MANEJO Y MEDICIONES CON MICROPIPETAS

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Franklin Samir Marín -1610870, Jorman Stifen Castro -1611029
Nohora Lith Hernández -1611207

Biología Molecular. Grupo A

Profesora: Liliana Yanet Suárez Contreras
Ingeniería Biotecnológica,
Facultad Ciencias Agrarias y del Ambiente
Universidad Francisco de Paula Santander

Introducción

El método más común para medir líquidos menores requiere el uso de un dispositivo conocido
como micropipeta. La micropipeta es un instrumento de laboratorio empleado para medir y
absorber pequeños volúmenes de líquidos y permitir su manejo en las distintas técnicas. Tener un
buen reconocimiento y practica de las micropipetas es algo primordial debido a que estas son una
herramienta básica en cualquier laboratorio de investigación ellas juegas un papel muy
importante como dispositivos utilizados para medir pequeños volúmenes de líquido de un
recipiente a otro con gran exactitud y se caracterizan por disminuir los márgenes de errores en
las mediciones realizadas, son de gran interés para volúmenes pequeños que van desde 0,1μl; en
los laboratorios de biología molecular, el manejo del equipo básico es fundamental; además, se
requiere del conocimiento de las distintas unidades de medición y su correcta conversión (Suarez,
2014).

El funcionamiento inadecuado de las micropipetas en el laboratorio es una de las causas que con
mayor frecuencia produce errores en el desempeño de las actividades y su calibración es una
tarea primordial por ende el objetivo de la práctica que se llevó a cabo fue la identificación
correcta de las micropipetas y su buena calibración debido a que hay que asegurarse de estar
usando la micropipeta correcta para el volumen que se necesita, se debe asegurar que la
micropipeta esté lista para el volumen deseado debido a que produciría un daño en esta
(Contreras, 2015).
Objetivos

 Identificar todas las partes de la micropipeta correctamente

 Medir de forma exacta con las micropipetas (0.5-10 μl; 10-100 μl y 100-1000 μl)
 Verificar la calibración de las micropipetas

MATERIALES Y MÉTODOS

Datos y resultados

Resultados

El procedimiento de la práctica fue basado en la toma de muestras con las micro pipetas que más

se usan en el laboratorio de Biología molecular. Se usó primero una micro pipeta blanca para

tomar volúmenes de menor magnitud, luego la amarilla para tomar volúmenes de cantidad

mediana y por último, una micro pipeta azul para tomar muestras de mayor tamaño.

Tabla #1
Descripción de pipetas
Rango Puntas Aspecto

0,5-10µL

Pipeta Blanca:
Nichipet EX
 10-100µL
Pipeta Amarilla:
Brand

Pipeta Azul: 100-1000µL

Nichipet EX

Pipetas usadas para el procedimiento de la práctica con sus respectivos rangos de volumen,

puntas, y su aspecto físico.

Figura (). Muestras de detergente de diferentes colores con las se realizó todas los

procedimientos del laboratorio. De izquierda a derecha: Muestra A, Muestra B, Muestra C y

Muestra D.

El primer procedimiento consistió en realizar tomas y vertimiento de muestras con un rango de

volumen de 0,5 µL a 10 µL ; es decir, se hizo uso de la micro pipeta blanca.

Tabla #2
Volúmenes tomados con micropipeta blanca
 Muestra A Muestra B Muestra C Muestra D Total

Integrante 1 4µL 5 µL 1 µL 0 µL 10 µL

Integrante 2 4 µL 5 µL 0 µL 1 µL 10 µL

Integrante 3 4 µL 4 µL 1 µL 1 µL 10 µL

Integrante 4 4 µL 5 µL 1 µL 0 µL 10 µL

Valores tomados de cada muestra por integrante del grupo de laboratorio y los valores totales en
el micro tubo de 2mL .

Figura ( ). Micro tubo de 2ml en el

cuál fueron vertidos los volúmenes.
Luego, se llevó a cabo una simulación de preparación de PCR, tomando las mismas cantidades
por cada uno de los reactivos que lleva una PCR; pero sustituyendo los reactivos
consecutivamente con las muestras de detergente A,B,C y D. Para ésta, se utilizó la micro pipeta
blanca y la micro pipeta amarilla (sólo una toma).

Tabla #3
Reactivos para la preparación de PCR
Reactivos Cantidad
Buffer (A) 2,5 µL
 MgCL2 (B) 0, 75 µL
Cebador ITS4 (C ) 1,25 µL
Cebador ITS5 (D) 1,2 µL
DNTPs (A) 0,50 µL
Taq Polimerasa (B) 1,10 µL
Agua Nanopura (C ) 16,65 µL (micro pipeta amarilla y blanca)
Solución ADN (D) 1,0 µL
Suero fetal bovino (A) 1 µL
Total: 25 µL
Reactivos junto a la muestra que lo sustituye , y en el lateral derecho se encuentran los volúmenes
respectivos a cada una.

Los micro tubos usado para éste procedimiento fueron los mismo que se usan para una PCR, es
decir, con capacidad 200 µL.

Por último, se realizaron medidas mayores a 100 µL, es decir, se usó la micro pipeta azul. El
Figuracierta
procedimiento fue el mismo, se tomó ( cantidad
). Microdetubo conde A, de B, de C y de D y se
muestra
capacidad de 200 µL. Usado para
vertió las cantidades en el micro tubo
PCR. de 2mL.

Tabla #4:
Volúmenes tomados con micropipeta azul
Muestra A Muestra B Muestra C Muestra D
Integrante 1 100 50 150 180
Integrante 2 150 150 150
Integrante 3 50 0 0 200
Integrante 4 100 50 150 180
Fueron tomados con la micropipeta azul a la que le corresponde éstos rangos.

Discusión de resultados y Conclusiones

En el laboratorio se realizó diferentes mediciones de volúmenes con el uso de la micropipeta, la
cual es empleada en el laboratorio de Biología Molecular para tomar pequeños volúmenes de
forma rápida y precisa. La mejor manera de dar uso de ella es colocar la punta, e introducirla en
la disolución presionando hasta el primer tope y soltando para succionar; para trasvasar el
líquido se debe presionar hasta el segundo tope, finalmente para retirar la punta se debe presionar
el botón superior. En la Tabla 1 se observa el tipo de micropipetas usadas en el laboratorio de
biología molecular, con el color de punta utilizado para cada rango de volumen. Se efectuaron
mediciones con micropipetas de marca Transferpette® S de BRAND de uso ergonómico de
diferentes rangos de volúmenes codificados con colores de 0.5-10µl (micropipetas de color
blanco), de 10-100µl (micropipetas de color amarilla) y de 100-1000µl (micropipetas de color
azul). Las marcas BRAND y Nichipet EX brindan máxima versatilidad y la más alta eficacia en
todo el rango de volumen, son consideradas micropipetas exactas, ligeras y robustas, su máxima
precisión en biología molecular es esencial para el pipeteado de enzimas.

Se realizó ejercicios de medición de volúmenes con el fin de obtener habilidad en el uso de la

micropipeta y la toma de volúmenes exactos, en dónde se debe tener en cuenta la rayita (-) , la
cuál indica donde parte los decimales. Es muy necesario resaltar que si tenemos una cantidad de
volumen con decimales para procedimientos como extracción de ADN, cuantificación de ADN o
cualquier procedimiento nos va a permitir tomar volúmenes con exactitud.

En la Tabla 2 se evidencia la toma de mediciones con micropipeta de pequeños volúmenes

menores a 20µl; en el cual se marcaron 3 tubos de 2ml y se realizó una matriz de distribución y se
procedió a realizar el ejercicio de toma de volúmenes.

En la tabla 3 se evidencia los volúmenes utilizados en la toma de mediciones con micropipetas

para la realización de PCR, la cual fue un ejercicio simulacro que tiene como fin preparar al
alumno para la realización de prácticas de PCR, y la obtención de habilidades y datos a tener en
cuenta como: la absorción de la muestra o reactivo lo más lento posible con el fin de no generar
burbujas, y colocar la muestra o reactivo en la pared del microtubo.

En la Tabla 4 se muestra el volumen de cada solución añadida a los 4 tubos, para la cual se utilizó
la micropipeta de punta de color amarrillo para tomar volúmenes de 10-100µl y micropipeta de
punta de color azul para tomar volúmenes de 100-1000µl.
En conclusión la utilización de micropipetas para la toma de pequeños volúmenes es fundamental
para las prácticas de laboratorio de biología molecular como extracción de ADN; esta
herramienta permite al estudiante tomar volúmenes exactos y precisos. Además, el laboratorio de
micropipetas ayuda al estudiante a adquirir experiencia en el uso y manejo de equipos y
herramientas de laboratorio biología molecular, así mismo el estudiante debe tener en cuenta que
las micropipetas tiene un tope de volumen el cual no debe ser sobrepasado, o tips, como no ladear
o voltear la micropipeta en el momento que contenga algún reactivo o muestra, de lo contrario el
líquido puede dañar la parte interna del filtro de ésta.

Discusiones y Conclusiones

Cuestionario

1. ¿Cómo se mide el porcentaje de exactitud y el coeficiente de variación? Escriba un

ejemplo
Porcentaje de exactitud
Se refiere a cuán cerca del valor real se encuentra el valor medido.
Coeficiente de variación
El coeficiente de variación (CV) es una medida de la dispersión relativa de un conjunto de
datos, que se obtiene dividiendo la desviación estándar del conjunto entre su media
aritmética y se expresa como CV=s/X para una muestra y CV=ơ/X para la población.
Los coeficientes de variación tienen las siguientes características:
 Puesto que tanto la desviación estándar como la media se miden en las unidades
originales, el CV es una medida independiente de las unidades de medición.
 Debido a la propiedad anterior el CV es la cantidad más adecuada para comparar
la variabilidad de dos conjuntos de datos.
 En áreas de investigación donde se tienen datos de experimentos previos, el CV es
muy usado para evaluar la precisión de un experimento, comparando en CV del
experimento en cuestión con los valores del mismo en experiencias anteriores.
 Ejemplo: Los valores de las pesadas del control gravimétrico son sólo la masa del
volumen dosificado. Para obtener el volumen real se debe efectuar un cálculo
corrector. El cálculo corrector se realiza por multiplicación del valor medio de los
valores de las pesadas (x) con el factor Z (mL/g que es lo mismo que µl/mg), que
toma en consideración la densidad del agua, la temperatura de control y la presión
atmosférica. Z es igual a 1,0032 µl/mg, referido a 21,5 ° C, 1013 mbar (hPa) y a la
utilización de agua destilada o z es igual a 1,0029 µl/mg, referido a 20 5 ° C y 1013
mbar (hPa). El factor Z es igual a 1/densidad (García, 2012).

Valores del control a 21,5 ° C (Z = 1,0032)

Volumen controlado Vo (µl): 200,0000
Valor nominal (mg) = Volumen controlado/Z
Valor nominal (mg): 199,3620
x1 =200,2000 x2=199,6000 x3= 199,4900 x4= 199,7000 x5= 199,7000

Valor medio: Ẋ= ∑xi/n

Volumen medio: V= ẋ*z V= 200.2+199.6+199.49+199.7-199.7/5= 1.0032
V= 199.738*1.0032= 200.3772
Exactitud: E (%)= V-Vnominal/Vnominal *100
E (%)= 200.3772-200/200-100= 0.189
Desviación estándar: S= Z* ∑ (xi-x)2/ n-1
S= 1.0032* 0.29688/4= 0.273
Coeficiente de variación: CV= s*100/V
CV= 0.273-100/200.3772= 0.136

2. ¿Cómo se clasifican las micropipetas automáticas?

Las micropipetas automáticas aportaron más practicidad y bioseguridad. También
aportaron mayor velocidad para dispensar muestras y reactivos con excelente precisión y
sin posibilidad de contaminación, y en las técnicas donde el tiempo operativo es crítico,
como en las reacciones enzimáticas e inmunoanalíticas que, la mayoría de estas técnicas
fueron automatizadas en la década de 1980. Demás está decir sobre la practicidad, la
precisión y la seguridad que aportó la micropipeta automática al desarrollo de las técnicas
 inmunoanalíticas, que se acrecentó mucho más con el desarrollo de las técnicas de PCR.
También se mejoró la calidad de los materiales utilizados en su fabricación y, muchos
modelos tienen la posibilidad de ser autoclavables.

Tipos
 Existen micropipetas manuales, en las que el volumen a aspirar se fija girando un
botón en su parte superior que está conectado a un sistema analógico de
confirmación de volumen, y automáticas, en las cuales dicho sistema es digital.
Actualmente, se reconocen fácilmente en el mercado dos de las mejores marcas
que existen: Eppendorf y Nichiryo (Castellani, 2015).

3. ¿Qué otras aplicaciones o usos tienen las micropipetas en biotecnología?

Las micropipetas pueden ser utilizadas en diversas industrias y para diferentes
aplicaciones, como son:
 Laboratorios
 Industria alimenticia
 Industria farmacéutica
 Microbiología
 Medicina
 Realización de PCR (Anónimo, 2013).

BIBLIOGRAFÍA

- Castellani, E. (2015). LA MICROPIPETA AUTOMÁTICA. Recuperado de

http://www.tideca.net/content/la-micropipeta-autom%C3%A1tica
- Contreras, J. (2015). Práctica: El uso de las micropipetas. Recuperado de http://jorge-
contreras.webs.com/guia-El%20uso%20de%20micropipeta-BM.pdf
- García, J. (2012). MEDIDAS DE DISPERSIÓN. Recuperado de
http://colposfesz.galeon.com/est501/distfrec/meddisp/meddisp.htm
- ¿Qué es una micropipeta? ¿Cuáles son los usos y aplicaciones de las micropipetas?.
(2016, 18 de febrero). Recuperado de https://www.quiminet.com/articulos/conozca-los-
principales-tipos-de-micropipetas-3437854.htm
- Suarez, P. (2014, 16 de Febrero). PRÁCTICA N. 2: MANEJO Y MEDICIONES CON
MICROPIPETAS. Recuperado de https://es.scribd.com/doc/207330650/Lab-2-
Micropipetas-1