ENTEROBACTERALES I

Escherichia coli, Klebsiella spp,

Enterobacter spp, Proteus spp
DIAGNOSTICUL MICROBIOLOGIC
 ENTEROBACTERALES
DEFINITIE
 bacili Gram (-), scurti,
 nesporulati,
 mobili sau imobili (cili peritrichi),
 unele specii sunt capsulate (Klebsiella)
 au capacitatea de a degrada glucoza fermentativ,
 aerobi, facultattiv anaerobi,
 oxidaza (-),
 catalaza (+),
 reduc nitratii la nitriti,
 CLASIFICARE DUPA GRADUL DE
PATOGENITATE
* BACTERII INALT PATOGENE:
- Yersinia pestis (ciuma, pesta),
- Salmonella typhi (febra tifoida),
- Shigella dysenteriae (dizenteria),
* BACTERII PATOGENE:
- Salmonella spp
- Shigella spp,
- Yersinia enterocolitica,
- E. coli (EIEC, EPEC, ETEC, EHEC, EAggEC)
* BACTERII CONDITIONAT PATOGENE:
- Patogenitate la limita (conditii legate de organismul – gazda
si microorganism),
- E. coli, Klebsiella, Enterobacter , Proteus etc.
 IMPLICAREA IN INFECTIILE UMANE
1. Patologia digestiva:
- 25% Salmonella, Shigella, E. coli,
2. Patologia urinara:
- 70 - 80% : E. coli, Klebsiella spp., Enterobacter spp, Proteus spp.
3. Infectii sistemice – septicemie:
- > 65% (Escherichia coli, Klebsiella pneumonia)
4. Patologia respiratorie:
- Pneumonia comunitara- Klebsiella pneumoniae,
- Pneumonia nosocomiala / ATI: Serratia, Klebsiella pneumoniae MDR,
5. Meningo- encefalite:
- E. coli, Klebsiella,
6. Patologie post - traumatica musculo- scheletala:
- Klebsiella pneumoniae, Serratia marcescens
 DIAGNOSTICUL DE LABORATOR IN INFECTII
PRODUSE DE
ESCHERICHIA COLI

 Escherichia coli:
- germeni comensali, saprofiti: locuitori normali ai intestinului uman, ileon
terminal, colon,
- bacterii conditionat patogene: infectii extraintestinale (peritonite,
colecistite, infectii ale plagilor, endometrite, pneumonii),
- bacterii cu potential patogen:
• Patotipuri enterice (BDA),
• Patotipuri urinare (ITU),
• Patotipuri extraintestinale (meningite, septicemii)
- se gasesc ubiquitar (apa, alimente, sol, suprafete inerte),
- Coliformi fecali: indice de poluare a apei
(indice de igiena)
 GENUL ESCHERICHIA- DEFINITIE

- bacili Gram (-), nesporulati,

- majoritatea sunt bacterii mobile,
- pot fi si imobile, capsulate,
- catalaza (+),
- oxidaza (-),
- se dezvolta la temperaturi cuprinse
intre 15 - 45ºC,
- de regula Lactozo (+),
- unele tulpini sunt hemolitice,
 Escherichia coli in
Infectii de tract urinar (ITU)
 UROCULTURA:
- 90% ITU cu E. coli,
- E. coli din flora bacteriana intestinala proprie,
- calea de infectie: ascendenta,
- aderenta la celulele uroepiteliale: fimbrii,
- pilii “pap”: “pyelonephritis associated pil”
* UROCULTURA CANTITATIVA
* Interpretare in context clinic si paraclinic (sumar urina si ex.
imagistic)
 UROCULTURA
 1. RECOLTARE
- inainte de administrarea substantelor antibiotice sau antiseptice,
- prima urina de dimineata,
- din “jet mijlociu”,
- asigurarea conditiilor se asepsie, antisepsie (toaleta locala
riguroasa),
- recoltor steril,
- tehnici de recoltare invazive,
 2. TRANSPORT
TRANSPORT IN MAX 2 ORE LA LABORATOR,
- Insamantare imediata
 UROCULTURA

3. EXAMEN MACROSCOPIC

 culoare (sange, medicatie diversa, antiseptic urinare),

 grade diferite ale aspectului tulbure, pana la piurie,
 miros,
 prezenta sedimentului la fundul recoltorului,
 grade diferite de hematurie macroscopica
 UROCULTURA

4. EXAMEN MICROSCOPIC
* Centifugare (3-5 min la 2000- 2500 turatii/min) =
Screening microscopic:
- Sediment urinar: preparat proaspat intre lama si lamela:
- examinare cu obiectiv 40X:
- leucocite, hematii, cristale, flora bacteriana, levuri etc
- Sediment urinar - Frotiuri Gram/ AM:
- PMN neutrofile, bacterii, celule epiteliale
Examen sumar de urina (ex. biochimic)
 UROCULTURA

5. CULTIVAREA URINEI:
* METODA DILUTIILOR,
* METODA ANSEI CALIBRATE
* “URICULT”/ “URILINE”
 Urocultura
Tehnica ansei calibrate

Anse de inoculare
 UROCULTURA

5.1. METODA ANSEI CALIBRATE:

- anse calibrate, din plastic, sterile, de unica utilizare, de 0,01 si
0,001 ml (volum de 1 microlitru urina)
- insamantare pe medii de cultura:
• geloza – sange,
• MacCokey,
• pe placa Petri de 90 mm diametru,
• 1 striu diametral si 10 striuri perpendiculare
• Incubare: 18- 20 ore, 37ºC
 UROCULTURA
5.2. METODA “URICULT”:
- geloza- sange,
- CLED sau MacConkey
 UROCULTURA:
CITIRE/ INTERPRETARE

1. ASPECTE CULTURALE: Escherichia coli

• Geloza – sange:
- colonii alb- gri, lucioase, bombate, tip”S”,
- hemolitice sau nehemolitice,
• MacConkey, CLED:
- colonii lactozo (+)/ lactozo (-),
Eschrichia coli- aspect cultural
MacConkey, agar- sange, CLED
 UROCULTURA- Escherichia coli:
CITIRE/ INTERPRETARE
2. IDENTIFICARE:
- Caractere microscopice: bacili scurti Gram (-),
- Caractere biochimice:
• TSI: G+; L, Z +/- ; H2S -, gaz +/ -
• MIU: mob +/ -; I +; U –
• MILF: mob +/ -; I +; Liz +/-, FenAla-
• Citrat Simmons –
• ONPG +
Escherichia coli –
CARACTERE BIOCHIMICE
 UROCULTURA
* INTERPRETARE REZULTATE

 UROCULTURA CANTITATTIVA:
* > 100 000 UFC/ ml
- infectie urinara,
* 10 000 – 100 000 UFC/ ml
- bacteriurie cu suspiciune de infectie urinara; (! prezenta
neutrofilelor in sediment)
- se recomanda repetarea analizei,
- bacteriurie semnificativa in context clinic si cu sumar urina,
* 1 000 – 10 000 UFC/ ml
- bacteriurie fiziologica, clinic nesemnificativa,
* < 1 000 UFC/ ml
- negativa
 INTERPRETAREA
CANTITATIVA A CRESTERII
NR.COLONII IN
VOL.INOCUL NR.COLONII/PE URINA
PLACA (UFC/mL)

1 1000
1L

100 100000
UROCULTURA POZITIVA

GOLD STANDARD
105 UFC/mL
 UROCULTURA
INTERPRETARE REZULTATE

 Criterii in interpretarea rezultatului:

- sex (fetite, baieti),
- varsta (n.n., sugar, batrani),
- tratament antibiotic,
- situatii fiziologice (sarcina, ciclul menstrual, alaptare etc),
- situatii patologice:
* imunodepresie: HIV, TBC, hepatita B, C, hemopatii maligne,
cancer, chimioterapie imunosupresiva etc,
* ruptura perineu, sonda uretrala permanenta, constipatie cronica
etc.
Klebsiella pneumoniae

 IDENTIFICARE:
- Caractere microscopice: bacili Gram (-) grosi, scurti, in
diplo pe axul lung, incapsulati,
- Caractere culturale:
- colonii lactozo (+) mucoase, care conflueaza pe medii
neinhibitorii
Klebsiella pneumoniae
Caractere microscopice
 Klebsiella pneumoniae
Aspecte culturale
(aspect mucos/ prezenta capsulei)
Klebsiella pneumoniae
Caractere biochimice
Genul Enterobacter
- specii mobile,
- fermenteaza glucoza cu cantitati mari de gaz,
- NU produce: indol, H2S si fenilalanildeaminaza (FenAla),
- Spre deosebire de genul Klebsiella, bacteriile din genul
Enterobacter au o activitate fermentativa mai redusa si sunt
mobile,
- 2 specii au importantta medicala:
* Enterobacter aerogenes,
* Enterobacter cloacae
 Genul Enterobacter

* Identificare preliminara:
1. Caractere de cultivare
- medii nutritive simple (geloza simpla, geloza- sange),
- mediu diferential CLED (geloza lactozata):
- medii slab selective (MacConkey):
2. Set minim de teste biochimice: TSI, MIU, MILF, citrat,
 Genul Enterobacter
- cultura pe mediul MacConkey:
- colonii mari, 2-3 mm, rotunde, tipice “S”,
- lactozo (+),
 Genul Enterobacter

Identificare definitiva:
- tipare serologica,
- tipare biochimica,
- tipare genetica
Antibiograma:
• Sensibilitate la fluorochimolone, cefalosporine generatia a III-
a, aminoglicozide,
• Tulpinile de Enterobacter sunt rezistente la ampicilina,
cefalosporine de generatia I, cloramfenicol, tetraciclina,
 Genul Proteus

* Bacteriile din Genul Proteus fac parte din flora bacteriana

normala a intestinului uman,
- Sunt raspandite pe sol, in ape reziduale, ape de suprafata,
alimente de origine umana sau animala,
- Produce imbolnaviri umane, cea mai des intalnita fiind infectia
urinara.
 Genul Proteus
* Identificare preliminara:
- fenomenul de invazie,
- fenomenul de demarcatie Dienes,
- colonii lactozo (-),
• Caractere exoenzimatice si metabolice:
pe medii multitest: TSI, MIU
- Teste (+): H2S, Fen Ala, ureaza, citrat, indol +/-,
* Proteus mirabilis / indol (-),
* Proteus vulgaris/ indol (+),
- Teste (-): lipsa fermentarii lactozei (L-), absenta
Lizindecarboxilazei (Liz -),
 Proteus spp.
fenomenul de invazie si
fenomenul de demarcatie Dienes
 Genul Proteus

* Identificare definitiva:
- Identificare biochimica (API, VITEK, Microscan,
MALDITOF etc),
- Tipare serologica,
- Tipare bacteriofagica,
- Rezistotipia:
• rezistenta intrinseca la tetraciclina, nitrofurantoin, colistin
Genul Proteus
Antibiograma standard difuzimetrica pentru
Enterobacterales
Antibiograma cantitativa (CMI – metoda dilutiilor
in mediu lichid/ bulion Mueller Hinton)