Segunda Especialidad en Hemoterapia y Banco de Sangre

Generalidades sobre
las células madre

Dr. Victor Neyra

 Tipos de células madres
• Totipotentes (cigote)
– Generar cualquier tipo de célula, formar un organismo completo.
• Pluripotentes (células embrionarias, germinales y fetales)
– Generar cualquier tipo de célula.
• Multipotentes (células mesenquimales y hematopoyeticas)
– Generar células de su propia capa o linaje embrionario de origen.
• Unipotentes (células madre progenitoras)
– Pueden formar únicamente un tipo de célula particular. Ejm células
madre musculares
Tipos de células madres Controversia Ética,
moral y religiosa
 Células Mesenquimales Madre (MSC)
• Las MSC se localizan en los vasos sanguíneos (Localización perivascular), a
nivel de todos los tejidos.
• Para obtener MSC, es necesario aislar las células Pericitos, cuyos
marcadores moleculares son: CD146, Actina y CD56.
• El tejido adiposo presenta mayor contenido de MSC que otros tejidos
(10,000 veces mas que la medula ósea).
• La cantidad de MSC de un individuo disminuye con la edad;
– 1/10,000 (recién nacido)
– 1/ 100,00 (< 30 a)
– 1/ 250,000 (> 30 a)
– 1/ 400,000 (50 a)
– 1/ 2millones (70 a).
 Localización de las células Pericitos

Figure. Two distinct populations of human perivascular cells, which help produce multipotent MSC-like cells in
culture, have been identified and purified: pericytes, which encircle capillaries and microvessels; and
adventitial cells, which surround all larger blood vessels.
Mirko Corselli et al. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2010;30:1104-1109
Células Perivasculares; detección en
diferentes tejidos
Tej. Muscular

Placenta Tej. Adiposo Piel

Tej. Cardiaco Tej. pancreatico Medula Osea

Células Perivasculares, expresión de
marcadores MSC
Microfotografía electrónica de barrido de los
Pericitos

Pericitos
Figure 1. The mesengenic process was originally a hypothesis diagram which proposed that adult human bone
marrow contains a stem cell that could be induced into several different differentiation lineages to culminate in
end-stage differentiated cells that fabricate and maintain mature mesenchymal tissue.
Transición MSC a Osteoblasto

PDGF (Plateles Growth

factor).
VEGF (Vascular Growth
Factor).
BMP (Bone
Morphogenetic Protein.
Criterios para identificar MSC
Principales medios de cultivo para MSC
Fuente de MSC
Aislamiento y extensión de MSCs
1200 rpm
x 10 min
Células grasa
Tratamiento con
Colagenása Fracción
vascular del
estroma

1er Pasaje 2do Pasaje 3er Pasaje

3.8 cm2 25 cm2 2 x 75 cm2 8 x 75 cm2

Fracción del Estroma 10% confluencia 40% confluencia 80% confluencia

 Características de MSC
• Multipotente (Capacidad de diferenciarse en varios linajes)
– Adipocito, Osteoblasto, condrocitos, tenocitos, miocitos, células mesodermo
visceral).
– Posible diferenciación células de origen endodérmico y ectodérmico
(hepatocitos, neuronas y cardiomicitos)
• Multipotencia aplicada a la regeneración y reparación de tejidos.
• Inmuno-modulación (inmunosupresoras e anti-inflamatorias)
• Capacidad de emigrar hacia sitio de injurias o tumores
– MSC en tumores (modificación genética de MSC)
 Rol inmuno-modulador de las MSC

• Suprime proliferación de linfocitos T inducido por alo-antígenos

• Promueve la secreción de HLA-G5, suprime células T y modula
acción de células NK
• Suprime la proliferación, producción de anticuerpos, y quimiotaxia
de células B
• Baja proliferación y activación de células NK
• Disminuye la maduración y activación de las células dendríticas
• Modula a las células T reguladoras mediante IL-10
Rol inmuno-modulador de las MSC

Figure 1. Proposed mechanisms of the immunomodulatory effects of MSCs. Abbreviations: DC, dendritic
cell; IDO, indoleamine 2,3-dioxygenase; IL, interleukin; MSC, mesenchymal stem cell; NK, natural killer;
PGE2, prostaglandin E2; TGF-, transforming growth factor ; TNF-, tumor necrosis factor-; Tregs,
regulatory T cells. Adapted from [8] with permission from Blood.
 (Graft-versus-host-disease)

(Hematopoietic Stem cell)

 Aplicaciones clínicas de MSC

While MSCs are most commonly isolated from bone marrow [2], they are also isolated from other
tissues including adipose tissue [3,4], placenta [5], amniotic fluid [6], and umbilical cord blood [7,8].
Due to their accessi-bility and convenient expansion protocols, MSCs have been recognized as
promising candidates for cellular therapy.
 Aplicaciones clínicas “Clinical Trials”
• Injuria Ortopédica
– Osteogenésis imperfecta
• Injerto vs enfermedad del hospedero
• Trasplante de medula ósea
• Enfermedad cardiovascular (infarto miocardio)
• Enfermedades autoinmunes
– Enfermedad de Crohn (buenos resultados)
– Esclerosis múltiple (aun en estudio)
– Lupus eritematoso sistémico (buenos resultados)
– Artritis reumatoidea (aun en estudio)
• Enfermedad hepática (cirrosis hepática por HBV)
• Enfermedad renal
 Rutas de administración de MSC
• Por vía intravenosa
• Local intra-arterial inyección
• Local inyección; piel, cordón espinal, tejido cardiaco.
• Para tejidos como hueso y cartílago, uso de andamiaje de
biomaterial sintético adheridos con MSC.
Crecimiento de los “Clinical trials” con MSC
Distribución de los “Clinical trials” con MSC
 Problemas no resueltos y desafios
• MSC han ganado importancia terapéutica por:
– Baja inmunogenicidad, capacidad de inmunomoduladora y antiinflamatoria.
– Alto tropismo y localización en la zona de injuria
– Gran actividad reparadora y regeneradora
– No riesgo de teratomas
– No problemas éticos
• Problemas no resueltos con MSC.
– No existen protocolos estándares (cultivo y tratamientos)
– No se conoce con exactitud la interacción de MSC (regeneradora, inmuno-
moduladora, tropismo, anti-inflamatoria).
– No se conoce que ruta de administración es la adecuada, ni el tiempo ni momento
que se debe administrar las MSC.
– Duración del tratamiento o de por vida.
– No se conoce los efectos adversos en el tiempo
 Células Madre Hematopoyéticas (HSC)
• Las células Madre Hematopoyéticas (HSC), constituyen una importante estrategia
terapéutica para pacientes que sufren de una enfermedad hematológica (leucemias y
linfomas principalmente).

• Las HSC se obtienen de la Medula Ósea (mixtura de células, incluyendo HSC, Células del
estroma, Células madre mesenquimales, adipocitos etc.), Cordón umbilical (fuente de
células madre con permisividad, tolerancia a la incompatibilidad HLA y baja incidencia
de generar enfermedad del injerto contra el Huésped) y Aféresis de Células madre
CD34+ (Mas practico y se obtiene una buena población exclusiva de HSC).

• Las HSC, tienen capacidad de auto renovarse (generar nuevas células madre activas y
quiescentes).

• Las HSC, tienen una gran plasticidad, capaces de generar cualquier célula de la línea
Mieloide o Linfoide, así como otras células como cardiomiocitos, hepatocitos etc.
Células Madre Hematopoyeticas (HSC)

Hematopoietic and stromal cell differentiation.

Fuente de Células Madre Hematopoyéticas (HSC)
Marcadores celulares que identifican las HSC
ARTICULOS
• Articulo 1: “Induction of Pluripotent Stem Cells
from Mouse Embryonic and Adult Fibroblast
Cultures by Defined Factors”

• Articulo 2: “Recent technological updates and

clinical applications of induced pluripotent stem
cells”

• Artículo 3: “Application of Induced Pluripotent

Stem Cell Technology to the Study of
Hematological Diseases”
4
http://learn.genetics.utah.edu/content/stemcells/quickref
/
http://learn.genetics.utah.edu/content/stemcells/quickref
/
Korean J Intern Med 2014;29:547-557 http://dx.doi.org/10.3904/kjim.2014.29.5.547

Figure 1
Generation of patient-specific induced pluripotent stem cells (iPSCs) and clinical applications thereof. Somatic cells isolated from a patient are
reprogrammed into iPSCs by transduction with the four reprogramming factors, octamer-binding transcription factor 4 (Oct4), sex determining
region Y-box 2, Kruppel-like factor 4, and c-Myc. Genetic defects in iPSCs can be corrected via gene editing with zinc finger nucleases (ZFNs),
activator-like effector nucleases (TALENs), and the clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR) system. Next, iPSCs with
or without edited modifications are differentiated into various target cells for disease modeling, drug screening, and stem cell therapy. DAPI,
4',6-diamidino-2-phenylindole.
 GRACIAS
victor.neyra@upch.pe