UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

FACULTAD DE CIENCIAS.QUIMICAS Y FARMACIA

MICROBIOLOGIA General

Yohana Analy Mateo Jacinto

201131229
GUIA DE TRABAJO No. 2 MICROSCOPIA

1.Realice un esquema en donde pueda observarse la trayectoria de los rayos

desde la fuente de luz pasando a través del condensador, el portaobjetos y el lente
objetivo 10X y señale lo siguiente:

a. Apertura numérica (AN)

Medida de la capacidad de la
lente para captar la luz y se
encuentra impresa en el objetivo.
(Prescott, Harly y Klein, 2002, p.)

b. Poder de Resolución (P.R.)

Capacidad de una lente para
distinguir o percibir como
separados dos puntos que se
encuentran muy cercanos. de un
microscopio óptico y cómo se
P.R. = 0.5 λ/ A.N objetivo
(Prescott, Harly y Klein, 2002, p.)
c. ¿Cuándo los rayos de luz
atraviesan el portaobjetos de vidrio y penetran en el lente objetivo: ¿que se forma
y cómo se aplica para el cálculo de la Apertura Numérica?
AN= n sin 𝜃
Donde n es el índice de refracción del medio en el que la lente se encuentra y θ es
la mitad del ángulo de aceptancia máximo que puede entrar o salir de la lente. La
AN se mide generalmente con respecto a un objeto o a un punto de una imagen y
varía con la posición del punto. (Prescott, Harly y Klein, 2002, p.)
2. ¿Cuál es la función del condensador?
Conjunto de lentes, situada debajo de la platina, cuya misión es concentrar la luz
sobre el espécimen, a fin de conseguir una adecuada iluminación de este. (Prescott,
Harly y Klein, 2002, p.)
3. ¿Cuál es la función del diafragma de apertura?
Regula la cantidad de luz que entra del condensador. (Prescott, Harly y Klein, 2002,
p.)
4. ¿Qué aumentos pueden tener los lentes objetivos y los oculares?
Los objetivos son las lentes que reciben la luz directamente tras atravesar la sección
Cada uno de ellos posee lentes que permiten diferentes aumentos. Las
magnificaciones de los objetivos más usados suelen ser de 4x, 10x, 20x, 40x y 100x.
El ocular se encuentra acoplado al tubo, que es la pieza que conduce los rayos de
luz provenientes de la muestra desde el objetivo hacia el ocular. Los aumentos más
habituales son 5x, 10x, 15x y 20x.

5. Dibuje un lente objetivo de inmersión y una lámina portaobjetos con aceite.

Señale la trayectoria de los rayos de luz a través de ellos y conteste lo siguiente:

(Prescott, Harly y Klein, 2002, p.)

a. ¿Cuál es el aumento de este objetivo?
100x
b. Indique el valor del índice de refracción (n) del aire, del vidrio (portaobjetos y del
objetivo) y el aceite de inmersión.
n del aire: 1.000294
n del vidrio: 1.50
n del aceite de inmersión: oscila entre 1.482 – 1.516 (Prescott, Harly y Klein, 2002,
p.)
c. Cuál es la función del aceite de inmersión?
Brinda la propiedad de concentrar la luz cuando esta pasa a través del objetivo de
100X del microscopio, aumentando su poder de resolución. (Prescott, Harly y Klein,
2002, p.)
d. Explique qué sucede con los rayos cuando atraviesan un portaobjeto sin aceite y
cuando traviesan un portaobjetos con aceite.
Cuando no hay aceite los rayos de luz se dispersan al momento de tener contacto
con el aire esto debido a que el n del aire es diferente al del vidrio, el aceite al tener
un n similar al vidrio permite concentrar los haces de luz hacia la muestra, dando
como resultado un mejor poder de resolución. (Prescott, Harly y Klein, 2002, p.)

6. Sobre el uso del lente de inmersión, investigue

a. Porqué es importante emplear aceite de inmersión cuando observamos
bacterias?
El n del aceite de inmersión permite apreciar a las bacterias como "incluidas en el
vidrio del objetivo" eliminando el efecto reflector del vidrio. Eso permite lograr mucho
mayores aumentos con menor distorsión esférica, menor aberración cromática y
mayor luminosidad o "abertura de pupila" (Prescott, Harly y Klein, 2002, p.)
b. ¿Qué le puede suceder al lente de inmersión si por un olvido no se elimina el
aceite después de su uso?
Si el aceite se deja en contacto con el objetivo, penetrará a través de las juntas y
las uniones de las lentes y los materiales causando un daño irreversible, lo que se
traduce a una mala imagen imagen provocando que la nitidez y el contraste no sean
buenos.
c. Ponga 3 recomendaciones para el correcto uso del lente de inmersión (100X) que
son imprescindibles para su mejor conservación y evitar que se deteriore.
 Poner una sola gota de aceite de inmersión.
 El aceite se elimina fácilmente usando sólo papel óptico, sin disolvente.
  Si se ha quedado aceite reseco o no ha sido posible eliminar todo el aceite,
entonces se debe poner una gota de etanol en el papel y pasarlo por la lente.
A continuación, se pasa un papel seco.

7. Sobre el uso correcto de la fuente de iluminación investigue:

a. Para observar una preparación en fresco: ¿cómo debe ser la intensidad de la luz?
¿A qué altura debe estar el condensador? Con el diafragma de apertura y de campo
conteste: ¿Cómo se debe manejar para obtener una buena iluminación?
La intensidad de luz debe estar reducida y el diafragma prácticamente
cerrado. En los microscopios cuyo condensador sea móvil, se puede mover hacia
abajo para reducir la cantidad de luz concentrada en el objetivo
b. Para observar una preparación fija y teñida de bacterias, conteste ¿en qué
posición debe estar el condensador? ¿Como debe usar el diafragma de apertura?
¿Y si el microscopio que está usando tiene diafragma de campo, como se usa?
Subir el condensador hasta el tope. Para el diafragma de apertura y de campo se
utiliza el método de iluminación de Kölher, abrir el diafragma de apertura y decampo,
luego cerrar completamente el diafragma de campo, descender el condensador
hasta ver nítido el diafragma decampo (aparecerá como un polígono), centrar el
polígono con los tornillos posteriores, luego se abrir el diafragma de campo
totalmente por último se contrastar la imagen con el diafragma de apertura del
condensador (Prescott, et al., 2012)

8. Elabore un cuadro con los diferentes tipos de microscopios ópticos que se

consideraron en esta unidad: campo claro, campo oscuro, contraste de fases,
fluorescencia y confocal de barrido láser. Indique las características y sus
principales aplicaciones. Incluya esquemas en donde se aprecien los accesorios
que contribuyen a mejorar el P.R de cada uno.

Nombre Del Microscopio Características Aplicaciones

Microscopio de campo claro
Utiliza luz visible y un Células pigmentadas,
sistema de lentes secreciones de tejidos.
ópticas para aumentar
imágenes de pequeñas
estructuras.
 Microscopio de campo Posee un condensador Se utiliza en el estudio
oscuro paraploide que no de pequeñas células
permite que la luz móviles. (observación
penetre directamente al de detalles de
objeto, sino de una superficies con alta
manera oblicua. no reflectancia)
requiere teñir la muestra

Microscopio de contraste de La luz viaja a distintas Permite observar

fases velocidades células vivas
dependiendo del medio provenientes de algún
de propagación. La luz tejido o de cultivos.
atraviesa la muestra con
distintas velocidades en
distintas secciones. no
hace falta utilizar tintes

Microscopio de Los objetivos son Permite observar

fluorescencia iluminados por una sustancias que
determinada longitud de emiten luz propia
onda, la imagen es
 resultado de una
radiación
electromagnética.
Utilizan una lámpara
xenón o una lámpara de
vapor de mercurio

Microscopio confocal Tipo de microscopio de Se utiliza para estudiar

fluorescencia. En lugar la estructura de
de iluminar la muestra materiales biológicos
de forma global se
ilumina punto a punto de
forma sucesiva y se
reconstruye la imagen al
final del proceso.

Microscopio electrónico de El rayo de electrones es Se utilizan

barrido proyectado sobre la ampliamente en
muestra, generando un la biología celular.
efecto de rebote.
Permite la visualización
tridimensional de la
muestra debido a que se
obtiene información
sobre la superficie de
esta.

9. Explique cómo funciona el microscopio electrónico y diferencias con el óptico.

 Microscopio Óptico Microscopio Electrónico
Fuente de luz Luz visible Haz de electrones emitidos
por un cátodo

Tipo de lentes Lentes ópticas de vidrio Lentes electromagnéticas

(objetivos y oculares)

Observación de la Muestra observada La muestra se forma en una

imagen directamente por el ojo pantalla fluorescente o placa
fotográfica

Tipo de muestras Células vivas y células muertas Células muertas

que se pueden
observar

Poder de resolución 0.2 um Hasta 0.5 nm

Se pueden observar bacterias Se observan ultraestructuras
cloroplastos, mitocondrias de celulares y virus
0.5 mm

No Si con el MEB
Imagen
tridimensional Si, presenta un tubo o
No columna en la que se hace el
Sistema de vacío vacío.

(Prescott, Harly y Klein, 2002, p.)

10. Mencione los dos tipos de microscopios electrónicos que existen y el P.R o la
capacidad de aumento de cada uno.
Microscopio electrónico de transmisión (MET): permite la observación de
muestra en cortes ultrafinos. Dirige el haz de electrones hacia el objeto que se desea
aumentar. Una parte de los electrones rebotan o son absorbidos por el objeto y otros
lo atraviesan formando una imagen aumentada del espécimen Los microscopios
electrónicos de transmisión pueden aumentar un objeto hasta un millón de veces.
(Prescott, Harly y Klein, 2002, p.)
Microscopio electrónico de barrido (MEB): crea una imagen ampliada de la
superficie de un objeto. No es necesario cortar el objeto en capas. Explora la
superficie de la imagen punto por punto. Se basa en recorrer la muestra con un haz
muy concentrado de electrones. Los electrones del haz pueden dispersarse de la
muestra o provocar la aparición de electrones secundarios. Los electrones perdidos
y los secundarios son recogidos y contados por un dispositivo electrónico situado a
los lados del espécimen. A medida que el haz de electrones barre la muestra, se
presenta toda la imagen en el monitor. Los microscopios electrónicos de barrido
pueden ampliar los objetos 200.000 veces o más. (Prescott, Harly y Klein, 2002, p.)
11. Ponga 2 ejemplos de las estructuras celulares y partículas que se pueden
observar con microscopía electrónica y sus dimensiones.

12. Mencione cuales son las ventajas y desventajas de la microscopía electrónica.

Ventajas
 Mayor aumento y alta resolución. La resolución de las imágenes de la
microscopia electrónica está en el rango de hasta 0,2 nanómetros
 Tiene un alcance de usos diverso en muchos diversos campos de la
investigación incluyendo tecnología, industria, ciencia biomédica y química.
 Imágenes altamente detalladas de las estructuras que contiene la muestra,
revelando la complejidad de la estructura
Desventajas
 Incapacidad para analizar especímenes vivos
 Solo se pueden producir imágenes en blanco y negro.
 Los microscopios electrónicos son muy costosos.
 Son equipos muy grandes, abultados que requieren de mucho espacio en un
laboratorio. También son altamente sensibles a los campos magnéticos y las
vibraciones causadas por otro equipo de laboratorio.

13. Adjunte imágenes de microscopía óptica y electrónica en donde se aprecie la

diferencia entre ambas.
 (Prescott, Harly y Klein, 2002, p.)

(Prescott, Harly y Klein, 2002, p.)

Referencias Bibliográficas:
Prescott, L., Harly, J., y Klein. (2002). Microbiología. Editorial McGraw-Hill