Examenul macroscopic a mat fecale:Examinarea se face direct in recipientul
incare sa prelevat proba cu ochiul liber sau cu lupa,ajutandu-ne de o bagheta de
sticlasau cu o ansa.Se notaza :cantitatea scaunului,culoare ,miros,elemente patologice sau de mucus,puroi,sangeNotarea consistentei este necesara pt corectarea datelor obtinute prin examenul preparatului Stoll
Preparat direct in ser fiziologic:Principiu:suspensia de materii se face in ser
fiziologic care pastreaza stabiitatea trofozoitilor de protozoare a larvelor de helminti precum si culoarea naturala a elementelor parazitare.Tehnica de lucru:pe o lama se pune o picatura de ser fiziologic Cuajutorul unei anse metalice sau a unei baghete se preleva o mica cantitate de proba de examinat si se amesteca pe lama cu picatura de ser fiziologic.Se acopera cu o lamela.Tehnica de examinare :examinarea se face cu un obiectiv de 10xiar indentificarea fiecarui element parazitar decelat se face cu obiectivul de 40x.Rezultate:Chistii de protozoare apar foarte refringentisi de aceea se decelaza cu usurinta.Ouala de helminti prezinta toate detaliile de structura ,culoare reala.In ouale embrionate ca cele de tenie ,oxiur de larva,se obeserva miscari periodice ale larvei sau embrionului.Preparatul ne ofera posibilitatea sa determinam intensitatea parazitara ,numarand sau apreciind nr de oua ale unei specii de helmintpe intreaga supraf. a lamei.
Preparat in solutia LugolPrincipiu:Coloreaza membrana chistilor si detaliile de
structura interna.Coloreaza de asemenea amidonul in diferite ulori in functie de stadiul de digestie.Material necesar::solutie Lugol dublu:iod metaloid,iodura de potasiu, apa distilata.Tehnica de lucru: Este la fel ca la prepartul in ser fiziologic si examinarea se face si cu obiectiv de 40x.Rezultate:chistii de protozoare se coloreaza in galben-brun si prezinta detalii de structura accentuate:membrane chistice ,nuclei ,cariozomi,vacuole iodofile,grup de flageli,corpuscul parabazal.Ouale de helminti apar colorate in brun roscat intens cu detalii de structura accentuate. 1 Preparatul Kato si Miura:Principiu:cantitate de materii aproximativ cat un bob de grau,clarificata cu un amestec de apa-glicerina,lasa sa se vada prin transparenta ouale de helminti.Mat. Necesare:solutia Kato si Miura:glicerina ,apa distilata verde malechit sol apoasa3%.Sunt necesare dreptunghiuri de celofan taiate cu dimensiunile 3/4cmsi lame de sticla mari.Tehnica de lucru:dreptunghiurile de celofan se cufunda si se mentin cel putin 24 ore in solutie Kato inainte de utilizare.Se ia cu bagheta o cantitate de materii cat un bob de grau si se aseaza pe o lama mare.Se ridica cu o pensa un dreptunghi de celofan din solutia Kato si se aseaza pe materii.Se preseaza celofanul cu un corp tare si plat pana preparatul devine plat iar materiile de sub celofan se prezinta ca un disc .Se lasa preparatul 30 minsi apoi se examineaza la microscopcu obiectiv de 10x si 40xRezultate:toate ouale si embrioforii de helminti sunt decelabili prin metoda Kato.Ouale sunt de 5- 20 ori mai frecvente decat preparatul direct.Pentru un rezultat mai bun se recomanda sa se examineze 2-3 preparate.
Exemple de paraziti prin metoda Kato si Miura 2
Ouale de T. trichiura apar uneori decolorate iar alteori cand sunt
asezateperpendicular pe grosimea preparatului se vad in sectiune deci rotunde si foarte mici de 25um.In acest caz indentificarea oului se obtine miscand mult viza micrometrica,cand se poate recunoaste cu usurinta forma ovala oului precum si cele doua formatiuni polare mai transparente.Oul de A.lumbricoides apare uneori cu invelisul mamelonat estompat .In preparatele pastrate se poate observa primele faze de evolutie a oualelor fecundate.Oul de D.latum si mai rar F.hepatica prezinta uneori o turtire laterala ca o cuta ,forma oului si prezenta operculului servesc de indentificare
Metoda de flotatie:Principiu:intr-o solutie saturata de clorura de sodiu,ouale
unor helminti sunt ridicate spontan la suprafata.Mat. necesare:capac de pahar Borel de 4cm inaltime si solutie saturata de clorura de sodiu.Tehnica de lucru:se amesteca cca 2g de materii fecale in20ml solutie saturata clorura de sodiu,intr-n capac de pahar Borel.La inceput se pune foarte putina solutie se omogenizeaza,iar apoi se adauga putin cate putin .La sfarsit coloana de lichid trebuie sa aiba inaltimea de 2-2,5cm.Pe suprafata lichidului se aseaza o lamela care se lasa sa plutesca 30 min timp in care ouale usoare se ridica la suprafata.Apoi seridica lamela cu o pensa mentinandu-se lamela tot timpul orizontal.Lamela se pune pe o lama si se examineaza la microscop.Rezultate:Datorita densitatii ridicate a solutiei toate ouale usoare se ridica la suprafata lichidului si adera la lamela Sunt astfel concentrate oua de Ascaris lumbricoides,Trichuris trichiura s.a.
Metoda de centrifugare:Principiu:elemente parazitare grele sunt concentrate in
sediment prin centrifugare intr-o suspensie aceto-aceticasi eter,cu pH -5Mt. necesare:solutie aceto-acetica :acetat de sodiu cristalizat,acid acetic,apa distilata.Tehnica de lucru:se pun cca 2 g de materii intr-o sticla de 50ml cu dop de sticla rodat ,se adauga 20 ml de solutie aceto-acetica,se introduc perle de sticla si se agita din nou bine.Se lasa sa se sedimenteze 1 min ,se adauga un volum egal de eter si se agita din nou bine.Se centrifugheaza 3 min la 1500-2500 rot/min.Se formeaza 4 straturi :sedimentul,stratul de suspensie acida ,un strat subtire aderent de pereti si stratul de eter cu grasimi dizolvate.Se desprinde peretii eprubete stratul intermediar si se examineaza la microscop intre lama si lamela.Rezultate:sunt concentrate oua de helminti grele .Metoda se foloseste rar.
Metoda culturilor cu carbune in cutii inchise.Principiu:larvele se concentraza lent
in decurs de cateva zile intr-un amestec de materii fecale cu carbune ridicandu-se spontan catre picaturile deapa de condensare de sub capacul de cutie cu cultura.Mat. necesare:cutii din mat plastic cu capac si carbune activat pulbere.Tehnica de lucru:se face o pasta din 5 lingurite carbune activat si 45ml apa distilata .Se amesteca o cantitate de aprox 7 g de materii fecale cu aceiasi cantitate de pasta de carbune.Amestecul se aseaza in cutia de mat plastic in forma d egramajoara cu un con astfel incat atunci cand se inchide cutia sa se turteasca varful conului.Peste cutie se pune o hartie de filtru sau vata inbibata in apa care prin evaporare sa formeze picaturi de condensare.Citirea se face zilnic din ziua 2 pana in ziua 14cu o lumina laterala .Detrmina agitarea larvelor de helminti.Rezultate:larvele de S. stercolaris apar intre ziua 2-4 de la preparare .Larvele de A.duodenale apar intre ziua 5-14 3
Culturi pe mediul Loeffler:Principiu:Protozoarele cultiva pe un mediu diafazic
alcatuit dint-un suport solid inclinat in eprubeta si o faza lichida constituita din solutie fiziologica Utilizam mediu pt depistarea parazititlor E.histolytica si Trichomonas Materiale necesare:mediul Loeffler inclinat in eprubete,amidon de orez,streptomicina ,penicilina.Tehnica de lucru:insamantarea se face in mediu incalzit la 37 grade C.Se adauga ser fiziologic cald pana la jumatatea inaltimii mediului solid.Se insamanteaza cateva picaturi din scaunul dizenteric .Se adauga o ansa de amidon d eorez si o ansa de streptomicina.Mediul se pastreaza la 37grade C.Controlul se face la 24,48,72 ore .Rezultate:E.histolitica se deceleaza cu usurinta cu obiectiv de 10xdatorita refringentei sale.Cu obiectiv de 40x se observa miscarile caracteristice in general intr-o singura directie.Indentificarea se mai poate face si dupa culoare extemporanee cu tricrom.
Amprenta anala:Examenul amprentei anale ne ofera posibilitatea diagnosticului
oxiurezei si a teniazei de carne de vita ,deceland ouale de paraziti.Exista mai multe metode de recoltare a amprentei anale :cu celofan ,cu pelicula de colodiu,cu celofan adeziv. 4
Picatura groasa: Principiu:din sange asezat instrat gros pe lama si
hemolizat,raman numai leucocite le si parazitii concentrati pe o suprafata mica .Picatura groasa este o metoda de concentrare.Recoltare din pulpa degetului sau prin punctie venoasa .Se recolteaza 2 lameDupa recoltare lamele se aseaza orizontal pe masa.Picatura groasa nu se fixeaza ci se hemolizeaza.Lamele cu picaturile hemolizate se pun imediat in baia de colorant timp de 30- 40min.Spalarea se face cu multa atentie.Examinarea se face cu obiectiv cu imersie si ocular de 7x.Rezultate:metoda este excelenta pt diagnosticul parazitozelor sanguine deoarece concentrarea este importanta.Indentificarea parazititlor este mai dificila decat in frotiu.
Infectia cu Trichomonas vaginalis:Este un singr parazit care poate fi pus in
evidentain secretia vaginala.Recoltarea:se face in primele zile postmenstruale ,la 48 ore dupa ultima spalatura sau raport sexual I la 6-7 zile dupa tratament local.Metode de examinare :Preparat direct:T.vaginalis se indentifica simplu dupa forma ,dimensiuni si forma caracteristica.Frotiu colorat :citoplasma parazitului apare colorata in albastru- violet iar nucleul si flagelii in rosu –violetCulturi in mediu Loeffler:parazitii se recunosc dupa forma corpului si miscarile caracteristice