Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
1
Fermentatia alcoolica fiind o succesiune de reactii catabolice produse de drojdii cu
ajutorul enzimelor este influentata de factori implicati in metabolism in mod esential.
Se vor aminti, in continuare, cativa factori, considerati mai importanti:
temperatura, ca valoare medie si ca amplitudine intre valorile maxime si minime,
fiecare specie de microorganism avand o temperatura optima specifica;
concentratia ionilor de hidrogen (pH), drojdiile dezvoltandu-se in general pe
substraturi acide (pH = 3.5 - 4.7);
potentialul redox, datorita faptului ca procesele de fermentare sunt, in general, reactii
de oxido-reducere;
presiunea osmotica - concentratiile ridicate de hidrati de carbon incetinesc mecanismul
fermentatiei, drojdiile obisnuite isi intrerup activitatea la presiuni osmotice mai mari
de 60 kgf/cm2
concentratia de alcool rezultat - are actiune inhibitoare daca depaseste 4-5% pentru
drojdiile de fermentatie inferioare si 18% pentru cele de fermentatie superioare;
activatorii si inhibitorii microorganismelor: antiseptice, microelemente minerale,
alcoolul, dioxidul de carbon, oxigenul, etc.
Mecanismul fermentatiei alcoolice
Acesta va fi prezentat schematic, fara comentarii.
FOSFODIOXIACETONA FRUCTOZO - 1.6 – DIFOSFAT
fructozofosfatliaza
GLICEROFOSFAT ALDEHIDA - 3 - FOSFOGLICERICA
fosfotrioziizomeraza
GLICERINA ALDEHIDA - 1.3 - DIFOSFOGLICERICA
triozofosfatdehidrogenaza
CoA
2.2 FERMENTATIA LACTICA
Definitie: prin fermentatie lactica se intelege procesul biologic din care rezulta ca
produs principal acidul lactic.
Fermentatia lactica este foarte frecvent intalnita in numeroase produse si domenii agro-
alimentare cu destinatie umana si zootehnica, fiind produsa in cele mai multe cazuri de
bacterii, dar si de drojdii si mucegaiuri.
Agenti ai fermentatiei lactice
Bacteriile care produc acid lactic fac parte din categoria cocilor (grec. kokkos =
bob) sau a bacililor (latin. bacillus = bastonas) si ca majoritatea bacteriilor se
dezvolta la temperaturi de 28 - 35oC (sunt mezofile). Exista insa si specii termofile (cu
temperaturi optime de dezvoltare intre 35 - 62oC) sau psihrofile (care prefera
temperaturi scazute, pana la 10oC). Procesul de fermentare poate produce in final doar
acid lactic, situatie in care bacteriile lactice se numesc homofermentative, sau pe
langa acid lactic, ca produs principal, si alti produsi secundari: alcool etilic, bioxid de
carbon, acid propionic, s.a., caz in care agentii de fermentatie se
numesc heterofermentativi.
2
Se vor da cateva exemple de agenti de fermentatie lactica, urmand sa se descrie mai pe
larg microorganismele la fiecare produs agro-alimentar a carui biotehnologie va fi
expusa in partea a 3-a a acestui curs.
Termobacteriii lactice heterofermentative, (in paranteza se dau originea si temperatura
optima): Leuconostoc caucasicus (chefir, branza, 37 - 45oC), Lactobacillus
lactis (lapte, branza, 36 - 45oC), L. helveticus (branza, 37 - 45oC);
Termobacterii lactice homofermentative: L.
bulgaricus sinonim Thermobacterium bulgaricum (iaurt, 45 - 62oC), L.
thermophilus (iaurt, 45 - 62oC), L. acidophilus (fecale nou-nascuti, 37-45oC), L.
delbruckii(plamezi cereale, 50oC);
Bacterii lactice mezofile heterofermentative: L. buchnerii (vin, plamezi acide, melasa,
28-32oC), L. brevis(lapte, varza murata, 28-32oC), L. pastorianus (bere, 28-32oC);
Bacterii lactice mezofile homofermentative: L. casei (lapte, 28-32oC), L.
plantarum (lapte, 28-32oC);
Bacterii lactice psihrofile.
Mecanismul fermentatiei lactice
Prin fermentatia lactica, teoretic, dintr-un gram de zahar fermentescibil (de ex.: lactoza
- dizaharid compus din glucoza si fructoza, maltoza - dizaharid avand doua molecule
de glucoza) se produce un gram de acid lactic. Produsul finit, acidul lactic, poate fi
levogir, dextrogir sau racemic, in functie de agentul de fermentatie, temperatura de
fermentatie sau compozitia chimica a mediului.
Mecanismul fermentatiei lactice este expus in schema urmatoare, in care, cu linii
intrerupte sunt aratati produsii intermediari si finali secundari, produsi de bacteriile
heterofermentative. Acesti produsi secundari prezinta uneori o importanta deosebita la
obtinerea unor alimente cu caracteristici organoleptice (gust, aroma, culoare, miros,
consistenta) sau fizico-chimice (goluri interioare, continut de aminoacizi sau
polipeptide) specifice.
Fructozo - 1.6 - difosfat Xilulozo - 5 - fosfat
Glicerina Dihidroacetonfosfat Gliceroaldehid - 3 - fosfat Acetil - fosfat
2.3 FERMENTATIA PROPIONICA
Definitie: Fermentatia propionica este un proces biochimic anaerob, prin care
substratul glucidic este transformat, prin reactii enzimatice datorate enzimelor
specifice din componenta bacteriilor propionice, in acid propionic.
Fermentatia propionica are importanta speciala in producerea branzeturilor maturate cu
pasta tare si goluri interioare (tip Schweitzer), carora le imprima, in afara incluziunilor
alveolare, caracteristici organoleptice specifice si o valoare nutritiva ridicata. Totodata,
bacteriile propionice produc, la maturarea painii, o fermentatie suplimentara,
transformand acidul lactic in acid propionic si bioxid de carbon, imbunatatind gustul si
cresterea in volum a painii. In partea de microbiologie aplicata se vor arata si alte
aplicatii practice ale acestei fermentatii.
3
Bacteriile propionice sunt incluse in familia Lactobacteriaceae,
genul Propionibacterium.
Printre cele mai importante, din punct de vedere al utilitatii in domeniul agroalimentar,
se amintesc: Propionibacterium freudenreichii van Niels sinonim cu Bacterium acidi
propionici, Propionbacterium shermanii, bacterii utile in sectoarele produselor lactate
si de panificatie si Propionibacterium rubrum vanNiels, bacterie ce formeaza petele
rosii pe branzeturi, Clostridium propionicum Neillonela, s.a., care nu au prea mare
importanta industriala.
Fiziologic, bacteriile propionice pot folosi ca substrat de fermentatie diverse hexoze
(glucoza, lactoza, maltoza), acizi organici (lactic, malic), glicerina, actionand in medii
neutre, slab acide (pH optim 6,9) si domenii de temperatura mezofile (35-37 oC). Valori
de temperatura de peste 60oC le inactiveaza, ca de altfel si concentratii de clorura de
sodiu mai mari de 4%.
Mecanismul fermentatiei propionice
Glucoza
Piruvat
4
Energia de reactie necesara este procurata de microorganismele implicate in
transformarea proteinelor din must in azot amoniacal si in degradarea unei parti (30-
50%) din acidul malic pana la dioxid de carbon si apa cu eliberare de energie (cca 320
kcal/mol).
Importanta fermentatiei malo-lactice
In anii in care strugurii nu se coc suficient, iar vinurile au o aciditate ridicata, prin
reducerea aciditatii datorita acestei fermentatii, vinurile devin mai catifelate si mai
agreabile la gust. Podgorenii pot favoriza aceasta fermentatie printr-o serie de
operatiuni tehnologice la indemana fiecaruia, care vor avea ca efect nu numai
reducerea aciditatii vinului, dar vor impiedica si fermentarea acida a zaharului
rezidual. Ca principiu, se poate spune ca o fermentare lactica dirijata prin selectionarea
naturala a unor bacterii lactice heterofermentative va avea ca efect favorizarea
reducerii continutului de acid malic. Aceasta este posibila prin: tragerea mai rapida a
vinului de pe drojdie, agitarea mai energica a drojdiei, sulfitarea mustului, mentinerea
temperaturii in domeniul optim al bacteriilor heterofermentative, diluarea mustului si
suplimentarea concentratiei de zaharuri, adaugarea unui vin cu pH sub 3,6 mustului ce
fermenteaza, etc.
5
In urma fermentatiei metanice, biomasa degradata constituie un ingrasamant natural,
ecologic, cu continut foarte ridicat de humus, compusi azotati si carbon.
2.6 FERMENTATIA BUTIRICA
Definitie: Fermentatia butirica reprezinta un proces biologic anaerob prin care
bacteriile butirice metabolizeaza diverse surse, in speial hidrocarbonati,
transformandu-le in acid butiric. Acest tip de fermentare asigura energia necesara
desfasurarii functiilor vitale si multiplicarii agentilor de fermentatie.
Agenti ai fermentatiei butirice
Bacteriile butirice apartin, in marea lor majoritate, cca. 100 de specii,
genului Clostridium din familia Bacillaceae, fiind caracterizate prin capacitatea de
formare a endosporilor in forma de suveica sau de maciuca, avand dimensiuni mai
mari ca celula vegetativa formatoare. Endosporii sunt o forma de rezistenta
indelungata in conditii de mediu foarte diferite, a caror distrugere nu se poate realiza
decat prin sterilizare la temperaturi peste 130oC, cel putin 20 minute.
Bacteriile butirice au un echipament enzimatic foarte diversificat, permitandu-le sa
foloseasca ca mediu de dezvoltare substrate poliglucidice, proteice, pectine cu
macromolecule complexe, dar si compusi chimici mai simpli ca de exemplu
monoglucide, acizi organici (lactic, propionic), alcooli (glicerina,), compusi cu azot,
etc.
Morfologic, bacteriile butirice se prezinta sub forma de bastonase care sporuleaza usor.
Inainte de sporulare ele se maresc si iau forma de maciuca sau de fus, iar unele specii
formeaza in interiorul celulei, inainte de a sporula, o substanta de rezerva, cunoscuta
sub numele de granuloza (asemanatoare cu amidonul), sintagma ce a stat la originea
denumirii unor specii: Granulobacter.
Bacteriile butirice sunt raspandite in pamant, cereale, produse lactate, conserve,
materii fecale, etc., efectul prezentei lor fiind, in majoritatea cazurilor, nedorit.
Produselor agricole si alimentare le depreciaza calitatea (produc bombajul conservelor
si balonarea tarzie a branzeturilor, imprima un gust specific neplacut unor bauturi
alcoolice, etc.).
In raport cu produsul finit al fermentatiei, bacteriile butirice pot fi clasificate dupa cum
urmeaza:
6
stiklandi (bacterii alterante ce produc bombarea conservelor), Cl. botulinum, Cl.
perfringens (agenti ce produc toxine grave pentru om si animale).
Donker, citat de Motoc, a propus in 1926 urmatoarea clasificare:
genul Aerobacillus - grupeaza bacteriile facultativ anaerobe care ataca zaharurile atat
in mediu aerob cat si anaerob, din care fac parte speciile: Bacillus macerans (produce
dextine cilice), Bac. acetoaethylicus, Cl. polymyxa;
genul Clostridium - cuprind bacterii strict anaerobe care degradeaza zaharurile numai
prin fermentare: Cl. Pasteurianus (produc amareala vinurilor tinere), Amylobacter
pectinovorum (agentul topirii inului) etc.;
genul Pectoclostridium - ataca glucidele, dar si compusii de degradare a proteinelor,
facand o jonctiune intre bacteriile butirice si cele de putrefactie.
Trebuie sa mentionam ca toate clasificarile sunt arbitrare si privite cu rezerva.
Mecanismul fermentatiei butirce
Redam, schematic, mecanismul general al acestei fermentatii. Mecanismul, produsii
finali si randamentele variaza larg in functie de mai multi factori, dintre care amintim:
natura si specificitatea agentului de fermentatie, compozitia si pH-ul, etc
Acid acetic Acetil CoA + CO2 + H2
Acetona + CO2 Aceto-Acetil CoA
Alcool izopropilic Butinil - CoA Alcool butilic
Acid butiric
2.7 FERMENTATIA CELULOZEI
Celuloza, care este cea mai raspandita poliglucida din natura, este descompusa
fermentativ de numeroase bacterii (aerobe si anaerobe ) si de ciuperci.
Din celuloza, prin fermentatia hidogenata, determinata de Bacillus fossicularicum se
obtine in cantitae insemnata hidrogen, acid propionic, acid lactic, acid butiric, alcool
etilic etc.
Din celuloza, sub actiunea lui Bacillus metanicus, se produce metanul, care apare in
cantiate mare in fermentatia balegarului.
Obtinerea unui numar mare de substante din celuloza, prin degradarea acesteia pe cale
fermentativa, constituie un argument ca celuloza este substratul potrivit asupra caruia
actioneaza mai multe tipuri de microorganisme fermentative.
Degradarea fermentativa a celulozei, sub actiunea microorganismelor, se produce in
natura in cantitate foarte mare, atat in conditii aerobe, cat si anaerobe. Rezultatul
acestui proces este insemnat, deoarece resturile de plante din sol sunt transformate in
substante ce contribuie la fertilitatea solului.
7
Fermentiile oxidative sunt reactii biochimice de natura enzimatica, prin care, in
prezenta oxigenului molecular din aer, substantele substratului sunt transformate in
acizi organici.
Spre deosebire de respiratia aeroba, in care oxidarea substantelor este completa
(producandu-se CO2, apa si energie calorica), in fermentatia aerobica, oxidarea se
opreste la formarea unor produsi intermediari (acizi).
In natura se intalnesc multe asemenea fermentatii, din acestea insa, considerate a fi
intalnite mai des in activitatile gospodaresti si in fermele de microproductie
sunt: fermentatia acetica, fermentatia pectolitica si fermentatia proteica.
Definitie: Fermentatia acetica este un proces biologic aerob, de natura enzimatica, prin
care substratul asupra caruia actioneaza microorganismele (alcoolul etilic) este
transformat in acid acetic (otetul este o solutie continand 6 - 9% acid acetic), astfel
incat acesta reprezinta principalul produs finit al fermentatiei acetice.
Agenti ai fermentatiei acetice
Principalii agenti ai fermentatiei acetice sunt bacteriile acetice din
genurile Acetobacter, Acetomonas (Gluconobacter), cuprinse in
familia Pseudumonodaceae, ordinul Pseudomonodales, bacterii strict aerobe,
nesporulate si gram negative. Acestea au forma de bastonase, uneori cu capete
rotunjite sau umflate, alteori usor curbate, care se dezvolta sub forma de voal
stralucitor, transparent si fragil.
In cea mai mare parte, bacteriile acetice sunt mezofile, avand temperatura optima in
jurul valorii de 30oC (19 - 36oC), producand acid acetic in concentratii de 2%
(Bacterium suboxidans) pana la 11% (B. schutzenbachii).
Dupa mediul in care se dezvolta, Hannenberg si Lazar (Citati de D. Motoc) clasifica
bacteriile acetice in:
bacterii acetice izolate din plamezi amidonoase (Gluconobacter suboxidans,
Acetobacter industrium);
bacterii acetice izolate din bere (Acetobacter kutzingianum, A. Pasteurianum);
bacterii acetice izolate din vin (A. Ascendens, A. Teurianum);
bacterii acetice industriale (Bacterium acetigenum).
Mecanismul fermentatiei acetice
Biochimismul fermentatiei este oxidarea alcoolului etilic, formandu-se ca produs
intermediar aldehida acetica activata (acetil coenzima A) si apoi hidratata (apa
provenind dintr-o reactie conexa, catalizata enzimatic de catalaza in prezenta F.A.D.):
Alcool etilic
Acetil - CoA
Acetil - CoA hidratata
Acid acetic
Importanta practica a fermentatiei acetice
Fermentatia acetica prezinta importanta practica in activitatile gospodaresti si
industriale.
Principalul aspect practic legat de fermentatia acetica este obtinerea otetului folosit la
marinarea unor produse culinare si pentru conservarea legumelor si fructelor. De
8
asemenea, fermentarea boabelor de cacao, prin care acestea capata aroma si alte
caracteristici organoleptice specifice este acetica.
O importanta deosebita o prezinta cunoasterea caracteristicilor microorganismelor
acetice si a mecanismului fermentatiei acetice pentru prevenirea si combaterea otetirii
vinului.
In vinurile slabe se dezvolta bacterii acetice (mai importante fiind: Acetobacter
ascendens, A. orlenense, A. pasteurianus, A. vini acetati, A. xylinoides, A. xylinum),
care oxideaza, treptat, alcoolul din vin.
Conditiile favorizante ale otetirii vinurilor sunt urmatoarele: continut de alcool sub
12%, aciditate volatila peste 1,4 g/l (in cazul vinurilor albe), respectiv 1,7 g/l (la
vinurile rosii), accesul aerului, temperaturi ambiante de 19 - 38 oC. Otetirea vinului este
o boala grava si periculoasa, deoarece, odata contaminat vinul, nu mai exista remediu
curativ. Prevenirea este necesara, in acest scop folosindu-se acidul sulfuros liber, ca
antiseptic.
Un rol important in raspandirea bacteriilor acetice il are musculita otetului
(Drosophyla melanogaster).
2.8.2 Fermentatia citrica
Fermentatia citrica este produsa de anumite ciuperci din genul Citromyces si
Aspergillus care determina transformarea glucozei in acid citric si apa.
Mecanismul acestei reactii se crede ca este acelasi cu cel al fermentatiei alcoolice pana
la formarea aldehidei acetice, care insa prin oxidare formeaza acidul glicolic. Din trei
molecule de acid glicolic se formeaza acidul citric si se elibereaza doua molecule de
apa.
Pe cale industriala acidul citric, cel mai folosit acid organic alimentar, se obtine tot pe
cale fermentativa. Substratul cel mai potrivit pentru microorganismele ce induc
fermentatia este zaharoza. Brotkevici a aratat ca daca se cultiva unele specii din
genurile Aspergillus, Penicillium si Rhisopus pe o solutie de zaharoza, in anumite
conditii specifice, se poate obtine acidul citric cu un randament de 90-100% din
cantitatea de zaharoza folosita.
Din glucoza, sub actiunea ciupercii Citromyces pfefferianicus, se obtine acidul citric
cu un randament de 50%.
Randamentul cu care se formeaza acidul citric, pe cale fermentativa, depinde de felul
microorganismelor, de natura substratului si de gradul de aerisire a culturii.
2.8.3 Fermentatia succinica, fumarica si malica
9
Fermentatia oxalica
Sub actiunea diverselor ciuperci si bacterii, se obtine acidul oxalic din substanta foarte
diferite, cum sunt: glucidele, glicerina, peptonele, acizii ( citric, succinic, malic tartric,
acetic ), alcooli, etc. Acidul oxalic se formeaza in cantitate mai mare din zahar, sub
actiunea mucegaiului Sterigmatocytis nigra, in prezenta sarurilor de fier. Daca fierul
lipseste, in loc de acid oxalic se obtine acidul citric. Pentru ca caidul oxalic sa se
formeze in cantitae mai mare, este necesar ca in mediul de cultura amicroorganismelor
sa se introduca subxstanta alcaline, capabile sa neutralizeze acidul oxalic format.
10