Clinical chemistry

1 Marqueurs de l’inflammation - Vitesse de sédimentation

La vitesse de sédimentation (VS) correspond historiquement à la vitesse de sédimentation de globules
rouges dans un tube à essai calibré (exprimée en hauteur de plasma par heure). Elle dépend notamment
de la présence de certaines protéines dont la concentration est modifiée lors d’une inflammation. Le prin-
cipal désavantage de ce test est sa faible spécificité (faux positifs nombreux). Par ailleurs la cinétique des
protéines identifiées est lente (elles sont détectables environ trente heures après le début de l’inflamma-
tion). Cet examen est peu coûteux et simple à mettre en place, donc très répandu. Il n’est cependant pas
suffisant pour réaliser un diagnostic.

En pratique les conditions de réalisation du test classique par sédimentation sont critiques mais pas
faciles à contrôler (verticalité du tube, vibrations...). Certains fabricants comme Alifax ont donc développé
des tests automatisés basés un principe de mesure différent : la densité optique. Un échantillon de sang
auquel on a ajouté un anti-coagulant est injecté dans un capillaire, centrifugé puis brusquement laissé
au repos dans une enceinte à la température contrôlée. On mesure l’évolution de sa densité optique,
qui dépend de la concentration - donc la distance entre globules rouges - à une longueur d’onde où
l’absorption par le milieu est minimale (950nm) : DO = log IItransmisincident
. La vitesse de sédimentation peut
alors être calculée à partir de la cinétique d’agrégation des globules rouges. Cet examen est rapide (20
secondes contre 1h pour la sédimentation), simple et répétable. Il reste cependant peu spécifique de
l’inflammation et moins sensible que la protéine C réactive.

2 Marqueurs de l’inflammation - Protéine C réactive

La protéine C réactive (CRP) est un biomarqueur de l’inflammation synthétisé à un stade précoce. Le
test associé est rapide et présente une bonne sensibilité (peu de faux négatifs : le taux de CRP augmente
dans la plupart des réactions inflammatoires) mais est très peu spécifique (il augmente aussi en réponse
à d’autres infections). Sa détection est basée sur le principe de l’immuno-turbidimétrie. Lorsque les
antigènes recherchés sont présents dans le sang, il réagissent de manière spécifique avec certains anticorps
pour former un complexe. Cette modification du volume des molécules est mesurable par turbidimétrie,
c’est-à-dire par comparaison des flux lumineux transmis et incidents. En effet Iscat ∼ V 2 /λ4 . Le complexe
Ag-Ab transmet deux fois plus de lumière que les molécules seules. Il est aussi possible de coupler
les Ac à des particules de latex, ce qui augmente la taille des complexes et donc la sensibilité (pente
signal/concentration).

3 Enzymologie
Les transaminases (ASAT et ALAT) sont des enzymes dont la présence anormalement élevée dans
le sang traduit une mort cellulaire importante, souvent en raison d’une lésion interne. On mesure leur
concentration par dosage. L’appareil utilisé pour l’examen est le Beckmann Couleter Unicel DxC 800.

Prenons l’exemple de la transaminase ALAT (ou alanine aminotransférase). Sa concentration est

mesurée dans le plasma par suivi cinétique d’absorbance. Cette enzyme catalyse la réaction de la L-
alanine et de l’alpha-cétoglutarate en pyruvate et en L-glutamate (réaction primaire). Le pyruvate est
alors réduit en lactate (réaction indicatrice).
L’appareil mesure la cinétique d’absorbance de l’échantillon à 340nm, qui est directement propor-
tionnelle à l’activité de l’enzyme ALAT. En pratique, il faut donc centrifuger un prélèvement de sang
puis ajouter un réactif dans l’appareil. Toutes les étapes suivantes sont automatisées. L’appareil doit être
étalonné régulièrement.