Instituto Politécnico Nacional

Unidad Profesional Interdisciplinaria de

Biotecnología

Laboratorio de biorreactores

Práctica 1
Presentación de biorreactores diversos
 INTRODUCUCCIÓN
Los bioprocesos tienen como objetivo el crecimiento de células vivas. Para ello, es precisa la
utilización de un entorno donde las condiciones de crecimiento puedan ser controladas en todo
momento. Los biorreactores son los recipientes o sistemas que ofrecen un ambiente biológicamente
activo y controlado. Para que el bioproceso tenga éxito, el diseño del biorreactor debe tener en
cuenta tres aspectos principales: características de la célula, modo de operación y condiciones de
esterilidad.

REACTOR BIOLÓ GICO.

Los biorreactores al contrario a los químicos, su cinética no está́

determinada exclusivamente por la velocidad de reacción y las
variables que la determinan, pues depende también de
características intrínsecas del organismo o cultivo tales como
crecimiento y tasa de división celular, así ́ como del tipo de
operación que se lleve a cabo. Por eso, lo primero que se define
en el diseño de un biorreactor es el propósito de utilización; es
decir, qué tipo de cultivo se va a utilizar, el modo de operar y/o
el proceso de cultivo.

El conjunto biorreactor- sistema de cultivo debe cumplir con los siguientes objetivos:

→ Mantener las células uniformemente distribuidas en todo el volumen de cultivo.

→ Mantener el cultivo puro, constante y homogénea la temperatura.
→ Minimizar los gradientes de concentración de nutrientes y costos de producción.
→ Prevenir la sedimentación y la floculación.
→ Permitir la difusión de gases nutrientes a la velocidad requerida por el cultivo.
→ Mantener un ambiente aséptico.
→ Maximizar el rendimiento y la producción.
→ Reducir al máximo el tiempo.

-CLASIFICACIÓ N-

 Clasificación operativa

Al operar un biorreactor en una determinada categoría (discontinuo, semicontinuo, continuo),

automáticamente queda determinado el modo de cultivo del sistema y se definen los parámetros y
las características operativas y de diseño que intervienen en el proceso productivo del sistema.

 Clasificación biológica

Los sistemas biológicos deben interaccionar con el ambiente externo para poder crecer y
desarrollarse; es por eso que los biorreactores se clasifican biológicamente de acuerdo al
metabolismo procesal del sistema de cultivo: anaeróbico, facultativo, aeróbico.

 Clasificación biológica-operativa
Al conjuntarse ambas clasificaciones, se conjuntan también la función operativa y la biológica para
establecer entre ambas un propósito de utilización, el modo de cultivo y el bioproceso. Siendo el
propósito de utilización, el destino de cultivo del biorreactor; para qué tipo de cultivo va a ser utilizado
el biorreactor; el modo de cultivo es sinónimo de sistema de cultivo y el bioproceso es en sí,́ todo el
proceso.

MODO DE OPERACIÓ N Y SISTEMAS DE CULTIVO.

Modo de operación Los bioprocesos o fermentaciones pueden ser clasificados en función de su

operatividad en 4 grandes grupos:

• Operación discontinua (batch). Se trata de un sistema cerrado, en el que en el inicio de la operación

se añade la solución esterilizada de nutrientes y se inocula con el microorganismo, permitiendo que
se lleve a cabo la incubación en condiciones óptimas de fermentación.

. • Operación alimentada (fed-batch). Es básicamente similar a la fermentación discontinua, pero en

este caso, algunos sustratos se añaden escalonadamente a lo largo del proceso. Es un método que
precisa de instalaciones simples, y, además, ofrece una mejora en la producción.

• Operación continua. En la fermentación continua se establece un sistema abierto. La solución

nutritiva estéril se añade continuamente al biorreactor y una cantidad equivalente de cultivo con los
microorganismos, se saca simultáneamente del sistema.

ESTERILIZACIÓN DE BIORREACTORES

La esterilización en un fermentador es necesaria en varias fases del bioproceso. En concreto se utiliza

para:

o Asegurar que sólo nuestro producto está presente en el medio de producción

o Proteger el producto durante el proceso
o Proteger el producto después del proceso
o Proteger al paciente

Los biorreactores comúnmente tienen las siguientes características:

 El diseño de los biorreactores es cilíndrico.

 Los biorreactores varían de tamaños milimétricos hasta llegar a los metros cúbicos.
 La mayoría de los biorreactores son de acero inoxidable.
 Los biorreactores mantienen condiciones ambientales en un mismo estado.
 Mantienen las células de un cultivo uniformemente distribuidas.
 Los biorreactores previenen la sedimentación y la floculación.
 OBJETIVO GENERAL

Identificar y describir los diferentes tipos de biorreactores y sus partes accesorias, al igual que la
forma como se operan, controlan, esterilizan, cargan y descargan, como se limpian y controlan.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

o Determinar el volumen total y de operación de cada uno de los biorreactores.

o Identificar cada una de las partes del biorreactor, así como los instrumentos de medición
o Conocer los tipos de biorreactores que hay en el laboratorio, y su clasificación.
o Identificar los factores que afectan o favorecen la biorreacción

DIAGRAMA DE BLOQUES

Identificar los
Descripción de sus Tomar las medidas
diversos
características. de los biorreactores.
biorreactores.

Identificar si son de
Calcular el volumen
columna, de tanque Identificar los
de cada tanque de
agitado o de accesorios.
biorreacción.
circulación.

MATERIALES
 Instrumentos de medición.
 Biorreactores nivel laboratorio y nivel planta piloto.
 Bitácora para realizar anotaciones.
 RESULTADOS
I. Winpact

Figura 1. Biorreactor agitado “Winpact”

Tabla 1. Características de biorreactor “Winpact”

Tipo de biorreactor Lote/semicontinuo

Total 4510 mL
Volumen
Operacional 3608 mL

Esterilización Autoclave

Agitación Mixta

Flujo (impulsores) Radial

Altura 34 cm

Radio 6.5 cm

Interno 13 cm
Diámetro
Externo 16 cm

Relación (h/d) 2.615

II. TANQUE AGITADO MAGNETICO MULTIGEN

Figura 2. Biorreactor agitado magnético “Multigen”

Tabla 2. Características de biorreactor agitado magnético “Multigen”

Tipo de biorreactor Lote/semi-coninuo

Total 2136 mL
Volumen
Operacional 1709 mL

Esterilización Autoclave

Agitación Mixta

Flujo (impulsores) Radial

Altura 21.7 cm

Radio 5.6 cm

Diámetro 11.2 cm

Relación (h/d) 1.9375

III. CONTROL QUIMICO DE ESPUMA

Figura 3. Biorreactor agitado “Control químico de espuma”

Tabla 3. Características de biorreactor agitado “Control químico de espuma”

Tipo de biorreactor Lote/semi-coninuo

Total 7948 mL
Volumen
Operacional 6358 mL

Esterilización Autoclave

Agitación Mixta

Flujo (impulsores) Radial

Altura 45 cm

Radio 7.5 cm

Diámetro 15 cm

Relación (D/H) 3
IV. TANQUE AGITADO MAGNETIDO PEQUEÑO

Figura 4. Biorreactor agitado magnético.

Tabla 4. Características de biorreactor agitado magnético

Tipo de biorreactor Lote/semi-coninuo

Total 596 mL
Volumen
Operacional 476 mL

Esterilización Autoclave

Agitación Mixta

Flujo (impulsores) Radial

Altura 15.5cm

Radio 3.5 cm

Diámetro 7 cm

Relación (h/d) 2.214

V. BIORREACTOR DE COLUMNA CON DISCOS

Figura 5. Biorreactor Air-lift.

Tabla 5. Características de biorreactor de disco

Tipo de biorreactor Lote/semi-continuo/continuo

Total 2273 mL
Volumen
Operacional 1818.8 mL

Esterilización Vapor

Agitación Neumática

Altura 7.6 cm ---- 14.8 cm

Radio 6.2 cm --- 5.4 cm

Diámetro 12.5 cm --- 10.8 cm

Diámetro de discos 8.3 cm

Relación (h/d) 2.07

VI. BIORREACTOR DE COLUMNA SENCILLO (air-lift)

Figura 6. Biorreactor Air-lift.

Tabla 6. Características de biorreactor Air-lift

Tipo de biorreactor Semi-continuo

Total 715 mL
Volumen
Operacional 572 mL

Esterilización Vapor

Agitación Neumáticamente

Columna Tubo de arrastre

Altura: 39.4 cm Altura: 27.5 cm

Radio: 2.1 cm Radio: 1.4 cm

Diámetro: 4.2 cm Diámetro: 2.8 cm

Relación (h/d) : 9.38 9.82

VII. BIORREACTOR DE COLUMNA GRANDE

Figura 7. Biorreactor Air-lift.

Tabla 8. Características de biorreactor Air-lift

Tipo de biorreactor Semi-continuo

Total 12.3 L
Volumen
Operacional 9.84 L

Esterilización Vapor

Agitación Neumática

Columna

Altura: 37.5 cm Altura: 48 cm

Radio: 7.6 cm Radio: 6 cm

Diámetro: 15.3cm Diámetro: 12.1 cm

Relación (h/d) 5.58

VIII. BIORREACTOR DE TANQUE AGITADO

Figura 8. Biorreactor tanque agitado.

Tabla 8. Características de biorreactor tanque agitado

Tipo de biorreactor Lote/semi-

continuo/continuo

Total 16. 67 L
Volumen
Operacional 14.39 L

Esterilización Vapor

Agitación Mecánica

Flujo (impulsores) Axial

Altura 44 cm

Diámetro 21.96

Relación (h/d) 2.003

IX. BIORREACTOR DE 75 L

Figura 9. Biorreactor tanque agitado y control de espuma.

Tabla 9. Características de biorreactor.

Tipo de biorreactor Alimentado continuo

Total 82.2 L
Volumen
Operacional 65. 76 L

Esterilización Vapor

Agitación Mecánica

Flujo (impulsores) axial

Altura 84

Diámetro 35.3

Relación (h/d) 2.37

X. BIORREACTOR DE COLUMNA

Figura 10. Biorreactor de columna

Tabla 10. Características de biorreactor de columna

Tipo de biorreactor

Total 56.25 L
Volumen
Operacional 45 L

Esterilización Vapor

Agitación Neumática

Altura: 241 cm

Radio: 38.75 cm

Diámetro: 57.5 cm

Relación (h/d) 4.19

MEMORIA DE CALCULO
o Volumen total o Volumen de operación
𝑉𝑜 = 𝑉(0.8)
𝑉 = 𝜋𝑟 2 ℎ
Ejemplo para biorreactor Winpact
Ejemplo para biorreactor Winpact
𝑉𝑜 = 4.512 𝐿 (0.8)
𝑉 = 𝜋(6.5 𝑐𝑚)2 (34𝑐𝑚)
𝑉 = 4512.89 𝑐𝑚2 𝑉𝑜 = 3.610 𝐿
𝑉 = 4.512 𝐿
o Relación (h/d)
ℎ 34 𝑐𝑚
= = 2. 615
𝑑 13 𝑐𝑚
 DISCUISIÓN

Se observó que el laboratorio cuenta con biorreactores de agitación neumática y mecánica,

clasificándolos respecto al tipo de agitación. Además, algunos otros se pueden clasificar por su
operación: discontinua (batch), semi continua (feed-batch) y continua; por su geometría se pueden
clasificar en: biorreactor agitado, columna y air-lift.

Analizando primeramente los biorreactores de agitación mecánica se pudieron determinar algunos

pro y contras de la misma. Utilizando el proceso de agitación mecánica existe mayor fuerza de corte
y por lo tanto los microorganismos que se encuentren presentes en la biorreacción se pueden ver
afectados (rompimiento celular), mientras que durante la agitación neumática al no existir alta fuerza
de corte los microorganismos no se ven afectados. También existen ventajas en agitación mecánica,
ya que al utilizar agitadores el medio se mantiene en constante agitación y evita el asentamiento de
la biomasa y resulta útil para fluidos poco viscosos; la agitación neumática no resulta eficiente para
fluidos viscosos debido a que no favorecería la homogeneidad de la mezcla.

Al analizar los diferentes tipos de agitadores disponibles en el laboratorio, se logró determinar las
características de cada uno de ellos y cómo actúan en la biorreacción. Algunos ejemplos son: Agitador
tipo Rushton que consta de paletas paralelas al eje del motor, que descargan el flujo
perpendicularmente, generando un flujo radial y existe mayor transferencia de gas cuando se cuenta
con difusores, ya que permite romper las burbujas que tienden a subir a la superficie debido a que
las burbujas pequeñas permanecen más tiempo en el medio. Mientras que el agitador de hélice
presenta inclinación en las paletas y se genera un flujo axial (paralelo al eje) y al haber difusión de gas
y no tener alta fuerza de corte favorece la coalescencia; por lo cual las burbujas se fusionan para
aumentar su tamaño y el tiempo de permanencia del gas es menor.

Para controlar la temperatura de la reacción se tienen opciones como la chaqueta y el serpentín. La

chaqueta tiene como objetivo hacer circular agua de enfriamiento por la parte exterior del
biorreactor y permitiendo que exista mayor área de transferencia de calor; y al utilizar el serpentín
que consta de dos tubos (uno dentro de otro), por el cual se hace circular agua de enfriamiento y
permite la salida de agua caliente al retirar temperatura de la reacción.

La forma de esterilizar los biorreactores depende del tamaño y del material a utilizar. Los
biorreactores de dimensiones pequeñas son esterilizados en autoclave, pero los equipos grandes de
material de acero inoxidable son esterilizados por medio de inyecciones de vapor o circulación de
vapor a través de la chaqueta, y así evitar contaminaciones.

La relación (h/d) es un factor de suma importancia debido a que cuando se trabaja con biorreactores
de agitación neumática se requiere mayor suministro de aire comprimido para lograr una correcta
agitación y asegurarse que el gas que sea distribuido en todo el medio.
 CONCLUSIÓN
 Se logró identificar las partes de los biorreactores, así como su funcionamiento y volumen.
 Se clasificaron los biorreactores de acuerdo a: geometría, operación y forma de agitación.
 Existen diferentes tipos de impulsores que nos pueden dar dos tipos de flujos axial y radial.
 Se identificaron los tipos de materiales utilizados en los tanques a nivel laboratorio (vidrio) y
a nivel planta piloto (acero inoxidable)
 Se identificaron las variables que afectan o favorecen el proceso: pH, temperatura, oxígeno.
 El tipo de biorreactor se elige de acuerdo a la cantidad de biomasa, así mismo depende de
las características del microorganismo.
 Para cada tipo de biorreactor tendrá una agitación de acuerdo a las características del medio
como la viscosidad.
 Se debe mantener en condiciones asépticas cualquier entrada o salida del biorreactor.
 En los biorreactores de columna se debe trabajar con fluidos Newtonianos.
 El diseño de biorreactores está dado por una serie de relaciones altura/diámetro (H/D).
 Se identificaron los equipos auxiliares que ayudan al control de la biorreacción que se lleva a
cabo.
 Los impulsores desempeñan un papel importante ya que determinan la agitación

REFERENCIAS
Bull, D.N., Thoma, R.W., Stinnett, T.E. (1983), “Bioreactors for Submerged Culture”, Adv. Biotech,
Process,1: 1-30.

Hernández, A. (2003). Microbiología Industrial. Costa Rica: EUNED.

Jáuregui, J. (2006). Glosario de Biotecnología. Aguascalientes, México: Algicida.