Valencia Vázquez Alicia YANAHI Grupo.

Cinética enzimática
La penicilina se hidroliza, y con ello se inactiva, por l penicilinasa (también conocida como β-
lactamasa), una enzima presente en algunas bacterias resistentes a dicho antibiótico. La masa de
esta enzima en Staphylococcus aureus es de 29,6 kDa. La cantidad de penicilina hidrolizada por
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minuto en una disolución de 10 ml que contiene 10 gramos de penicilinasa purificada se midió en
función d ela concentración de penicilina.

Penicilina Cantidad hidrolizada (nmol)

(μM)
1 0.11
3 0.25
5 0.34
10 0.45
30 0.58
50 0.61

a) Represente V0 frente [S], y 1/V0 frente a 1/[S]. A partir de estos datos: ¿Te parece que esta
enzima presenta una cinética de tipo Michaelliana?. Si es así, ¿cuál es el valor de Km?.

La enzima presenta una cinética del tipo Michaelliana.

Km=m = 5.2202 μM

V0 vs [S]
0.0007

0.0006

0.0005

0.0004
V0
(µmol/min)
0.0003

0.0002

0.0001

0.0000
0.0 10.0 20.0 [S] 30.0 40.0 50.0
(µM)

Gráfico 1. V0 vs [S]
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1/V0 vs 1/[S]
9000
f(x) = 7622.51 x + 1460.19
8000 R² = 1

7000

6000

5000
1/V0
(min/µmol)
4000

3000

2000

1000

0
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
1/[S]
(µM-1)

Gráfico 2. 1/V0 vs 1/[S]

b) ¿Cuál es el valor de Vmax?

Vmax = 0.0007 μmol/min.

Ejercicio inhibición
Se mide la cinética de una enzima en función de la concentración de sustrato en presencia y
ausencia de 100 μM de inhibidor. Determinar:

a) Realizar los gráficos de V0 vs [S] y 1/V0 vs 1/[S] tanto en ausencia como en presencia de
inhibidor.
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V0 vs [S]
45.0

40.0

35.0

30.0

25.0
V0
(µmol/min)
20.0

15.0

10.0

5.0

0.0
0.0 10.0 20.0 30.0 40.0[S] 50.0 60.0 70.0 80.0 90.0
(µM)

Gráfico 3. V0 vs [S] En ausencia de inhibidor

1/V0 vs 1/[S]
0.09 f(x) = 0.22 x + 0.02

0.08

0.07

0.06

0.05
1/V0
(min/µmol)
0.04

0.03

0.02

0.01

0.00
0.00 0.05 0.10 0.15 1/[S] 0.20 0.25 0.30 0.35
(µM-1)

Gráfico 4. 1/V0 vs 1/[S] En ausencia de inhibidor

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V0 vs [S] (Con inhibidor)

9.0

8.0

7.0

6.0

5.0
V0
(µmol/min)
4.0

3.0

2.0

1.0

0.0
0.0 10.0 20.0 30.0 40.0 [S] 50.0 60.0 70.0 80.0 90.0
(µM)

Gráfico 5. V0 vs [S] En presencia de inhibidor

1/V0 vs 1/ [S] (Con inhibidor)

0.45 f(x) = 1.11 x + 0.11

0.40

0.35

0.30

0.25
1/V0
(min/µmol)
0.20

0.15

0.10

0.05

0.00
0.00 0.05 0.10 0.15 1/[S] 0.20 0.25 0.30 0.35
(µM-1)

Gráfico 6. 1/V0 vs 1/[S] En presencia de inhibidor

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b) ¿Cuáles son los valores de Km y Vmax en presencia y ausencia del inhibidor?

En ausencia de inhibidor En presencia de inhibidor

Km = 10.0000 μM Km = 9.8524 μM
Vmax = 44.6429 μmol/min Vmax = 8.8889 μmol/min

c) ¿De qué tipo de inhibición se trata?

Se trata de una inhibición mixta, esto se puede observar al combinar los gráficos de
V0 vs [S] con y sin inhibidor en donde el valor de Vmax disminuye cuando hay
inhibidor en el medio y en la combinación de los gráficos de 1/V0 vs 1/ [S] con y sin
inhibidor, la pendiente generada en presencia de inhibidor aumenta.

V0 vs [S]
44.6429
45.0
40.0
35.0
30.0
25.0
V0
(µmol/min)
20.0
15.0
10.0 8.8889

5.0
0.0
0.0 10.0 20.0 30.0 40.0[S] 50.0 60.0 70.0 80.0 90.0
(µM)

Gráfico 7. Combinación de gráficos V0 vs [S]

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1/V0 vs 1/[S]
f(x) = 1.11 x + 0.11
0.40

0.30

1/V0 0.20
(min/µmol)

0.10
f(x) = 0.22 x + 0.02

0.00
-0.20 -0.10 0.00 0.10 0.20 0.30

-0.10 1/[S]
(µM-1)

Gráfico 8. Combinación de gráficos 1/V0 vs 1/[S]