o
StsE. Aunque esta función aún no ha sido probada por ensayos in vitro de las
enzimas expresadas individualmente, hay mucha evidencia de esta suposición.
Ambas proteínas contienen en su porción C terminal los motivos característicos
característicos que son típicos para las fosfotransferasas de amiglucósidos y las
proteínas quinasas eucarióticas (véase la sección 4.5; PIEPERS-BERG et al.,
1988; HEINZEL et al. , 1988). Recientemente, se encontró un gen homólogo a
strN en un fragmento de ADN de S. flavopersicus, que confiere resistencia a la
espectinomicina a S. lividans (J. ALTENBUCHNEaRn d D. LYUTZ-KANOVA,
datos no publicados; ver más abajo Sección 4.1.2) . Además, se detectó una
actividad de fosforilación de espectinomicina en esta cepa recombinante de S.
lividans (J. DISTLER, J. ALTEN BUCHNER y D. LYUTZKANOVA, datos no
publicados). Estos hallazgos apoyan la suposición de que sfrN codifica una
fosfotransferasa. Se identificaron dos genes estrechamente relacionados, strBI y
strB2, que codifican la amidinotransferasa que participa en la biosíntesis del resto
de estreptidina (OHNUKeIt al., 1985a, b; DISTLER et al., 1987b; TOHYAMA et al.,
1987; MAYERe t al., 1988

Ambas amidinotransferasas de S. griseus clonadas en S. lividuns fueron activas

en un ensayo no específico que no diferenciaba entre el primer y el segundo paso
de transamidinación (OHNUKI et al., 1985a, b; DISTLER et al., 1987b; TOHYAMA
et al. ., 1987; S. EHRIG-FRANTZKE, y W. PIEPERSBERGu, datos publicados).
Dado que las enzimas codificadas por los genes clonados aún no se han probado
con sus sustratos postulados (WALKER, 1975a, véanse los pasos 6 y 11, Fig. 14)
sigue siendo incierto si los supuestos con respecto a sus funciones (cf. StrB1,
paso 6, StrB2, paso 11, Fig. 14) son correctos (PISSOWOTZKI et al., 1991) o si
StrBl lleva a cabo ambos pasos (OHNUKI et al., 1985b). El último es respaldado
por el sorprendente hallazgo de que los extractos de S. bluensis parecían contener
ambas actividades enzimáticas, aunque solo StrB1 se usa en la vía de la
bluesidina (WALKER, 1990) y solo el gen strB1 podría detectarse mediante la
hibridación en dos productores de bluensomicina, S. bluensis DSM 40564 y S.
hygroscopicus ssp. glebosus DSM 40823 (cf. Fig. 13; G. MAYER, A. MEHLINGa,
nd W. PIEPERSBERG, datos no publicados).

28
29
30
31
Figura 13 Agrupaciones de genes para la producción de estreptomicinas
(SM) y los aminoglucósidos de Ca, bluensomicina (BM) y espectinomicina
(SP) relacionados. Los productores de estreptomicetos investigados más
intensamente son las cepas de S. griseus (Sgr) N2-3-11 y DSM40236, S.
glaucescens (Sgl) GLA.0 (ETH 22794), S. bluensis (Sbl) DSM40564 y S. flavo -
persicus (Sfl) NRRL 2820. Se proporcionan mapas de restricción para
algunas enzimas para orientación; los grupos se alinean de acuerdo con sus
genes de amidinotransferasa [strB (l)] homólogos.

Figura 14 Las vías estreptidina y bluensidina. Los pasos enzimáticos están

numerados; cuando se sabe o se postula que un producto genético particular está
involucrado, esto se da (ver Tab. 2 y Fig. 13). Los intermedios conocidos o postulados
(numerados entre paréntesis) son (1) ~ -yoyo-inositol-3-fosfato, (2) mioinositol, (3) silo-
inososa, (4) silo-inososamina, (5) silo-inososamina- 4-fosfato, (6) N 'amidino-scyllo-
inososamine- 4-fosfato, (7) N'-amidino-scyllo inososamine, (8) 3-keto-N1-amidino-
scyllo-inososamine, (9) N' amidi- no-estreptamina, (10) N1-amidino-estreptamina-6-
fosfato (7a) bluensidina; P: residuos de fosfato.

32
Figura 15 La vía dTDP-dihidrostreptosa. Para el sistema de numeración y
etiquetado, vea la leyenda de la Fig. 14; los intermedios son (12) D glucosa-1-
fosfato, (13) dTDP-D-glucosa, (14) dTDP-4-ceto-6 desoxi- ~ -glucosa, (15)
dTDP-4-ceto- ~ -ramnosa
4.1.1.2 La vía de la L-dihidrostreptosa
GRISEBACH (1978) postuló una ruta para dTDP-L dihidrostreptosa similar a la
que conduce a L-ramnosa activada en bacterias gramnegativas: activación de D-
glucosa en forma de dTDP D-glucosa (paso 12, Fig. 15), deshidratación a dTDP-4-
ceto-6 desoxiglucosa (paso 13), epimerización a dTDP-4-ceto- ~ ramnosa (paso
14), y reducción acoplada a un reordenamiento de la cadena de carbono hexosa
que produce dTDP-L-dihidrostreptosa (paso 15). Las 4 enzimas que catalizan la
síntesis de dTDP-L-dihidrostreptosa están codificadas por los genes strD, strE,
strM y strL (ver Tab. 2 y Fig. 14; DISTLER et al., 1987b).

La evidencia que lo respalda es el alto nivel de homología que comparten con los
genes respectivos que codifican las enzimas de biosíntesis de L-ramnosa en
salmonellae, rfbA, B, C, D y su actividad en Escherichiu coli (REEVES, 1993;
PIEPERSBERG , 1994; S. VERSECK y W. PIEPERSBERG, datos no publicados).
StrD está relacionado con NDP-hexosa sintasas (pirofosforilasas) (DISTLER et al.,
1987b). Los genes similares a todo o parte del grupo strDELM están presentes en
muchos otros grupos de genes que codifican enzimas para la producción de
metabolitos secundarios de estreptomicetos que contienen un resto de azúcar
6DOH (PIEPERSBERG, 1994; LIU y THORSON, 1994; VINING y STUT-TARD ,
1994). En un examen de las cepas de estreptomicetos, más de 50 de las cuales
produjeron 6 metabolitos secundarios que contenían desoxihexosa, la mayoría
parecía poseer genes que se hibridan con strD, E (L, M (STOCKMANaNn d
PIEPERSBERG, 1992). Por lo tanto, esta parte de la El grupo de genes str parece
estar muy extendido entre los estreptomicetos productores de antibióticos y otros
grupos bacterianos (ver Secciones 5.3 y 6). WOTZKI et al., 1991; PIEPERSBERG,
1994).

33
4.1.1.3 Vía de hexosamina
La síntesis del tercer resto de estreptomicina, N-metil-L-glucosamina (NMLGA)
(activada por NDP), se ha estudiado intensamente. Se han postulado varias vías
especulativas, incluida la nucleotidilación, la desacetilación de uno de los
intermedios (si se forman UDP-N-acetil-hexosaminas) y al menos tres pasos de
epimerización, uno de los cuales podría dividirse en etapas separadas de
oxidación y reducción en C -4 de la hexoseamina, seguido de N-metilación. El
precursor directo aún se desconoce, pero podría ser D-glucosa-1-fosfato, D
glucosam-he-1-fosfato, N-acetilm-glucosamina-1-fosfato o N-metil-D-glucosamina
(S. BEYER y W. PIEPERSBERG, datos no publicados). Además, las estructuras
publicadas, hexosaminas activadas por UDP y fosforiladas (HIROSE-KUMAGAI et
al., 1982; KUMADA et al., 1986), de intermedios putativos de la vía V-metil-L
glucosamina (NMLGA) que se acumularon en el el tipo salvaje y en un mutante
bloqueado en la ruta NMLGA no puede explicarse por la ruta actualmente
postulada. Otro problema no resuelto es la formación del grupo N-metilo en N
metil-L-glucosamina que podría introducirse al nivel de D glucosamina o más tarde
en la vía, quizás incluso después de la condensación de los tres restos de
estreptomicina (OKUDA e ITO, 1982, op. Lit.).

Existe evidencia indirecta de que los genes strPQX, aislados y secuenciados a

partir de S. glucecescens, strFG y stsG, analizados a partir de S. grises, están
involucrados en la vía de N-metil-L-glucosamina (MANSOURI y PIEPERS - BERG,
1991; J. AHLERT, G. MAYER, S. BAYER y W. PIEPERSBERGu, datos no
publicados). StrQ es una pirofosforilasa de CDP-D-glucosa que podría catalizar el
paso de activación de la vía de N-metil-L-glucosamina (Fig. 16, paso 16; S.
BAYER y W. PIEPERSBERG, datos no publicados). La proteína StrP comparte un
mayor grado de similitud con UDP-glucosa 4 epimerasas que con NDP-hexosa
4,6-deshidratasas, que están relacionadas de forma distante y, por lo tanto, podría
ser una deshidrogenasa C-4 (o epimerasa; Fig. 16, pasos 17,19,18a, o 20) para
derivados de NDP-hexosa (PISSOWOTZKI et al., 1991). Alternativamente, StrP
podría ser una oxido-reductasa, introduciendo un grupo ceto en C-2 de una
hexosa activada por CDP (Fig. 16, paso 20). Este podría ser el sustrato de una
amiotransferasa, codificada por strS o stsA, STROSHANE que introduce el grupo
2-amino (Fig. 16, paso 21).

34
Figura 16 La vía NDP-N-metil-L-glucosamina (NMLGA). Para el sistema de
numeración y etiquetado, consulte la leyenda de la Fig. 14. La ruta exacta de
formación de NMLGA es desconocida y podría proceder a través de CDP-
glucosa (A) o un derivado desconocido de NDP-D glucosamina (B) como
precursores (para detalles, ver texto). Los posibles intermedios en (A) son
(16) D-glucosa-1-fosfato, (17) CDP-D glucosa, (18) CDP-4-ceto-D-glucosa, (19)
CDP-4-ceto- ~ - manosa, (20) CDP-L-manosa, (21) CDP-2-ceto- ~ -glucosa,
(22) CDP-L glucosamina; posibles intermedios en (B) son (16a) NDP-D
glucosamina, (17a) NDP-N-metil-D-glucosamina, (18a) NDP-N metil-D-
manosamina, (19a) NDP-4-ceto -N-metil- ~ manosamina, (20a) NDP- 4-ceto-N-
metil- ~ -glucosam
Los genes strFG se mapearon en una región que complementaba un mutante
bloqueado en la ruta de N-metil-L-glucosamina. Las comparaciones de proteínas
sugieren que tanto StrF como StrG podrían ser miembros del grupo de las
isomerasas (o epimerasas) de azúcar independientes de dinucleótidos (no
oxidorreductasa) e incluso podrían formar una enzima heterodimérica
(MANSOURI y PIEPERSBERG, 1991). Un candidato para una 35-epimerasa (Fig.
16, pasos 18 y 19a) en la ruta de la N-metil-L-glucosamina es StrX debido a su
similitud significativa con otras 35-epimerasas como StrM (ver sección 4.1. 1.2; S.

35
BEYER y W. PIEPERSBERG, datos no publicados). La proteína StsG tiene tres
motivos conservados que generalmente se encuentran en metiltransferasas.

Por lo tanto, stsG podría codificar la N-metiltransferasa necesaria para la

formación de estreptomicina (Fig. 16, pasos 22 y 16a). En base a estos datos
genéticos, se pueden proponer las siguientes rutas para la síntesis de N-metil-L-
glucosamina, entre varias otras posibilidades:

(1) activación de CDP de D-glucosa-1-fosfato (StrQ), epimerización y

oxidorreducción seguido de una transaminación y N-metilación que produce CDP-
L-glucosamina (Fig. 16A);

(2) activación y modificación de D-glucosamina (o un derivado de la misma) que

explicaría las observaciones anteriores de que la D-glucosamina se incorpora
preferentemente a la N-metil-L-glucosamina (Fig. 16B) ( OKUDA e ITO, 1982;
KUMADA et al., 1986).

Sin embargo, la secuencia de pasos enzimáticos o las reacciones aún

desconocidas siguen siendo aún más especulativas. En correspondencia con las
reacciones de cicloritol transaminasa del ciclitol, también se podría involucrar una
fosfotransferasa adicional en la ruta de N-metil-L-glucosamina que forma la NDP-
hexosamina identificada y fosforilada adicionalmente (HIROSE-Ku-MAGAI et al. ,
1982; KUMADA et al., 1986).

4.1.1.4 Condensación de subunidades, procesamiento y exportación

La condensación de los precursores activados requiere dos etapas de
glicosiltransferasa que son catalizadas por dos enzimas localizadas en la fracción
citoplasmática soluble que produce dihidro estreptomicina-6-fosfato, que es el
último intermediario soluble detectado dentro de las células productoras (KNIEP y
GRISEBACH, 1976, 1980). La transferencia de dihidrostreptosilo se purificó
parcialmente y se encontró que era una enzima dimérica (KNIEP y GRISEBACH,
1980) con un probable peso molecular de la subunidad de 35 kDa. La evidencia de
que el gen strH podría ser uno de los dos genes necesarios para las
transferencias de glicosil es débil (OHNUKI et al., 1985a, b; MANSOURI y
PIEPERSBERG, 1991). El producto de condensación dihidro estreptomicina-6-
fosfato se convierte, probablemente junto con el transporte activo, en
estreptomicina-6-fosfato mediante una deshidrogenasa asociada a la membrana
(paso 26, Fig. 17; MAIER y GRI-SEBACH. 1979). Las proteínas codificadas por
strVW y strU detectadas recientemente en S. glaucescens y S. griseus
(PIEPERSBERG, 1994; BEYER et al., 1996) pueden formar este complejo de
transporte / deshidrogenasa unido a la membrana. La proteína StrU tiene una
similitud significativa con las deshidrogenasas oxidantes del grupo hidroxilo
alcohólico, y los productos del gen strV (W) representan un nuevo miembro de la
36
familia de los llamados transportadores ABC (BEYER et al., 1996 ) sugiriendo que
podrían participar en la oxidación y exportación de dihidro-estreptomicina-6-
fosfato. Sin embargo, StrU es claramente un miembro de la familia de
deshidrogenasa dependiente de la coenzima dinucleótida y no contiene ningún
dominio transmembranario ni sitios de asociación de membrana. Por lo tanto, la
participación sugerida de StrU en la oxidación de la dihidrostreptomía-cin-6-fosfato
no se correlaciona fácilmente con los hallazgos anteriores del grupo de H.
GRISEBACH (MAIER y GRISEBACH, 1979) que este óxido está en la fracción de
partículas (membrana) y no requiere la adición de un aceptador de electrones
como NAD (P) +. Sin embargo, estos fenómenos podrían explicarse por una
formación hipotética de complejo oxidasa / exportador entre la proteína StrU y el
dominio citoplasmático del complejo transmembránico StrU / W y una coenzima
dinucleótida fuertemente unida en StrU. Esto también explicaría el acoplamiento
de los pasos de oxidación y transporte que han sido interpretados como una
unidad funcional (MAIER y GRISE-BACH, 1979). Una especulación atractiva
podría ser que la oxidación está acoplada tanto a la exportación impulsada por
ATP de un aminoglucósido fosforilado como a un transporte de electrones unido a
la membrana.

La desfosforilación final para liberar el antibiótico biológicamente activo es

catalizada por StrK, una fosfatasa extracelular específica de estreptomicina-6-
fosfato (paso 27, Fig. 17; WALKER, 1975a; MANSOURIA y PIEPERS-BERG,
1991). Los productos génicos de los genes strK de S. griseus y S. glaucescens
(orfZ de VOGTLI y HOTTER, 1987) son altamente homólogos a la fosfatasa
alcalina (PhoA) de E. coli (MANSOURI y PIEPERSBERG, 1991). Las propiedades
del fosfato StrK de S. griseus cuando se expresa en S. lividans son similares a las
informadas anteriormente para la estreptomicina fosfato fosfatasa (WALKER y
SKORVAGA, 1973; WALKER, 1975a; MANSOURI y PIEPERSBERG, 1991). Cada
uno de los cinco pasos (dos transferencias de glicosil, deshidrogenación, reacción
de fosfatasa y transporte) debe tener un equivalente en los productores de 5 '-
hidroxi-estreptomicina y, a excepción de la deshidrogenación, también en la
dihidroestreptomicina y bluensomicina productores (cf. Fig. Al). La reacción de
hidroxilación en 5 'que forma derivados de hidroxi en 5' de estreptomicinas aún es
oscura. Podría tener lugar mediante una reacción de hidroxilasa durante la
liberación en la membrana citoplasmática o en la etapa de la dTDP-hexosa. Sin
embargo, parece poco probable que el grupo 6-hidroxi original de D-glucosa
permanezca en los intermedios ya que los siguientes pasos requerirían enzimas
con especificidad de sustrato alterada o incluso mecanismos de reacción
alterados. D-manosilación en la posición 4 de la N-metil-L-glucosamina la fracción
ocurre en algunos biovares productores de estreptomicina de S. griseus. Esto
parece ser una reacción periférica inespecífica en lugar de un paso integral en la

37
ruta biosintética, ya que en las mismas cepas se forma un manosidohidrolizado
bajo el agotamiento del catabolito de carbono (INAMINE y DEMAIN, 1975). Más
tarde, también se detectó un producto dimannosilado en cepas de S. griseus
(IKEDA et al., 1985a), además de las modificaciones del grupo amino N-metil-L-
glucosamina como en las ashimicinas producidas por S. griseus FT3-4 ( TOHMA
et al., 1989). Además, los productos finales pseudodisacáridos de la familia de
estreptomicina que carecen del resto N-metil-L-glucosamina tienen actividad
antibiótica y se presentan como productos naturales en las fermentaciones de
Streptomyces sp. cepa AC4437 (AWATA et al., 1986).

38
Figura 17

39
4.1.2 Estreptomicina relacionada con los Aminogl ycósidos de Ca
Espectinomicinas (actinospectacina). La molécula de espectinomicina (ver Fig. A2)
está compuesta de dos derivados de hexosa condensados dobles, un mioinositol y
un derivado 6DOH (actinospectosa, una 4,6-didesoxihexosa; cf. Fig. 8), y, por lo
tanto, es un compuesto de Ca (4,5) -6DOH como lo es la
dihidroestreptosilstreptidina (AC4437) producida por algunos estreptomicetos
(AWATA et al., 1986). La incorporación de glucosa marcada con isótopos
radiactivos y estables en ambos restos claramente apoya esta interpretación
(OTSUKA et al., 1980). Sin embargo, no se han informado más estudios
bioquímicos sobre la vía, a excepción de la reciente demostración en un productor
de espectomicina de una L-g1utamina: escifosinosa aminotransferasa similar a la
encontrada en los productores de estreptomicina (cf. Sect. 4.1.1.1; WALKER,
1995). Recientemente, se clonó un segmento de ADN que confiere resistencia a la
espectinomicina (3,65 kb) del productor de espectinomicina S. flawpersicus NRRL
2820 (J. AL-TENBUCHNER y D. LYUTZKANOVA, comunicación personal). La
secuencia de ADN sugirió que se derivaba de un grupo de genes de
estreptomicina reordenado y degenerado ya que mostraba una sorprendente
similitud con tres genes, strBl, strR y strN en los respectivos grupos de S. griseus y
S. gfaucescenso (cf. Fig. 14). El gen relacionado con strB2 se elimina y su
producto proteico truncado (80 aa) es ciertamente no funcional. La eliminación
probablemente estuvo acompañada o precedida por una inserción de un elemento
IS similar a IS112, parte del cual se ha retenido. Además, el patrón de similitud
entre los marcos de lectura es desconcertante: el producto del gen relacionado
con strB2 muestra 83.8% y 92.5%, el producto del gen relacionado con strR 45.9%
y 47.5%, y el producto de strN- gen relacionado 29.5% y 29.4% de identidad con
las proteínas StrB1, StrR y StrN, respectivamente, de S. griseus y S. gfaucescens.
Todavía no se sabe si hay otros genes de producción de espectinomicina
adyacentes a este grupo. Sin embargo, este hallazgo respalda firmemente la
hipótesis de que un grupo de genes de producción ancestral para aminoglucósidos
similares a la estreptomicina podría haberse desarrollado en otra variante por
evolución divergente después de la degeneración, modificación y, más tarde,
recombinación frecuente con un grupo de genes strlsts intactos creando así una
nueva vía que produce productos finales más simples pero efectivos. Más
recientemente, se ha descrito un nuevo derivado de la espectinomicina, la
espenolimicina (Fig. A3) (KARWOWSKI et al., 1984). Su resto 6DOH se altera
porque la posición 3 'contiene un grupo oximetilo y el enlace C-3' 14 'es
insaturado, lo que recuerda las modificaciones que ocurren en otros residuos
6DOH, por ejemplo, en antraciclinas (ver Figs. 8 y 9 y sección 5.3).

Kasugamycins. No se ha realizado mucho trabajo para dilucidar la vía bioquímica

para la producción de kasugamicina (Fig. A4) y compuestos relacionados de Ca

40
(4) -6DOH (minosaminomicina; Fig. A5). Sin embargo, es razonable postular vías
similares a la estreptomicina también para estos aminoglucósidos. Los ciclitoles se
derivan claramente de mioinositol. Sin embargo, el postulado de UMEZA-WA et al.
(1986) que el resto 6DOH kasugamina podría derivarse de UDP-N-acetil-D-
glucosamina parece poco probable en vista de lo que se ha aprendido de la vía de
estreptomicina y de otras vías 6DOH o hexosamina en el pasado reciente. Más
bien, parece probable que se utilice una ruta biosintética dTDP- o CDP-hexosa, ya
que el producto final es un derivado de 2,3,4,6-tetradesoxi-2,4-diaminohexosa (cf.
Sectas. 3.2.1 y 5.3).

Miomicina La miomicina, además de ser un posible compuesto Ca (4) -HA (Fig.

A8) modificado por un número variable de residuos de plilsilo, es otro producto
relacionado con la estreptomicina en el sentido de que contiene algunas
similitudes estructurales distantes con la bluensomicina, como grupos carbamoilo
en el resto de ciclitol además de un grupo guanidino (en el resto de hexosamina) y
aparentemente un modo de acción y sitio de unión que son idénticos a los de las
estreptomicinas (DAVIESe t al., 1988). Dado que estos aminoglucósidos son
producidos por nocardioformas (o corineformas; FRENCH et al., 1973) será
interesante ver si los genes relacionados con los genes strlsts conocidos en los
productores de estreptomicina o bluensomicina también están presentes en los
actinomicetos inferiores. Ejemplos de tales genes que se pueden encontrar en el
productor de miomicina son aquellos que codifican enzimas de las siguientes
familias (ver Tab. 2): amidinotransferasas (p. Ej., StrB1, StrB2),
carbamoiltransferasas (vía de la bluensomicina) y aquellas relacionadas con
algunas de las enzimas involucradas en la síntesis del ciclitol (p. ej., StrO, StrN) y
en otras partes de la vía, p. ej., activación, síntesis y transferencia del precursor de
3-amino-hexosa (p. ej., StrQ, StrS , o StsA), o involucrado en fenómenos de
exportación y resistencia (p. ej., StrV, StrW, StrA). Las relaciones genéticas con
los productores de antibióticos que contienen / 3- colas de lisina (p. Ej.,
Estreptotricina; cf. Fig. A27; o viomicina) también pueden ser evidentes. El resto 3-
guanidinomanosa en la miomicina podría derivarse de una vía inusual de glucosa
NDP o manosa NDP similar a la unidad NMLGA en estreptomicina (véase la
sección 4.1.1.3).

Boholmycin La última clase de aminoglucósidos estructuralmente nueva que se

describirá está representada por el compuesto pseudotetrasacárido boholmicina
(Fig. A7; SAITOH et al., 1988) y es producido por una cepa de Streptomyces
hygroscopicus. Claramente pertenece a los aminoglucósidos de Ca según
nuestras definiciones. Se compone de un dicarbamoil-sicilinositol, dos amino
azúcares condensados a través de enlaces glucosídicos a las posiciones 4 y 6 del
ciclitol, y una heptosa (Ha- (4) Ca (6) -PA-Hep). Sus claras relaciones

41
estructurales tanto con la miomicina (en la unidad pseudodisacárida de ciclicitol (4)
-3-amino hexosa; ver arriba) como con las seldomicinas (en la unidad de ciclitol (6)
-2-amino-pentosa; cf. Sección 4.3) le da un claro papel de puente entre los
aminoglucósidos Ca y los '(2DOS-) Cb, y será interesante ver si esto se refleja en
similitudes a nivel genetidenzymic. La incorporación de una D-manoheptosa lo
hace único entre los aminoglicósidos que contienen ciclitol y podría ser otra
indicación de la hipótesis de que la producción de componentes de la pared
celular de bacterias gramnegativas (p. Ej., Lipopolisacárido) y muchos antibióticos
en estreptomicetos. puede basarse en el mismo grupo de genes (PIEPERSBERG,
1992,1993).

Ca Aminoglucósidos con monoaminociclitoles. Se han informado tres antibióticos

monoaminociclitol aminoglucósidos sin importancia en la aplicación farmacéutica
pero con estructuras interesantes que deberían mencionarse aquí.

(1) La minosaminomicina, un producto de Ca (4) -6DOH relacionado con

kasugamicina de Streptomyces sp., Ya se ha mencionado anteriormente. Su
característica estructural única es la presencia de un 1-D-1-amino-1-desoxi-
mioinositol al que se une un dipéptido de histidinil-valina a través de un enlace
amida (Fig. A5). La introducción del grupo amino en el cicitol podría seguir
principalmente la misma ruta que en la ruta de los estreptidina, aunque con
estereoselividad alterada en los pasos catalizados por la deshidrogenasa y la
transaminasa de primer paso.

(2) La higromicina A (Fig. A9) se detectó antes de la higromicina B en la misma

cepa de Streptomyces hygroscopicus a principios de la década de 1950 y luego
también se encontró como producto de otras Streptomyces sp. y de
Corynebacterium equi. También es un compuesto Ca (l) - [X] -6DOH y es
interesante en varios aspectos:

- tiene una unidad de aminociclitol, una 2-amino-neo-inosamina, cuya derivación

es totalmente oscura, pero sugiere, sin embargo, que tanto un Ca como un Cb
(para la biosíntesis del resto 2DOS en la higromicina B) es funcional en esta cepa,
y que estas dos vías solo pueden coexistir debido a su estereoselectividad
completamente diferente de los pasos de transformación de oxidación;

- dos de los grupos cis-hidroxilo están puenteados por un residuo de metileno en

la fracción de ciclitol;

- el furanosídico 5-ketod-deoxysugar podría ser otra unidad rara de 6DOH

derivada de una dTDP-glucosa (ver Secciones 3.2.1 y 5.3).

42
(3) Los aminoglucósidos de la serie LL-BM123 (Fig. A6), producidos por Nocardia
sp., Son nuevamente compuestos de origen biosintéticamente mixto ya que
también contienen residuos de aminoácidos como la minosaminomicina. Su
fórmula de ruta única es Ca (4) -H (4) - HA, donde el disacárido D-glucosaminil-
(pl, 4) - ~ -nannanosa está unido glucosídicamente a la posición 4 de la 2-amino-2-
desoxi- resto mioinositol. El último aminociclitol debería derivarse del mioinositol,
que de nuevo solo se puede formar a través de una aminotransferasa con
diferente selectividad de sustrato en relación con la proteína StsC implicada en la
biosíntesis de estreptidina (véase la sección 4.1.1.1).

4.2 Fortimicinas, Istamicinas

Este grupo de compuestos de Ca (6) -HA o Cb (6) -HA muy similares (Fig. A10)
está muy extendido entre el género de actinomicetos filamentosos (cf. Fig. L), a
saber, Micromonospora spp. (fortimicinas: FTM; SF 2052), Dactylosporangium
spp. (dactimicinas), Streptomyces spp (isamicinas: ISM; sannamycins) y
Saccharopolyspora spp. (esporaricinas). De hecho, la única diferencia biosintética
importante entre los dos grupos que contienen fortamina (FTM, dactimicinas) o 2-
desoxfortamina (ISM, esporaricinas y sannamicinas) como amicocititoles parece
ser la formación del ciclitol mediante fosfato de mioinositol o siclilosososa,
respectivamente (véase la sección 3.1). La vía FTM se ha estudiado más
ampliamente en Micromonospora olivasterospora ATCC 21819 (productor de
FTM-A). Se ha encontrado que es casi congruente en la especificidad del sustrato
con la de los productores de SF-2051 Micromonospora sp. SF-2089 ATCC 31580,
dactimicina Dactylosporangium matsuzakiense ATCC 31570, sannamicina
Streptomyces sunnanensis IF0 14239, istamicina s. tenjimarien- sis ATCC 31603,
y sporaricin Saccharopo-

Lyspora hirsuta ATCC 20501 (Fig. 18 y Tab. 3; ITOH et al., 1984; ODAKURA et
al., 1984; DAIRI y HASEGAWA, 1989; HASEGAWA, 1991, 1992; DAIRI et al.,
1992a, b, c; OHTA et al., 1992a, b, 1993a, b; OHTA y HASEGA-WA, 1993a, b;
HOTTA et al., 1995). De los aproximadamente 20 pasos de la biosíntesis de FTM-
A, 14 han sido identificados por varios métodos, incluida la inducción y el análisis
de mutantes bloqueados, la clonación de genes y la alimentación de intermedios.
La mayoría de los genes de producción (fms) parecen estar agrupados en un
fragmento de ADN de ca. 30 kb o más en M. olivasterospora. El orden de los
genes identificados en M. olivasterospora ATCC 21819 es fmsl0, 13, 3, 4, 5, 12, 8,
7, 14,1,11, (orf2), fmr0, (orf4). Este segmento de ADN en su conjunto solo se
hibrida con el ADN genérico de Micromonospora sp. SF-2089 y D. matsuzakiense
(DAIRI et al., 1992b). Sin embargo, el patrón de restricción de las bandas de
hibridación fue casi idéntico solo en la cepa Micromonospora sp. SF-2089. En el
ADN de los otros tres productores investigados no se observó hibridación con el

43
fragmento de 30 kb, pero cuando los genes individuales para funciones
conservadas se tomaron como sondas, por ejemplo, el fmsl3 (smsl3; codificando
el N-glycyltransferase), se observó una hibridación significativa con el ADN de los
seis productores (OHTA et al., 1992b). Por lo tanto, parece probable que todos los
productores de aminoglucósidos de tipo FTM contengan grupos de genes
altamente relacionados que se originan a partir de una fuente evolutiva común con
algunas modificaciones menores, como el uso de una vía diferente para la
formación del (2-desoxi ) - precursor de la silo-inososa. y HASEGAWA, 1993a, b;
OHTA y col. 1993a, b; ver Sect. 4.5) En cada caso, el gen de resistencia simple
parece residir en el grupo de genes de producción.

44
Figura 18 La vía fortimicina (FTM, astromicina). La misma vía a partir de la 2-
desoxi-scilo-inosamina parece estar establecida en los productores de
istamicina / sannarnicina / esporaricina. Se dan los intermedios conocidos y
los pasos enzimáticos postulados; para más detalles, ver HASEGAWA (1992)
y HO'ITA et al. (1995)
Sin embargo, parecen estar organizados de manera diferente en los grupos de
genes en ambos grupos (OHTA et al., 1993a). Por lo tanto, el conjunto de genes
utilizados en el productor de dactimicina podría ser una mezcla de las dos líneas
evolutivas extremas encontradas en los otros productores del grupo FTMlISM
aminoglucósidos: (1) contiene probablemente una vía Cb como el tipo ISM
(sanamicina) productores; pero (2) tiene el gen y el perfil de resistencia, así como
la mayor similitud de secuencia de ADN con los productores de tipo FTM (SF-
2051).

45
Los dos últimos pasos en la formación de FTM-A (transferencia de glicil) y FTM-C
(N-para-mimidoilación del grupo glicil amino; cf. Fig. 18), catalizados por los
productos génicos Fmsl3 y Fmsl4, respectivamente, en M El olivuterosporu (Tab.
3) representa la fase bioquímicamente mejor investigada de la ruta biosinética
para los aminoglucósidos de tipo FTM. Los genes para estos dos pasos han sido
clonados, analizados en parte, y se ha encontrado que están presentes en todos
los productores de aminoglucósidos de tipo FIM / ISM ya sea por hibridación o por
actividad (DAIRI et al., 1992c; OHTA et al. , 1992b). En un mutante bloqueado del
productor ISM, S. tenjimuriensis FTM-B se convirtió en 1-epi-FIM-B, dactimicina y
l-epi-dactimicina; M. olivasterosporu a su vez convirtió ISM-A. e ISM-Bo en ISM-A3
e ISM-B3, respectivamente (ver Fig. A10 HOTTA et al., 1989; DAIRI y
HASEGAWA, 1989). El mecanismo de la transferencia de glicilo y la posible
activación del residuo de glicilo (p. Ej., Aminoacil-AMP) aún no se ha estudiado.
Se demostró que el grupo N-formimidoilo deriva de la glicina, cuyo grupo C-2 se
convierte mediante un mecanismo de oxidasa inusual en el grupo formimidoilo y
probablemente COa solo en presencia de oxígeno molecular; esto es catalizado
por la enzima Fmsl4 que contiene FAD (DAIRI et al., 1992 ~). Otro producto
génico interesante es la Fms8 fosfotransferasa, que probablemente cataliza la
fosforilación 3 '-OH del resto de purpurosamina en el intermedio FTM-KK1. Esta
enzima es homóloga a las enzimas APH (3 ') codificadas por los genes nmrA y
aph de Micromonosporu sp. Productora de neomicina. y Streptomyces fradiae,
respectivamente, y pueden ser reemplazados por los últimos productos génicos
(DAIRI et al., 1992a). Sin embargo, su implicación en la interesante
deshidroxilación 3 ', 4' no está clara (ver Fig. 18, pasos 8, 9). Para esta fase de la
ruta probablemente se requieren varios pasos: (1) la deshidratación en C-3 'podría
ocurrir a través de un mecanismo similar al que opera en la ruta de 3,6-
didesoxihexosa en bacterias gramnegativas (cf. Sect. 3.2.1 y Fig. 10); (2) una
reacción de 4'5'-deshidratasa como se sugiere por la aparición de 4'3'-
deshidratado-FTM-A; (3) una etapa de reductasa / deshidrogenasa) reduciendo el
doble enlace 4 ', 5'.

4.3 Aminooglucósidos que contienen 2-desoxstreptamina

El grupo grande y clínicamente importante de aminoglucósidos que contienen 2-
desoxstreptamina (2DOS) se estudió ampliamente con respecto a su biogénesis
en cepas mutantes y de tipo salvaje utilizando precursores marcados con 14C-,
I3C-, 3H- y "N" , como D-glucosa, D-glucosamina y 2DOS. Los datos resultantes
se obtuvieron principalmente con los productores de neomicina, paromomicina,
ribostamicina, butirosina y los antibióticos del grupo genamicidsagamicina se han
revisado extensamente (RINEHART y STROSHANE , 1976; PEARCEa y
RINEHART, 1981; KAKINUMA, 1982; KASE et al., 1982; OKUDA e ITOH, 1982;
UMEZAWAe t al., 1986; GRAFE, 1992). Sin embargo, desde 1985 solo se han

46
encontrado muy pocos hallazgos nuevos. publicado. Por lo tanto, aquí solo se
ofrece un breve resumen de lo que se conoce actualmente.

El resto 2DOS, que es el bloque de construcción básico en esta familia de

compuestos, está hecho directamente de glucosa-6-fosfato a través de la ruta Cb
(véase la Sección 3.1; Fig. 19, cf. Fig. 4) como se ha demostrado claramente
recientemente en el productor de neomicina S. fradiae (YAMAUCHI y KAKINUMA,
1992b, c; 1993; 1995) y postulado anteriormente (KAKINUMA, 1982).
Anteriormente, la biosíntesis de la fracción de cicitol era oscura y se creía que
ocurría a través del mioinositol o directamente de la glucosa por un mecanismo
desconocido (RINEHART y STROSHANE, 1976). Sin embargo, ya se sabía por el
patrón de etiquetado de las posiciones C1 y C de glucosa y por la incorporación
del primer grupo amino, que la 2- desoxi-scil-inosamina no se deriva de la D-
glucosamina y que la dirección La segunda transaminación es opuesta a la de las
vías estreptidina y actinamina (PEARCEn y RINEHART, 1981; UMEZAWA et al.,
1986). El primer paso de transaminación podría ser catalizado por una
aminotransferasa muy similar a la enzima StsC de S. griseus (ver sección 4.1.1.1),
ya que WALKER lo mostró et al. (CHENa y WALKER, 1977; LUCHER et al., 1989;
WALKER, 1995) que los cetociclitoles fueron transaminados por el grupo a-amino
de glutamina en extractos del productor de neomicina S. fradiae y el productor de
gentamicina Micromonospora purpurea como en productores de estreptomicina y
espectinomicina. Por lo tanto, será interesante ver si las sondas stsC, por ejemplo,
de S. griseus, detectarán un gen respectivo en los grupos de genes de producción
de actinomicetos productores de 2DOS. Los pasos posteriores en la formación de
2DOS también podrían estar estrechamente relacionados con los pasos
respectivos en la vía de estreptidina (véase la Fig. 14), como la deshidrogenación
(enzima StsB o StrI-like?) Y la transaminación de segundo paso ( enzima StsA-
like?). Se desconoce si los precursores 2DOS están fosforilados en alguna etapa o
si entran en los pasos adicionales de condensación y secreción en una forma
similar a la estreptomicina. La presencia de aminoglucósidos-3 '-fosfo-transferasas
como mecanismos de resistencia en algunos de los productores de 2DOS (véase
más adelante, sección 4.5) sugeriría, sin embargo, que la fosforilación no se
produce en el resto del ciclitol.

Todos los principales aminoglucósidos que contienen 2DOS, a excepción del

grupo de la destomicina-higromicina B y quizás también las apramicinas, parecen
formarse a través de un intermedio pseudodisacaridárico común, la paromamina,
que se forma como un intermedio temprano del 2DOS y una molécula de D-
glucosamina, que probablemente esté activada por nucleótidos, a través de la vía
hipotética descrita en la Fig. 19. Si la formación de precursores y las reacciones de
fijación del resto D-glucosamina de alguna manera se relacionan con la de la

47
unidad NMLGA de estreptomicina (ver sección 4.1) queda por mostrar. Más
adelante, las rutas 2DOS se ramifican en varias rutas alternativas que dan como
resultado la gran variedad de productos finales (ver Figs. All-A17).

Aminoglucósidos 2DOS 4,5-disustituidos.

Los compuestos que están sustituidos con 4,5 en el aminociclitol, como las
neomicinas, paromomicinas, lividomicinas (Fig. A1 l; básicamente Ha- (4) Cb (S) -
P (3) -HA) o ribostamicinas, y las butirosinas (Fig. A13; básicamente Ha- (4) Cb (5)
- P), probablemente se sintetizan directamente a partir de la romamina o por
medio de un segundo pseudodiscoloide, neamina (Fig. 19), seguido de la unión de
un pentosa furanosídica, xilosa (formando xilostasinas) o ribosa (formando
ribostamicinas) que finalmente pueden ser glucosiladas por una 2,6-diamino-2,6-
didesoxihexosa (neosamina B o C) en las neomicinas y pa- romomicinas Los
pseudodisacáridos son claramente intermedios y pueden convertirse directamente
en los productos finales respectivos en mutantes bloqueados en su formación, por
ejemplo, en la ruta biosintética del aminociclitol. La neamina (neomicina A) tiene
una actividad antibiótica medible. La vía de las neosaminas B y C es tan oscura
como la de la primera unidad de hexosamina, aunque está claro que la D-
glucosamina se incorpora preferentemente en ellas. El tipo de activación, la (s)
glicosiltransferasa (s) y la ruta de incorporación de un segundo amino-N en la
posición C de la 2-aminohexosa aún no se han establecido enzimáticamente.
También podría existir una similitud con la situación en S. griseus productor de
estreptomicina: UDP- (N-acetil-) D-glucosamina podría no ser un precursor
inmediato como en la biosíntesis de la pared celular. Por lo tanto, será necesario
detectar también una enzima nucleotidiladora relacionada con StrQ entre los
productos génicos implicados en la biosíntesis de aminoglucósidos de tipo
neomicina. En este contexto también son importantes los resultados de estudios
de biogénesis más recientes con glucosa etiquetada con 13C y 6-13C, que
sugieren que todos los componentes básicos de la neomicina parecen estar
formados por intermedios del ciclo de la pentosa fosfato (Fig. 20; RINEHART et
al., 1992). Si este "equilibrio" de todas o la mayoría de las moléculas de glucosa a
través del ciclo de la pentosa fosfato ocurre generalmente para todas las hexosa y
otros componentes de carbohidratos en metabolitos secundarios dentro de la fase
de producción, los resultados anteriores de los estudios de etiquetado de isótopos
tendrían que ser reinterpretado Aminoglucósidos 2DOS 4,6-disustituidos.

Las kanamicinas-tobramicina (Fig. A12 HA- (4) Cb (6) -HA), las gentamicinas-
sagamicina (Fig. A14; HA- (4) Cb (6) -PA), y probablemente también las
seldomicinas (Fig. A17; los grupos HA- (4) Cb (6) - PA) de 2DOS que contienen
aminoglucósidos también se sintetizan a partir de paromamina. Sin embargo, su
sustitución adicional en la posición C6 del ciclitol y la naturaleza y modificación del

48
segundo residuo glucosídico distinguen las gentamicinas de las seldomicinas en
las que un resto de azúcar piranoide C-5 se reemplaza por una hexosamina. Este
azúcar en los compuestos relacionados con la gentamicina es D-xilosa (la unidad
de pseudodisacárido formada con el ciclosito 2DOS se llama garamina) y podría
ser D-xilosa o 2-amino-2-desoxi-~ -xi-pérdida en las seldomicinas. Dado que las
gentamicinas solo se producen en Micromonospora spp., Y las seldomicinas solo
se encuentran en Srrepromyces spp. Será de interés estudiar las relaciones
mutuas entre los respectivos conjuntos de genedenzimas biosintéticas en relación
con los involucrados en la producción de los otros grupos de aminoglucósidos que
contienen 2DOS. El estudio más intensivo sobre el diseño de una ruta 2DOS
individual se llevó a cabo en el grupo de gentamicina (GM) -sisomicina-sagamicina
(KASE et al., 1982; cf. UMEZA-WA et al., 1986) que es uno de los más versátiles
con más de 20 productos finales identificados. Se deben mencionar algunos
detalles para la comparación (para las fórmulas, ver la Fig. A 14): (1) un mínimo de
20 enzimas probablemente esté involucrado en la biosíntesis de, por ejemplo, GM-
C; (2) muchos de los pasos, por ejemplo, deshidrogenación y transaminación en
las posiciones 3 y 6 de piranosas, o N-metilación y deshidratación, se parecen a
los de otras rutas de aminoglucósidos; (3) la ruta de ramificación múltiple avanza
desde el primer intermediario trisacárido GM-A2 a GM-X2 y luego se ramifica para
producir los dos intermedios insaturados sisomicina (a través de JI-20A) y
verdamicina (a través de G-418, un compuesto que ahora con frecuencia utilizado
para la selección de vectores de clonación en células vegetales y animales). En
algunas cepas, estos dos intermedios ya pueden ser los principales productos
finales que se liberan. Esta fase biosintética se asemeja mucho a los pasos de
3,4-deshidroxilación en la ruta de fortimicina (cf. Fig. 18; pasos 8, 9); sin embargo,
la aparición de una 2,3,4,6-desoxi-2,6-aminohexosa 3,4-insaturada indica que la
deshidratación (probablemente de un precursor 4-hidroxilado después de 3-
deshidroxilación; cf. LIU y THORSON, 1994) es un paso en este proceso (véase
también la sección 4.2). La última fase de la biosíntesis de GM que produce los
productos finales GM-C ,, GM-C ,,, GM-C2 y sagamicina, que se utilizan
principalmente en terapéutica implica etapas de reducción, epimerización y N-
metilación, probablemente mediante acción de los mismos enzimas en intermedios
diferentes pero estructuralmente relacionados.

49
Figura 19

50
Figura 20 Biogénesis de los componentes derivados de hexosa, pentosa y
ciclotol en neomicina a partir de 6- (CL3) - ~ - glucosa (según RINE-HART et
al., 1992). Los patrones de etiquetado medidos por (C ”) RMN prueban que
todas las unidades se construyen preferentemente a partir de unidades C,
(0), C2 o C3 (líneas gruesas) reorganizadas por reacciones catalizadas por
transcetolasa y transaldolasa en pasajes a través de el ciclo de
penosfosfato. Los patrones de etiquetado anteriores obtenidos con 1- (*) o
1,6-etiquetas (DLA) glucosas también se dan a partir de los cuales no fue
posible una diferenciación entre la incorporación directa o indirecta de
glucosa.
Apramicinas y Destomicinas. La apramicina toma una posición más distante en
relación con los otros aminoglucósidos 2DOS (Fig. A15; CB (4) -OctA (S) -HA) y la
destomicina-higromicina B (Fig. A16 Cb / Ca (S) -H (2,3) -HepA) grupo. En las
apramicinas monosustituidas en la posición 4 del resto 2DOS, la paminamina
podría ser un intermediario. La vía adicional requeriría entonces un alargamiento
en el grupo 6'-hidroximetilo del resto hexosamina por una unidad C-2 que, sin
embargo, parece bastante improbable. Una ruta alternativa sería la condensación
de 2DOS con un derivado de octosa, que recuerda la vía inusual de la octosa en
las lincosamidas (véase la sección 5.1; RINEHART, 1980; véase también la
discusión en OKUDA e ITO, 1982). Además, el resto 4-amino-4-desoxi-~-glucosa
unido glicosídico a la posición 8 'es bastante inusual entre los aminoglucósidos; La
transaminación 4 también se produce en los compuestos relacionados con la
kasugamicina, pero en una unidad 6DOH (véase la sección 4.1). Esta unidad

51
podría sintetizarse mediante la transaminación de un intermedio de NDP-4-
cetoglucosa formado por una enzima relacionada con la UDP-glucosa 4-
epimerasa (véase la sección 3.2). En las destomicinas y la higromicina B, el resto
2DOS está 5-sustituido con una hexosa inusual, D-talosa. Esto a su vez se fusiona
a través de un tipo único de enlace químico, un enlace orto-éster entre los 2'- y 3'-
hidroxilos y la posición 1 "de un ácido de azúcar derivado de una 6-amino-6-
desoxiheptosa , ácido destómico. Estos detalles estructurales sugieren que hay
muy poca semejanza entre las vías de la higromicina B y la producción de
destomicina y las de otros aminoglucósidos, a excepción de la biosíntesis del
aminociclitol. Curiosamente, las cepas de Streptomyces eurocidicus y de
Saccharopolyspora hirsuta producen los derivados de destomicina, SS-56-C y lN-
amidino-1N-demetil-2- hidroxdestomicina A (INOUYE y col., 1973; IKEDA y col.,
1985b; cf. Fig. A16), respectivamente. ly, que son claramente compuestos de Ca y
están relacionados con la estreptidina en sus restos de diaminociclitol. Aquí, un
evento de recombinación de ADN que resulta en la fusión de dos grupos de
genes, aquellos para la producción de estreptomicina y destomicina, podría haber
creado una nueva vía mixta. el gen de estreptomicina agrupa esos ge nes
necesarias para la producción del intermedio 1-N-amidinostreptamina-6-fosfato (cf.
La figura 14) podría ser utilizada. La unidad de estreptamina en SS-56-C podría
formarse directamente a partir de scilo-inosamina o por hidrólisis del grupo l-N-
amidino a partir de l-N-amidino-estreptamina. Esto también podría significar que
los intermedios de 6-fosfato de las destomicinas se forman dentro de las células
como en el caso de los productores de estreptomicina.

En resumen, en comparación con las estreptomicinas y las fortimicinas, los

aminoglucósidos 2DOS mencionados hasta ahora parecen tomar una posición
intermedia con respecto a la distribución de los pasos de modificación en relación
con las reacciones de condensación. Prácticamente todas las modificaciones
están terminadas antes de la condensación en estreptomicinas, pero en los
antibióticos 2DOS tienen lugar mucho más después de la condensación por
reacciones de transferencia de glicosilo por las cuales solo se forma
completamente el diaminociclitol.

4.4 Otros aminoglucósidos

Derivados de azúcar monoméricos. El número de moléculas bioactivas y estables
derivadas directamente de unidades monosacáridas o análogos de azúcar
descritos en la literatura está aumentando constantemente (Fig. A18; los
compuestos relacionados con el cicitol se tratan a continuación; cf. Sect. 5.2). Aquí
se mencionan algunos ejemplos:

(1) Un grupo de inhibidores de la glucosidasa, como las nojirimicinas (inhiben las

glucosidasas y manosidasas), la galactostatina (inhibe las galactosidasas) y la
52
siastatina (inhibe las sialidasas), son análogos de azúcar con un anillo de piridina
sustituido y pueden considerarse como un grupo de alcaloides bacterianos
derivados de aminohexosas o aminopentosas (GRAFE, 1992). La 1-
desoxinojirimicina (DNJ) azucarada y un alcaloide vegetal estructurado similar
(castanospermina; no se muestra) pueden actuar como medicamentos contra el
VIH al prevenir la maduración de la glicoproteína de la envoltura gp120. Este
hallazgo motivó un estudio reciente de la biogénesis de estos azúcares de amina
inusuales mediante el etiquetado de isótopos estables en Streptomyces subrutilus
(HARDICK et al., 1992). Se descubrió que DNJ se deriva de una molécula de
glucosa convertida primero a través de fructosa, 6-oxidación y pasos reductores
de 2 o 6 transaminaciones a manonojirimicina (Fig. 21). Este producto intermedio
puede deshidratarse y reducirse a 1-desoximanonojirimicina o, alternativamente,
epimerizarse en C-2 a nojirimicina y posteriormente deshidroxilarse a DNJ. Por lo
tanto, se podrían usar varios genes enzimáticos relacionados con los utilizados en
la formación de otros componentes de azúcares amino y / o desoxi en antibióticos
conocidos. Lo mismo podría ser válido para otros amino azúcares monoméricos
aislados de cultivos de microorganismos como 3-amino-3-desoxi-D-glucosa, N-
carbamoil-D-glucosamina, prumicina y estreptozotocina (Fig. A18; ver también
compilaciones en UMEZAWA et al., 1986; GRAFE, 1992). También se han
preparado derivados semisintéticos de DNJ con actividad inhibitoria mejorada
sobre a-glucosidasas y farmacocinética, dos de los cuales, miglitol y emiglitate
(Fig. AM), han alcanzado la fase de desarrollo clínico (MULLER, 1989).

(2) El derivado de D-glucosamina recientemente descrito CV-1 (Fig. A18), que es

producido por un Streptomyces spp. y es un antibiótico débil en sí mismo, tiene un
efecto cooperativo muy interesante junto con la espiramicina en bacterias
gramnegativas (ICHIMURAe t al., 1987). Se demostró que el efecto inhibidor de
CV-1 estaba en la síntesis de LPS en E. coli, aliviando así el efecto barrera de la
membrana externa para la espiramicina, que por sí sola no es efectiva en los
gramnegativos. La biosíntesis de CV-1 implica N-carbamoilación de D-
glucosamina, probablemente de L-citrulina, que posiblemente ocurre en un
precursor activado por L-fosfato o nucleótido o el azúcar libre. Se demostró que la
reorganización posterior de N-carbamoil-D-glucosamina en el hemiaminal de anillo
abierto único se desarrolla espontáneamente (YASUZAWA et al., 1987).

(3) La valiolamina (cf. Fig. A21) es un nuevo miembro de aminociclitol monomérico

del grupo de validimicina de aminoglucósidos (KAMEDA et al., 1984; ver más
abajo) y tiene actividad inhibitoria contra a-glucosidasas.

53
Figura 21Biogénesis propuesta de nojirimicina y análogos de
monosacáridos relacionados. (D) NJ: (1-desoxi-) nojirimicina; (D) MJ: (1-
desoxi-) manonojirimicina. Los patrones de marcaje obtenidos de D-glucosa
marcada con 1,6 se adoptaron de RINECHART et al. (1992) (cf. Fig. 20).
Trehalosaminas y otros aminodisacáridos. Un grupo más grande de productos de
actinomicetos que contienen nitrógeno y carbohidratos son compuestos con
analogía estructural a los disacáridos trehalosa o sacarosa. La mayoría de estos
tienen alguna actividad biológica, ya sea como antibióticos o como inhibidores de
la glucosidasa. Las trehalosaminas a, glicosídicas y (Fig. A19; HA (1) -H) se
conocen desde hace mucho tiempo y se aislaron debido a su actividad

54
antibacteriana que, sin embargo, es solo débil (cf. UMEZAWA et al. , 1986;
ASANOe t al., 1989). La biosíntesis de 2-trehalosamina y manosil glucosaminida a
partir de una molécula de D-glucosamina y D-glucosa o D-manosa,
respectivamente, por enzimas relacionadas con la trehalosa sintasas puede ser
fácilmente considerada. Por el contrario, la derivación de 3- y 4-trehalosaminas
que también se producen como productos de estreptomicetos podría seguir al
menos dos rutas diferentes:

(1) formación de una 3- o 4-aminohexosa activada que se condensa con D-

glucosa o

(2) modificación de trehalosa preformada. Sería interesante saber si estos

compuestos tienen funciones (auto) reguladoras en procesos adaptativos, como la
osmorregulación, la diferenciación celular o el metabolismo secundario; el
metabolismo de la trehalosa podría desempeñar un papel importante en esos
fenómenos fisiológicos en los estreptomicetos (CHAMPNESS y CHATER, 1994).
Un nuevo miembro de la familia de las trehalosaminas es el antibiótico qP-
glucosídico 3,3'-neotrehalosa-diamina (Fig. A19; HA (1) -HA) aislado de un
Bacillus pumilus por su actividad antibacteriana en una cepa de Klebsiella
hipersensible aminoglucósidos pneumoniae (NUMATA et al., 1986; TSUNO et al.,
1986).

Los análogos 3-amino-3-desoxi de trehalosa y sacarosa y sus epímeros, TI, T-I1

(3-trehalosamina) y T-I11 o SI y S-I1 (3-sucrosamina) deben considerarse como
miembros de este familia de compuestos (Fig. A20; ASA-NO et al., 1989). Estos
se han obtenido mediante síntesis quimioenzimática a partir de las formas 3-ceto
de trehalosa y sacarosa, que se prepararon mediante tratamiento con D-glucósido
3-deshidrogenasa de Flavobacterium saccharophilum, y mediante aminación
química reductora. A excepción de S-I, estos compuestos son antibióticos débiles;
S-I es un inhibidor de las invertasas.

probablemente sea cierto solo para el origen del precursor C7 (que es

sedoheptulosa-7-fosfato o un epímero del mismo). Sin embargo, al menos las
etapas de ciclación y deshidratación son probablemente catalizadas por enzimas
homólogas a la deshidroquinato sintasa y la deshidrasa deshidroquinato,
respectivamente. Este tipo de ciclitol se encuentra en validoxilaminas y
validamicinas (Fig. A21; básicamente compuestos de Cb (1) - Cb (4) -H), y en
acarbosa, amilestatina y otros inhibidores de la glucosidasa estructuralmente
relacionados (Fig. A22; general fórmula (H), - Cb (1) -6DOH / H (l) - (H); TRUS- al.,
1989). La valienamina y los cicloscitoles C7 relacionados se condensan todos a
través de un grupo imino con otra molécula del mismo origen y estructura similar
(familia de la validamicina) o en la posición 4 con una 4,6-didesoxi-~ -gluceras o

55
unidad de 4-desoxi-~-glucosa (familia de acarviosina de inhibidores de a-
glucosidasa y trehalasa). Esto sugiere que la reacción de aminotransferencia tiene
lugar en un precursor de la fracción C, ciclitol y que la valienamina podría ser un
intermediario para todos los demás derivados (véanse las figuras 6,21 y A21, A22;
cf. RINEHART et al., 1992) .

Las validamicinas son a-D- o P-D-glucosiladas en varias posiciones (Fig. A21) que
podrían lograrse mediante glucosiltransferasas extracelulares o asociadas a la
pared celular. Además, la familia de inhibidores de la glucosidasa acarviosina, que
comprende acarbosa, amilostatinas, oligostatinas, "amino-oligosacáridos"
(derivados epoxídicos de amilostatinas), adiposinas, trestatinas y AI-5662, todos
están glucosilados de forma variable, principalmente por condensación con
unidades di- u oligosacáridas tales como maltosa, oligomaltodextrinas, trehalosa o
unidades de acarviosina (TRUSCHEITet al., 1981; MULLER, 1989). Nuevamente,
el mecanismo de adición de tales bloques de azúcares oligosacáridos podría ser
un proceso extracelular asociado a la membrana similar a la formación
dependiente de bactoprenol de heteropolisacáridos extracelulares, por ejemplo,
cadenas 0 de lipopolisacárido (GOEKE, 1986; RAETZ, 1996). Alternativamente,
estos compuestos podrían ser excretados como precursores inactivos por
exportadores especiales similares a la estreptomicina (véase la sección 4.1.1.4).
Este punto de vista está respaldado por la reciente identificación de una 7-
fosfotransferasa acarbosa en la producción de Actinoplanes sp. (DREPPER y
PAPE, 1996).

Trehazolin. Un nuevo tipo de inhibidor aminoglucosídico y muy específico de la

trehalasa, trehazolin (o trehalostatin), un producto de Micromonospora sp. y
Amycolatopsis sp., y la síntesis química de este compuesto y su anómero P se ha
informado recientemente (ANDO et al., 1991; KOBAYASHI y SHIOZA-KI, 1994;
Fig. A23; Ca (1,2) -HA) . El resto aminociclitol en esta molécula es inusual ya que
podría formarse en una vía de Ca (ver Fig. 4) a través de mioinositol y contracción
del anillo posterior como se sugiere para la pactamicina (ver Sección 5.2) o por
cierre de anillo reductor directo de un precursor de cetohexosa, por ejemplo,
fosfato fructosado. Además, la presencia de un grupo carbamoilo recuerda a otros
grupos de aminoglicosidos; La incorporación de este grupo puede implicar
enzimas similares a las utilizadas en las vías de otros aminoglucósidos. Sin
embargo, la molécula de trehazolina exhibe el único enlace aminoglucosídico
verdadero conocido en su unión al resto am-glucosa.

Sorbistinas Los aminoglucósidos pseudodisacáridos de la familia de la sorbistina

(Fig. A24) son interesantes en dos aspectos: son producidos por pseudomonas y
actinomicetos superiores, y contienen un inusual diaminohexitol de cadena abierta,
1P-diamino-sorbitol, de origen biosintético desconocido (revisado en UMEZAWA et

56
al., 1986). Es tentador especular que estos compuestos podrían derivarse de una
ruta similar a la de las fortimicinas, seguida de una división de anillo reductora
entre las posiciones C-1 y C-2 de un aminociclitol similar a la fortamina más
adelante en la ruta (cf Sección 4.2; cf. Figura 18). De hecho, un precursor de
amina no metilado y no metilado podría ser el precursor directo del 1,4-
diaminosorbitol con una epi- merización adicional en la posición c-5 (C-3 de
fortarina) creando la configuración estereoquímica del sorbitol. La presencia de
una 4-amino-4-desoxi-glucosa se puede explicar de dos maneras, en cuanto a la
biogénesis de 4-amino-4-desoxitrelosa (ver la discusión sobre trehalosaminas más
arriba). De acuerdo con la similitud con la vía de fortimicina, un precursor preferido
sería el Camino-glucosa preformado (NDP-).

Figura 22 Esquema propuesto de biogénesis de cicitoles derivados de

azúcar C7 de la familia de la validamicina. El patrón de etiquetado de 1,6- o 6-
(C'3) - ~ -glucosas fue adoptado de RINEHART et al. (1992) (cf. Fig. 20)

57
Esto podría sintetizarse a través de reacciones similares a las etapas iniciales
postuladas para la biosíntesis de la fracción NMLGA de estreptomicina (cf.
Sección 4.1; cf. Fig. 16), por lo que se forma un conveniente intermedio 4-
cetohexosa. que podría usarse como sustrato de aminotransferasa.

Alosamidina Un nuevo producto aminoglucosídico de Streptomyces spp., La

alosamidina y sus derivados de metil y didemetilo (Fig. A25; Ca (4) -HA (4) -HA),
es el primer inhibidor de quitinasa aislado de actinomicetos (SAKUDA et al. .,
1987; ZHOU et al., 1992, 1993). La alosamidina se compone de componentes
inusuales, un aminociclitol C6 ramificado de cinco miembros (alosamizolina) y dos
unidades de N-acetil-D-alosamina unidas a través de enlaces p-1, 4-glicosídicos
que podrían sintetizarse a través de una nueva vía de Ca y mediante 3-
epimerizaciones de (N-acety1) -D-glucosamina, respectivamente. Se desconoce la
ruta exacta de la síntesis del ciclositol de alosamicolina, aunque se demostró que
sus átomos de C y N derivan directamente de la D-glucosamina. Por lo tanto,
podría sintetizarse a partir de mioinosina formada por una enzima análoga a la
mioinositol fosfato sintasa a través de la sucesiva contracción del anillo,
oxidorreducción / epimerización y pasos de transaminación. Alternativamente,
podría ciclarse directamente a partir de fosfato ~ glucosaminado a través de una
enzima de tipo Ca (u otra) que forma pentaciclitoles activando C-5 y uniéndolo a
C-1. El anillo de aminooxazolina en el resto de alosamizolina (Fig. A25) se
introduce probablemente a través de N-amidinotransfer desde L-arginina, N-
monometilación, ciclación y un segundo paso de N-metilación (ZHOU et al., 1993).
Por lo tanto, también en esta vía, varios pasos podrían ser catalizados por
enzimas relacionadas con productos genéticos strlsts.

4.5 Resistencia en productores de aminoglucósidos

Curiosamente, el aminoglucósido y en particular los mecanismos de resistencia a
la estreptomicina por mutación (OZAKI et al., 1969; WALLACE et al., 1979;
PIEPERSBERG et al., 1980), y los codificados por genes de resistencia
específicos en productores (WALKER, 1975b; COURVALIN et al., 1977) y
aislamientos clínicos de bacterias gramnegativas y grampositivas, como
patógenos ocultos o infecciones infecciosas oportunistas, en su mayoría
determinadas por plásmidos (BENVENISTE y DAVIES, 1973; UMEZAWA, 1974;
DAVIES y SMITH, 1978 FOSTER, 1 983), fueron los primeros entre todos los
fenómenos de resistencia a los antibióticos que se identificaron a nivel molecular.
De hecho, el primer gen de resistencia clonado de un productor de antibióticos fue
el gen que codifica la butirosina-3 ‘-fosfo-transferasa, APH (3 ') -IV, de Bacillus
circulanns (COURVALIeNt al., 1977). Además, la correlación entre la fosforilación
de estreptomicina y su aparición en productores de estreptomicina, S. griseus
(MILLER y WALKER 1969; NIMI et al., 1971) y en cepas clínicas de Escherichia

58
coli y Pseudo-monas aeruginosa (UMEZAWA et al., 1967a, b), por primera vez
condujo a la especulación de que la resistencia a los antibióticos transferible
podría haber evolucionado en general en los productores de estos productos
naturales (BENVENISTE y DAVIES, 1973). Más tarde, la modificación del sitio
diana ribosómico a través de la metilación específica de ARNr 16s también se
identificó como un mecanismo principal de resistencia a aminoglucósidos en los
productores (PIENDL et al., 1984; CUNDLIFFE, 1989, 1992a). Por primera vez, se
demostró que la transferencia de un gen entre bacterias gram positivas y
gramnegativas en la naturaleza ocurre con un gen de resistencia a
aminoglucósidos: el gen aphA-3 (kanamicinomicina 3 '- fosfotransferasa) se
transfirió entre enterococos ( también estreptococos y estafilococos) y
Campylobacter coli (revisado en COURVALIN, 1994). Algunos de los genes de
resistencia a los aminoglucósidos podrían haberse diseminado de los productores
de aminoglucósidos a otras bacterias en períodos evolutivos anteriores, cuyos
mecanismos ahora se están haciendo evidentes (MAZODIER y DAVIES, 1991;
COURVAIJN, 1994). En este contexto, también es interesante que existan
sistemas multifactoriales relacionados para el transporte intracelular de ADN y
moléculas de proteínas que funcionan específicamente entre bacterias y otros
tipos no relacionados, como células de otros géneros bacterianos y células
vegetales y animales (POHLMAN et al., 1994). Se ha avanzado mucho en el
análisis de los mecanismos de resistencia en productores bacterianos de
aminoglucósidos y otros compuestos autóxicos que contienen carbohidratos (Tab.
4, Fig. 23). Nuestro conocimiento actual se puede resumir de la siguiente manera:

(1) Hay dos fenómenos bioquímicos que confieren resistencia básica: primero, la
eliminación específica de la función inhibidora dentro de la célula productora (por
ejemplo, inactivación por modificación, modificación del sitio objetivo o la
producción de un nuevo insensible versión del complejo diana normal) y el
segundo transporte activo del inhibidor fuera de las células a través de
exportadores de energía. El primer tipo podría considerarse como un mero
mecanismo de autoprotección que emplea grupos químicos protectores o
mecanismos de derivación, mientras que el segundo tiene su función principal en
el transporte de los compuestos fuera de las células para permitir que los
productos finales bioactivos alcanzar sus destinos naturales, es decir, otras
células. Solo podemos especular sobre las funciones naturales de estos
compuestos y la naturaleza de las células objetivo. En general, estas células
objetivo podrían ser otras células del mismo organismo (funciones similares a las
hormonas: las células objetivo serían etapas no productivas o de otro modo
diferentes del ciclo de vida) o células de otros organismos, por ejemplo,
competitivos (DAVIES). et al., 1992; PIEPERSBERG, 1993).

59
(2) Los exportadores activos se han identificado hasta ahora solo para antibióticos
como macrólidos, antraciclinas, tetraciclinas (véase la Tabla 4), pero no para
aminoglucósidos. Curiosamente, dos genes, strV y strW, se han detectado
recientemente en los grupos de genes de producción de estreptomicina de S.
glaucescens y S. griseus; Estos genes codifican un nuevo tipo de transportadores
ABC (PIEPERSBERG, 1995; BEYER et al., 1996). Como la estreptomicina se
secreta en forma inactiva y fosforilada (WALKER, 1975b; MANSOURI y
PIEPERSBERG, 1991; PIEPERSBERG, 1995), estos exportadores
transmembrana, si son responsables de la secreción, no darían lugar a un fenotipo
de resistencia (RETZLAFF et al., 1993) . Hay evidencia que respalda esta
hipótesis: S. lividans 66 cepas que llevan una combinación de las unidades de
transcripción strA [APH (6)] y strVW en plásmidos convierten la estreptomicina
añadida en un estreptomiccindfosfato acumulado extracelularmente
(desafortunadamente esos clones resultaron ser muy inestable; S. BEYER y W.
PIEPERSBERG, datos no publicados). Por lo tanto, la vista anterior estaría
respaldada además por la posible existencia de un sistema de exportación activo,
también para precursores de aminoglucósidos antibióticos inactivos de las células
productoras. Será de mayor interés investigar la presencia de genes
transportadores similares en otros grupos de genes de producción de
aminoglucósidos. Recientemente se ha identificado un tipo diferente de proteína
unida a la membrana como el producto del gen butB en Bacillus circulans NRRL
B3312 (AUBERT-PIVERT y DAVIES, 1994; HOTTA et al., 1995). La proteína ButB
está relacionada con las proteínas de la capa S asociadas a la pared celular en
bacterias gram positivas de bajo G + C y la interrupción de su gen bloquea la
producción de butirosina, lo que indica eso. También podría estar involucrado en
la exportación de aminoglucósidos.

(3) Algunos de los mecanismos de resistencia a aminoglucósidos enumerados en

la Tab. 4, por ejemplo, la fosforilación y la acetilación, también se encuentran entre
las que podrían proporcionarnos la base bioquímica para comprender la evolución
de este tipo de determinantes de resistencia. Se sospecha que derivan de
enzimas biosintéticas o que sirven para ambos propósitos al mismo tiempo, como
los genes pac y bar que codifican las acetiltransferasas de puromicina y
fosfinotricina, respectivamente (WALKER, 1975a, b; THOMPSON y SETO, 1995 ;
TERCERO et al., 1996). Una vez más, fue la vía biosintética de estreptidina la que
primero apoyó esta especificación, ya que los intermedios en esta vía se
desfosforilan y se fosforilan sucesivamente dos veces, la última vez en la misma
posición (C-6 del aminociclitol) que la fosforilada. enzima de resistencia, StrA
(AphD o APH (6); ver más abajo), en productores de estreptomicina (ver Fig. 17;
WALKER, 1975b). Como esta enzima también tiene una actividad fosforilante para
la estreptidina y su precursor inmediato, la N-amidinostreptamina (WALKER,

60
1975b; sin embargo, a valores de KM mucho más altos; DISTLER y
PIEPERSBERG, 1985) se sugirió que también era un agente biosintético. - Zyme.
Sin embargo, entre los productos génicos para la producción de estreptomicina
hay dos, StrN y StsE, con motivos peptídicos similares a los de los centros
catalíticos de antibióticos y proteínas quinasas, especialmente HXDX ~ NX, -UD
(U = residuo hidrofóbico, p. Ej. , I, V, L) probablemente involucrados en la
transferencia del grupo fosfato (PISSOWOTZKI et al., 1991; RETZ-LAFF et al.,
1993; KNIGHTON et al., 1991; cf. también la Sección 6). Es más probable que
sean las dos fosfotransferasas involucradas en la vía de la estreptidina (ver
sección 4.1.1.1). Recientemente, un gen de resistencia a la espectinomicina que
codifica una espectinomicina fosfotransferasa, fue clonado de S. flavopersicus
NRRL 2820 que mostró una sorprendente similitud con StrN de S. griseus y S.
glaucescens (J. ALTENBUCH-NER, D. LYUTZKANOVA y J DISTLER,
comunicación personal). Este hallazgo respalda firmemente la hipótesis de que los
genes de resistencia se originan a partir de genes biosintéticos. Aquí, esta
hipótesis también debe extenderse para incluir la posibilidad de que un gen de
producción ancestral pueda convertirse en un gen de resistencia por evolución
divergente o después de la degeneración y modificación de una vía preexistente
para producir productos finales más simples pero aún efectivos ( este podría ser el
caso de la espectinomicina; ver sección 4.1). La kanamicina-6'-acetiltransferasa en
S. kanamyceticus también podría estar involucrada principalmente en la
acetilación de precursores de kanamicina por varias razones (CRA-MERI y
DAVIES, 1986; ver también más abajo).

(4) La resistencia a los aminoglucósidos también se produce como una propiedad

fenotípica críptica en estreptomicetos, como una segunda enzima de resistencia a
estreptomicina (estreptomicina-3 ”-fosfo-transferasa) y enzima de resistencia a
kanamicina (kanamicina-3- N-acetiltransferasa) en S. griseus (HEINZEL, et al.
1988; HOITA et al., 1988). Se puede usar como base para la detección de nuevos
productores de antibióticos similares a los aminoglucósidos (ETIENNE et al., 1991)
o para estimular la producción de aminoglucósidos, por ejemplo, el gen 6'-
acetiltransferasa de S. kana- myceticus estimula producción de aminoglucósidos
cuando se introducen varias copias en los productores de kanamicina y neomicina
(CRAMERI y DAVIES, 1986).

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62
Figura 23 Representación esquemática de los mecanismos de resistencia
autoprotectora en productores de carbohidratos secundarios
antibióticamente activos.
(4) La resistencia a los aminoglucósidos también se produce como una propiedad
fenotípica críptica en estreptomicetos, como una segunda enzima de resistencia a
estreptomicina (estreptomicina-3 ”-fosfo-transferasa) y enzima de resistencia a
kanamicina (kanamicina-3- N-acetiltransferasa) en S. griseus (HEINZEL, et al.
1988; HOITA et al., 1988). Se puede usar como base para la detección de nuevos
productores de antibióticos similares a los aminoglucósidos (ETIENNE et al., 1991)
o para estimular la producción de aminoglucósidos, por ejemplo, el gen 6'-
acetiltransferasa de S. kana- myceticus estimula producción de aminoglucósidos
cuando se introducen varias copias en los productores de kanamicina y neomicina
(CRAMERI y DAVIES, 1986).

4.6 Regulación en estreptomicetos

La síntesis de aminoglucósidos como la producción de otros metabolitos
secundarios en Streptomyces está regulada por una complicada red de proteínas
reguladoras codificadas por los grupos de genes biosintéticos individuales y otros
genes reguladores pleiotrópicos. Además de estos genes reguladores, los
autorreguladores de tipo hormonal (p. Ej., Factor A), las moléculas de señal
intracelular (p. Ej., PpGpp) y los nutrientes (p. Ej., Fosfato, glucosa, fuentes de N,
etc.) controlan la producción de aminoglucósidos. a nivel de expresión génica y / o

63
actividad enzimática. Principalmente para la S. griseus productora de
estreptomicina como sistema modelo, describiremos aquí algunos de los detalles
más importantes conocidos o postulados (resumidos en la Fig. 24).

La depresión de la producción de aminoglucósidos por glucosa ha sido reportada

por estreptomicina, kanamicina, istamicina y neomicina (VININGa y DOULL, 1988;
DEMAIN, 1989) y es causada por la represión de las sintasis antibióticas (p. Ej., N-
acetylkanamycin aminohidrolasa; DEMAIN, 1989) en lugar de por una influencia
en la formación de precursores de metabolitos secundarios. Los mecanismos de
control de catabolitos de carbono ampliamente estudiados en otros sistemas
bacterianos como E. coli y Bacillus subtilis (revisado por FISCHER, 1 992)
generalmente usan la regulación génica mediada por cAMP / CAP. Aunque el
AMPc alivia la represión de la glucosa de la N-acetilcanamicina aminohidrolizada
en S. kanamyceticus (SATOH et al., 1976) solo hay evidencia débil de la
participación de AMPc en la regulación de la producción de aminoglucósidos en
Streptomyces. La concentración intracelular de AMPc cae bruscamente en la fase
de crecimiento vegetativo medio a tardío de S. griseus S104 antes del inicio del
metabolismo secundario (RAGAN y VINING, 1978). La glucosa aumenta los
niveles de AMPc en S. antibioticus mientras reprime simultáneamente la formación
de oleandomicina (LISHNEVSKAYA et al., 1986). No hay evidencia de que cAMP
afecte directamente la producción de estreptomicina (NEUMANN et al., 1996) o
controle el metabolismo secundario en general (MARTIN y DEMAIN, 1980). Es
más probable que la represión de la fuente de carbono esté mediada por la
glucosa quinasa. Los mutantes deficientes en glucosa quinasa de S. coelicolor que
tienen niveles intracelulares normales de AMPc no exhiben un fenotipo de
represión de glucosa (AN-GELL et al., 1992; KWAKMANan d POSTMA, 1994). En
contraste con estos resultados, se aislaron mutantes de S. kanamyceticus
sensibles a la glucosa bloqueados en la producción de kanamicina que tienen
niveles de glucosa quinasa de tipo salvaje (FLORES et al., 1993). Por lo tanto, un
azúcar fosforilado podría mediar en la represión de la fuente de carbono de la
producción de antibióticos (DEMAIN, 1989).

Hay evidencia contradictoria en la literatura sobre la influencia de la fuente de

nitrógeno en la producción de estreptomicina y otros aminoglucósidos. Sin
embargo, el amonio parece impedir la síntesis de estreptomicina, neomicina y
kanamicina (SHAPIRO, 1989), mientras que el nitrato y algunos aminoácidos
apoyan la producción de aminoglucósidos, por ejemplo, kanamicina (BASAK y
MAJUMDAR, 1973) y estreptomicina. La estimulación de la producción de
estreptomicina por alanina, arginina y glutamina puede explicarse en términos de
ser donantes directos de grupos nitrogenados en etapas catalizadas por enzimas
durante la biosíntesis de estreptomicina (véase la sección 4.1). Los mecanismos

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subyacentes al efecto positivo de la asparagina y la prolina (SHAPIRO, 1989) o la
represión de la síntesis de estreptomicina por valina (ENSIGN, 1988; NEUMANN
et al., 1996) en S. griseus actualmente no se comprenden. Estos compuestos
podrían influir en la expresión de enzimas biosintéticas clave a nivel genético. Esta
influencia podría estar mediada por un sistema similar a NtrB / NtrC o por una
modulación de las actividades de las enzimas metabólicas primarias y las enzimas
biosintéticas de estreptomicina a nivel fisiológico a través de la acumulación y
excreción de metabolitos mediante, por ejemplo, la regeneración de
retroalimentación presión o inducción de vías gluconeogenéticas o condiciones
metabólicas que favorecen rutas especiales del metabolismo intermediario, como
el ciclo del pentosefosfato utilizado en la "dirección inversa".

La biosíntesis de aminoglucósidos (por ejemplo, estreptomicina, neomicina,

kanamicina) es sensible a una alta concentración (> 5 mM) de fosfato inorgánico
(MARTIN, 1989). El fosfato aminoglucósido fosfato extracelular que forma el
antibiótico biológicamente activo, en el caso de la estreptomicina (ver sección 4.1),
de un precursor fosforilado inactivo es inhibido por el fosfato. La estreptomicina-6-
P se acumula en cultivos de S. griseus cultivados a una alta concentración de
fosfato o con un pH bajo debido a la inhibición de la estreptomicina-6-P fosfatasa
(MANSOURI y PIEPERSBERG, 1991). Además, hay evidencia de que algunos
genes metabólicos secundarios están controlados por un sistema similar a PhoB /
PhoR; Las llamadas cajas pho se han detectado en regiones promotoras
reguladas por fosfato (véase la Fig. 24B; MARTIN, 1989; MARTIN F

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