BIORREMEDIACION DE SUELOS CONTAMINADOS CON HIDROCARBUROS

UTILIZANDO BACTERIAS ANTARTICAS SICROTOLERANTES

Ruberto, Lucas1; Vazquez, Susana1; Lo Balbo, Alfredo2; Mac Cormack, Walter3

1
FFyB, UBA. Junín 956 6º piso (C1113AAD) Buenos Aires, Argentina. lruberto@ffyb.uba.ar,
svazquez@ffyb.uba.ar, lbalbo55@hotmail.com
2
IAA, Cerrito 1248 (C1010AAZ) Buenos Aires, Argentina. wmac@ffyb.uba.ar

Palabras clave: biorremediación, bacterias sicrotolerantes

Keywords: bioremediation, psychrotolerant bacteria

RESUMEN

La biorremediación es la herramienta más adecuada para la recuperación de suelos

contaminados con hidrocarburos. En la Antártida las condiciones climáticas y las
reglamentaciones internacionales exigen la utilización de cepas autóctonas sicrotolerantes.
En este trabajo se muestran ensayos a campo en donde se evaluó la eficiencia de la
bioestimulación y la biomagnificación sobre suelos antárticos contaminados en forma aguda
y crónica con hidrocarburos.

ABSTRACT

Bioremediation is the best tool for the clean up of hydrocarbons contaminated soils. In
Antarctica, climate conditions and regulations determine the use of indigenous psychrotoler-
ant strains. In this work we show field assays evaluating the efficiency of biostimulation and
bioaugmentation on Antarctic soils under acute and chronic hydrocarbon contamination.

INTRODUCCIÓN

El tratamiento de suelos contaminados con hidrocarburos es esencial para mantener

la calidad del medio ambiente. Debido a limitaciones en los recursos, los procesos de
limpieza son prohibitivos. Los costos elevados se exacerban en regiones de clima frío como
la Antártida, debido al difícil acceso para la maquinaria pesada y la falta de infraestructura
(Reynols y col. 1997). Además, el uso de los hidrocarburos, en las regiones de clima frío,
para la generación de electricidad, calor y movimiento de vehículos, resulta en infinidad de
pequeños o medianos derrames. A esto se suma la necesidad de transporte de estos
combustibles, con el riesgo potencial que esto implica. Esta situación hace indispensable la
aplicación de tratamientos de bajo costo que sean logísticamente posibles. La
biorremediación es una herramienta efectiva para mejorar la degradación de contaminantes
en suelo. La temperatura es un factor limitante de estos procesos, por lo que resulta
adecuado el uso de bacterias sicrotolerantes (Whyte y col. 2001). Se ha propuesto a la
biomagnificación como la estrategia más efectiva (Collerman 1997, Coulon y Delille 2003,
Cuningham y Philp 2000); sin embargo, la optimización de factores físicos y/o químicos del
suelo contaminado mejora la actividad degradadora de la microflora autóctona, haciendo
innecesaria la aplicación de técnicas de biomagnificación (Ruberto y col. 2003). En
Argentina, muchas áreas de clima frío muestran contaminación por hidrocarburos. Este
problema incluye las inmediaciones de las bases Antárticas, donde las condiciones
climáticas y las regulaciones internacionales hacen indispensable el uso de
microorganismos autóctonos. Los objetivos de este trabajo son: analizar el efecto de la
bioestimulación y la biomagnificación en la eficiencia de la biorremediación de un suelo
antártico con historia de contaminación; caracterizar las cepas y consorcios bacterianos
utilizados y desarrollar un sistema de biorremediación de suelos contaminados con
hidrocarburos, logística y económicamente viable, utilizando bacterias sicrotolerantes
aisladas de la Antártida.

METODOLOGÍA

Se realizaron ensayos en diferentes escalas: microcosmos (Duarte da Cunha y

Ferreyra, 2000) de 0.25 kg en frascos, microcosmos de 3 kg en bandejas y parcelas de 50
kg de suelo, todos expuestos a las condiciones ambientales antárticas. Los suelos
crónicamente contaminados se obtuvieron de las áreas de manejo de combustible de las
bases Jubany y Marambio . El suelo se tomó de la capa superficial, hasta los 20 cm de
profundidad. Los ensayos de contaminación aguda se realizaron utilizando suelos de las
mismas áreas y contaminándolos con diferentes hidrocarburos puros o mezclas complejas
según el objetivo de cada ensayo. En los sistemas con biomagnificación, se utilizaron como
inóculo, cepas y consorcios bacterianos sicrotolerantes aislados de suelos con historia de
contaminación con Gas Oil y/o JP1 provenientes de la bases antes nombradas. Se utilizaron
las siguientes cepas: ADH (Rhodococcus sp.), DM1-41 (Stenotrophomonas maltophilia),
MP2-4 (Stenotrophomonas sp.), M10dp (Pseudomonas sp.) y los consorcios bacterianos
M10 y J13. Todas las cepas y consorcios tienen capacidad para utilizar distintos
hidrocarburos (alifáticos y aromáticos) como única fuente de carbono y energía (Bej y col.
2000; Mac Cormack, 1999, Margesin y Schinner 1997). Se evaluó la desaparición abiótica
de hidrocarburos, la respuesta de la microflora autóctona a la presencia de los
contaminantes (Aislabie y col. 2001), el efecto de la bioestimulación con N y P y la
biomagnificación con cepas y consorcios de bacterias sicrotolerantes con capacidad
degradadora de hidrocarburos conocida. Se realizaron recuentos en placa de
microorganismos viables, concentración de hidrocarburos totales por espectroscopía
infrarroja (IR) y análisis cualitativo y cuantitativo de hidrocarburos por cromatografía
gaseosa y espectrometría de masa (MS-GC).

RESULTADOS

En todos los ensayos se observó que las condiciones climáticas antárticas producen
una importante eliminación abiótica de los contaminantes que osciló entre el 40% y el 60%
de la carga inicial. Los ensayos en frascos mostraron que, cuando el suelo prístino fue
sometido a una contaminación aguda con gasoil existió una significativa respuesta de la
microflora autóctona (35% de remoción comparado con el control abiótico). Sin embargo la
presencia de un inóculo externo produjo una significativa reducción en la concentración final
de los contaminantes (81,1% de remoción). Ensayos en bandejas utilizando suelo
contaminado con un hidrocarburo aromático policíclico (fenantreno) mostraron resultados
similares.
Cuando se analizaron suelos crónicamente contaminados en sistemas de bandejas, la
flora autóctona fue muy efectiva en la remoción de hidrocarburos al ser bioestimulada con N
y P (81% de remoción en 45 días). El sistema inoculado con un consorcio bacteriano aislado
del mismo suelo a biorremediar (M10) mostró una remoción del 86%, mientras que un
consorcio aislado de un suelo distinto (J13) mostró una baja eficiencia, similar a la mostrada
por la flora autóctona sin bioestimular (62%). (Fig 1). En todos los casos, la eficiencia de un
sistema para eliminar los hidrocarburos se correlacionó con un incremento de la actividad
biológica, observada como mayores valores de recuento de bacterias aerobias totales y
fundamentalmente de bacterias degradadoras de hidrocarburos las cuales llegaron a
representar mas de un 90% de las cuentas totales. Los cambios cualitativos inferidos a
partir de los análisis de GC y MS pueden observarse en la (Fig. 2) donde se muestran los
cromatogramas correspondientes a los sistemas abiótico e inoculado con el consorcio M10.
En los estudios con parcelas los cambios en la actividad biológica mostraron un
comportamiento similar a los ensayos en frascos y bandejas, sugiriendo que la metodología
desarrollada es aplicable a escala total sin perjuicio de la eficiencia del sistema. El
seguimiento de las parcelas, actualmente en desarrollo, permitirá comprobar la capacidad
del sistema para sobrellevar las condiciones invernales antárticas y observar la capacidad
para reanudar la actividad degradadora en el siguiente período estival.
De estos resultados se ha podido inferir que en los eventos de contaminación aguda,
la aplicación de procesos de biomagnificación con microorganismos autóctonos es la
alternativa de elección para lograr una efectiva biodegradación. Sin embargo, cuando el
suelo presenta una historia de contaminación previa, la bioestimulación con adecuadas
cantidades de N y P es suficiente para una efectiva eliminación de los contaminantes. Estas
aseveraciones son válidas tanto para hidrocarburos alifáticos como para aromáticos.
Finalmente, este estudio muestra la factibilidad de aplicar en la Antártida un sistema
de biorremediación de suelos contaminados con hidrocarburos aprovechando la actividad
de las bacterias autóctonas sicrotolerantes. Considerando los resultados obtenidos y la
factibilidad tanto logística como económica, puede considerarse a la biorremediación como
la estrategia más adecuada para la eliminación de suelos antárticos contaminados con
hidrocarburos del petróleo.

REFERENCIAS

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from Antarctica. Polar Biology, 23, 100-105.
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Collerman, E., 1997. Uses of bacteria in bioremediation. In SHEENAN, D., ed.
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Coulon, F., y Delille, D., 2003. Effects of biostimulation on growth of indigenous bacteria in
sub-Antarctic soil contaminated with oil hydrocarbons. Oil & Gas Science and
Technology, 58, 469-479.
Cunningham, C. J. y Philp, J.C., 2000. Comparison of bioaugmentation and biostimulation in
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University of Buenos Aires, 192 pp.
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Eureka, Nunavut. Cold Regions Science and Technology, 32, 121-132.
 Hidrocarburos Totales vs Tiempo

14000
CONTROL

Fig 1: concentración de hidrocarburos a lo

12000 ABIOTICO

10000
largo de un experimento de biorreme-
AUTOCTONO

8000
diación de suelos contaminados con
ppm

AUTOCTONO + N
6000

4000 CEPAS + N
Gas Oil en forma crónica
2000
M10 + N
0
0 10 20 30 40 50
J13 + N
DIAS

T IC :T F A 1 .D

Abund anc e
TIC: TFE1.D
9 0000 00

Abundance
8 5000 00
1.05e+07
8 0000 00 1e+07

7 5000 00 9500000

9000000
7 0000 00

8500000
6 5000 00
8000000
6 0000 00
7500000
5 5000 00 7000000

5 0000 00 6500000

4 5000 00
6000000

5500000
4 0000 00
5000000
3 5000 00
4500000
3 0000 00 4000000

2 5000 00 3500000

2 0000 00
3000000

2500000
150 00 00
2000000
100 00 00
1500000
50 00 00
1000000
0
T im e -> 500000
5 .0 0 1 0 .0 0 1 5 .0 0 2 0 .0 0 2 5 .0 0 3 0 .0 0

Time--> 0
5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00

Fig 2: cromatogramas de los

sistemas abiótico
(derecha) y biomagnificado
con el consorcio M10 a los
a los 45 días de iniciado el
experimento