MICROBIOLOGIA,TOXICOLOGIA Y

NUTRICION
PROGRAMA:
2020.CE1.0029.03/DT .M.13114
INSTRUCTOR: RAUL MEJIA
 MICROBIOLOGIA

Imagen de colonias de microorganismos colerados mediante la tincion gram y vistos en un microscopio.

Tinciones
 Microscopio
• Para el examen microscópico de los
microorganismos se puede utilizar el
microscopio óptico o el microscopio electrónico.

• En general, el microscopio óptico se usa para

observar células intactas, mientras que los
microscopios electrónicos se usan para
observar estructuras internas o detalles de las
superficies celulares
 Microscopio
• Todos los microscopios utilizan lentes para
aumentar la imagen de una célula de modo que
se puedan observar sus detalles estructurales.

• Es importante también la resolución que esta

limitada por las propiedades físicas de la luz.

• El microscopio óptico cuyos imites de resolución

están aproximadamente en los 0.2 micrómetros
mientras que el microscopio electrónico es capaz
de aumentar el poder 1000 veces.
Microscopio óptico compuesto
El microscopio óptico ha sido una
herramienta básica para el desarrollo de la
microbiología. Se utilizan en la actualidad
varios tipos de microscopios ópticos: de
campo claro, contraste de fases, campo
oscuro y fluorescencia.
 Microscopio óptico compuesto
• El microscopio de campo claro que es el usado
en el laboratorio se compone de dos series de
lentes (lentes objetivo y lentes del ocular).

• Con este tipo de microscopio las muestras se

visualizan gracias a las diferencias de contraste
entre ellas y el medio que las rodea.

• Las diferencias de contraste se producen

porque las células absorben o dispersan a luz
en diferentes grados.
 Microscopio óptico compuesto
• Muchas células bacterianas son difíciles de
observar bien con el microscopio de campo
claro debido a su falta de contraste con el
entorno. Los microorganismos pigmentados
son una excepción, pues su color de
contraste y mejora la visualización de las
células
• Debido a lo anterior es necesario aumentar el contraste de las células
de los microorganismos para poder obsérvalos en un microscopio.

¿Cómo se logra aumentar el contraste

para poder ver las bacterias en forma
de cocos, bacilos, espirilos o colonias
etc.?
Colonia: es la agrupación de microorganismo de un mismo tipo.
Microscopio óptico
El contraste de las células se puede
incrementar por una técnica de gran
importancia en microbiología llamada

TINCIONES
 Tinciones
• Se puede utilizar colorantes para teñir las células y aumentar así su contraste
facilitando su observación.

• Los colorantes son compuestos orgánicos y cada tipo de colorante tiene

afinidad por determinados componentes celulares.

• Muchos de los colorantes utilizados con frecuencia en microbiología están

cargados positivamente (catiónicos) y se combinan fuertemente con
constituyentes celulares cargados negativamente, como los ácidos nucleicos y
los polisacáridos ácidos.

• Entre los colorantes catiónicos se pueden citar el azul de metileno, el cristal

violeta y la safranina.

• Dado que las superficies celulares están por lo general, cargadas

negativamente estos colorantes se combinan con estructuras de la superficie
de las células, y por tanto, son excelentes colorantes de aplicación general.
 Tinciones
El principio general de las tinciones usadas
en microbiología es hacer uso de colorantes
orgánicos los cuales son absorbidos por las
paredes celulares de las células, de tal
manera que estas cambian su color y se
pueden ver mas fácilmente desde un
microscopio.
 Tinciones
• Las tinciones se clasifican en:

simples y diferenciales.
Todas buscan facilitar la visión de los
microorganismos, identificación y
clasificacion de acuerdo a la tinción a la
cual tienen capacidad de adquirir.
 Tinción simple
• Las tinciones más simples se realizan sobre
preparaciones previamente secadas.

• Sobre un portaobjetos con una suspensión de

microorganismos previamente secados y fijados se
derrama una pequeña cantidad de una solución diluida
del colorante y se mantiene el contacto durante uno o
dos minutos: a continuación se lava varias veces con
agua y se seca. Este tipo de preparación suele
observarse con un objetivo de inmersión.

Porta objetos: Lamina usada para inoculación de microorganismo que luego después se ponen bajo el lente del microscopio con el fin de
observar microorganismos.
 Tinción de gram
La tinción de gram es una de las técnicas
mas conocidas e importantes para la
clasificación de bacterias. Dichas bacterias
se denominan como:

Bacterias gram positivas y bacterias gram

negativas.
 Tinción de gram
• La tinción de gram es una tinción diferencial
comúnmente usada en análisis
microbiológicos.
• Descubierta por Hans Cristian Gram.
• Hace el uso de portaobjetos (laminillas de
vidrio) con las muestras inoculadas por
frotación de bacterias tenidas y examinadas al
microscopio.
 Tinción de gram
Los reactivos usados en la tincion gram son los
siguientes:
• Cristal violeta (colorante basico)
• Lugol (mordiente)
• Alcohol
• Cetona (decolorante)
• Safranina (colorante de contraste)

Mordiente: sustancia química que sirve para fijar colores.

 Tinción de gram
Fundamento teórico:

• El cristal violeta actúa como colorante básico

uniéndose a la pared celular bacteriana, con ayuda
del lugol (mordiente)que refuerza la unión del
colorante. Las bacterias gram positivas
debido a la composición bioquímica de su pared
celular retienen el complejo cristal violeta-lugol y
aun después del tratamiento con el decolorante aun
muestra su tinción de color purpura o violeta en el
microscopio.
 Tinción de gram
• Las bacterias gran negativas pierden
el colorante básico cuando son tratadas con el
decolorante debido a que el alcohol disuelve el
contenido lipidico (grasa) de la pared celular( lo
vuelve mas permeable), dando como resultado
la perdida del complejo cristal-violeta-lugol. Las
bacterias decoloradas captan el colorante de
contrase, razon por la cual estas bacterias se
observan de color rojo al microscopio.
Bacterias gram positivas y gran
negativas.
¿Cuál es gram positiva y gran
negativa?
FIN..