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2. Descripción de la actividad
Propósito:
Conocer los principales equipos con los cuales se trabaja en un laboratorio de microbiología y conocer y
aplicar las normas de bioseguridad que se deben tener en un laboratorio.
Objetivo:
Establecer normas y principios básicos de comportamiento en el laboratorio.
Fundamentación Teórica
La bioseguridad es un conjunto de medidas preventivas encaminadas a reducir el riesgo de transmisión
de enfermedades infecciosas, las plagas de cuarentena, las especies exóticas invasoras, organismos vivos
modificados.
Cuando se trabaja en laboratorio con microorganismos se deben poner en práctica varias
normas de bioseguridad para evitar accidentes y adquirir enfermedades.
Descripción de la práctica
A continuación, encuentra las normas de bioseguridad básicas de cualquier laboratorio y los cuidados
que se deben tener al lavar material del vidrio. Por favor realice una buena lectura, pero principalmente
ponga en práctica todas las recomendaciones.
Normas generales de bioseguridad.
Usar bata de manga larga con puños, la cual debe estar completamente
cerrada.
Usar guantes de nitrilo, tapabocas, gorro, gafas de seguridad y todos
los elementos de seguridad solicitados dependiendo del riesgo.
Evitar tocar sus ojos o piel con las manos enguantadas.
Usar cabello recogido, calzado cerrado y bajo, no usar falda, joyas,
manillas, reloj o elementos que puedan entorpecer la manipulación
de los materiales o equipos.
Metodología
Deben llevar al laboratorio un pre-informe donde resuelvan las siguientes preguntas:
¿Qué es bioseguridad?
¿Cuáles son las normas básicas de bioseguridad en el laboratorio de microbiología? En el
laboratorio seguir claramente las instrucciones dadas por el docente.
Propósito:
Determinar las características esenciales de la fermentación láctica durante la producción de Yogurt en
condiciones de laboratorio.
Fundamentación Teórica.
El yogurt es un producto lácteo fermentado ampliamente consumido. Se considera generalmente que fue
originado por los pastores nómadas, especialmente en Asia, y en el sur oriente de Europa, en la actualidad el
yogurt se relaciona con otros productos del mismo tipo como la leche agria, la leche de mantequilla agria, el kumis
y el kéfir.
El yogurt es el producto elaborado por fermentación de la leche mediante los microorganismos Streptococcus
hermophilus y Lactobacillus bulgaricus. E l yogurt es ácido y tiene una suave y fina textura, que va desde un firme
gel hasta un líquido viscoso como las natillas, dependiendo de la técnica de fabricación.
La principal reacción que ocurre en el yogurt es la fermentación láctica que realizan en simbiosis, las bacterias
lácticas del género de Streptococcus y Lactobacillus.
Según la legislación, para que este precipitado resultante de la fermentación de la leche sea considerado como
yogurt, en él “los microorganismos lácticos, deben ser viables y estar presentes en el producto terminado, en
cantidad mínima de 1×10.000.000 colonias por gramo o mililitro”. Estas bacterias proceden fundamentalmente de
las ubres de vacas, ovejas y cabras y al contaminar la leche, aprovechan la lactosa de la leche para, mediante la
fermentación láctica, producir ácido láctico y ácido fórmico o acetaldehído, que, en unas condiciones determinadas
de temperatura y pH del medio (disminuido a valores de pH 5 – 6 por la acumulación de ácido láctico en la leche),
provocan la desestabilización de las micelas de caseína disueltas en la leche (por alcanzar la carga neta las
estructuras proteicas (punto isoeléctrico), generando su unión), y con ella la separación de ésta del suero, dando
como resultado un precipitado coagulado que se define como “yogurt”. Los compuestos resultantes de esta
fermentación son los principales causantes de las cualidades organolépticas del yogurt; el ácido láctico le confiere
el típico sabor acidulado del yogurt y el acetaldehído, el aroma característico.
No hay hasta ahora, normas sobre la composición del yogurt y gran cantidad de fabricantes elaboran una amplia
variedad de productos. La leche casi siempre de vaca es el principal ingrediente. La primera etapa es preparar una
mezcla de leche y otros ingredientes, es común descremar parcialmente esta leche, pueden agregarse a la mezcla
sólidos adicionales en forma de leche en polvo descremada, lactosa, caseinato de sodio, etc., estos sólidos
adicionales dan cuerpo y mejoran la aceptación del cliente.
La leche en especial debe ser de alta calidad, el fabricante debe utilizar pruebas de selección para evitar el uso de
leches o de otros ingredientes que pueden contener antibióticos residuales u otros materiales bacteriostáticos a los
cuales son extremadamente sensibles los cultivos de yogurt. La buena calidad del producto terminado demanda un
control muy estricto de la composición de la mezcla. Donde la legislación lo permite, se pueden emplear
estabilizadores, cuajo, gelatina, calcio (en forma de caseinatos, lactatos, gluconatos, etc.), carragenina y otros
productos comestibles para dar más cuerpo. Después de estandarizar la composición de la mezcla, se clarifica,
pasteuriza y homogeniza, adicionando a continuación el inoculo en una concentración que va del 2-2.5%, se incuba
a 43-45°C durante un tiempo de 3-4 horas, enfriando finalmente a 5-8°C (el yogurt así preparado permanece en
buenas condiciones durante 7-10 días en refrigeración.
MATERIALES Y REACTIVOS, por grupos de 5 estudiantes
PROCEDIMIENTO
A) ELABORACION DE YOGURT.
1.- A la leche fresca se adiciona la leche descremada en polvo (al 6%), y se somete a
calentamiento a 82-85°C durante 30 minutos.
3.- La mezcla así preparada se enfría hasta 45°C, este tratamiento térmico de la leche es
importante porque controla el grado de desnaturalización de las proteínas del suero, lo cual
afecta la estructura del gel del yogurt esto además estimula el crecimiento de
microorganismos indicadores.
5.- La mezcla inoculada se vierte al recipiente (frasco estéril de 1 litro) para incubar a 43-
45°C durante 4 horas o bien hasta que la mezcla haya alcanzado un pH de 4,6 (equivalente
a una acidez de 0.9% expresada como ácido láctico), lo cual puede verificarse mediante una
titilación con NaOH 0.1N, empleando fenoftaleina como indicador.
6.- Una vez que se tiene la acidez deseada se puede adicionar la fruta (en forma de
mermelada o bien edulcorar con azúcar de mesa), y se procede a enfriar a
aproximadamente a 7°C, conservando esta temperatura hasta su consumo.
1.- Prepare una serie de tubos de ensaye conteniendo cada uno 5 ml de leche preparada
como se indicó anteriormente (con leche, leche en polvo, gelatina e inoculo).
2.- Rotule del 0 al 5 e incube a 45°C. (Cero, una, dos, tres y cuatro horas).
3.- Con intervalos de una hora tome alícuota de 2 ml para titular acidez, adicione 50
microlitros de fenoftaleina.
4.- Titule con NaOH 0.1N hasta una coloración rosada muy tenue que persista de 15 a 30
segundos, anotar el volumen empleado en cada titulación
Tomando el tubo cero al tiempo cero (justo después de la adición del inoculo) el tubo 1 al
tiempo 1 (primera hora) y así sucesivamente hasta el tubo 4
La acidez en la muestra expresada como ácido láctico se calcula con la siguiente fórmula:
Resultados. Discuta los resultados en relación con el tiempo de producción de ácido láctico
y las reacciones químicas que confieren el cambio de las condiciones organolépticas de la
leche.
OBJETIVOS
Cuantificar la producción de etanol producido por levaduras.
Fundamentación Teórica.
Por otra parte, Más del 97 por ciento de la gasolina de EE. UU. Contiene etanol,
generalmente en una mezcla llamada E10, compuesta por un 10 por ciento de etanol y un
90 por ciento de gasolina, para oxigenar el combustible y reducir la contaminación del aire.
El etanol tiene un número de octano más alto que la gasolina, lo que proporciona
propiedades de mezcla premium, según el Departamento de Energía de EE. UU.
Materiales y Reactivos
Mecheros
Probetas de 100 ml estériles
1 matraz de 100 ml con 50 ml caldo YPS inoculado con levadura (una diferente para cada
grupo
1 matraz con 100 ml de agua destilada estéril
3 matraces de 200 ml con 100 de caldo YPS
3 sistemas de evaporación
6 Tubos falcón
Espectrofotómetro
Celdas de espectrofotometría.
Centrifuga
PROCEDIMIENTO
Cuantificación de etanol
La espectrofotometría es una técnica analítica que permite cuantificar un compuesto en una
solución se fundamenta en la capacidad que tiene las moléculas para absorber las
radiaciones electromagnéticas, es de señalar que la absorción es directamente proporcional
a la concentración del compuesto.
Coloque los matraces en baño con hielo durante 10 minutos, y centrifugue el caldo en tubos
falcon a 5000 rpm durante 5 minutos.
Adicione a un frasco hermético, exactamente 40 ml u 80 ml del centrifugado si utilizó 2
tubos (todos los grupos deben adicionar la misma cantidad en sus frascos
correspondientes).
Adicione 5 ml de la solución SPS en su recipiente correspondiente.
Coloque el sistema a 70 grados centígrados durante 20 minutos, extraiga la solución SPS y
cuantifique en el espectrofotómetro a 400 nm. Transforme las unidades de absorbancia con
la ecuación de regresión.
Realice el montaje del sistema de evaporación (figura 1), con 40 ml de la dilución de etanol
y 5ml de la solución patrón como se indica en la gráfica. Realice este montaje para cada
dilución de etanol.
Coloque el sistema a 70 grados centígrados durante 20 minutos extraiga con cuidado la
solución Patrón y realice lecturas de absorbancia a 400 nm utilizando como blanco solución
patrón SPS. Tabule los datos como se indica en la tabla 1.
ABSORVANCIA CONCENTRACIO
N
1%
2%
3%
4%
5%
Resultados. Realice las gráficas correspondientes y discuta los resultados alrededor del
potencial de la producción de alcohol a partir de levaduras.
Descripción de la práctica
En esta práctica se identificarán microorganismos aislados del suelo capaces de producir
amilasa.
Propósitos: Que los estudiantes reconozcan la importancia de las técnicas de ingeniería genética aplicadas al
desarrollo Biotecnológico.
El presente laboratorio pretende la identificación de microorganismos por vía molecular causantes de ETAS.
Este laboratorio se ha dividido en tres fases de la siguiente manera:
Fase 1: Aislamiento y cultivo de microorganismo.
Fase 2. Extracción de ADN.
Fase 3. Identificación del Microorganismo.
1. Prepare un medio de caldo nutritivo (10 ml). Colocar en autoclave o en su defecto a ebullición en un
tubo de ensayo tapado. No destapar hasta que el medio se utilice. Mida mediante un espectrofotómetro
la absorbancia.
2. Para el Aislamiento y cultivo de los microorganismos, tome el alimento contaminado, corte un pedazo
pequeño y colóquelo en los 10 ml de caldo nutritivo previamente esterilizado. Se deja incubando a 37 ºC
durante 24-48 Horas. De no tener incubadora se deja incubando a temperatura ambiente 48 horas.
Identificar la turbidez del medio de cultivo, para ello medir por espectrofotometría el medio
incubado a la misma longitud de onda. La diferencia en la absorbancia indicará el crecimiento del
microorganismo. Mientras más alta sea la absorbancia mayor será el crecimiento.
14. Adicione 100 μL de Buffer TE, agite suavemente por vortex durante 10 seg
RESULTADO DE LA SECUENCIACIÓN.
AGCTTTTCATTCTGACTGCAACGGGCAATATGTCTCTGTGTGGATTAAAAAAAGAG
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GACTTAGGTCACTAAATACTTTAACCAATATAGGCATAGCGCACAGACAGATAAAA
ATTACAGAGTACACAACATCCATGAAACGCATTAGCACCACCATTACCACCACCAT
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GGTGGCCACCGTCCTCTCTGCCCCCGCCAAAATCACCAACCACCTGGTGGCGATGA
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GGCGAGAAAATGTCGATCGCCATTATGGCCGGCGTATTAGAAGCGCGCGGTCACAA
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GGTACTTGGACGCAACGGTTCCGACTACTCCGCGGCGGTGCTGGCTGCCTGTTTAC
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GCTTTCCTACTTCGGCGCTAAAGTTCTTCACCCCCGCACCATTACCCCCATCGCCC
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AATATGGCAATGTTCAGCGTTTCCGGCCCGGGGATGAAAGGAATGGTCGGCATGGC
GGCGCGCGTCTTTGCTGCAATGTCACGCGCCCGTATTTCCGTGGTGCTGATTACGC
AATCATCTTCCGAATACAGTATCAGTTTCTGCGTTCCGCAAAGCGACTGTGTGCGA
GCTGAACGGGCAATGCAGGAAGAGTTCTACCTGGAACTGAAAGAAGGCTTACTGGA
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GCACCTTGCGTGGGATCTCGGCGAAATTCTTTGCCGCGCTGGCCCGCGCCAATATC
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TAACGATGATGCGACCACTGGCGTGCGCGTTACTCATCAGATGCTGTTCAATACCG
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ATTCGCCTCGTGAAAGAATATCATCTGCTGAACCCGGTCATTGTTGACTGCACCTC
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TCACGCCGAACAAAAAGGCCAACACCTCGTCGATGGATTACTACCATCTGTTGCGT
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ATTACCGGTTATTGAGAACCTGCAAAATCTGCTCAATGCTGGTGATGAATTGATGA
AGTTCTCCGGCATTCTTTCAGGTTCGCTTTCTTATATCTTCGGCAAGTTAGACGAA
GGCATGAGTTTCTCCGAGGCGACTACGCTGGCGCGGGAAATGGGTTATACCGAACC
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GTTTTGCGCTATGTTGGCAATATTGATGAAGATGGCGTCTGCCGCGTGAAGATTGC
CGAAGTGGATGGTAATGATCCGCTGTTCAAAGTGAAAAATGGCGAAAACGCCCTGG
CCTTTTATAGCCACTATTATCAGCCGCTGCCGTTGGTGCTGCGCGGATATGGTGCG
GGCAATGACGTTACCGCTGCCGGTGTCTTTGCCGATCTGCTACGTACCCTCTCATG
GAAGTTAGGAGTCTGACATGGTTAAAGTTTATGCCCCGGCTTCCAGTGCCAATATA
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GATGGCGATGAATGAACACTGCGGCAAGCCGCTTAATGACACCCGTTTGCTGGCTT
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ATTGCGCACGGGCGACACTTGGCAGGCTTCATTCACGCCTGCTATTCCCGTCAGCC
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TACTGCCTGGCTTCCGGCAGGCGCGGCAGGCGGTCGCGGAAATCGGCGCGGTAGCG
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CCGCCCAGCGCGTTGCCGACTGGTTGGGTAAGAACTACCTGCAAAATCAGGAAGGT
TTTGTTCATATTTGCCGGCTGGATACGGCGGGCGCACGAGTACTGGAAAACTAAAT
GAAACTCTACAATCTTAAAGATCACAATGAGCAGGTCAGCTTTGCGCAAGCCGTAA
CCCAGGGGTTGGGCAAAAATCAGGGGCTGTTTTTTCCGCACG
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CCCGCAGTGCGAAGATCCTCTCGGCGTTTATTGGTGATGAAATCCCGCAGGAAATC
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AAGCGATGTCGGTTGTCTGGAATTGTTCCACGGGCCAACGC
TGGCATTTAAAGATTTCGGCGGTCGCTTTATGGCACAAATGCTGACCCATATTGCG
GCGATAAGCCAGTGACCATTCTGACCGCGACCTCCGGTGATACCGGAGCGGCAGTG
GCTCATGCTTTCTACGGTTTACCGAATGTGAAAGTGGTTATCCTTTATCCACGAGG
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CTGTTGCCATCGACGGCGATTTCGATGCCTGTCAGGCGCTGGTGAAGCAGGCGTT
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GCCGCGTGTGGAAGAGTTGTTCCGCCGCAAAATCTGGCAACTGAAAGAGCTGGGTT
ATGCCGCCGTGGATGATGAAACCACGCAACAGACAATGCGTGAGTTAAAAGAACTG
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CGGTCATGGTCCAGGCAAACATCACCGCTAAATGACAAATGCCGGGTAACAATCCG
GCATTCAGCGCCTGATGCGACGCTGGCGCGTCTTATCAGGCCTACGTGAATTCTGC
AATATATTGAATCTGCATGCTTTTGTAGGCCGGATAAGGCGTTCACGCCGCATCCG
GCATTGACTACAAACTTAACGCTGCTCGTAGCGTTTAAACACCAGTTCGCCATTGC
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GGTTTGGTCAGCCGATTTTCAATAATGAAACGACTCATCAGACCGCGTGCTTTCTT
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TGATAATCTCGGCATTCAATTTCTTCGGCTTCACCGATTTAAAATACTCATCTGAC
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GGTGATGATATCTCCCCAGAATTGATACAGATCTTTCCCTCGGGCATTCTCAAGAC
GGATCCCCATTTCCAGACGATAAGGCTGCATTAAATCGAGCGGGCGGAGTACGCCA
TACAAGCCGGAAAGCATTCGCAAATGCTGTTGGGCAAAATCGAAATCGTCTTCGCT
GAAGGTTTCGGCCTGCAAGCCGGTGTAGACATCACCTTTAAACGCCAGAATCGCCT
GGCGGGCATTCTCCGGCGTGAAATCTGGCTGCCAGTCATGAAAGCGAGCGGCGTTG
ATACCTGCCAGTTTGTCGCTGATACGCATCAGCGTGCTAATCTGCGGAGGCGTCAG
TTTCCGCGCTTCATGGATCAACTGCTGGGAATTGTCTAACAGCTCCGGCAGTGTAT
ATCGCGTGGTGGTCAACGGGCTTTGGTAATCAAGCGTTTTCGCAGGTGAAATAAGA
ATCAGCATATCCAGTCCTTGCAGGAAATTTATGCCGACTTTAGCAAAAAAAGAGAA
TGAGTTGATCGATAGTTGTGATTACTCCTGCGAAACATCATCCCACGCGTCCCGAG
Entorno para su
Componente práctico
desarrollo:
Productos a
Análisis de los resultados de la práctica en un informe de
entregar por el
laboratorio
estudiante:
Tipo de No se entrega ningún
Individual Colaborativo X
producto: producto
Informe de laboratorio con los siguientes componentes: Introducción, fundamentación científica del tema,
Metodología, resultados, discusión de resultados y bibliografía.
El informe lo debe entregar al tutor encargado del componente práctico en cada uno de los CENTROS.
Una vez enviada la nota cada tutor debe registrarla en la plataforma de registro de notas para
laboratorio
RUBRICA DE EVALUACIÓN
Aspectos Valoración
Valoración alta Valoración baja
evaluados media
Los estudiantes en Aunque se presenta
grupos de trabajo un informe de No realizan la
realizan y entregan el laboratorio no se entrega del
informe de laboratorio presenta de forma informe final o
Informe de de cada una de las explícita cada uno éste carece de la
de los acápites 20
laboratorio prácticas con los estructura solicitada
acápites solicitados en la solicitados para el
guía informe
(Hasta (Hasta 5
(Hasta 20 puntos)
10puntos) puntos)
El informe de cada una
de las prácticas se A pesar de que se
encuentra bien presenta el El informe carece
fundamentado informe, este de todo
teóricamente, se carece de argumento
evidencia el análisis de sustento teórico, científico o
los datos, se establece no se hace un solamente se
Calidad del la relación entre la análisis profundo evidencia copia de
30
informe teoría y la práctica a de los resultados y texto que no se
partir de una discusión las conclusiones relaciona con el
científica, de donde se no derivan del análisis de los
infiere conclusiones a análisis de los datos.
partir de los resultados mismos.
obtenidos.
(Hasta 15 (Hasta 5
(Hasta 30 puntos)
puntos) puntos)
En el cuerpo del No se respetan las
Se utilizan de forma texto se normas de
correcta las normas APA encuentran escritura
para las referencias errores en la establecidas, se
bibliográficas tanto en el aplicación de las evidencia plagio o
cuerpo del texto como normas, el texto no se citan
en la respectiva bibliografía. tiene dificultades correctamente los
Documento final 10
El texto es en la redacción y autores, presenta
coherente, presenta una presenta algunos altas deficiencias
buena gramática y errores de en la estructura
ortografía. ortografía y gramatical y de
gramática. ortografía.
(Hasta 6 (Hasta 3
(Hasta 10 puntos)
puntos) puntos)
Calificación final 10
0