9.

Deficiențe enzimatice
9.1. Boli corelate cu deficiențe enzimatice și proteice
1250 boli genetice

200 erori metabolice

deficiente enzimatice
 9. Deficiențe enzimatice
9.1. Boli corelate cu deficiențe enzimatice și proteice
Boala Enzima deficienta Incidenta (%)
Gaucher Glucocerebrozidaza 0.002
Acatalazemia Catalaza (eritrocite) 0.004
Hipofosfatazia Fosfataza alcalina 0.001
Alcaptonuria Hemogentizat 1,2- 0.0001-0.001
dioxigenaza
Fructozuria Fructokinaza 0.0008
Pentozuria L-xilulozo reductaza 0.04 (evrei)
Tay-Sachs -N-acetil-D-hexoz- 0.0003
aminidaza
Fibroza chistica Proteina regulatoare 0.03 (caucazieni)
transmembranara
a fibrozie cistice
Albinism Tirozinaza 0.02 (scolari
Zimbabue)
Icter (nou- Biotinidza 0.0025
nascuti)
Deficienta Prolidaza mica
Prolidazei
Boala Pompe -Gluocozidaza mica
Imunodeficienta Adenozin deaminaza mica
combinata
severa
Xantinuria Xantin oxidaza mica
 9. Deficiențe enzimatice
9.2. Sindromul Gaucher
Mutatii ale genei GBA1 (glucocerebrozidaza)

Localizare - cromozomul 1 (1q21-22)

ghr.nlm.nih.gov

Gena GBA1: contine 11 exoni si 10 introni

Mutatii locale identificate in exonii genei GBA1

www.neurology.org
 9. Deficiențe enzimatice
9.2. Sindromul Gaucher

Mutatii ale genei GBA1 (>300)

Glucocerebrozidaza

http://www.childrensgaucher.org/

Glucocerebrozidaza

lizozomi

Pacienti cu Gaucher

↑conc. glucocerebrozidelor

prescottgenomics.wikispaces.com
Macrofage marite
= celule Gaucher
 9. Deficiențe enzimatice
9.2. Sindromul Gaucher
Semne si simptome ale bolii

Marirea ficatului/splinei (5-75x)

Scaderea numarului
Celule Gaucher (splina)
Trombocite Celule albe Celule rosii www.microscopy-uk.org.uk/

Coagulare Apararea Transport O2

organismului

Sangerari Anemie
Cresterea ratei
nazale Oboseala
de imbolnavire
Caderea
parului

www.makethediagnosis.com
 9. Deficiențe enzimatice
9.2. Sindromul Gaucher
Semne si simptome ale bolii

Prezenta celule Gaucher in maduva spinării

Circulația sanguina lentă

https://promedspine.com
Dureri articulare
febra Moartea țesuturi osoase

Subțierea oaselor

Conformație osoasă
de tip “pahar Erlenmeyer”
http://image.slidesharecdn.com/
9. Deficiențe enzimatice
9.2. Sindromul Gaucher

Boala autozomala recesiva

Mecanismul prin care mutatia GBA1

promoveaza agregarea sinucleinei

www.cerezyme.com
Corpusculii Levy
http://alzheimersnewstoday.com/
 9. Deficiențe enzimatice
9.2. Sindromul Gaucher

Incidenta: 1- 45.000-60.000 in populația globală

1- 100.000 in populația din România
1- 850 la populația evreiască “Askkenazi”

Arch Intern Med. 1998;158(7):777-781

Distributia pentru cel putin o boala:
TS - Tay-Sachs CF-fibroza chistica; GD –Gaucher.
 9. Deficiențe enzimatice
9.3. Acatalazemia
Catalaza - o enzima comuna

www.riverbendds.org
PDB:1QQW
Catalazei umane
(eritrocite)
Tetramer
monomer 60 KDa

Rata de descopunere
1 molec. Enzima
1 milion molec H2O2/s
Situs de legare catalaza umana
Kirkman & Gaetani, TrendsBiochemSci, vol 32(1), 44-50, 2007
 9. Deficiențe enzimatice
9.2. Acatalazemia
Catalaza - distributie

Ficat
Cantitati mari
Eritrocite
Rinichi

Țesutul conjuctiv
Cantitati moderate
Pancreas
Ser

Catalaza - localizare celulara

Peroxizomi
Mitocondrie Eritrocite normale
guides.wikinut.com
Citoplasma
 9. Deficiențe enzimatice
9.2. Acatalazemia
Gena catalazei Boala ereditară
deficienta a catalazei din sange
Localizare - cromozomul 13 (11p3)

Activitatea enzimatică < 10%

hipocatalazemie?

Identificată în 1948
pacienți japonezi

Gena catalazei: contine 13 exoni si 11 introni

33 kb
 9. Deficiențe enzimatice
9.2. Acatalazemia

Incidenta: 0,05- 1000 în populația ungară (homozigot)

2,3/1000 la în populația ungară (heterozigot)

0,04- 1000 în populația elvețiană

1 :12 500 în populația niponă

118 cazuri de acatalazemie

61 familii (11țări)

11 mutații
3 în introni

8 în exoni
9. Deficiențe enzimatice
9.3. Acatalazemia
9. Deficiențe enzimatice
9.3. Acatalazemia Produsii de peroxidare lipidica tubulii
renali proximali al soarecelui
normal (A,C) si acatalazemic (B,D)
Consecințe
Ulceratii alveolare
Boala Takahara

Gangrene

Pierderea
dintilor

Igiena orala neadecvata

Reiko Sunami et al. Am J Physiol Renal Physiol
2004;286:F1030-F1038

Dezvoltarea bacteriilor necroză

Neutrofile Producere H2O2 O2 

Interacțiune cu hemoglobina
 9. Deficiențe enzimatice
9.4. Hipofosfatazia
Localizare –gena

Localizare - cromozomul 1 (1p36.1)

Gena: 12 exoni (50 kb)

> 190 mutații genetice diferite

Incidența 1: 100000

În Germania 200 cazuri (2009)

 9. Deficiențe enzimatice
9.4. Hipofosfatazia
Boala ereditara caracterizata prin:

Mineralizarea defectuasa a oaselor

Deficienta a enzimei
fosfataza alcalina nespecifică din țesuturi (FANT)

Ficat Oase Rinichi

Radiografia unui fat (18 saptamani)

afectat de hipofosfatazie letală
Mornet, Best Practice & Research Clinical Rumatology,
22(1), 113-127, 2008
 9. Deficiențe enzimatice
9.4. Hipofosfatazia

Fosfataza alcalină – 4 izoforme

placentara
celule embrionare
intestinala
dimeri (ser, membrane)
omologie 90-98%
ADNul 2q37.1
FANT
di(tetra)meri
omologie 50% cu restul
ADNul 1p34-36

http://www.jbc.org/

1 subunitate
1 situs catalitic
1 Mg2+
2 Zn2+
 9. Deficiențe enzimatice
9.4. Hipofosfatazia

Substrate

Pirofosfat (PPi)
Fosfataza alcalina tisulara nespecifica (TNAP)
genereaza Pi din PPi sau dNTP (deoxinucleotidtrifosfati)

Pirodoxal-5’-fosfat (PLP)

Metabolismul vitaminei B6 (piridoxina - P) asistat de

fosfataza alcalina. (tractul gastrointestinalt - GI)
https://www.researchgate.net/
fosfoetanolamina
 9. Deficiențe enzimatice
9.4. Hipofosfatazia

Mutatii genetice
(>190)

c.1559delT 41%
F310L 14%
populatia japoneza

c.571G>A 50%
(E174K )
Populatia europeana
(hipofosfatalazemie
moderata)

Mornet, Best Practice & Research

Clinical Rumatology, 22(1), 113-127, 2008
 9. Deficiențe enzimatice
9.4. Hipofosfatazia

Semne si simptome ale bolii

Arcuirea prenatala a oaselor lungi

Rahitism infantil cu sau fara activitate mare a fosfatazei alcaline

Hipercalcemie si hipercalciuria

Pierderea prematura
a dintilor decisivi

Istoric familial

Simptome clinice ale formei

infantil-juvenile ale hipofaosfataziei
Beck, Open Bone J, 2009
 9. Deficiențe enzimatice
9.4. Hipofosfatazia
Metode de diagnosticate Valori de referinta folosite pentru
diagnoza HP la copii/adulti

Pirodoxal-5’-fosfat (PLP)

Marker al hipofosfataziei

Densitatea osoasa femurala

 9. Deficiențe enzimatice
9.5. Boala Tay-Sachs
Deficienta a -N-acetil-D-hexoz-aminidazei
Enzima - scindeaza gangliozidele GM2
GM2 – glicosfingolipide (acid sialic)
Abundente in plasma neuronilor

Deficienta acumularea GM2

in lizozomii celulelor nervoase

www.netterimages.com
www.stockphotos.ro
 9. Deficiențe enzimatice
9.5. Boala Tay-Sachs
Incidenta:

1- 27/1-30 la evreii Ashkenazi

1- 110 la evreii marocani

1- 140 la evreii irachieini

1- 50 la americanii irlandezi

1- 250 in populatia generala

Boala recesiva
 9. Deficiențe enzimatice
9.5. Boala Tay-Sachs
Testele

Masurarea nivelului hexozaminidazei A

Din cordonul ombilical

Prin amniocenteza

http://www.sigmaaldrich.com/

Saptamana 15-18 de sarcina

 9. Deficiențe enzimatice
9.5. Boala Tay-Sachs
Hexozaminidazele A si B
 9. Deficiențe enzimatice
9.5. Boala Tay-Sachs
HexozaminidazaA
 9. Deficiențe enzimatice
9.5. Boala Tay-Sachs
HexozaminidazaA
 9. Deficiențe enzimatice
9.5. Boala Tay-Sachs
Manifestari

Boala Tay-Sachs infantila (deficienta hexozaminidazei A)

Deficiente motorii medii (3-6 luni)

Retard mental (primele 4-8 luni)

Descreste atentia vizuala (6-10 luni)
Descrec miscarile voluntare si capacitatea vocala
(>10 luni)
Stare vegetativa, orb (2 ani) decesul (4 ani)

Gangliozidoza cronica GM2 - adolescenti

tremurat
coordinare slaba
tulburari de vorbire
retina neafectata
 9. Deficiențe enzimatice
9.5. Boala Tay-Sachs
Manifestări
Boala Tay-Sachs –varianta B1

Enzima își reduce activitatea față de unele substrate

Apare la 3-7 ani
Deteriorarea este variabila
deces 1-2 ani
> 5 ani

Boala Sanhoff- mutatii ale gene HexB

codeaza ambele subunitati HexA si HexB
infantilă, juvenilă sau târzie

Pete maculare rosii

http://themedicalbiochemistrypage.org/
 9. Deficiențe enzimatice
9.6. Alcaptonuria
Deficiența homogentizat dioxigenazei

a) Structura protomerului
b) Structura trimerului
HGD-dimer de trimeri
Mecanismul catalitic de
actiune a HGD
 9. Deficiențe enzimatice
9.6. Alcaptonuria
Simptome clinice Osteoartrita
Acumularea acidului homogentisic
(intremediar metabolic)

oase

cartilagii

http://www.romedic.ro/
urina http://d341kjmsrris3c.cloudfront.net/
Pietre
rinichi
prostata
vezica
Depozitare in tesuturi
Complicatii la inima
valve noi

http://www.e-ijd.org/articles/
 9. Deficiențe enzimatice
9.6. Alcaptonuria
Boala recesivă Incidență:

1- 500.000 (1.000.000)

1- 19.000 la slovaci

la dominicani

http://archive.cnx.org/
9. Deficiențe proteice
9.7. Fibroza chistică

CFTR

https://ghr.nlm.nih.gov/
9. Deficiențe proteice
9.7. Fibroza chistică

https://www.mun.ca/biology/
9. Deficiențe proteice
9.7. Fibroza chistică Supravietuire in timp/terapii

Boala recesiva

https://s3.amazonaws.com/
http://www.erswhitebook.org/
 9. Deficiențe enzimatice
9.8. Albinism

Tirozinaza
 9. Deficiențe enzimatice
9.8. Albinism
Terminologie

Pigmentare redusă (piele, păr, ochi)

https://www.epharmapedia.com
 9. Deficiențe enzimatice
9.8. Albinism
Melanina - localizare
Melanocitele celulelor uveale (Uvee - strat pigmentar al irisului)
Melanocitele de la jonctiunea dermo-epidermala

https://thumbs.dreamstime.com/

Oláh , J. et al., The British Journal of Dermatology. 2013;169(2):243-249.

 9. Deficiențe enzimatice
9.8. Albinism
Melanozomi – vezicule intracelulare
Specializate în siteza și stocarea melanilei

Pigmentare adecvata
Prezenta celulelor
Formarea melanozomi
Cantitate suficientă de melanina
din organita celulara

Localizarea melanozomului in melanocite

Wasmeier, C. et al., J.Cell.Sci, 121(24), 3997, 2008
 9. Deficiențe enzimatice
9.8. Albinism
Tipuri de albinism
Oculocutanat (hipopigmentarea parului și pielii)
Oculocutanat de tip I (OCA1; gena/cromozom 11)
Oculocutanat de tip II (OCA2; gena/cromozom 15)
Afro-americani / africani subsaharieni

Oculocutanat de tip III (OCA3; gena/cromozom 9, rară)

Sudafricanii negri

Oculocutanat de tip IV (gena/cromozom 5, rară)

Descendenți din populația japoneză
OCA1 OCA2

http://albinizm.ru/
 9. Deficiențe enzimatice
9.8. Albinism

Tipuri de albinism

Sindromul Hermansky-Pudlak (HPS)

Cel putin una din 7 gene mutate (pacientii dezvolta boli
Intestinale sau pulmonare respectiv boli hemoragice +
semne si simptome ale alb. oculocutanat)
Ocular (OA1) OA1
hipopigmentarea ușoară a
părului, pielii și ochilor
o mutatie genetica
cromozomul X (barbati)

Probleme ale funcției vizuale

Sindromul Chediak-Higashi (CHS)

formă rară (mutație cromozomul 1)
Simptome similare albinismului oculocutanat
+ defecte ale leucocitelor  risc de infecții
 9. Deficiențe enzimatice
9.8. Albinism
Deficienta tirozinazei

Localizare –gena (OCA1)

Localizare - cromozomul 11 (11q14-21)

https://ghr.nlm.nih.gov/gene/TYR#location
 9. Deficiențe enzimatice
9.8. Albinism
Deficienta tirozinazei
Albinismul oculocutanat de tip I (OCA1)

Incidența 1 la 16.000-20.000
OCA 1A
Boala autozomala recesivă
OCA 1B
OCA 1 – 4 subtipuri OCA 1MP
OCA 1TS
OCA 1A – caracteristici:

Mutație nulă a genei tirozinazei

nu se produce melanina
Fenotip sever: păr alb, transiluminarea irisului, nistagmus
reducerea acuității vizuale (20/200-20/400)
Pacienții – risc pentru cancer

http://plasticsurgerykey.com/
 OCA 1B – caracteristici: 9.8. Albinism

Mutație a genei tirozinazei

Activitatea enzimei  7%
obstrucționarea pigmentării
varianta “galbenă”

Fenotip: păr alb  blond  maro deschis

reducerea/scăderea moderată a
acuității vizuale
https://s-media-cache-ak0.pinimg.com/
Fenotip: transiluminarea irisului, nistagmus

OCA 1MP – caracteristici:

Mutație a genei tirozinazei

Activitatea enzimei moderată
Fenotip: păr blond (MP - minimal pigment)
Pacienti cu nevi (tumori benigne ale pielii)
http://albinizm.ru/
Transiluminarea irisului variabilă
acuitatea vizuală 20/80-20/200
 OCA 1TS – caracteristici: 9.8. Albinism
Mutație a genei tirozinazei
Producerea unei enzimei - activitate f(T)
Tirozinaza- activitate normală în zonele mai “reci” ale organismului
Tirozinaza- activitate  în zonele mai “calde” ale organismului

Fenotip: păr închis pe brațe, picioare și piept

Fenotip: păr alb (axilar, pubian, scalp)

Levin, A.V. & Stroh, E., Journal of AAPOS,

15 (1), 59-66, 2011

La naștere nu poate fi diferențiat față de OCA1A

http://www.handresearch.com/
 9.8. Albinism
Tirozinaza – 2 mecanisme de oxidare

Monooxigenaza (crezolaza)
Oxiadaza (catehinază)

o-chinone - functii
Antibioza
Secretie defensiva
Rigidizarea cuticulara
Formarea pigmentilor melaninici

Cai metabolice de formare a melaninelor

 9.8. Albinism
Cai metabolice de formare a melaninelor

Structura eumelaninei
www.tikalon.net
 9.8. Albinism

Tirozinaza – structura si functiile fiziologice

Familia cupru proteinelor de tip 3

Tirozinaza
Catecol oxidaza
Homocianinele (transportul O2 in artropode si moluste)

Situs activ 2 atomi de cupru

1 atom de cupru – 3 histidine

Structura cuaternara

Tirozinaza monomera
Pseudomonas putida
Bacillus thuringienis

Tirozinaza dimera
Thermomicrobium roseum Tirozinaza heterotetramera
Bacillus megaterium Thermomicrobium roseum
Streptomices castanglobisporus
 9.8. Albinism
Tirozinaza - patru stari de oxidare

Nativă – met-tirozinază
deoxi-tirozinază – 2x Cu(I)

oxi-tirozinază
deact-tirozinază – Cu (0)
parasește situsul
- Cu (II)

Cele 4 stări de oxidare ale

tirozinazei
 Rolul biotinei

Cofactor enzimatic pentru 4 carboxilaze

Piruvat carboxilaza
Acetil-CoA carboxilaza
propionil carboxilaza
metilcrotonil carboxilaza

https://media.mercola.com/

Rothschild, L. J., Phil. Trans. R. Soc. B., 363, 2787-2801, 2008

 Utilizarea biotinei

2 enzime
holocarboxilaza
BIotinidaza

Holocarboxilaza
Leagă biotina de carboxilaze

Biotinidaza
Desface complexul
biotina-carboxilaze

Deficitul celor 2 enzime

Acidemii organice

Deficitul de holocarboxidaza
Manifestări clinice: Eritem, urină cu miros de pisică
nfecții recidivante, manifestări neurologice
 Icterul
Deficienta biotinidazei

Incidența (1/60.000 SUA)

Localizare - 3p25.1 Lungime genă – 23 kb (4 exoni)

https://ghr.nlm.nih.gov/

Transmitere autozomala recesiva

Debut: sugar/copil mic

Manifestări clinice: cutanate (dermatite), convulsii, surditate, atrofie optică,

întârzieri în dezvoltare
Tratament: administrarea de biotină
 Biotinidaza umana

Glicoproteină – monomer (sialat)

502 aminoacizi, 57 KDa

6 situsuri de N-glicozilare

Biotinidaza din ser  ficat

Alte organe:
Rinichi
glande suprarenale
9 izoforme ale biotinidazei

Hidrolazică (pH acid)

Uniprot (P43251)
Activitate
Activitate biotinil transferazică (pH fiziologic)

Nivel  Biotinidaza din ser

diagnosticarea bolilor de stocare a glicogenului
D. Holesova et al., Clinical Biochemistry 44 (2011) 520–549
 Deficienta ACAMD
Oxidarea acizilor grasi
Catabolismul -oxidarea
aminoacizilor R3 mitochondriala
|
GD / GCOSCoA R1— C=C—COSCoA SCAD/C4—C6
Uman +4-NBCoA |
R2 M.e. + 3-keto-C4CoA
Fu, Z et al. Djordjevic, S et al.
Biochemistry 43, Biochemistry 34,
+2H
9674 (2004) + 2163 (1995)
Res 2.1 Å Res 2.5 Å
2
MCAD/C6—C10
e- S.s. +C8CoA
iBD / iBuCOSCoA
Uman + iBD-CoA Kim, J.-J. et al.
Battaile, K. P. et al. PNAS 90, 7523
JBC 279, ETF (1993)
16526 (2004) Res 2.4 Å
LCAD/C10—C18; C12
Tetramer, Res 1.8 Å
Eder, M. et al, EJB,
e- 245, 600-607
i3VD / i3vCOSCoA Gel filtrareTetramer
Tiffany, K. A. et al.
Biochemistry 36, vLCAD-1 / >C16
8455 (1997)
ETF Gel filtrareDimer
Tetramer, Res 2.6 Å DH Zhang, J. et al, BBRS
297, 1033-1042
i2VD (SBCAD) / iLeuCOSCoA e- vLCAD-2 (ACAD-9)
Uman+aceto-acetil-CoA C16:0 ; cis-9-C16:1 ; cis-9,12-C18:2
Tetramer, Res 2.6 Å Gel filtrareDimer
Preliminary data
Lant respirator Ensenauer, R. et al.
JBC 90, Jun (2005)
 Deficienta ACAMD
Proprietati selectate ale MCAD

 MCAD tetramer (D = 90 Å)

Eur. J. Biochem. 271, 483-493 (2004)

From Kim, J.-J., S., Miura, R,
 MCAD – enzima care catalizeaza prima
etapa din cadrul oxidarii acizilor grasi cu
lant mediu (C4-C16)
120
SCAD MCAD LCAD VLCAD
100

80
relative activity

60

40

20

0  Mutatii punctiforme G985A sau K304E

4 6 8 10 12 14 16 18 la interfata dintre monomeri
substrate chain length
 Deficienta ACAMD

Mecanismul de reactie si determinarea

activitatii enzimatice

Ghisla, S.& Thorpe, C.,J. Biochem. 271, 496 (2004)

Lehman, S.& Thorpe, C., Biochemistry 29, 10594 (1990)