ATUALIDADES EM QUÍMICA

Luiz Alberto Colnago, Fábio C.L. Almeida e Ana Paula Valente

O Prêmio Nobel de Química de 2002 foi outorgado ao químico John B. Fenn e ao engenheiro Koichi Tanaka
pelo desenvolvimento da espectrometria de massa para análise de macromoléculas biológicas e ao químico Kurt
Wüthrich pelo desenvolvimento de aplicações da ressonância magnética nuclear (RMN) multinuclear e multidi-
mensional para determinação da estrutura tridimensional de proteínas. As contribuições desses pesquisadores
tornaram a Bioquímica a “grande ciência” do nosso tempo, permitindo a rápida identificação das proteínas presentes
em uma amostra em solução, bem como das suas estruturas tridimensionais.
▲

▲
Prêmio Nobel, ressonânica magnética nuclear, espectrometria de massa, proteínas, macromoléculas biológicas

Recebido em 31/10/02, aceito em 16/11/02

T
odos os seres vivos, desde vírus
e bactérias até seres superiores
como plantas e animais, são
constituídos de macromoléculas res-
ponsáveis pela grande maioria das
suas funções vitais. A hereditariedade,
uma das principais características dos
seres vivos, é transmitida de geração
em geração por intermédio de políme-
ros de ácidos nucléicos, denominados
ácido ribonucléico (RNA) e ácido
desoxirribonucléico (DNA). As informa-
ções contidas nos ácidos nucléicos
são operacionalizadas por meio da ex-
pressão de proteínas (polímeros de
aminoácidos), que têm funções de ca-
talisar as mais variadas reações nos
sistemas biológicos, como as opera-
ções de digestão dos alimentos, divi-
são celular, leitura e cópia dos ácidos
nucléicos, entre milhares de outras rea-
ções. As proteínas também têm função
de transporte de substâncias e elétrons
(por exemplo, a hemoglobina que
transporta oxigênio e gás carbônico),
função de sustentação (por exemplo,
o colágeno dos tendões), função mo-
tora nos músculos, função protetora do
organismo (por exemplo, os anticor-
pos), entre muitas outras funções vitais.
A seção “Atualidades em Química” procura apresentar assuntos que mostrem como a Química é uma ciência viva, seja
com relação a novas descobertas, seja no que diz respeito à sempre necessária revisão de conceitos.
Outras macromoléculas presentes nos
seres vivos são os polímeros de açú-
cares, como a celulose que dá susten-
tação às plantas, o amido que é fonte
de reserva para as sementes e larga-
mente usado na alimentação humana,
entre muitos outros polissacarídeos.
Os estudos dos genomas têm le-
vado ao conhecimento da composição
dos ácidos nucléi-
cos e dos genes que
eles codificam. Ca-
da gene pode gerar
uma proteína. Esses
estudos estão bem
avançados e vários
seres vivos já têm
seus genes conheci-
dos ou seqüencia-
dos. O assinalamen-
to dos genes se dá por intermédio da
leitura do DNA, procurando os sinais
de iniciação e terminação. Dessa forma
delimita-se os quadros abertos de
leitura (sigla ORF, do inglês, open read-
ing frames). Os ORF não necessaria-
mente são expressos como proteínas.
Pode ocorrer que ORF não sejam ex-
pressos ou que muitos ORF juntos for-
mem uma proteína, por meio de jun-
ções alternativas. Muitos genes tam- 9
bém só são expressos durante certa
fase da vida ou quando o ser vivo está
sujeito a estresse. Isto significa que a
presença de um gene não neces-
sariamente leva à produção da respec-
tiva proteína. Assim, para conhecer
todos os mecanismos celulares torna-
se necessária a análise global de todas
as proteínas expressas
As informações contidas em uma célula. Esse
nos ácidos nucleicos são estudo é conhecido co-
operacionalizadas por mo proteoma (em ana-
meio da expressão de logia ao genoma).
proteínas (polímeros de Uma outra importan-
aminoácidos), que têm te área de estudo de
funções de catalisar as mais proteínas é a determi-
variadas reações nos nação de sua estrutura
sistemas biológicos tridimensional, para que
seja possível a correla-
ção entre a estrutura e sua função bio-
lógica. As proteínas têm uma estrutura
tridimensional única e pequenas mu-
danças estruturais podem levar à per-
da ou redução de sua atividade
biológica.
Pela breve introdução acima pode-
se ver que os estudos dos proteomas
das várias espécies e de como as pro-
teínas funcionam são o grande desafio
do nosso tempo. Esses estudos estão
tornando-se viáveis e cada vez mais
rápidos graças aos métodos analíticos

QUÍMICA NOVA NA ESCOLA Espectrometria de massa e RMN no estudo de macromoléculas biológicas N° 16, NOVEMBRO 2002
 desenvolvidos pelos pesquisadores meio dos grupos amino e carboxila, for- polipeptídica na forma de hélices,
laureados com o Prêmio Nobel de mando uma ligação peptídica pela eli- folhas, voltas etc.
Química de 2002. A seguir é apresen- minação de moléculas de água, con- 3- Estrutura terciária - estrutura tri-
tada uma rápida revisão sobre proteí- forme mostrado na Figura 2. dimensional de uma proteína, com a
nas para ajudar a entender a impor- Uma proteína é composta de deze- disposição espacial das unidades de
tância do trabalho desses laureados. nas a centenas de aminoácidos e a se- estruturas secundárias e das cadeias
qüência de ligação é determinada laterais.
Proteínas: da seqüência de pelos ácidos nucléicos (ácido desoxirri- 4- Estrutura quaternária - algumas
aminoácidos à estrutura quaternária bonucléico-DNA ou ácido ribonucléico- proteínas são compostas de mais de
As proteínas são compostas de RNA) responsáveis pela hereditarie- uma cadeia polipeptídica (subunida-
unidades estruturais básicas de molé- dade. de). O arranjo espacial dessas subuni-
culas orgânicas denominadas amino- A estrutura das proteínas é descrita dades é conhecido como estrutura
ácidos. Os 20 aminoácidos mais co- em quatro níveis de organização (Fi- quaternária de uma proteína. Uma pro-
muns encontrados na natureza e codifi- gura 3): teína pode consistir de cadeias poli-
cados pelo DNA são: glicina (gly), 1- Estrutura primária - seqüência de peptídicas idênticas e não idênticas. A
alanina (ala), valina (val), leucina (leu), aminoácidos da cadeia polipeptídica. hemoglobina, por exemplo, é constituí-
isoleucina (ile), metionina (met), prolina 2- Estrutura secundária - arranjo es- da de cadeias polipeptídicas não idên-
(pro), fenilalamina (phe), triptofano pacial básico de parte de uma cadeia ticas.
(trp), serina (ser), treonina (thr), aspa-
ragina (asp) glutamina (gln), tirosina
(tyr) cisteína (cis), lisina (lys), arginina
(arg), histidina (his) ácido aspártico
(asp) e ácido glutâmico (glu). Na Figura
1 está a fórmula estrutural básica de
um aminoácido, que é constituído de
10 um grupo amino, em preto, um grupo
carboxila, em azul, um átomo de hi-
drogênio, em verde, e uma cadeia late-
ral (R), que diferencia os vinte aminoá-
cidos, em roxo. Esses grupos são Figura 2: Reação de formação de um dipeptídeo a partir de dois aminoácidos, destacando-
se a ligação peptídica em vermelho. Note que em uma das pontas do dipeptídeo há um
ligados a um carbono assimétrico (me-
grupo amino livre e na outra um grupo carboxila. Portanto esse dipeptídeo pode se combinar
nos para glicina, na qual a cadeia late- com outros aminoácidos, formando cadeias mais longas chamadas polipeptídeos; proteínas
ral também é um átomo de hidrogênio), são polipeptídeos.
conhecido como carbono-α (Cα), em
vermelho.
Os aminoácidos ligam-se entre si
para formar peptídeos ou proteínas por

Figura 1: Fórmula estrutural básica de um

aminoácido, destacando os diferentes
componentes: em preto, grupo amino; em
azul, grupo carboxila; em verde, átomo de
hidrogênio; em roxo, cadeia lateral (R), que
diferencia os vinte diferentes aminoácidos;
em vermelho, carbono assimétrico (menos
para glicina, na qual a cadeia lateral tam- Figura 3: Níveis de organização das estruturas da proteínas: a) estrutura primária; b) estrutura
bém é um átomo de hidrogênio), conhecido secundária (hélice α); c) estrutura terciária da β-hemoglobina e d) estrutura quaternária da
como carbono-α (Cα). hemoglobina.

QUÍMICA NOVA NA ESCOLA Espectrometria de massa e RMN no estudo de macromoléculas biológicas N° 16, NOVEMBRO 2002
 Como mostrado a seguir, os traba-
lhos de Fenn e Tanaka estão relacio-
nados à determinação da massa mo-
lecular de proteínas e os de Wüthrich
à determinação das estruturas tridi-
mensionais de proteínas em solução.
Espectrometria de massa de
macromoléculas biológicas
Em 1912, J. J. Thompson demons-
trou que era possível separar molécu-
las na fase gasosa por diferenças de
massa e carga, que é o princípio de
funcionamento dos espectrômetros de
massa. Há vários tipos de espectrô-
metros de massa, mas todos eles re-
querem a gaseificação e ionização da
amostra, aceleração da molécula car-
regada por um campo elétrico, disper-
são dos íons de acordo com a razão
massa/carga (razão m/z) e a detecção
dos íons e registro do sinal.
A espectrometria de massa (EM) é
uma técnica largamente utilizada pelos
químicos na análise de moléculas pe-
quenas ou de tamanho médio. O mé-
todo é tão sensível que hoje é usado
rotineiramente na análise de substân-
cias em baixa concentração, como no
caso de doping, controle de alimentos,
contaminação ambiental, entre muitas
outras áreas de aplicação.
A aplicação da EM na análise de ma-
cromoléculas só começou a ter sucesso
na década de 70, quando se conseguiu
levar macromoléculas à forma de gás
ionizado. O grande avanço nessa área
ocorreu com o desenvolvimento da
técnica de ionização por spray eletros-
tático (ESI - do inglês electrospray ioni-
zation), por Fenn, e da técnica de
dessorção suave por laser (SLD - do
inglês soft laser desorption), por Tanaka.
Com esses desenvolvimentos, a EM
passou a ser largamente usada no
estudo de macromoléculas biológicas,
principalmente no estudo de proteínas.
Contribuição de John B. Fenn
O grande desafio de ionizar macro-
moléculas foi tema de estudo de mui-
tos pesquisadores, mas muitas das
técnicas desenvolvidas produziram
íons muito grandes ou íons difíceis de
serem vaporizados sem decomposi-
ção substancial. Fenn trabalhou com
uma dessas técnicas, a ESI. A Figura
4 apresenta o diagrama de um espec-
QUÍMICA NOVA NA ESCOLA Espectrometria de massa e RMN no estudo de macromoléculas biológicas
Figura 4: Diagrama de um espectrômetro de massa com ionização por spray eletrostático
(ESI).
trômetro de massa com ESI, que con-
siste em submeter a amostra a um fluxo
em uma pequena agulha em um com-
partimento contendo nitrogênio seco.
A diferença de potencial entre a agulha
e as paredes do compartimento é de
quilovolts; assim, entre a saída da agu-
lha e o compartimento há um enorme
campo elétrico. Conseqüentemente, a
gotícula de solução de amostra que sai
dessa agulha é dispersa no comparti-
mento como um spray de microgotas
eletricamente carregadas, que, direcio-
nadas pelo campo, seguem em dire-
ção à parede do compartimento. Devi-
do à geometria desse compartimento,
essas microgotas se dirigem a um
compartimento a vácuo, o espectrô-
metro de massa em si. O campo elé-
trico é forte o suficiente para extrair íons
isolados das microgotas. O tempo (in-
dicado pelo cronômetro na Figura 4)
que cada íon leva para atingir o detetor
depende das suas massa molecular
(m) e carga (z), sendo proporcional à
razão m/z; portanto, é possível determi-
nar a massa molecular do composto.
O uso da ESI permite a ionização
de macromoléculas que têm papel
destacado nos processos biológicos,
como peptídeos, proteínas, polissaca-
rídeos e ácidos nucléicos. A presença
de uma grande quantidade de cargas
em diferentes moléculas de um mesmo
tipo gera diversos picos (ver Figura 4).
Os diversos sinais do espectro inicial-
mente confundiram os pesquisadores,
mas Fenn usou essa complexidade 11
para melhorar a precisão das determi-
nações de massa e desenvolveu a teo-
ria de cargas múltiplas. Hoje existem
programas de computador baseados
nessa teoria que ajudam na análise
desses gráficos e, assim, permitem
que se determine a massa molecular
com grande precisão.
Contribuição de Koichi Tanaka
Durante a década de 80 vários gru-
pos tentaram resolver o problema da
volatilização/ionização de macromolé-
culas usando laser. Achava-se que era
possível vaporizar com laser uma pe-
quena parte de uma amostra sólida ou
líquida sem sua degradação. Em Mos-
cou, V.S. Letokov demonstrou que o
método poderia ser usado em peque-
nas moléculas polares como os amino-
ácidos. Em 1985, essa metodologia foi
aperfeiçoada por M. Karas e F. Hillen-
kamp, que demonstraram que se
poderia volatilizar moléculas pequenas
usando uma matriz capaz de absorver
a energia do laser.
Em 1987, em um simpósio de EM,
em Osaka (Japão), Tanaka apresentou
os primeiros resultados da aplicação
da técnica de dessorção suave por la-
ser (SLD) na análise de proteínas
intactas, o que foi um grande avanço
N° 16, NOVEMBRO 2002

12
Figura 5: Diagrama de um espectrômetro de massa com dessorção/ionização por laser.
para a área. A descoberta de Tanaka,
que fez que a dessorção suave por la-
ser funcionasse para macromoléculas,
foi uma combinação adequada da
energia e do comprimento de onda do
laser com as propriedades de absor-
ção/transferência de calor de uma
matriz e a estrutura molecular do analito
depositado nessa matriz. A matriz
usada por Tanaka foi glicerol contendo
partículas coloidais.
Tanaka demonstrou que, ao se usar
um laser de baixa energia (laser de ni-
trogênio - 330 nm), íons de macromo-
léculas biológicas são formados, fato
que não era esperado na época. O
princípio da técnica de SLD é apresen-
tado na Figura 5, na qual, no gráfico
intensidade em função de m/z, é
mostrada a separação de íons de uma
molécula de proteína com uma e duas
cargas e de um agregado da mesma
proteína com uma carga. Nessa figura,
também são destacados o sistema de
aceleração por campo elétrico (placa
negativa), a dispersão dos íons em
função da razão m/z (resultando nos
seus diferentes tempos de vôo, TOF -
do inglês time of flight, indicados pelo
cronômetro) e o detector.
QUÍMICA NOVA NA ESCOLA Espectrometria de massa e RMN no estudo de macromoléculas biológicas
O tipo de espectrometria de massa
mais usado hoje em dia para análise
de macromoléculas biológicas é o com
dessorção/ionização por laser assisti-
da por matriz - tempo de vôo, conheci-
do pela sigla MALDI-TOF/MS (do in-
glês, matrix-assisted laser desorption/
ionization-time of flight mass spectrom-
etry) e é a ferramenta básica para a
análise de proteomas.
Aplicações da espectrometria de
massa
Os espectrômetros de massa revo-
lucionaram o campo das ciências
conhecido como Química de Proteínas,
pois permitem a identificação de proteí-
nas com relativa facilidade. Mas como
se faz isto? Ao se conhecer uma massa
molecular com grande precisão (1/
40000), torna-se possível compará-la
com as seqüências das ORF co-
nhecidas do genoma e, assim, identi-
ficar qual ORF geraria proteína com
aquela massa molecular. Esse procedi-
mento é bastante preciso, mas nem
sempre suficiente. Os equipamentos
com ESI geram fragmentos das molé-
culas; assim, com o auxílio de softwares
adequados, compara-se não somente
a massa da proteína inteira, mas
também a dos fragmentos gerados.
Hoje tem-se genomas completa-
mente seqüenciados. A pergunta a ser
então respondida é quando e em que
condições as células expressam certas
proteínas. Sabe-se que as células apre-
sentam mecanismos intricados de
controle. Esse controle é normalmente
feito por proteínas que se expressam
nos diferentes estágios do desenvolvi-
mento de um organismo. Com a es-
pectrometria de massa é possível iden-
tificar as proteínas em baixa concen-
tração e em poucos dias. Com os mé-
todos bioquímicos tradicionais pode-
se levar meses ou anos.
Espetroscopia de ressonância
magnética nuclear (RMN)
O fenômeno da RMN foi observado
experimentalmente pela primeira vez em
1946, por F. Bloch e E. Purcell (Prêmio
Nobel de Física de 1952). A RMN é
observada quando se incide ondas de
rádio-freqüência em uma amostra que
tem isótopos com spin nuclear maior
que zero (por exemplo, 1H) na presença
de um campo magnético. A RMN pas-
sou a ser de grande importância para
análises químicas já na década de 50,
com a descoberta de que seu sinal
reflete o ambiente químico em que o nú-
cleo se encontra em uma molécula. Esse
fenômeno, denominado deslocamento
químico, permitiu um grande avanço na
área de determinação estrutural de
moléculas pequenas e/ou de média
massa molecular. Até o final da década
de 60, a RMN se restringia praticamente
às análises baseadas no 1H, devido à
baixa sensibilidade da técnica. Esse
problema foi superado com a introdu-
ção da técnica de pulsos e o uso da
transformada de Fourier (TF), iniciado
por Ernst e Andrew, em 1966. O uso da
técnica de pulso e da TF também
permitiu a R. Ernst o desenvolvimento
das técnicas de RMN multidimensional,
pelo que recebeu o Prêmio Nobel de
Química de 1991. Na RMN multidimen-
sional, além de se obter um aumento
da resolução espectral, foram automati-
zadas as medidas de vários parâmetros
de RMN, como o efeito Overhauser
nuclear (NOE), o acoplamento spin-spin
etc. Esses desenvolvimentos e o uso de
ímãs supercondutores de alto campo
N° 16, NOVEMBRO 2002

Figura 6: Diagrama de um espectrômetro de RMN.
permitiram a aplicação da RMN na
determinação das estruturas de macro-
moléculas biológicas, principalmente
proteínas, que foi a principal contribuição
de Wüthrich. Na Figura 6 é apresentada
um diagrama de um espectrômetro de
RMN com ímã supercondutor. A amos-
tra é colocada dentro da sonda de RMN
que fica no centro de uma bobina su-
percondutora, resfriada por nitrogênio e
hélio líquidos. Um computador central co-
manda o equipamento, enviando, cap-
tando e processando os sinais de RMN.
Contribuições de Kurt Wüthrich
A primeira estrutura tridimensional
de uma proteína (a mioglobina) com
Os laureados de 2002
O Prêmio Nobel de Química de 2002
foi outorgado pela Academia Real Sueca
de Ciências “para o desenvolvimento de
métodos para identificação e análise
estrutural de macromoléculas biológicas”.
Metade foi outorgada conjuntamente a
John B. Fenn e Koichi Tanaka “pelo
desenvolvimento de métodos de ioniza-
ção por dessorção suave para análise de
macomoléculas biológicas por espectro-
metria de massa” e a outra metade para
Kurt Wüthrich “pelo desenvolvimento de
espectroscopia de ressonância magnéti-
ca nuclear para determinação da estrutura
tridimensional de macromoléculas bioló-
gicas em solução”.
John B. Fenn nasceu em 1917, na ci-
dade de Nova Iorque, nos Estados Unidos
da América. Obteve seu doutorado em
1940, na Universidade Yale, da qual foi
QUÍMICA NOVA NA ESCOLA Espectrometria de massa e RMN no estudo de macromoléculas biológicas
meio similar ao de uma proteína na
célula. A primeira a ser estudada foi
uma pequena proteína chamada BPTI
(“inibidor de tripsina pancreática
bovina”), de massa molecular aproxi-
madamente 5000 u (5 ku)1. Junto com
a primeira estrutura, no laboratório de
Wüthrich foram desenvolvidas as
bases de toda a metodologia usada
até hoje para a determinação da
estrutura de proteínas. Essa metodo-
logia se baseia na atribuição dos sinais
de RMN aos átomos de hidrogênio na
macromolécula, na medida de grande
número de parâmetros espectrais rela-
cionados à estrutura, como o efeito
Overhauser nuclear, e no uso de
métodos computacionais que transfor-
mam os dados estruturais em uma es-
trutura tridimensional. O efeito Over-
resolução atômica foi determinada por hauser nuclear é um parâmetro que
difração de raios X, em 1957, por M. permite determinar distâncias interatô-
Perutz, que dividiu com J. Kendrew o micas de até cerca de 5 ångstrons.
Prêmio Nobel de Química de 1962. Pa- Hoje mais de 2500 proteínas (cerca de
ra essas análises, as proteínas eram 20% do total) tiveram suas estruturas
cristalizadas. Embora houvesse evi- determinadas por esse método. 13
dências de que o meio cristalino tinha Com o passar dos anos, o tamanho
muita água e algumas enzimas eram máximo das estruturas de proteínas
até ativas nesse meio, alguns pesqui- determinadas por RMN aumentou
sadores consideravam-no muito dis- bastante, passando-se de massas mo-
tante do meio onde a proteína exerce leculares de 5 ku para 20-30 ku. Para
sua função (células). isso foi preciso incorporar medidas de
15
Em 1986, Wüthrich e colaboradores N e 13C e, em alguns casos, 2H (deu-
demonstraram que a RMN multidimen- tério). No entanto, há um limite físico
sional poderia determinar a estrutura no tamanho de proteínas para a RMN
tridimensional, com resolução atômica, multidimensional, difícil de ser supera-
de uma proteína em solução, que é um do, pois o tempo de relaxação dos
professor titular de ro de pesquisa e desenvolvimento na Uni-
1967 a 1987, quan- dade de Negócios em Ciências da Vida,
do se aposentou da Divisão de Instrumentos Analíticos e
como professor de Medida, da Shimadzu, em Quioto
emérito. Desde (Japão).
1994, é professor Kurt Wüthrich nasceu em 1938, em
titular de Química Aarberg, na Suí-
Analítica na Uni- ça. Doutorou-se
versidade Comu- em Química Inor-
nidade das Na- gânica na Univer-
ções de Virgínia, em Richmond (EUA). sidade de Basel,
Koichi Tanaka nasceu em 1959, na em 1964. Desde
cidade de Toyama, 1980, é professor
no Japão. Formou- titular de Biofísica
se em Engenharia Molecular no Ins-
na Universidade tituto de Biologia
Tohoku, em 1983. e Biofísica Molecular, do Instituto Federal
Desde abril de Suíço de Tecnologia (ETH), em Zurique
1983 trabalha na (Suíça). Também é professor visitante de
Shimadzu Corp., Biologia Estrutural no Instituto de Pes-
sendo que atual- quisas Scripps, em La Jolla, Califórnia
mente é engenhei- (EUA).
N° 16, NOVEMBRO 2002
 spins nucleares vai diminuindo com o
aumento do tamanho da proteína, o
que dificulta a observação e a resolu-
ção espectral. Proteínas grandes pas-
sam a não gerar nenhum sinal nas
medidas de RMN. Esse foi um outro
desafio enfrentado por Wüthrich e
colaboradores. Em 1998, eles publica-
ram um trabalho usando um efeito cha-
mado de correlação cruzada entre a
anisotropia do deslocamento químico
e o acoplamento dipolar. Esse efeito
faz que cada hidrogênio amídico da
proteína apareça em duas freqüências
diferentes (dubleto), sendo que cada
um dos componentes do dupleto tem
relaxação diferente: um deles relaxa
rapidamente, enquanto o outro mais
lentamente. A nova técnica, conhecida
como espectroscopia otimizada de
relaxação transversa (sigla inglesa
TROSY, de transverse relaxation opti-
mized spectroscopy), faz uso desse
sinal de RMN que relaxa mais lenta-
mente. Essa outra grande contribuição
14 do laboratório de Wüthrich possibilitou
que fosse possível se trabalhar com
proteínas com massa superior a 40 ku,
já tendo sido determinadas estruturas
de proteínas de até 100 ku.
Aplicações de RMN
Trabalhar na determinação de estru-
turas de proteínas não é tarefa fácil,
pois resolver a estrutura de uma pro-
teína em solução pode levar de um a
quatro anos, dependendo de como
esta se comporta em solução. Porém
esse trabalho é recompensado. A partir
da estrutura de uma proteína pode-se
entender mecanismos das reações
biológicas e, assim, desenvolver novas
drogas que bloqueiem processos bio-
lógicos indesejáveis. Diversas drogas
estão sendo desenvolvidas usando-se
essa metodologia, sendo que indús-
trias farmacêuticas têm investido mi-
lhões de dólares montando centros de
RMN para essa finalidade.
Uma outra aplicação importante da
técnica é na determinação dos chama-
dos proteomas estruturais. Hoje, 40%
dos ORF obtidos da análise dos geno-
Abstract: Mass Spectrometry and Multidimensional and Multinuclear NMR: Revolution in the Study of Biological Macromolecules - The Nobel Prize in Chemistry 2002 was awarded to chemist John B.
Fenn and to engineer Koichi Tanaka for the development of mass spectrometry for the analysis of biological macromolecules and to chemist Kurt Wüthrich for the development of multidimensional and
multinuclear nuclear magnetic resonance (NMR) for determining the three-dimensional structure of proteins. The contributions of these researchers made Biochemistry the “great science” of our times,
allowing the fast identification of proteins present in a sample in solution, as well as their three-dimensional structures.
Keywords: Nobel Prize, nuclear magnetic resonance, mass spectrometry, proteins, biological macromolecules
QUÍMICA NOVA NA ESCOLA
Figura 7: Estrutura da proteína PSD1 obtida em solução por RMN (http://cnrmn.bioqmed.
ufrj.br). À esquerda, tem-se a sobreposição das diversas possíveis estruturas em solução
obtidas por RMN. Observe que em certas regiões a proteína apresenta várias estruturas
possíveis. Estas são provavelmente as regiões da proteína com grande flexibilidade. Todas
as estruturas determinadas em solução têm regiões flexíveis e regiões rígidas. À direita, há
um diagrama onde se observa a hélice α, em vermelho/amarelo, e as folhas β, em azul. As
ligações de dissulfeto estão representadas em laranja.
mas são proteínas com função comple- mente utiliza-se a unidade dalton (Da)
tamente desconhecidas. A resolução da como sinônimo da unidade de massa
estrutura das proteínas resultantes atômica (u). Entretanto, o dalton e seu
desses ORF tem possibilitado atribuir símbolo não foram aceitos pela Con-
função a elas. Assim, pode-se antever ferência Geral de Pesos e Medidas.
um futuro não tão longínquo em que se
saberá a função de quase 100% das Luiz Alberto Colnago (colnago@cnpdia.embrapa.br),
bacharel em Farmácia pela Faculdade de Farmácia e
proteínas codificadas no DNA humano. Bioquímica do Espírito Santo, mestre em Química e
Conseqüentemente, será muito mais doutor em Físico-Química pelo Instituto Militar de
fácil desenvolver a cura para as doenças Engenharia, é pesquisador da Embrapa Instrumen-
que atualmente nos afligem. tação Agropecuária, em São Carlos - SP. Fábio C.L.
Almeida (falmeida@cnrmn.bioqmed.ufrj.br), bacharel
No Brasil há uma sociedade cientí- em Ciências Farmacêuticas e doutor em Ciências
fica que se dedica somente ao uso da Biológicas (Bioquímica) pela USP, é docente do De-
RMN, a Associação de Usuários de partamento de Bioquímica Médica do Instituto de Ciên-
RMN - AUREMN (http://www.auremn. cias Biomédicas da UFRJ (DBM/ICB/UFRJ) e pesqui-
sador do Centro Nacional de Ressonância Magnética
org.br) - e existem dois centros que tra- Nuclear, na UFRJ (CNRMN/UFRJ). Ana Paula Valente
balham com ressonância magnética (valente@cnrmn.bioqmed.ufrj.br), bacharel em Farmá-
nuclear de proteínas em solução: o cia e mestre em Ciências Biológicas (Biofísica) pela
UFRJ, doutora em Ciências Biológicas (Bioquímica)
Centro Nacional de Ressonância Mag-
pela USP, é docente do DBM/ICB/UFRJ e pesqui-
nética Nuclear - CNRMN (http:// sadora do CNRMN/UFRJ.
cnrmn.bioqmed.ufrj.br) e o Laboratório
Nacional de Luz Síncroton - LNLS
(http://www.lnls.br). A Figura 7 mostra Para saber mais
a estrutura tridimensional da proteína CHAPMAN, J.R. (Ed.). Mass spec-
PSD1, uma proteína com atividade anti- trometry of proteins and peptides.
fúngica, a primeira estrutura de uma Totowa: Humana Press, 2000.
Fundação Nobel: http://www.nobel.se
proteína totalmente resolvida no Brasil.
WÜTHTRICH, K. NMR of proteins and
nucleic acids. Nova Iorque: John Wiley
Nota
& Sons, 1986.
1. Na área de Bioquímica, comu-
Espectrometria de massa e RMN no estudo de macromoléculas biológicas N° 16, NOVEMBRO 2002