Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
LP02-Examinare Microscopica Si Microchimica 2015-2016 PDF
LP02-Examinare Microscopica Si Microchimica 2015-2016 PDF
Examinarea microscopică și
microchimică a produselor
vegetale
Lucrări Practice 02
LP 02 ‐ Semestrul I
I.1.1.b. Examenul microscopic
Simbolizează o fază mai avansată a analizei calitative a produselor vegetale și are drept
scop stabilirea ţesuturilor şi elementelor anatomice caracteristice ale secţiunilor şi
preparatelor clarificate din pulberi sau produse fragmentate. Caracterele atanomice ale
diferitelor organe de plantă pot servi în multe cazuri la precizarea poziţiei taxonomice a
speciilor producătoare.
Un produs vegetal poate fi supus examenului microscopic în urma unei anumite
prelucrări în vederea obţinerii unor preparate care pot fi analizate la microscop. Preparatele
microscopice se realizează prin metode diferite în funcţie de natura, starea (întreg, fragmentat
sau pulverizat), după consistenţa şi chiar compoziţia chimică a produsului vegetal.
Tehnica pregătirii preparatelor microscopice este foarte variată şi depinde de grupa
morfologică din care face parte produsul vegetal și anume: rădăcini, scoarţe, frunze, ierburi,
flori, seminţe, fructe.
Obţinerea preparatelor microscopice sub formă de secţiuni.
Secţionarea unui produs vegetal întreg sau fragmentat se face de obicei în plan
transversal, iar dacă este nevoie în plan longitudinal.
Pentru secţionarea produselor vegetale uscate şi fragmentate convenabil, acestea se
aduc la consistenţa necesară prin: înmuierea în apă fierbinte în cazul frunzelor şi florilor sau
prin fierbere timp mai îndelungat pentru rădăcini, scoarţe sau tulpini. Pentru produsele care
conțin mucilagii, metoda de pregătire presupune macerarea timp de 24 de ore într‐un
amestec de alcool şi glicerină (R) (1:1).
Secţiunile se obţin cu ajutorul unui brici, lame sau a unui microtom (produsul fiind
inclus în parafină). Dacă fragmentele ce trebuie secţionate sunt subţiri cum este cazul
frunzelor, unor scoarţe, fructe sau seminţe, acestea se includ între două fragmente de măduvă
de soc secţionată longitudinal. Secţionarea se realizează printr‐o mişcare uniformă a lamei
briciului de la bază spre vârf, fără opriri, pentru obţinerea de secţiuni subţiri şi de aceeaşi
grosime. Secţiunile obţinute se prind într‐un cristalizor cu apă distilată, după care sunt
clarificate şi apoi colorate.
1
Farmacognozie
Clarificarea se face în mod curent cu apa de Javel (R) timp de minimum 20 minute, cu apă
oxigenată prin fierbere un minut sau cu o soluţie de cloralhidrat 80% (R). Rezultate bune se
obțin și în cazul în care este folosită o soluţie de KOH 5% (R). După spălare repetată, secţiunile
clarificate se colorează.
Tehnica de lucru.
Clarificarea cu apă de Javel. ‐ Produsul vegetal secţionat se aduce într‐un cristalizor în
care se află apă de Javel, avesta se acoperă cu o sticlă de ceas şi se lasă 15 minute până
la câteva ore în funcţie de natura organului vegetal. Se decantează lichidul şi se spală
de mai multe ori secţiunile cu apă până când nu se mai percepe mirosul de clor.
Clarificarea cu soluţie de cloralhidrat 80 % (R) ‐ Produsul vegetal se aduce pe o lamă
cu câteva picături de sol. de cloralhidrat; preparatul se încălzeşte uşor trecând repede
lama prin flacăra unui bec de gaz. Dacă este nevoie să se efectueze mai multe secţiuni,
atunci fierberea acestora cu cloralhidrat se poate face în capsulă de porţelan sau chiar
într‐un creuzet, după care se spală sau fără spălare, se pot colora.
2
LP 02 ‐ Semestrul I
Colorarea secţiunilor se poate realiza prin procedee multiple, însă cele mai frecvent
utilizate sunt următoarele:
Colorarea cu floroglucină în mediu de acid clorhidric. ‐ Secţiunile clarificate se tratează cu o
soluţie de cloralhidrat 80% şi apoi cu câteva picături dintr‐o soluţie alcoolică de floroglucină în
mediu de acid clorhidric (R), pereţii lignificaţi ai celulelor se colorează în roşu. Pentru
îndepărtarea acidului clorhidric, secţiunile sunt aduse în glicerina diluată (1:3), iar apoi
montate pe o lamă de microscop şi acoperite cu o lamelă.
Dubla colorare cu verde de iod şi carmin alaunat. ‐ După spălarea secţiunilor cu apă distilată,
pentru înlăturarea urmelor de clor, se reia procesul de spălare cu o soluţie de acid acetic 1%
(R), apoi cu apă distilată, după care sunt menţinute în alcool timp de 15‐30 minute pentru
eliminarea aerului. Secţiunile astfel pregătite se menţin 1‐2 minute într‐o soluţie de verde de
iod (R), mai apoi sunt spălate în repetate rânduri cu apă distilată până în momentul în care
lichidul de spălare nu mai este colorat. Secţiunile sunt ţinute 5‐10 minute în soluţie de carmin
alaunat (R) după care se spală până la îndepărtarea urmelor de reactiv. În aceste condiţii
secţiunile au ţesuturile sclerificate colorate în verde sau albastru verzui, cuticula şi pereţii
suberificaţi în galben‐verzui sau brun de către verdele de iod, iar ţesuturile celulozice în roşu
datorită carminului alaunat.
După includerea lor în apă, glicerină sau montare în masa gelatinoasă ori în balsam de
Canada (pentru conservare un timp mai îndelungat), acestea se pot examina la microscop.
Montarea secţiunilor în masa gelatinoasă şi în balsam de Canada.
Tehnica de lucru.
În vederea obţinerii de preparate montate în masa gelatinoasă se separă, cu ajutorul
unui ac spatulat, fragmente cubice cu latura de cca 5mm. Se aduc pe câte o lamă de
microscop, care se depune pe o placă încălzită, lăsând masa să se topească încet,
evitând fierberea. În gelatina fluidificată se aduc 1‐2 secţiuni, care se acoperă cu o
lamelă.
Masa gelatinoasă se obţine în modul următor: 2g gelatină albă se lasă în contact cu 4g
apă până la completa ei absorbţie. Se adaugă 10g glicerină uşor încălzită şi se menţine
pe baia de apă până se obţine o masă omogenă. Se înlocuieşte apa evaporată cu soluţie
conservantă şi se strecoară printr‐un tifon. Prin răcire rezultă o masă solidă, gălbuie,
translucidă.
3
Farmacognozie
Pentru montare în Balsamul de Canada, secţiunile sunt în prealabil deshidratate prin
tratare cu alcool 90°, iar apoi în două reprize cu alcool absolut. În continuare sunt
ţinute în xilen, care nu trebuie să se tulbure și timp de câteva minute în ulei de cuişoare
(Aetheroleum Caryophylli) pentru clarificare. Se aduce o picătură de balsam pe o lamă,
se încălzeşte uşor, timp în care se elimină uleiul volatil. Rezina rămasă se dizolvă în
xilen, benzen, cloroform sau eter, iar în soluţia rezultată se montează secţiunile.
Balsamul de Canada este o oleo‐rezină lichidă limpede, transparentă, de culoare
galben‐deschisă sau galben‐verzuie și miros balsamic.
Examinarea secțiunilor cu ajutorul reactivului Steinmetz (R).
Datorită compoziţiei complexe a acestui reactiv, se realizează atât clarificarea
ţesuturilor precum şi colorarea lor selectivă. Secţiunile obţinute, se aduc pe o lamă de
microscop într‐o picătură de reactiv. Se acoperă cu o lamelă şi după un timp de 5‐10 minute,
necesar clarificării, se examinează la microscop. Agenţii de clarificare sunt: cloralhidratul,
glicerina şi alcoolul. Sulfatul de anilină colorează în galben ţesuturile lignificate (vase de lemn,
celule pietroase, fibre lignificate, sclerenchimuri); Sudanul III colorează în roşu sau portocaliu
uleiul volatil, picăturile de ulei gras, rezinele, membranele cutinizate şi ceroase, latexul;
alaunul de fier amoniacal dă precipitate sau coloraţii cu taninurile sau compuşii fenolici; iodul
colorează amidonul în albastru‐violaceu, oferind o bună observare a acestuia; mucilagiile şi
gumele din ţesuturi se identifică datorită aspectului sidefos sau sticlos determinat de alcool şi
glicerină, iar cristalele de oxalat de calciu se identifică sub formă de cristale de sulfat de calciu
datorită ionilor de sulfat din reactiv.
În final, preparatul microscopic obţinut după una din tehnicile menţionate, se
examinează cu ochiul liber şi la lupă deasupra unei surse de lumină şi se desenează schema
secţiunii. În schemă, se urmăreşte redarea proporţiilor dintre ţesuturi, delimitate prin notări
convenţionale. În general, schema trebuie să redea structura reală a produsului vegetal
respectiv, încât acesta să poată fi recunoscut datorită particularităţilor care rezultă din
dispoziţia şi succesiune ţesuturilor, precum şi din prezenţa unor elemente anatomice
caracteristice cum sunt cele mecanice, ţesuturile secretoare, incluziunile celulare, etc.
Observarea aspectului general al unei secţiuni conduce la precizarea organului ce
constituie produsul vegetal analizat. După realizarea schemei, secţiunea se aduce la
microscop, se alege o zonă caracteristică îngustă, de 3‐4 celule, care se desenează în celule
urmărindu‐se succesiunea ţesuturilor cu particularităţile lor în elemente anatomice
4
LP 02 ‐ Semestrul I
caracteristice. Deci, la interpretarea unei secţiuni trebuie să se ţină seama de elementele
generale, cum sunt ţesuturile care alcătuiesc un anumit tip de organ şi de elementele
particulare (caracteristice), prin care un produs poate fi deosebit de alte produse din aceeaşi
categorie de organe.
Examenul microscopic al produselor vegetale pulverizate.
Produsele vegetale se pulverizează prin zdrobire sau măcinare, urmată de
omogenizare prin cernerea pulberii (sită cu 30 de ochiuri pe cm2). Preparatul microscopic se
obţine utilizându‐se un reactiv sau o soluţie de clarificare a cărui alegere se face fei pentru
clarificarea pulverii vegetale, fie pentru obţinerea unor reacţii caracteristice compuşilor
chimici ai pereţilor celulari sau ai conţinutului celulelor.
Tehnica de lucru.
Pe o lamă de microscop se aduc 2‐3 picături din soluţia de cloralhidrat (R), în care se
presară pulberea vegetală luată cu un ac spatulat. Preparatul astfel obţinut se încălzeşte uşor,
până când se percepe un miros slab de reactiv, iar după răcire se acoperă cu o lamelă. Dacă
este necesară prelungirea încălzirii se mai adaugă 1‐2 picături din soluţia de cloralhidrat.
Pentru punerea în evidenţă a elementelor lignificate, se adaugă preparatului, înainte
de acoperire cu lamela, 1‐2 picături soluţie de floroglucină în acid clorhidric(R). Asemeni
examenului microscopic al secţiunilor, pulberile pot fi cercetate într‐o varietate de soluţii şi
reactivi, începând cu apa şi terminând cu reactivul Steinmetz. Examenul microscopic al are ca
scop precizarea organului din care provine produsul vegetal respectiv, prin identificarea
elementelor anatomice comune organului şi stabilirea celor caracteristice produsului.
Având în vedere diversitatea mare a elementelor anatomice existente în preparatele
microscopice ale pulberilor, produselor vegetale, în continuare se vor prezenta unele
caracteristici microscopice ale acestora, pe organe vegetale.
Caracteristici microscopice ale organelor vegetale
Organe subterane (rădăcini, rizomi, bulbi) în stare pulverizată, prezintă la examenul
microscopic :
‐ numeroase fragmente de parenchim cu materii de rezervă (amidon, inulină, picături
de ulei gras)
‐ fragmente de vase mari de lemn (reticulate, punctate, scalariforme) şi adeseori
fragmente de suber.
5
Farmacognozie
Aceste ţesuturi prin care se poate identifica, în primul rând, organul vegetal, pot
prezenta particularităţi care permit deosebirea diverselor organe subterane între ele. Pentru
deosebirea acestor organe între ele se folosesc în mod curent:
‐ aspectul granulelor de amidon (izolate sau asociate, forma şi poziţia hilului, aspectul
dat de zonele hidratate, dimensiunile);
‐ cristalele de oxalat de calciu (forma de cristalizare, mărimea);
‐ elemente mecanice (fibre, celule pietroase, izolate sau grupate, însoţite sau nu de
cristale de oxalat de calciu, forma lumenul, canaliculele, culoarea lor etc.);
‐ ţesututri secretoare (canale, pungi, celule lacticifere)
‐ culoarea conţinutului celular al unor ţesuturi.
Tulpinile sub formă pulverizată se întâlnesc mai ales în studiul produselor „herba”.
Elementele anatomice de diferenţiere sunt următoarele:
‐ fragmentele de epidermă cu stomate;
‐ peri tectori şi glandulari;
‐ fragmentele de parenchim şi vasele de lemn;
‐ incluziuni celulare (cristale de oxalat de calciu)
Scoarţele pulverizate examinate la microscop prezintă următoarele caracteristici :
‐ numeroase fragmente de parenchim, cu sau fără raze medulare;
‐ elemente mecanice (fibre, celule pietroase);
‐ suberul este prezent de cele mai multe ori;
‐ vasele de lemn lipsesc (cu unele excepţii)
Caracterele prin care se pot diferenţia scoarţele între ele sunt legate de aspectul şi
structura elementelor mecanice (forma, lumenul, canalicule, însoţite sau nu de cristale de
oxalat de calciu, forma acestora), de natura chimică a materiilor de rezervă din parenchimuri
(amidon, picături de ulei) şi de ţesuturile secretoare, lacticiferele.
Frunzele pulverizate prezintă la microscop:
‐ numeroase fragmente verzi de parenchim clorofilian
‐ epidermă
‐ ţesuturi conducătoare
6
LP 02 ‐ Semestrul I
7
Farmacognozie
b. tip anisocitic, stomata este înconjurată de trei celule anexe, dintre care una
este mai mică decât celelalte două; (Crucifereae)
c. tip paracitic, stomata prezintă două sau mai multe celule anexe dispuse
paralel cu axul longitudinal al ostiolei; (Rubiceae)
d. tip diacitic, stomata este însoţită de două celule anexe paralele între ele şi
perpendiculare pe axul longitudinal al ostiolei; (Caryophylaceae)
e. tip actinocitic, stomata este înconjurată de celule anexe dispuse radial
(Eucalypti folium).
f. tip ciclocitic, stomata este înconjurată de 4 sau mai multe celule anexe
dispuse circular în jurul acesteia. (Palmae)
Anomocitic Anisocitic Paracitic
Diacitic Actinocitic Ciclocitic
Florile pulverizate prezintă la examenul microscopic numeroase fragmente de epidermă, cu
aspect variat, în funcţie de piesa florală din care provin: fragmente de endoteciu şi papile mai
mult sau mai puţin dezvoltate de pe stigmat, granule de polen, vasele de lemn mici, inelate
sau spiralate.
8
LP 02 ‐ Semestrul I
Dacă acest ansamblu de ţesuturi permite stabilirea organului, deosebirea dintre
diversele flori pulverizate se poate face numai prin caractere proprii fiecărui produs vegetal în
parte.
Astfel, perii tectori sunt foarte variaţi ca aspect, formă, numărul şi dispoziţia celulelor
care îi alcătuiesc, grosimea pereţilor celulari. Se pot observa peri tectori în formă de „T”
pluricelulari verticilaţi, monocelulari îngroşaţi, stelaţi, ramificaţi sau etajaţi.
Perii glandulari prin varietatea lor prezintă adeseori caractere anatomice specifice
unor familii vegetale.
Polenul, element anatomic de ansamblu al pulberilor de flori, poate constitui un
important caracter de diferenţiere, datorită exinei (netedă, echinulată sau cu diverse
formaţiuni, numărul porilor germinativi, culoarea, forma, mărimea). Elementele mecanice, în
special fibrele, sunt provenite adeseori din bractei şi cristale de oxalat de calciu.
Fructele şi seminţele pulverizate oferă o varietate de ţesuturi, dintre care unele sunt prezente
în mod constant:
‐fragmentele de endosperm, cotiledoane, embrion. Un examen mai atent arată că şi
aceste ţesuturi pot fi deosebite prin unele particularităţi ca:
‐ dimensiunile pereţilor celulari (endospermul),
‐ natura materiei de rezervă înmagazinată (ulei gras, amidon, aleuronă)
‐ alte ţesuturi provenite din pericarp sau tegument seminal.
Examenul microscopic al produselor vegetale „concissum” clarificate.
Această metodă se utilizează în examenul microscopic al fragmentelor produselor
vegetale provenite din organe vegetale subţiri (frunze, flori, herba).
Tehnica de lucru.
Fragmente de produs vegetal de dimensiuni mici (cu diametrul de 5mm), se aduc
într‐o eprubetă, se acoperă cu câţiva mL de soluţie de hidroxid de sodiu 5% sau 8% şi se fierb
timp de 3‐5 minute. După răcire se decantează lichidul alcalin, apoi produsul se spală de mai
multe ori cu apă distilată. Pe o lamă de sticlă se aduc fragmente de produs vegetal aşezate cu
faţa superioară în sus, altele cu cea inferioară, o parte din acestea fiind zdrobite cu ajutorul
unui ac spatulat. Se acoperă cu 1‐2 picături de apă, apoi cu o lamelă, apăsând uşor cu degetul,
după care se examinează la microscop. Clarificarea fragmentelor vegetale se poate realiza şi
cu ajutorul soluţiei 80% de cloralhidrat.
9
Farmacognozie
La examenul microscopic se pot observa elementele anatomice în secţiune
transversală şi longitudinală (ca la pulberi).
În cazul frunzelor se observă epidermele (forma celulelor, particularităţile cuticulei,
dacă este prezentă, tipul stomatelor, prezenţa sau absenţa perilor tectori şi glandulari,
caracterele acestora când sunt prezenţi, papilele etc.), ţesuturile palisadic şi lacunar cu
particularităţile lor şi mezofilul cu incluziuni, precum şi ţesuturile conducătoare.
Dacă produsul clarificat este o floare este recomandabil să fie examinată fiecare piesă
florală în parte. În acest caz sepalele şi bracteele prezintă caractere foarte apropiate de cele
întâlnite la examenul frunzelor.
La petale se observă epidermele ( forma celulelor, eventuala prezenţă de papile, peri
tectori şi glandulari, cuticula etc.), mezofilul şi ţesuturile conducătoare.
Staminele şi gineceul pot fi caracterizate prin endoteciu, polen, stigmatele papiloase,
aspectul epidermelor.
Detaliile necesare pentru efectuarea examenului microscopic sunt cuprinse în Tabelul nr.II.
Organul vegetal Radix, Rhizoma, Bulbus, Tuber Cortex
Structura ‐ tipul Parenchimul liberian, cu sau fără
Dispoziţia lemnului şi liberului raze medulare.
Elemente caracteristice Parenchim cortical
Secţiune ‐ amidon, Suber
transversală, ‐ inulină, Elemente caracteristice
longitudinală, ‐ cristale de oxalat de Ca, ‐ fibre,
radiară, ‐ celule pietroase, ‐ celule pietroase,
longitudinal ‐ fibre, ‐ aparat secretor,
tangenţială ‐ ţesuturi lignificate, ‐ cristale de oxalat de Ca,
‐ aparat secretor, ‐ amidon,
‐ canale laticifere ‐ raze medulare
‐ sclerenchim
Fragmente de vase lemnoase . Ţesuturi obişnuite
Fragmente de parenchim de rezervă. (fragmente de ţesut clorofilian, vase
Elemente anatomice caracteristice spiralate, inelate, fragmente de
Pulbere
(amidon, cristale de oxalat de Ca, celule epidermă)
şi preparat
pietroase, fibre, ţesuturi lignificate, Elemente anatomice caracteristice
"concissum"
pungi, canale sau celule secretoare) (fibre simple sau însoţite de cristale,
clarificat celule pietroase, cristale de oxalat de
Ca, amidon, raze medulare, pungi
secretoare)
10
LP 02 ‐ Semestrul I
11
Farmacognozie
I.1.1.c. Examenul microchimic
Examinarea microscopică a produselor vegetale poate fi însoţită de controlul
microchimic, prin care pot fi evidenţiaţi, îndeosebi în urma unor reacţii de culoare sau de
precipitate, constiuenţii chimici din ţesuturi utili identificării produsului.
În acest scop se utilizează:
Reacţii histochimice
‐ secţiuni (transversale, longitudinale)
‐ pulberi
Reacții pe Microsublimate
Reacții pe Microdistilate
Cu ajutorul reacţiilor histochimice (microchimice) se pot identifica compuşii chimici
dintr‐un produs vegetal, direct în celulele ţesuturilor cu ajutorul unor reacţii specifice.
Ţinând seama de caracterul selectiv al acestor reacţii, examenul histochimic care se
efectuează pe secţiuni (transversale sau longitudinale) mai rar pe pulberi vegetale, acestea
permit localizarea unor principii active în produse studiate.
Exemple
Amidonul este pus în evidenţă prin colorarea în albastru în prezenţă de iod
iodurat 0,5% (R) diluat 1:9, pus pe preparatul microscopic. Aleurona în
condiţiile de mai sus se colorează în galben.
Cutina, uleiurile volatile, uleiurile grase şi latexul se colorează în roşu‐portocaliu
cu o soluţie de Sudan III.
secţiune de Quercus cortex sau pulberea tratată cu o picătură de floroglucină
în acid clorhidric concentrat (R), pe o lamă de microscop, evidenţiază lignina
prin colorarea în roşu a elementelor lignificate.
Secţiunea transversală sau pulberea de Hydrastis rhizoma se poate utiliza
pentru identificarea berberinei şi hidrastinei după cum urmează: Secţiunea sau
pulberea se pune pe o lamă cu câteva picături de acid azotic 3%, se acoperă cu
o lamelă şi se încălzeşte uşor deasupra unei flăcări, după câteva minute
cristalizează acele de berberină de culoare galbenă. Dacă secţiunea se
umectează pe lamă cu acid clorhidric diluat (R) și se acoperă cu lamela, iar apoi
12
LP 02 ‐ Semestrul I
se tratează cu cloroform (prin absorbţia cu o hârtie de filtru a acidului pe partea
opusă a lamelei), după câteva minute apar în celule cristale incolore, prismatice
de hidrastină. Spre marginea lamelei se observă cristale aciforme de culoare
galbenă (berberina).
Pulberea de Althaeae radix se amestecă cu1‐2 picături de tuş diluat (o parte tuş
şi 9 parţi apă), în câmpul vizual cenuşiu‐închis, între particulele de pulbere,
neclare, apar aglomerări de mucilagii, sub formă de insuliţe sticloase, fără
structură, care se umflă treptat, şi se întind, dizolvându‐se în apă. Apăsând
lamela cu un ac, ne putem convinge de elasticitatea şi vâscozitatea acestor
aglomerări mucilaginoase. Bulele de aer pot cauza erori, însă ele au un contur
net, negru, pe când mucilagiile sunt opace şi marginile lor neregulate.
Pulberea de Inulae radix sau Taraxaci radix se macerează cu câţiva mL alcool
timp de 24 ore. Se filtrează şi se examinează la microscop într‐o picătură de
glicerină (R). Se observă sferocristale de inulină.
Pulberea de Quercus cortex se tratează cu câteva picături de alaun
feriamoniacal (R), pe o lamă de microscop sau o sticlă de ceas, datorită
materiilor tanante aceasta prezintă o coloraţie albastră‐neagră sau verde‐
neagră.
Pulberea de Frangulae cortex sau Rhei radix se tratează pe o lamă sau o sticlă
de ceas cu câteva picături de hidroxid de sodiu 10%, se observă o coloraţie roşie
datorată antracenozidelor.
Pulberea de Opiu se umectează cu apă distilată apoi se adaugă un cristal de
sulfat feriamoniacal. În jurul cristalului apare un inel roşu, ca urmare a formării
meconatului de fier (acid meconic).
Punerea în evidenţă a uleiurilor grase şi volatile din pulberea produsului
respectiv se poate face şi cu ajutorul colorării cu tinctura de alkana sau cu
Sudan III. Colorarea se face pe lamă. Secţiunea sau pulberea se lasă în colorant
timp de o jumătate de oră sau şi mai mult, acoperită cu o lamelă, după care
soluţia colorantă se absoarbe cu hârtie de filtru şi se adaugă glicerină. Picăturile
de ulei volatil sau de uleiuri grase se colorează în galben‐roşu (Sudan III) sau în
roşu (tinctura de alkana).
13
Farmacognozie
Dacă pulberea de Ricin semen se saponifică cu 3mL soluţie alcoolică de hidroxid
de potasiu (R) şi se încălzeşte uşor, după câtva timp se pot observa cristalele
sărurilor acizilor graşi sub forme de ace izolate sau asociate. Această reacţie
este folosită pentru deosebirea uleiurilor grase de cele volatile.
Reactivii utilizaţi în examenul histochimic sunt foarte variaţi. Ei pot fi reactivi pentru
identificarea unei singure substanţe sau reactivi pentru identificarea unui număr mare de
substanţe, de exemplu reactivul Steinmetz (R).
Reactivii de culoare utilizaţi pentru identificarea unor grupe de compuşi din produse
vegetale. ‐ Tabelul III
14
LP 02 ‐ Semestrul I
condiţii, anumite substanţe din produsul vegetal pot sublima pe lama superioară, în dreptul
tamponului de vată, unde apare un sublimat, de obicei sub formă de cristale. În analiza
sublimatului se va preciza aspectul, culoarea, sistemul de cristalizare, apoi solubilitatea,
eventual fluorescenţa în U.V., punctul de topire, după care se trece la reacţii de identificare,
cu ajutorul unor reactivi de culoare (Tabelul IV).
Reactivii de culoare folosiţi pentru identificarea unor principii active din produse vegetale.
Tabel IV
Substanţa sublimată Reactivul ‐ Reacția Culoare obţinută
Atropina ‐ (cristale aciculare incolore) Reacţia Vitali violetă
Berberina ‐ (mase cristaline galbene) dizolvate în acetonă cristale verzi
Berneol dizolvat în benzen + acid fericianic cristalizează
Cumarina Reacţia Feigl violetă
Cafeină ‐ (cristale aciculare, incolore) reacţia murexidului roşie
Emodina ‐ (c aciculare, galben‐portocalii) în mediu alcalin roşie
Gentizina ‐ (cristale galbene) în mediu alcalin galbenă
Hidrochinona ‐ (cristale incolore) + 1 pic. sol. FeCl3 1% cristale brune
Heleniena ‐ (cristale aciculare portocalii) + valilină sulfurică (R) roşu‐violet
Santonina ‐ (cristale lamelare, incolore) + sol. CH3ONa roşie
Strichnina ‐ (mase cristaline, incolore) cu H2SO4 şi sol. K2Cr2O7 albastru violet
Microdistilarea se foloseşte în cazul în care principiul activ este volatil şi se poate distila.
Distilatul obţinut, se poate folosi pentru identificarea principiilor active prin reacţii
microchimice. Exemplu: prin această metodă se identifică coniina.
15