Práctica 3 Actividades Bioquímicas

El crecimiento
crecimientobacteriano
bacteriano
se se realizó
realizó a 37°C
a 37°C excepto
excepto para Celulasas
para Celulasas y Xilanasas
y Xilanasas
Amilasas(+lugol; halo transparente positivo)
Bacillus subtilis Positivo
Pseudomonas aeruginosa negativo
Escherichia coli negativo

Celulasas( halo transparente positivo)

Streptomyces ipomoea Sí se observa halo transparente
Streptomyces cyaneus Sí se observa halo transparente

Xilanasas (halo transparente positivo)

Streptomyces ipomoea Sí se observa halo transparente
Streptomyces cyaneus No se observa halo transparente

Proteasas [reactivo de Frazier (NH4)2SO4]

Bacillus subtilis sí libera proteasas
Escherichia coli no libera proteasas
Enterococcus faecalis no libera proteasas

Lipasas (Spirit Blue positivo si es azul)

Bacillus subtilis Sí produce lipasas
Pseudomonas aeruginosa No produce lipasas
Staphylococcus aureus Sí produce lipasas

Utilización de hidratos de carbono

Utilización de hidratos de Caldo lactosado Caldo con
carbono sacarosa
Escherichia coli Positivo Positivo
Proteus vulgaris negativo negativo
Pseudomonas aeruginosa Negativo Negativo

Prueba de Hugh y Leifson Oxidativo sin fermentativo

vaselina vaselina
(aerobio) (anaerobio)
Escherichia coli oxidativo fermentativo
Proteus vulgaris NO oxidativo fermentativo
Pseudomonas aeruginosa oxidativo NO fermentativo
Positivo: amarillo si utiliza el hidrato de carbono en condición
aerobia y/o anaerobia

NOTA: No nos va a preguntar los resultados de cada bacteria en este conjunto de pruebas
de pruebas
Medio Agar Kliger hierro dos azúcares
Medio KIA Zona 1 Zona 2
Aerobio Lactosa +amarillo
Anaerobi
naranja
estricto
o Lactosa - rosa naranja
facultativ Lactosa +amarillo amarillo
o Lactosa - amarillo rosa

Zona 1 = aerobia
Zona 2 = anaerobia

La glucosa a baja concentración (1g/l) es el azúcar preferido para

crecer se agotará en las primeras horas de crecimiento del cultivo
(aproximadamente 4). La utilización de azúcares acidifica el
medio de cultivo por la transformación glucolítica de glucosa a
pirúvico.
La lactosa, que es el otro azúcar que contiene este medio, se
encuentra en mayor concentración (10 g/l) que la glucosa, si el
microorganismo es capaz de utilizarla el medio se acidificará más
debido a una alta producción de ácidos en el medio produciendo
el viraje del rojo de fenol a amarillo, que a pH neutro, del inicio
del experimento era de color naranja
EL medio contiene peptona, cuando estos péptidos se utilizan
como fuente de carbono y de energía la degradación de sus
aminoácidos a través del ciclo de Krebs requiere de la posterior
utilización de oxígeno por la cadena respiratoria y se liberará
amonio que basificará el medio, produciendo viraje del rojo de
fenol a rosa.
Si la bacteria puede utilizar el tiosulfato sódico del medio,
producirá SH2, que en presencia del hierro (del citrato amónico
férrico) formará un precipitado negro
El rojo de fenol es un indicador de pH que presenta un viraje
triple: a pH bajo es amarillo, a pH neutro es naranja y a pH básico
es rosa
Si se produce gas el medio se puede romper y/o desplazarse por
la aparición de burbujas
E. coli es anaerobio facultativo por lo que crece tanto en la zona
aerobia como en la anerobia, como tiene la capacidad de
degradar la lactosa el medio se acidifica en las zonas 1 y 2.
Produce gas, desplaza y rompe el medio de cultivo (la
fermentación ácido mixta produce CO2 y H2). Las colonias son de
color rosado claro, no produce SH2.
Salmonella El medio es rosa por la incapacidad de crecer en
presencia de lactosa, lo que obliga a degradar los aminoácidos de
la peptona como fuente de carbono y energía lo que basifica el
medio; las colonias son de color negro, lo que nos indica
quereduce tiosulfato produciendo SH2.
P. aeruginosa Todo de color rosa, nos indica que no es capaz de
crecer en presencia de lactosa y oxida los aminoácidos de la
peptona del medio, es aerobio y no produce gas; las colonias no
son negras, deducimos que no produce SH2.

Además contiene: extracto de carne, extracto de levadura,

cloruro sódico y agar
 Medios de cultivo 1 de 2
Escherichia coli
Mac Conkey Temperatura 44°C selecciona E. coli, hay producción de gas por
fermentación de lactosa. Sales biliares y cristal violeta inhiben
gram positivos. Púrpura de bromocresol vira a amarillo por
ácido. Contiene además peptona de carne y NaCl.
Agar Levine Eosina y azul de metileno inhiben gram positivos, precipitan por
la fermentación y producción de ácidos dando colonias negras con
brillo metálico. Contiene además peptona, lactosa, fosfato
potásico y agar.
Agar No se utilizó
desoxicolato
lactosa
KIA (Kliger o Ver página anterior
Agar hierro
dos
azúcares)

Enterococcus faecalis
selectivo por azida sódica Inhibe cadena respiratoria. Contiene
Rothe además: peptona, glucosa, cloruro sódico y fosfatos
Selectivo por Kanamicina, azida sódica; la esculina da color
KAA negro cuando se degrada a esculetina en presencia de sales de
(Kanamicina hierro. Las colonias son pequeñas, grisáceas, rodeadas de halo
esculina marrón oscuro. Además tiene: Peptona, extracto de levadura,
azida agar) cloruro sódico y citrato amónico férrico.
(Brain Heart Infussion) + si tolera NaCl 6,5% a 42°C. Infusión de
cerebro y corazón; digerido péptico de tejido animal,
Caldo BHI cloruro sódico, glucosa, digerido pancreático de gelatina y
NaCl 6,5% a fosfato de sodio (estos componentes no los pueden
42°C preguntar, no los comentaron en clase).
Caldo BHI a + se observa turbidez, igual que el anterior, pero con baja
42°C concentración de NaCl (0.5%)

Staphylococcus aureus
Giolitti + si ennegrece. LiCl inhibe gram (-) Manitol, piruvato sódico y
Cantoni glicina que favorecen S. aureus que, además, reduce Telurito
potásico; éste, a su vez inhibe gram (+)porque no lo reducen. El
medio es selectivo, de enriquecimiento y diferencial. Cubrir con
vaselina parae evitar Micrococcus. También contiene peptona,
NaCl, extractos de carne y levadura, .
Baird-Parker Nuevamente:LiCl, piruvato, glicina, telurito potásico. Colonias
con centro negro y Halo transparente de hidrólisis de prot y otro
opaco de lipólisis de la yema de huevo. Contiene además
peptona y extractos de carne y levadura.

Pseudomonas aeruginosa
Caldo verde Verde de Malaquita inhibe gram + y flora acompañante.
malaquita Contiene además: Peptona de carne, extracto de carne,
fosfato dipotásico
Agar P. aeruginosa resiste Cetrimida, MgCl2 favorece su crecimiento y
cetrimida el glicerol es la fuente de carbono. Contiene además: peptona, y
sulfato potásico
 Medios de cultivo 2 de 2
Salmonella
Agua de Preenriquecimiento o regeneración. Es un medio general. Contiene
peptona además: Cloruro de sodio y tampón de fosfato.
Caldo Enriquecimiento. Sales biliares inhiben no entéricos, yodo-
Muller- yoduro de potasio inhibe coliformes y otras bacterias
Kauffman o intestinales, tiosulfato sódico reacciona con yodo para formar
tetrationato- tetrationato que es reducido por Salmonella y Proteus liberando
bilis verde H2SO4, el CaCO3 neutraliza este ácido. Verde brillante inhibe
brillante Proteus. Contiene además peptona y NaCl.
XLD (Xilosa- Desoxicolato inhibe otros m. o. Tiosulfato es reducido por
lisina- Salmonella a SH2 que en presencia del citrato amónico férrico
desoxicolato forma precipitado negro en el centro de la colonia, al agotarse la
) Xilosa ha acidificado el medio por el ácido, pero luego, como no
oxida lactosa ni sacarosa descarboxila lisina basificando el
medio por formar cadaverina y el rojo de fenol torna a rosa.
Contiene además extracto de levadura.
HEA (agar nuevamente sales biliares, tiosulfato sódico, citrato amónico
entérico de férrico, el azul de bromotimol es verde a pH neutro, Salmonella
Hektoen) crece a expensas de la peptona y las colonias son verdes con
centro negro. Contiene además: sacarosa, lactosa y fucsina
ácida.
Medio para Se inocula en la parte superior y se adiciona después vaselina. La
observar bacteria Salmonella agota la glucosa y requiere descarboxilar
descarboxila lisina lo que basifica el medio, el colorante púrpura de
-ción de la bromocresol adquiere color púrpura a pH básico. Si la bacteria no
lisina puede descarboxilar lisina (p. ej. Proteus) el medio se queda ácido
y el colorante amarillo. Contiene además extracto de levadura

Indol Crecimiento de agua de peptona para crecimiento de bacterias y

prueba posterior de Indol con reactivo de Kovacs. Contiene
además NaCl
Citrato Contiene citrato de amonio como única fuente de carbono. Si la
(medio de bacteria utiliza citrato el NH4 se transforma en NH3 y el medio se
Simmons) basifica virando a azul, ya que el Azul de bromotimol en medio
neutro es verde, en medio ácido es amarillo y en medio básico es
azul. Contiene además: Agar, y sales de amonio como fuente de
nitrógeno.
La prueba del Indol y de Citrato es parte de las pruebas IMViC; la
prueba del Indol también se realizó para E. coli.
Confirmativas 1a de 2 Escherichia Enterococcus Staphylococcus Pseudomonas
coli faecalis aureus aeruginosa
Bacilos cocos cocos bacilos
delgados
Gram negativo positivo positivo negativo
oxidasa negativo positiva
catalasa negativo positivo positiva
KIA (Lys negativo Positivo (rosa)
descarboxilasa) (amarillo)
KIA (Producción H2S) negativo negativo
KIA (lactasa) Positivo negativo
Ureasa Negativo
(amarillo)
Descarboxilación de la
lisina
Reducción de nitratos Positivo
Proteasa positivo
KingA/ King B Positivo
piocianina y
pioverdina
O/F oxidativo y oxidativo
fermentativo
confirmativas 2a de Escherichia Enterococcus Staphylococcus Pseudomonas
2 coli faecalis aureus aeruginosa
indol I ( React. positivo (anillo
Kovacs) p-dimetil- rojo)
amino-benzaldehído,
alcohol amílico y HCl
Rojo de metilo M
(rojo=fermentación
ácido mixta)
Voges Proskauer V
(alfa naftol y potasa)
Citrato C (medio
Simmons) (azul de
bromotimol
DNAsa positivo
Coagulasa positivo
Serológica (Slide positivo
Staph plus Kit)
Serologica kit
Salmonella O/Vi
antisera
 Salmonella Proteus

bacilos cortos bacilos cortos

negativo negativo
negativo
positivo negativo
Positivo (rosa) Positivo (rosa)

positivo Negativo
negativo negativo
Negativo Fuertemente
(amarillo) (+)(rosa)
Positivo (azul-
púrpura)
 Salmonella Proteus

negativo Positivo ( rojo)

(amarillo)

positivo Positivo

negativo (no es negativo

rojo)
Positivo (azul) Negativo
(verde)

positivo negativo