Control de Calidad PDF

Control de la calidad analítica
en Química Clínica
Centro de Analistas Clínicos

Bahía Blanca
21 y 22 de Agosto, 2009
Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 1

Argentina
Calidad
• De acuerdo a ISO, es “la totalidad de

las características de una entidad
que le confiere su aptitud para
satisfacer necesidades establecidas
o implícitas.”

Argentina
Calidad de servicio bioquímico
• Información con características de:
– Validez
– Oportunidad
– Exactitud analítica
– Sensibilidad y especificidad clínica.
• Desde el punto de vista del médico y el paciente
la calidad de la información que entrega el
laboratorio refleja el estado fisiopatológico del
paciente en el momento de la toma de muestra.

Argentina
Definiciones
• Aseguramiento de la calidad
– “Planificar todas las acciones necesarias
para proveer una adecuada confiabilidad
de que el servicio satisface las
necesidades particulares”

Argentina
Proceso del Laboratorio Clínico
FASE
PREANALITICA
FASE ANALITICA
•Recepción de FASE
la solicitud POSANALITICA
•Pretratamiento de la
•Preparación del muestra
•Informe
paciente •Análisis
•Interpretación
•Cálculos
•Toma de muestra Bioquímica-Clínica
•Resultado
•Conservación y
transporte

Argentina
Fase analítica

Argentina
Descripción de un proceso
analítico
• Principio analítico
• Obtención de la muestra (pretratamiento y
conservación)
• Factores biológicos de importancia para la obtención
de la muestra
• Materiales necesarios (reactivos y equipamiento)
• Procedimiento de medida
• Bioseguridad
• Intervalo de Referencia
• Interpretación clínica
• Notas técnicas (fuentes de errores, accidentes,
problemas, etc)
• Bibliografía
Argentina
Procedimientos de medida
Características de Practicabilidad
• Educación y entrenamiento del

operador
• Disponibilidad de Reactivos
• Tiempo de ejecución
• Tipo y volúmen de muestra
• Costos
• Bioseguridad
• Posibilidad de automatización
Argentina
Datos de la realidad
1814 Laboratorios usando el mismo método, reactivo y calibrador.
Laboratorios con sistemas analíticos

similares tienen desempeño analítico
distinto.

Argentina
Procedimientos de medida
Características de Confiabilidad
• Especifidad analítica
• Interferencias analíticas
• Linealidad
• Límite de detección
• Límite de cuantificación
• Intervalo de medición
• Error Aleatorio
• Error Sistemático

Argentina
Límite de detección
• Límite de detección es
el valor promedio de
una distribución
cuyos valores
exceden en un 95% el
valor de Límite del
Blanco.
• LD = LB + 1.65xDE
• Límite de Blanco es el
percentilo 95 de 100
determinaciones de
valor blanco.

Argentina
Límite de cuantificación
• El error de medición a valores cercanos al

LD puede ser tan grande que impida
informa el resultado.
• El Límite de cuantificación es el mínimo
valor medible manteniendo los requisitos
de calidad analítica.
• En necesario conocer el CV y el Error
Sistemático a ese nivel de concentración.

Argentina
Errores analíticos
• Aleatorios
– Son aquellos errores de magnitud y
sentido impredecibles e inevitables.
Producen la imprecisión de un proceso
analítico. No se pueden evitar pero sí
minimizar.
• Sistemáticos
– Son aquellos errores de magnitud y
sentido definido. Son evitables.
Argentina
Error Aleatorio
Precisión: Grado de concordancia entre resultados obtenidos

cuando se analiza repetidamente una misma muestra
estable.
La Imprecisión se mide
por la Desviación Estándar
s=
∑ i
( x − x ) 2
n −1 Error Aleatorio

Argentina
Definiciones
• Repetibibilidad
– Grado de concordancia entre resultados
obtenidos por una prueba en mediciones
sucesivas bajo las mismas condiciones de
medida.
• Reproducibilidad
– Grado de concordancia entre resultados
obtenidos por una prueba en condiciones distintas
de operador, sistema analítico, etc.

Argentina
Imprecisión de un proceso
¾ La variabilidad, expresada como la

varianza total, es la suma de las varianzas
de cada paso del proceso.
n
s = ∑s
n
∑s
2 2
T i sT = 2
i
i =1 i =1

Argentina
Otra forma de medir la imprecisión:
El Coeficiente de Variación
¾Es la expresión de la Desviación

Estándar relativa al valor promedio.
s
CV = _
• 100
x

Argentina
Causas de imprecisión
9 En la serie analítica
– Errores en la medida de los reactivos y/o las muestras
– Evaporación de las muestras
– Error fotométrico
– Variación de la temperatura de incubación
– Deriva electrónica de la calibracion
9 Entre series
– Error aleatorio en la calibración
– Deterioro del calibrador luego de la reconstitución
9 Día a día
– Variación vial a vial del calibrador
– Errores en la reconstitución de calibradores y/o reactivos
– Error aleatorio de la calibración

Argentina
Perfil de precisión
En general, la precisión depende de la concentración
• Caso A) Analitos con rango clínico estrecho (electrolitos)

• Caso B) Analitos con rango clínico extendido (hormonas,
metabolitos)
• Caso C) Alto CV cerca del límite de detección y luego
disminuye a concentraciones mas altas.

Argentina
Error Sistemático
• Diferencia entre la mejor medida obtenible

y el “Valor Verdadero”.
Error Sistemático _
ES = x −"VV " = + 20 mg%
⎛_ ⎞
⎜ x −"VV " ⎟
_ ES (%) = ⎝ ⎠ • 100 = + 22,2%
“VV” x "VV "
90 mg% 110 mg%

Argentina
Error Sistemático
Constante Proporcional
Hallado
Hallado
m=1 m<>1
Referencia Referencia
Hallado = a + m.Referencia Hallado = m.Referencia
Argentina
Error sistemático mixto
Ordenada al
origen < > 0
Hallado
Pendiente < > 1

Referencia
Punto de coincidencia
Hallado = Referencia
Argentina
Creatinina, casos
LAB 1 LAB 2 LAB 3 LAB 4
Ordenada 0.057 -0.014 0.476 0.368
Pendiente 0.9613 0.9489 0.7894 0.9854
Correlación 0.9976 0.9988 0.9810 0.9988
MDRD a 1 mg%,
ml/min
59 63 47 35

Argentina
Creatinina, casos
Lab 1 Lab 2
Hallada, mg%
3. 50 3. 50
Hallada, mg%
3. 00 3. 00
2. 50 2. 50
2. 00 2. 00
1. 50 1. 50
1. 00 1. 00
0. 50 0. 50
0. 00 0. 00
0. 00 0. 50 1. 00 1. 50 2. 00 2. 50 3. 00 3. 50 0. 00 0. 50 1. 00 1. 50 2. 00 2. 50 3. 00 3. 50
Referencia, m g% Referencia, m g%
Lab 3 Lab 4
Hallada, mg%
3. 50 3. 50
Hallada, mg%
3. 00 3. 00
2. 50
2. 50
2. 00
2. 00
1. 50
1. 50
1. 00
0. 50 1. 00
0. 00 0. 50
0. 00 0. 50 1. 00 1. 50 2. 00 2. 50 3. 00 3. 50 0. 00
0. 00 0. 50 1. 00 1. 50 2. 00 2. 50 3. 00 3. 50
Referencia, m g%
Referencia, mg%

Argentina
Definiciones
• Inexactitud
– Antes
• Diferencia entre el valor promedio de varias
determinaciones y el valor verdadero o de
referencia.
– Hoy
• Diferencia entre el valor obtenido y el valor
verdadero o de referencia.
• Veracidad
– Grado de concordancia entre el valor obtenido de
muchas determinaciones y el valor de referencia.
Argentina
Exactitud de las mediciones
Exactitud
Grado de concordancia entre el valor informado y el
valor verdadero
Error Sistemático
– Grado de desvío del valor
promedio de muchas
determinaciones y el
Error total de la
valor de referencia. medición o
Imprecisión inexactitud de la
– Grado de dispersión de medición
los resultados obtenidos
para un mismo analito
sobre una misma muestra
estable en condiciones
establecidas

Argentina
Analizando las muestras de los pacientes
Ej. : Glucosa
Error Sistemático = 22,2% ES
Desvío Estándar = 5 mg%
CV = 4,5%
90 mg% 95 mg% 110 mg% 125 mg%
Inexactitud = + 20 mg% = 22,2%
Inexactitud = + 5 mg% = 5,6 %
Inexactitud = + 35 mg% = 38,9%

Argentina
Si el procedimiento analítico tiene Error Sistemático nulo o
despreciable, entonces la inexactitud de una medida individual
queda determinada en forma aleatoria. El resultado obtenido
puede ser cualquiera entre x+3DE y x-3DE.
_
- 3DE + 3DE
x = VV

Argentina
Error Total Máximo es la máxima inexactitud a un
determinado nivel de concentración y en un sistema
analítico en condiciones estadisticas estacionarias.
Error Sistemático (ES) = x – “VV”
“VV” x
Error Aleatorio (EA) = 3xDE
Error Total Máximo = ES + EA

Argentina
Cálculo del Error Total Máximo
⎛⎛_ ⎞ ⎞
⎜ ⎜ x −"VV " ⎟ + 3 × DE ⎟
ES + EA
ETM = *100 = ⎜ ⎝ ⎠ ⎟ ×100
"VV " ⎜ "VV " ⎟
⎜ ⎟
⎝ ⎠

Argentina
Ejercicio: Cálculo del Error Total Máximo
• Queremos calcular el ETM de un método

para determinar la actividad catalítica de
ALT a una concentración crítica de 50
U/L. De los datos del Control Interno
sabemos que CV=7%.
• Debemos calcular el Error Sistemático y
Aleatorio a dicha concentración crítica y
aplicar la fórmula del Error Total Máximo:
ETM= ES% + EA%

Argentina
Ejercicio: Cálculo del error sistemático
• Se debe disponer de un suero con valor de referencia

certificado de ALT en el orden de la concentración
crítica (50 U/L).
– Alternativa: un suero nativo con valores asignados por
un método de rutina validado.
• Analizamos dicho material durante tres días
consecutivos por triplicado, en condiciones de
estricta rutina y bajo control estadístico de la calidad
y obtenemos, por ejemplo, 48 U/L.
• Calculamos el Error Sistemático:
_
X − Valor Asignado 48 − 50
ES = • 100 = • 100 = −4%
Valor Asignado 50

Argentina
Ejercicio: Cálculo del Error Aleatorio
Calculamos el valor de la Desviación Estándar a partir

de los datos del Control de Calidad Interno:
_
CV • X 7 • 48 U L
DE = = = 3.36 ≈ 3.4 U L
100 100
Con el valor de la Desviación Estándar calculamos
el Error Aleatorio:
3 • DE 3 • 3.4 U L
EA = • 100 = • 100 = 20.4%
Valor Asignado 50 LU

Argentina
Ejercicio: Cálculo del ETM
• Finalmente sumamos los dos errores.

Tener en cuenta que en el caso del
Error Sistemático se utiliza –siempre- el
valor Absoluto.
ETM = ES% + EA% = 4% + 20.4% = 24.4%

Argentina
Medición de la variación
Dos conjuntos de datos pueden tener

promedios similares pero igualmente
ser muy distintos.
¿Cómo expresamos cuantitativamente la

variación en un conjunto de datos?

Argentina
La Varianza
N
1
V = ∑(xi − x)2
N i=1
La varianza es la media del cuadrado de
las diferencias entre los datos individuales y la
media del conjunto de datos.

Argentina
La Desviación Estándar
N
1
S = V = ∑(xi − x)2
N i=1

Argentina
Estimación de la desviación estándar
• A partir de un mínimo de 20 determinaciones en dias distintos
(Precisión total)
• A partir de las diferencias de medidas duplicadas (Precisión
intraensayo)
– Dadas k diferencias de medidas duplicadas
d1, d2, d3, ….dk
una estimación de la S, está dada por:
∑ d i2
S = i =1
2k

Argentina
Componentes de la imprecisión

Argentina
Intervalo de confianza
• Intervalo de datos que contiene al valor
verdadero:
__
ts
X ±
n
Siendo t el valor de Student para el nivel
de confianza determimado
Argentina
Comparación de dos promedios
Paso 1: Elegir el nivel de probabilidad (nivel de
significancia) de la prueba y verificar que las S no
difieren significativamente.
• Paso 2: Calcular la desviación estándar mezcla de
las dos estimaciones para obtener una mejor
estimación de la S. __ __
X A− XB
t=
( n A − 1) S A2 + ( n B − 1) S B2 1 1
× +
n A + nB − 2 n A nB
• Comparar el valor de t hallado con el t crítico para el

nivel de confianza elegido.

Argentina
Comparación del valor hallado
con el valor de referencia
• Elegir el nivel de confianza de la prueba.

• Calcular el estadístico t mediante:
__
( x − VR ) n
t=
S
• Comparar el valor de t hallado con el
valor crítico al nivel de confianza elegido

Argentina
Comparación de desviaciones
estándar (Prueba F)
• Esta prueba estadística se utiliza para decidir si
dos estimadas de la desviación estándar
difieren significativamente.
• Para ello se realizar el cociente de la varianza
mayor sobre la menor y se compara el
estadístico obtenido con el valor crítico para el
nivel de probabilidad elegido.
S A2
F= 2
SB
Comparar el valor de F obtenido con el F crítico.

Argentina
Ejemplo Prueba F
• Comparar las siguientes desviaciones

estándar
– SA = 0.93, nA=9
– SB = 1.71, nB=12
• Calculo F
F = (1.71)2 / (0.93)2 = 3.38
El valor F crítico para los grados de libertad es 3.7,
por lo tanto no hay razón para creer que las
desviaciones estándar son distintas.

Argentina
¿El ETM que tengo en mi
procedimiento analítico es
aceptable?

Argentina
Elementos de la calidad analítica
2 1
Creación de la Especificaciones de
Calidad Analítica Calidad Analítica
3
Control de la
Calidad Analítica

Hyltoft Petersen y col.:Argentina
Eur J Clin Chem Clin Biochem, 1996; 34: 983-999
Requisitos basados en
Paso 1 Variabilidad Biológica
Precisión-Veracidad
Otros criterios
Estrategia clínica
Criterio profesional
Intervalo de referencia
2 1
3
Control de la
Calidad Analítica
Argentina
Jerarquía de procedimientos para establecer
las especificaciones de calidad analitica
1. Evaluación de los efectos del desempeño analítico sobre las

consecuencias clínicas en cuadros clínicos específicos.
2. Evaluación de los efectos del desempeño analítico sobre las
decisiones clínicas en general:
1. Datos basados en la variabilidad biológica
2. Datos basados en la opinión del clínico
3. Recomendaciones profesionales publicadas
1. A partir de grupos de expertos nacionales o
internacionales
2. A partir de grupos de expertos locales o individuales.
4. Objetivos de calidad establecidos por:
1. Organismos reguladores (por ej. CLIA)
2. Organizadores de PEEC
Strategies to set global analytical quality specifications in

Laboratory Medicine, Scand
Daniel Mazziotta J Clin
Fundación Lab Invest, Vol 59, Nº7;481999
Bioquimica
Argentina
Criterio de calidad analítica basado en
la Variabilidad Biológica: Precisión
Optimo Æ CVa ≤ 0,25 CVintra

Deseable Æ CVa ≤ 0,50 CVintra
Minimo Æ CVa ≤ 0,75 CVintra
Ejemplo : Glucosa, CVintra = 6.5 %
CVa óptimo = 0,25 x 6.5 % = 1.6 %

CVa deseable = 0,5 x 6.5 % = 3.3 %
CVa mínimo = 0,75 x 6.5 % = 4.9 %

Argentina
Criterio de calidad analítica basado en la
Variabilidad Biológica
Error Sistemático
Optimo Æ ES ≤0,125 x (CVi2 + CVe2)1/2
Deseable Æ ES ≤ 0,25 x (CVi2 + CVe2)1/2
Minimo Æ ES ≤ 0,375 x (CVi2 + CVe2)1/2
Ejemplo : Glucosa, CVi = 6.5 % y CVe = 7.7%

ES óptimo = 1.3 %
ES deseable = 2.5 %
ES mínimo = 3.8 %

Argentina
Criterio de calidad analítica basado en la
Error Total
• El Error Total Máximo se calcula teniendo

en cuenta dos probabilidades: 95% y 99%.
– A 95%: ETM = ES + 1.65xCV
– A 99%: ETM = ES + 2.33xCV
• Normalmente se determina el ETM

considerando el 95% de la distribución.

Argentina
Límites de aceptabilidad para el ETM
Probabilidad 100%
- LA x = “VV” + LA

Argentina
Probabilidad 100%
- LA x = “VV” + LA

Argentina
Probabilidad del 95%
- LA x = “VV” + LA

Argentina
Especificaciones de Calidad basadas
en la Variabilidad Biológica
Nivel Optimo Nivel Deseable Nivel Mínimo
CVa
≤ 0,25.CV i
B
≤ 0,5.CV B
i
≤ 0,75.CV B
i
ES
≤ 0,125. (CV ) + (CV ) ≤ 0,25. (CV ) + (CV ) ≤ 0,375. (CV ) + (CV )
i 2 e 2 i 2 e 2 i 2 e 2
B B B B B B
ETM
≤ ES optimo
+ 1,65.CV optimo
≤ ES deseable
+ 1,65.CV deseable
≤ ES minimo
+ 1,65.CV minimo

Argentina
Glucosa: CVi =6.5% CVe= 7.7%
Precisión Error Error Total

Sistemático
Mínimo 4.9% 3.8% 11.9%
Deseable 3.3% 2.5% 7.9%
Óptimo 1.6% 1.3% 3.9%

Argentina
Criterios para el uso de los
requisitos de calidad analítica
z Para analitos con gran control homeostático
utilizar criterios mínimos (ej. calcio, sodio,
albúmina).
z Para analitos con variabilidad intraindividuo
mas amplia, utilizar criterios óptimos (ej.
triglicéridos, creatinfosfoquinasa, etc.)
z En todos los casos, cuando se comienza a
tratar de controlar la calidad analítica,
conviene fijar requisitos que se puedan lograr
y paulatinamente elevar el nivel según
corresponda.
Argentina
Especificaciones Deseables basadas en la
Variación Especificación
Analito Biológica
CVi CVe EA% ES% ET%
Alaninoaminotransferasa 24.3 41.6 12.2 12 32.1
Bilirrubina Total 25.6 30.5 12.8 10.0 31.1
Calcio 1.9 2.8 1.0 0.8 2.4
Colesterol 6.0 14.9 3.0 4.0 9.0
Creatinina 4.3 12.9 2.2 3.4 6.9
Glucosa 4.9 7.7 2.5 2.3 6.3
Hematocrito 2.8 6.4 1.4 1.7 4.1
La base de datos de Variabilidad Biológica se puede

encontrar en: WWW.WESTGARD.COM
Argentina
Aplicación al ejercicio de ALT
En el ejercicio de ALT obtuvimos un ETM=20.4%.
De la tabla anterior observamos que para ALT:
Variación Biológica Especificación
Analito
CVi CVe EA% ES% ET%
Nuestro procedimiento para ALT cumple con el requisito

de ETM: 20.4% < 32.1%

Argentina
Ejercicio: Creatinina
• Queremos calcular los requisitos de calidad analítica
para la Creatinina para el nivel Deseable según el
criterio de Variabilidad Biológica.
• Vamos a la Base de Datos de Variabilidad Biológica y
encontramos que: CVintraindividuo=4.3% y CV entre
individuo=12.9%
• Cálculo del requisito para error aleatorio:
CVa ≤ 0.5xCVi = 0.5x4.3% =2.2%
• Cálculo del requisito para Error Sistemático:
ES ≤ 0.25 [CVi2+CVe2]^1/2 =0.25x13.6 = 3.4%
• Cálculo del Error Total Aceptable:
ETA=ES+1.65CVa=3.4%+1.65x2.2%=7.0%

Argentina
Requisitos…
• Los procedimientos analíticos deben

cumplir los requisitos de calidad
analítica para cada componente del
Error Total.

Argentina
Aplicación al ejercicio de ALT
Variación Biológica Especificación

Analito
CVi CVe EA% ES% ET%
• Error sistemático: - 4 % (a 50U/L)

• Error aleatorio: 20.2%
• Error Total Máximo: 24.2% (a 50 U/L)

Argentina
Hay que controlar el desempeño analítico
Pero antes hay que evaluar y verificar si el

desempeño es aceptable

Argentina
Paso 2
2 1
3
Control de la
Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica Calidad Analítica 64
Argentina
Factores que influyen la calidad
analítica
Factores Externos Factores Internos
Permanentes Permanentes
principio analítico condiciones de

linealidad implementación
interferencias temperatura, volúmen,
especificidad
tiempo.
equipamiento función de calibración
reactivos y calibradores utensilios
trazabilidad del calibrador Variables
Variables Variaciones en el
desempeño
Variaciones entre lotes
• Precisión y sus
• reactivos componentes
• calibradores • Calibración
• insumos
Responsabilidad de la Industria Responsabilidad del Laboratorio

Argentina
Sistemas analíticos
i) Reactivos
Sistemas analíticos Unico
ii) Calibrador
homogéneos Fabricante
iii) Instrumento
i) Reactivos Fabricante 1
Sistemas analíticos Fabricante 2
ii) Calibrador
heterogéneos
iii) Instrumento Fabricante 3

Argentina
Creación de la Calidad Análítica
Industria
Validación en fábrica
Cumplir con los criterios de
confiabilidad
Estudio de Conmutabilidad de
calibradores y controles
Trazabilidad de los valores asignados a
calibradores y controles

Argentina
Creación de la Calidad Analítica
Laboratorio
Implementación
Condiciones locales
Uso de procedimientos e instrucciones constantes
Disponibilidad de procedimientos escritos
Si se utilizan sistemas no homogéneos, debe
comprobarse la conmutabilidad de calibradores y
controles.
Verificación de sistemas homogéneos
Selección de métodos en base a la EEC
Comparación con otros métodos disponibles

Argentina
Error sistemático
• La Evaluación Externa de la Calidad

demuestra que la principal causa de
dispersión entre laboratorios es de
origen sistemático.

Argentina
Causas de falta de veracidad en las
mediciones
• Inadecuada definición de la cantidad
– ej. identidad química no conocida exactamente
• Calibración insuficiente
– ej. calibrador sin trazabilidad certificada
• Insuficiente especificidad del método
• Errores sistemáticos en pasos metodológicos
individuales
– ej. errores volumétricos, fotométricos, etc.
• Deterioro preanalítico de la muestra
– ej. inadecuada preservación
• Errores instrumentales

Argentina
Trazabilidad [VIM:1993, 6.10]
Propiedad del resultado de una medición o del valor de

un estándar la cual permite relacionarlos a una referencia
establecida, usualmente estándares de medida nacional o
internacional, a través de una cadena ininterrumpida de
comparaciones, todas teniendo incertidumbres establecidas.

Argentina
Definición SI CGPM
Procedimiento BIPM, INM, LRA
Primario
Calibrador primario
Procedimiento
secundario
INM, LRA
Calibrador secundario
TRAZABILIDAD
Procedimiento de medida
CALIBRACIÓN
elegido por el fabricante

Fabricante
Calibrador de
trabajo del fabricante
Procedimiento de medida de
trabajo del fabricante
Calibrador del kit
Procedimiento de rutina
Muestra del paciente LABORATORIO

CLINICO
Resultado

ISO 17511 Argentina
La cadena ininterrumpida de comparaciones implica:
- Todos los procedimientos de medida tienen que tener
la misma especificidad.
- Cada calibrador debe ser conmutable.

Argentina
Conmutabilidad
• Característica de un material procesado que le
da la propiedad de comportarse como un
suero nativo fresco cuando se analizan con
diferentes procedimientos de medida.
• Idealmente los calibradores y controles –

materiales procesados por la industria -
deberían ser conmutables con los materiales
de los pacientes.

Argentina
Proceso típico de materiales de control o
calibradores
Centrifugación Recalcificación
Toma de muestra Plasma Suero
Centrifugación
Coagulación Suero
Agregado de FILTRACIÓN
•Fracciones lipoprotéicas
componentes
•Antimicrobianos DIÁLISIS
•Estabilizadores INTERCAMBIO IONICO
•Tampones
ADSORCIÓN
•Analitos
ÓSMOSIS REVERSA
Liofilizado
•Homogeneización
•Filtración 0.22 micrones Matriz
•Dispensado modificada
Congelado
< -50 Cº
Argentina
Efecto matriz
• La influencia de una propiedad de la muestra –
distinta del analito investigado- sobre la medición, y
por lo tanto sobre el resultado obtenido.
• El grado de modificación de la reactividad en los
materiales con matriz modificada normalmente es
una característica única de un lote determinado de
calibrador y un procedimiento de medición
específico.
• Guía para la determinación del grado de efecto matriz

de un material procesado
– NCCLS EP-14A : Evaluation of matrix effect

Argentina
Conmutabilidad
Curva de regresión de valores hallados sobre
muestras nativas y materiales procesados
Material No Conmutable
Método de Rutina
Material
Conmutable
Muestras
Nativas
Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica Método Referencia 77

Argentina
Estudio del Efecto Matriz
Material no conmutable
ES = -5.3%
Calibración con Calibración con material

material conmutable no conmutable
Argentina
Figura 1 − Jerarquía de calibración extendida y trazabilidad metrológica hasta el SI
Ej. Colesterol, Glucosa, Creatinina, etc Dominio de la
Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica

Industria DIV
79
Norma ISO 17511 Argentina
El efecto matriz involucra la interrelación de cuatro
componentes principales de las pruebas analíticas:
• Diseño del instrumento El fabricante ajusta el

valor de calibración para
• Formulación del reactivo
compensar cualquier
• Principio analítico efecto matriz posible.
• Composición de controles
y calibradores y las
técnicas de procesado.
Los multicalibradores séricos son específicos de un

determinado sistema analítico y no son –en general-
intercambiables con otros sistemas.
Argentina
Argentina
Efecto matriz
• Calibradores y controles
– La modificación de la reactividad de los
materiales procesados requiere un
ajuste de valores para su uso correcto.
• Ej. Calibrador Cfas (Roche)
– Valor para colesterol
» Sistemas Hitachi Æ157 mg% Diferencia = 1.9 %
» Cobas Mira Æ 160 mg%
El valor del calibrador no siempre es el valor “verdadero” sino que
es el valor que el fabricante asigna al analito para que al analizar
muestras de pacientes con su sistema analítico se obtengan
valores trazables al sistema de referencia.

Argentina
Para considerar
El objetivo de una calibración trazable es transferir el
grado de veracidad de los materiales de referencia y/o
procedimientos de referencia a un procedimiento que
es de menor orden metrológico.
La trazabilidad no es una propiedad de los

procedimientos de medida sino de los resultados o
valores asignados.
Es responsabilidad de la industria garantizar la máxima

trazabilidad posible de los calibradores suministrados
Es responsabilidad del laboratorio garantizar la trazabilidad del

resultado del paciente.
Argentina
Figura 1 − Jerarquía de calibración extendida y trazabilidad metrológica hasta el SI
Cuidadosa selección
del calibrador
Validación de la
calibración

Argentina
Definiciones
• Verificación: Confirmación mediante la provisión de
evidencia objetiva que se cumplen los requisitos
especificados (ISO 9000:2000; 3.84)
– Ej. Confirmar que un instrumento adquirido responde a las
características solicitadas en el pedido.
• Validación: Confirmación mediante la provisión de
evidencia objetiva que se cumplen los requisitos para un
uso o aplicación determinados.
– Ej. Confirmar que la respuesta de un instrumento es apta para
un determinado procedimiento analítico.
• Evaluación: La evaluación por parte del laboratorio abarca no
solo la verificación y la validación, sino también otros aspectos
tales como practicabilidad, tiempo de ejecución, costos, etc.

Argentina
¿Porqué evaluar los métodos analíticos en el
laboratorio?
(no porque lo exigen los requisitos de acreditación!!!)
• Para garantizar la exactitud diagnóstica de

las determinaciones y la validez de los
intervalos de referencia.
• Confiabilidad en el diagnóstico y
seguimiento de las enfermedades

Argentina
Fundación Bioquímica Argentina
Efecto de los errores analíticos
sobre el valor predictivo de las pruebas
V( + )
Sensibilidad diagnóstica = F( −) + V( + )
V( − )
Especificidad diagnóstica =
F( + ) + V( − )
Valor de corte
FP
VN Aumento de EA
VP
Sanos
Enfermos
FN
Aumento de ES
Argentina
¿Porqué hay que verificar/validar?
• Reactivos comerciales validados en fábrica

• La declaración del fabricante, cuando existe, no siempre
se cumple cuando el método se ejecuta en el laboratorio.
– Causas
– Distintas condiciones de ejecución
– Distintos operadores
– Sistemas heterogéneos
– Distintos calibradores
• Modificaciones de reactivos comerciales

• Métodos no comerciales, desarrollados en el
propio laboratorio

Argentina
Aspectos a tener en cuenta en la
evaluación de métodos analíticos
• Características de • Características de
confiabilidad practicabilidad
– Rango clínico – Grado de entrenamiento
– Linealidad – Relación
– Precisión Costo/Beneficio
– Veracidad – Automatización
– Límite de detección – Tiempo de ejecución
– Límite de cuantificación – Disponibilidad en el
mercado
– Recursos técnicos
necesarios

Argentina
Factores principales en la
composición del error de medición
Objetivos
• Errores preanalíticos
– Preparación del paciente
– Toma de muestra
– Transporte y conservación
• Error Aleatorio
• Error sistemático variable
– Calibración frecuente
– Cambios de calibrador
• Error Sistemático
– Calibrador inadecuado
– Causas instrumentales
Argentina
Paso 0: Validación instrumental
• Veracidad de la longitud de • Luz parásita

onda – Óptimo: T% < 0.5%
– Óptimo: ± 2 nm – Aceptable: T% < 1.0%
– Aceptable: ± 3 nm • Precisión fotométrica
• Veracidad fotométrica (UV y – Óptimo: CV < 0.5%
Visible) – Aceptable: CV <1%
– Óptimo: ± 2% • Estabilidad fotométrica
– Aceptable: ± 3% – Deriva + ruido < 1%
• Linealidad fotométrica (UV
y Vis)
• Temperatura
– En la cubeta ± 0.1 ºC
– Óptimo: 0.98 < m < 1.02
– Aceptable: 0.97 < m < 1.03 • Volumetría
Argentina
Primera Norma Mercosur para el Laboratorio Clínico

Argentina
Equipo para control espectrofotométrico
y Equipo con materiales de
control para:
y Absorbancia UV‐VIS
y Longitud de onda
y Linealidad a 340, 405 y 510 nm
y Precisión
y Luz espuria
y Plan de control y mantenimiento.
y Planillas e instructivos
Laboratorio de Referencia y Estandarización en Bioquímica Clínica – LARESBIC


Argentina
Precisión (Error aleatorio)
• Es prioritario establecer primero el grado de
imprecisión antes de evaluar cualquier otra
característica del método.
• Normalmente los resultados obtenidos por
métodos cuantitativos se distribuyen
normalmente.
• El parámetro que mide la imprecisión es la
desviación estándar.

Argentina
Componentes de la imprecisión
• La varianza total de un procedimiento tienen
los siguientes componentes:
S =S +S
2
T
2
IS
2
ES
• La varianza total medida directamente, por ej.
a partir del Control de Calidad Interno, es un
valor subestimado.
• Es útil conocer el valor de los componentes
de la varianza total en el momento de analizar
las razones de una varianza total aumentada.

Argentina
Veracidad
• El grado de veracidad está en relación inversa a
grado de error sistemático en el sistema de
medición.
• Definición (VIM): Diferencia entre el promedio de
infinitas mediciones, en condiciones de
repetibilidad, y el valor verdadero.
• Definición práctica: Diferencia entre el valor
promedio de un gran número de mediciones, en
condiciones de repetibilidad y el valor de
referencia convencional.
• Bias. Normalmente se traduce como Error
Sistemático.
Argentina
2 1
3
Control de la
Calidad Analítica

Argentina
Garantía de Calidad Analítica
Control de Calidad Evaluación Externa

Interno de Calidad

Argentina
Detección de errores
z Control de Calidad Interno

– Detecta cambios en el desempeño estable
z Evaluación Externa de Calidad
– Permite comparar el desempeño individual
con respecto al resto de los laboratorios
y/o con estándares de desempeño.

Argentina
Evaluación Externa de Calidad
en el Laboratorio Clínico

Argentina
Evaluación Externa de la Calidad
Definición
Sistema para la comparación objetiva de los

resultados obtenidos por los laboratorios
por medio de una agencia externa, ya sea entre
si o con valores de referencia.
ISO-REMCO N231, 1991

Argentina
Evaluación Externa de la Calidad
Permite al Bioquímico evaluar el desempeño

de su laboratorio al comparar sus
resultados con los obtenidos por otros
laboratorios o con estándares de
aceptabilidad reconocidos o convenidos.

Argentina
Breve historia
1947, Belk y Sunderman, USA.

1961, Tonks, Canada
1976, Whitehead, UK
1980, Adam Uldall, DK

Argentina
Criterios óptimos de un PEEC
• Número suficiente de laboratorios

participantes
• Distribuciones frecuentes
• Ciclo corto
• Muestras de control confiables
• Valores asignados válidos
• Informes inteligibles

Argentina
Funciones de la EEC
• Mide la variabilidad interlaboratorial

• Permite la comparación y evaluación de métodos,
instrumentos, reactivos, etc.
• Muestra el desempeño del laboratorio
• Permite la determinación de valores de consenso
• Estímulo educacional
• Elemento de la acreditación de los laboratorios
por terceros
• Permite establecer programas de estandarización

Argentina
Evaluación Externa
Pruebas de
de
Suficiencia
Calidad

Argentina
Diferencias
EEC PS
Educativo Ligado a
buscando la actividades
armonización de regulatorias, de
los laboratorios carácter punitivo
para una mejora con consecuencias
global de la red económicas.
de laboratorios.

Argentina
¿Porqué participar de un PEEC?
• Complementa el Control de Calidad

Interno
• Visualiza el desempeño del laboratorio
• Suministra información de su grupo
metodológico y de otros grupos
• Asistencia técnica
• Motiva al personal

Argentina
Información suministrada por el
laboratorio
1. Valor hallado
2. Principio analítico o procedimiento
3. Reactivo
4. Calibrador
5. Instrumento
6. Información accesoria
(temperatura, longitud de onda, etc)
Argentina
Procesamiento de los datos
• General
– Descripción de las condiciones operativas
– Establecimiento del Valor Asignado
– Establecimiento de criterios de aceptabilidad
• Individuales
– Medida del desempeño individual
• En la encuesta
• Histórico

Argentina
Instrumentos utilizados: Glucosa
Instrumentos Porcentaje Manuales Automatizados
Espectrofotómetros 59,8 %
65,6 %
Fotómetros 5,8 %
AA Flujo Contínuo 13,6 %

34,4 %
AA discretos 20,8 %

Argentina
General
Descripción de las condiciones operativas
Establecimiento del Valor Asignado
Establecimiento de criterios de aceptabilidad
Individuales
Medida del desempeño individual
En la encuesta
Histórico

Argentina
Estimación del Valor Asignado
• Valor de consenso de laboratorios referí

• Materiales de control con valores
certificados
• Valor de consenso de los participantes
– Sin discriminación de métodos
– Discriminando por método u otra
característica (reactivo, instrumento,
procedimiento, etc.)

Argentina
Estableciendo el Valor de Consenso
• Método paramétrico
– Truncamiento y determinación del valor
medio y la desviación estándar.
• Método No Paramétrico
– Determinación de la Mediana y
estimación del Rango Intercuartílico.

Argentina
Método paramétrico
• Aplicable a distribuciones con

características normales o
Gaussianas.
– Truncamiento de valores marginales
– Valor Medio y Desviación Estándar de la
población truncadaÆParámetros de
consenso.

Argentina
Método No Paramétrico
• Posición
– Mediana = P50
• Dispersion
– Rango Intercuartílico = P75 – P25
– Estimación de la Desviación Estándar
• DE = RI/1,349

Argentina
Ejemplos: Glucosa (n=1836)
• Paramétrico • No Paramétrico
– Nivel 1 – Nivel 1
• Promedio = 294 mg% • Mediana = 296 mg%
• DE = 28 mg% • RI = 37 mg%
• CV = 9,7% • DE = 27,4 mg%
– Nivel 2 – Nivel 2
• Promedio = 88 mg% • Mediana = 88 mg%
• DE = 11 mg% • RI = 12 mg%
• CV = 12,6% • DE = 12 mg%
• CV = 13,6 %

Argentina
Valores asignados vs Valores de
consenso
ANALITO METODO VALOR VALOR DE DIFERENCIA
ASIGNADO CONSENSO
UREA Ureasa UV, 45 mg% 44 mg% 2,2%
cinético
GLUCOSA Glucosa 122 mg% 109 mg% 10.7%
Oxidasa
COLESTEROL Colesterol 193 mg% 192 mg% 0.5%
Oxid.
URATO Uricasa Perox. 5.4 mg% 5.5 mg% 1.9%
CREATININA Jaffè 1.8 mg% 1.8 mg% 0%
c/desprot.
SODIO FL 137 mEq/L 137 mEq/L 0&
EIS 137 mEq/L 136 mEq/L 0.7%
POTASIO FL 4.2 mEq/L 4.3 mEq/L 2.4 %
EIS 4.3 mEq/L 4.3 mEq/L 0%
CALCIO
Daniel Mazziotta Cpx118118 9.2 mg%
Fundación Bioquimica 9.0 mg% 2.2% 118
Argentina
General
Individuales
En la encuesta
Histórico

Argentina
Criterios de aceptabilidad
• Variabilidad
Biológica
• Opinión de
expertos
• Estadísticos
• Arbitrarios

Argentina
Aceptabilidad (PEEC)
Analito DRP Aceptable (%)
Urea 10
Glucosa 10
Colesterol 10
Urato 17
Creatinina 15
Proteinas 5
Sodio 5
Potasio 8
Cloruro 5
Albúmina 10
Calcio 10
Fósforo 10
Triglicéridos 15
Bilirrubina 15
Enzimas 20
Argentina
Aceptabilidad en varios países (DRP%)
País Urea AST Bil T. TG ALB CRE COL URI

DK 19 22 34 34 4,2 6,6 8,1 13
NL 19 7 33 33 4,2 6,6 8,1 10
BE 16 16 24 20 6,2 8,0 8,1 15
GE 24 21 24 21 18 18 18 18
UK 5,7 12 19 - 7,5 8,9 7,6 7,7
SP 10 17 28 14 14 14 9,8 15
FR 16 20 15 15 10 11 16,5 16
IT 9,5 10 - 8,5 4 8,8 5,5 8
AR (PEEC) 10 20 15 15 10 15 10 17
Daniel Mazziotta
Carmen Ricós y col. EurFundación
J Clin Bioquimica
Chem Clin Biochem 1996; 122
34:159 - 165
Argentina
General
Individuales
En la encuesta
Histórico

Argentina
Análisis Individual
• Métodos recomendados por ISO

– Puntaje Z
Z=
(Valor Hallado − Valor Asignado )
Desv ío Estándar
– Puntaje Q
Q=
(Re sultado hallado − Valor Asignado) • 100
Valor Asignado

Argentina
Argentina
Argentina
Diagrama de Youden
A
-/+ +/+
_
A
-/- +/-
_
B B
Argentina
Aceptabilidad clínica vs. probabilidad
estadística
A
-/+ +/+ DRPA=+/- 10%
_
A
+/-2CV= +/-20%
-/- +/-
_
B B
Argentina
Diagrama de Youden: ALP

Argentina
Evolución del desempeño de los
laboratorios participantes

Argentina
General
Individuales
En la encuesta
Histórico

Argentina
Gráfico DRP vs Encuesta
15
10
5
DRP (%)
-5
-10
-15
1 2 3 4 5 6 7 8
Distribución

Argentina
Distribución interlaboratorial
Laboratorio
-DRP VC +DRP
Situación ideal: Error Sitemático nulo

y Error Aleatorio Aceptable
Argentina
20
15
10
DRP (%)
5
0
-5
-10
-15
-20
1 2 3 4 5 6 7 8
Distribución

Argentina
Laboratorio
-DRP VC +DRP
Error Sistemático Negativo (-DRP%)

y Error Aleatorio Aceptable
Argentina
20
15
10
DRP (%)
5
0
-5
-10
-15
1 2 3 4 5 6 7 8
Distribución

Argentina
Laboratorio
-DRP VC +DRP
ErrorSistemático nulo y Error Aleatorio

Aumentado
ES variable y EA aceptable
Argentina
20
15
10
DRP (%)
5
0
-5
-10
-15
1 2 3 4 5 6 7 8
Distribución

Argentina
Resultados no aceptables para la EEC
• Errores administrativos
• Errores Sistemáticos
• Errores Aleatorios
• Límite de aceptabilidad
• Efecto de matriz

Argentina
Origen de problemas
• Administrativos
• Metodológicos
• Técnicos
• Error de matriz

Argentina
Administrativos
Error al transcribir el resultado hallado

• Método y/o Reactivo y/o Instrumento
erróneo
• Unidades erróneas

Argentina
Metodológicos
• Calibración incorrecta
• Incorrecta preparación de
reactivos
• Problema instrumental
• Arrastre
• Resultado fuera del rango lineal
• Tiempo de incubación incorrecta

Argentina
Técnicos
• Mala reconstitución del material de

control
• Análisis del material de control fuera del
período de estabilidad
• Muestra mal colocada en la corrida
• Informe del resultado pese a tener
señales de error en el CCI
• Error de cálculo
Argentina
Efecto Matriz
• Algunos materiales pueden

contener sustancias que afecten un
determinado principio analítico y/o
instrumento.

Argentina
Conclusiones
• Cada laboratorio debe implementar

un Programa de Garantía de la
Calidad Analítica como parte de su
sistema de calidad.
• El grado de complejidad que esta
tarea implica es determinante en el
establecimiento de etapas de dicho
programa.
Argentina

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Control de la calidad analítica

Centro de Analistas Clínicos

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 1

• De acuerdo a ISO, es “la totalidad de

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 2

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 3

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 4

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 5

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 6

• Educación y entrenamiento del

Laboratorios con sistemas analíticos

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 9

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 10

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 11

• El error de medición a valores cercanos al

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 12

Precisión: Grado de concordancia entre resultados obtenidos

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 14

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 15

¾ La variabilidad, expresada como la

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 16

¾Es la expresión de la Desviación

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 17

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 18

En general, la precisión depende de la concentración

• Caso A) Analitos con rango clínico estrecho (electrolitos)

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 19

• Diferencia entre la mejor medida obtenible

90 mg% 110 mg%

Pendiente < > 1

LAB 1 LAB 2 LAB 3 LAB 4

Ordenada 0.057 -0.014 0.476 0.368

Pendiente 0.9613 0.9489 0.7894 0.9854

Correlación 0.9976 0.9988 0.9810 0.9988

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 23

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 24

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 26

90 mg% 95 mg% 110 mg% 125 mg%

Inexactitud = + 20 mg% = 22,2%

Inexactitud = + 5 mg% = 5,6 %

Inexactitud = + 35 mg% = 38,9%

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 28

Error Sistemático (ES) = x – “VV”

Error Total Máximo = ES + EA

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 29

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 30

• Queremos calcular el ETM de un método

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 31

• Se debe disponer de un suero con valor de referencia

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 32

Calculamos el valor de la Desviación Estándar a partir

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 33

• Finalmente sumamos los dos errores.

ETM = ES% + EA% = 4% + 20.4% = 24.4%

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 34

Dos conjuntos de datos pueden tener

¿Cómo expresamos cuantitativamente la

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 35

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 36

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 37

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 38

Daniel Mazziotta Fundación Bioquimica 39

• Comparar el valor de t hallado con el t crítico para el

principio analítico condiciones de