ESTANDARIZACIÓN DE UN MÉTODO ESPECTROFOTOMÉTRICO (CURVA

DE RINGBOM)

PARADA Andrés. MORALES M. Harold Santiago. QUINTERO Josué Leonardo

RODRIGUEZ G. David Alejandro. Universidad Distrital Francisco José de
Caldas. Facultad de Ciencias y Educación. Proyecto Curricular Licenciatura en
Química. 10 de mayo de 2018. Análisis Químico Instrumental.

Resumen.
En el presente informe el lector podrá encontrar la importancia, la realización y la
aplicación de la curva de Ringbom en los métodos instrumentales para la determinación
de absorbancias, longitudes de onda y concentraciones; a través de métodos
experimentales para obtener el intervalo óptimo de concentraciones, preparando una serie
de soluciones patrón del analito, luego medir sus absorbancias y así poder hallar la parte
lineal de la gráfica y obtener el intervalo óptimo de concentraciones a utilizar en una curva
de calibración.
Palabras Clave
Curva de Ringbom, métodos instrumentales, absorbancia, longitud de onda, soluciones
patrón, concentraciones, curvas de calibración.
Abstract.

In the present report, the reader can find the importance, the realization and the
application of the Ringbom curve in the instrumental methods for the determination of
absorbances wavelengths and concentrations; through experimental methods to obtain the
optimal range of preparation, preparing a series of standard solutions of the analyte, then
measure their absorbances and thus be able to find the linear part of the line and obtain
the optimal range of use in a calibration curve.
Key Words
Ringbom curve, Instrumental methods, absorbance, wavelengths, standard solutions,
concentrations, calibration curve.

Objetivos: • Identificar la relación entre la

absorbancia y la concentración de
General: una solución.
Conocer los principios básicos de los • Realizar una curva de calibración que
métodos para la determinación permita encontrar la concentración de
espectrofotométrica de la concentración trabajo.
de sustancias.
• Aplicar la curva de Ringbom para
Específicos: estandarizar métodos
espectrofotométricos.
• Calcular la concentración de una
muestra problema, a partir de la
curva.
• Cuantificar vainillina en una muestra
de esencia comercial por medio de la
espectrofotometría ultravioleta.
• Estudiar el efecto del pH sobre el
espectro de absorción de la vainillina
por medio de espectrofotometría
ultravioleta.
Reseña histórica
Métodos espectrofotométricos
La espectrofotometría es uno de los
métodos de análisis más usados, y se
basa en la relación que existe entre la
absorción de luz por parte de un
compuesto y su concentración. Cuando
se hace incidir luz monocromática (de
una sola longitud de onda) sobre un
medio homogéneo, una parte de la luz
incidente es absorbida por el medio y
otra transmitida, como consecuencia de
la intensidad del rayo de luz sea
atenuada desde Po a P, siendo Po la
intensidad de la luz incidente y P la
intensidad del rayo de luz transmitido.
Dependiendo del compuesto y el tipo de
absorción a medir, la muestra puede
estar en fase líquida, sólida o gaseosa.
En las regiones visibles y ultravioleta del
espectro electromagnético, la muestra es
generalmente disuelta para formar una
solución.
Cada sustancia tiene su propio espectro
de absorción, el cual es una curva que
muestra la cantidad de energía radiante
absorbida, Absorbancia, por la sustancia
en cada longitud de onda del espectro
electromagnético, es decir, a una
determinada longitud de onda de la
energía radiante, cada sustancia absorbe
una cantidad de radiación que es distinta
a la que absorbe otro compuesto
[ CITATION Cam10 \l 9226 ]
Curva de Ringbom
Intervalo óptimo de concentraciones:
Se debe trabajar, en lo posible, con
concentraciones que permitan que se
cumpla la ley de Beer, con el fin de
obtener una curva de calibración que
tenga una relación lineal.
Para obtener el intervalo óptimo de
concentraciones primero se construye
la curva de Ringbom, que consiste en
construir una gráfica de absorbancia
(100- %T) vs. Log Concentración. Los
datos se obtienen preparando una serie
de soluciones patrón del analito, que
cubran una variación de por lo menos
dos órdenes de magnitud de
concentración de este y se miden las
transmitancias correspondientes a la
longitud de onda analítica escogida. Para
la mayoría de los sistemas la curva de
Ringbom corresponde a una curva en
forma de S.
La parte lineal de esta gráfica permite
obtener el intervalo de concentraciones
óptimo o el intervalo que presentara una
relación lineal entre absorbancia y
concentración. En esta gráfica, los
cruces de la parte recta (la intermedia),
con la parte baja y con la parte alta,
pueden servir para determinar un valor
para los límites de detección mínimo y
máximo, respectivamente.

Estandarización De Un Método
Espectrofotométrico (Curva De
Ringbom)
Lo primero que se debe realizar es elegir
la longitud de onda analítica, para ello se
realiza un barrido espectral experimental
a una sustancia con una concentración
conocida, luego con esta muestra de
concentración conocida (sustancia
patrón), esta se debe diluir para lograr
diferentes concentraciones y así realizar
un análisis de cada una al medir su
absorbancia; todas a la longitud de onda
analítica escogida.
Después de esto se debe graficar la
absorbancia vs concentración para así
encontrar su relación y también graficar
el porcentaje de transmitancia vs la
concentración para poder determinar la
curva de Ringbom.
Lo necesario para realizar la curva de
Ringbom son los gráficos, la linealidad, la
cual determinara el intervalo de
concentraciones en que el sistema llega
a cumplir la ley de beer y así logrando
una linealidad entre la concentración de
la sustancia y la absorbancia presentada.
[ CITATION Gar05 \l 9226 ]
Características de la curva de
Ringbom:
De acuerdo con la Australian Pesticides
and Vetherinary medicines Authority
(APVMA) 17, la linealidad debe ser
establecida mediante una inspección
visual y debe observarse que el
comportamiento de la respuesta analítica
está en función de la concentración del
analito.
La exactitud del método se verifica
mediante el análisis de un material de
referencia certificado, o comparando los
resultados con los resultados obtenidos
por otro método confiable sobre la misma
muestra, de no ser posible ninguno de
estos procedimientos se recurre a las
pruebas de recuperación, las cuales
suministran evidencias sobre la validez
de los resultados obtenidos por la curva.
[ CITATION Rai09 \l 9226 ]
Aplicación de Curva de Ringbom
La curva de Ringbom es muy usada en
las industrias alimenticias, en los
pesticidas, fármacos, entre otras
empresas con actividades similares, por
cuestiones prácticas y económicas,
La industria de pesticidas y fármacos
utilizan este método ya que suelen tener
componentes dañinos para la salud
humana y para el medio ambiente, en el
caso de las industrias alimenticias,
requieren de esto para poder pasar los
estrictos estándares de calidad que
exigen los alimentos.
Otra industria que utiliza este método de
la curva de ringbom y la
espectrofotometría, es la industria de
aguas de las ciudades, ya que algunas
de estas exigen que algunos
componentes estén en muy poca
cantidad, es por ello que realizan las
calibraciones de equipos por medio de la
curva de ringbom que les brinda una
exactitud muy alta.
[ CITATION JAI17 \l 9226 ]
Equipos
ESPECTROMETROSHIMADZU UV1800
Es extremadamente versátil con una
funcionalidad completa de 190nm hasta
1100nm, además tiene conexiones para
computadora y para dispositivos USB
que permiten archivar los datos
obtenidos en el instrumento, está
construido con un software que posee
una precisión operacional muy alta, tiene
varios modos de uso, como: modo
fotométrico, que mide absorbancia
transmitancia, el modo espectro, que
obtiene la banda espectral de las
muestras, un modo cuantitativo que
permite calcular las longitudes de onda y
concentraciones desconocidas y algunas
curvas de concentración, modos de
tiempo en los cuales hace escaneo en
función al tiempo entre otros modos muy
útiles en las practicas, es un modelo con
haz de luz doble que permite comparan
absorbancia de blanco y muestra al
mismo tiempo, precisión de +/- 1nm.
ESPECTOFOTOMETRO SAFAS 2
El espectrofotómetro SAFAS 2 está
equipado con lámparas de larga duración
y de deuterio y tungsteno de baja
temperatura, con centrado totalmente
automático para una precisión y energía
optimizadas, día tras día. No implican
derivas térmicas y brindan estabilidad
inmediata después de la auto calibración,
sin necesidad de que se deba esperar un
precalentamiento.
Poseen un rango espectral de 185nm -
1000nm, con una precisión de +/-0,2nm y
una velocidad de lectura de 7000nm por
minuto. Por último los modelos SAFAS 2,
están equipados con una excelente
óptica, montados exclusivamente en
soportes y bases de aluminio, sin lente ni
fibra óptica. Su amplia apertura numérica
proporciona una energía muy alta y una
excelente relación señal/ruido.
[ CITATION AND10 \l 9226 ]
Metodología
1) Preparar 100 mL de solución stock
de la sal. (CuSO4)
2) Realizar un barrido
espectrofotométrico desde 400 ni
hasta 700nm.
3) Graficar la curva espectral e
identificar la longitud de onda de
máxima absorción.
4) Preparar 7 diluciones que presenten
absorbancias entre 0,1 a 2.0, No
olvidar tomar el blanco antes.
5) Medir Absorbancia y Transmitancia
de cada solución.
6) Calcular la concentración de la
muestra problema.
7) Realizar Curva de Ringbom.
RESULTADOS
DISCUSION DE RESULTADOS
CONCLUSIONES
REFERENCIAS
 ANDIA. (2010). Equipos varios para laboratorio. Bogotá, Colombia.: ANDIA.

 Castro, C. (2010). FUNDAMENTOS DE ESPECTROFOTOMETRÍA. Lima: Guía TP

QUMICA.

 García Galvis, J., & Ballesteros González, M. I. (2005). EVALUACIÓN DE

PARÁMETROS DE CALIDAD PARA LA DETERMINACIÓN DE CARBONO
ORGÁNICO EN SUELOS. Bogotá: Revista Colombiana de Química, vol. 34, núm. 2,
2005, pp. 201-209.

 JAIRO E. MERCADO CAMARGO, Q. M. (2017). VALIDACIÓN DE LA

METODOLOGÍA ANALÍTICA PARA LA DETERMINACIÓN DE FÓSFATO EN AGUA
POTABLE POR ESPECTROFOTOMETRÍA ULTRAVIOLETA-VISIBLE-MÉTODO DEL
AZUL DE MOLIBDENO CON ÁCIDO ASCÓRBICO. Cartagena, Colombia.:
UNIVERSIDAD DE CARTAGENA.

 Raibel Suarez, E. A. (2009). Validación de un método analítico para la determinación

de magnesio eritrocitario. Mérida, Venezuela.: Facultad de Farmacia y Bioanálisis,
Universidad de Los Andes.