Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Familia Neisseriaceae
Definitie:
- coci rotunzi, Gram (-), dispusi in perechi, cu fetele adiacente aplatizate (aspect
caracteristic „in boabe de cafea”, „reniformi”), tetrade, gramezi,
- oxidaza-, catalaza- pozitivi,
- imobili,
- nesporulati,
- speciile patogene prezinta capsula,
- sunt germeni pretentiosi nutritiv,
- se dezvolta optim la 35°C- 37°C, in atmosfera imbogatita cu CO2 (5-10%).
Familia Neisseriaceae cuprinde genurile:
- Neisseria,
- Moraxella,
- Kingella,
- Eikinella,
Propunere pentru noul Manual Bergey de Bacteriologie (taxonomie):
Familia Moraxellaceae:
- Branhamella catarrhalis,
- Acinetobacter.
1
2. Neisseria gonorrhoeae: este foarte agresiva pentru orice fel de mucoasa: genitala,
rectala, faringiana, conjunctivala,
- determina infectii acute, localizate cu tendinta invaziva tisulara si, apoi, sistemica.
Netratate, infectiile gonococice evolueaza spre cronicizare cu fibroze.
- La barbat: uretrita acuta, epididimita,
- La femeie: endocervicita, boala inflamatorie pelvina (salpingita, metrita,
pelviperitonita), infectii gonococice diseminate (eruptie cutanata, artrite, meningita,
endocardita)
- La nou- nascut: conjunctivita, endoftalmita.
Diagnosticul de laborator:
1. Infectii determinate de Neisseria meningitidis:
a) Recoltare:
- In meningitele meningococice se recolteaza LCR: 3-5 mL, inainte de administrarea de
antibiotice ar fi ideal,
- Transport imediat la laborator, ferit de variatii de temperatura si lumina (se transporta
la temperatura corpului/ 37°C),
- Uneori se recomanda insamantarea LCR la patul bolnavului, imediat dupa punctia
lombara, cu transportul rapid al mediilor de cultura la laborator,
- Sange (hemocultura): volum 3-5 mL la copil, 10 mL/ flacon de hemocultura la adult,
- Exudat nazal si faringian (important pentru determinarea punctului de plecare a
infectiei, precum si la purtatori- contacti pentru stabilirea sursei de infectie, utile in
ancheta epidemiologica).
- Medii de conservare si transport: Stuart si Amies (tampoane nazo-faringiene)
b)Examen macroscopic: aprecierea aspectului macroscopic (LCR opalin, tulbure,
purulent),
c) Examen microscopic direct:
- numaratoare elemente/ mmcub (camera de numarat Fuchs – Rosenthal (se foloseste
LCR brut, in diferite dilutii, in functie de gradul de opacitate),
- se centrifugheaza restul de LCR (20 min la 3500 rotatii) si din sediment se efectueaza
frotiuri (Gram, Giemsa) si insamantari pe medii de cultura (geloza- sange berbec si
geloza chocolat),
- din supernatant de determina prezenta antigenelor bacteriene solubile (Neisseria
meningitidis, Str pneumoniae, Haemophilus influenzae, Str. agalactiae/ grup B).
* Latex aglutinarea si coaglutinarea: detectia rapida direct din supernatant LCR, inactivat
prin fierbere, a antigenelor solubile de N. meningitidis, serogrup A, B, C, Y, W 135.
Rezultatul pozitiv al uneia dintre reactii impreuna cu aspectul microscopic al frotiului
colorat Gram, permite medicului inceperea de urgenta a tratamentul antibiotic, inainte de
obtinerea culturilor.
2
- Examen microscopic: frotiuri colorate Gram si Giemsa sau albastru de metilen
(aspectul celularitatii): prezenti coci Gram (-), rotunzi, in diplo, fete adiacente aplatizate,
„in boabe de cafea”, „reniformi”, intra si extra- leucocitari, frecvente PMN. Prezenta
leucocitelor pledeaza pentru un prognostic favorabil. Examinarea frotiurilor dureaza aprox
10 minute, deoarece, in meningita meningococica, frotiul este sarac in germeni.
d) Izolarea:
- Medii de cultura imbogatite: geloza Columbia sau geloza BHI (brain, heart infusion)-
sange berbec 7- 10%, geloza chocolat, pentru prelevate normal sterile (LCR, sange,
lichide de punctie),
3
* Testul oxidazei: pe suprafata coloniilor suspecte se depune o picatura de solutie apoasa
1% de tetrametilen- p- parafenilendiamina preparata extemporaneu. Testul este pozitiv
daca coloniile devin roz, rosu purpuriu, apoi se innegresc in 10 sec. Testul poate fi efectuat
si prin depunerea coloniilor pe hartie de filtru impregnata cu acelasi reactiv. Aparitia unei
culori violet intens, in 3-10 sec, indica pozitivitatea testului.
* Testul de fermentare a zaharurilor:
- Coloniile suspecte se repica in sectoare pentru obtinerea de cultura pura, in cantitate
suficienta pentru inoculare pe medii solide, inclinate ce contin zaharuri 1% (glucoza,
maltoza, lactoza, zaharoza), ser de cal 10%, indicator de pH. Tuburile cu zaharuri se
incubeaza in atmosfera CO2, timp de 20 ore. Meningococul fermenteaza glucoza si
maltoza fara producere de gaz, si nu fermenteaza lactoza si zaharoza.
* Relativ recent, pentru diferentierea speciilor de Neisseria au fost introduse teste bazate
pe substraturi cromogene. Trei dintre acestea, ß- galactozidaza (ONPG), γ-
glutamiltransferaza (GGT) si hidroxiprolin- aminopeptidaza (HPAP) au fost preluate si in
unele galerii comerciale de microteste:
ONPG - - -
GGT + - -
HPAP - + -
4
si latexaglutinare. Sunt cunoscute in prezent 12 grupe antigenice ale meningococilor: A, B, C,
W135, Y etc. Peste 95% din izolatele europene apartin grupelor B, C, A si Y. In functie de
aglutinarea cu antiseruri de grup, tulpinile de meningococi pot fi:
- grup aglutinabile: pot fi incadrate intr-un grup definit,
- poliaglutinabile: aglutineaza cu mai multe seruri,
- neaglutinabile: nu aglutineaza cu niciun ser.
* Tipizarea meningococilor: Tipizarea antigenica vizeaza antigene polizaharidice, proteice si
lipopolizaharidice.
- antigenele polizaharidice determina serogrupele,
- antigenele proteice sau antigenele de membrana externa (OMP- Outer Membrane Proteins)
determina tipurile si subtipurile de meningococi,
- antigenele lipopolizaharidice determina imunotipurile (8 clase diferite de LPS/
lipopolizaharid = 8 imunotipuri).
* Antibiotipia (sensibilitatea la antibiotice): meningococii au pastrat in general
sensibilitatea la penicilina. Tulpinile de meningococ producatoare de penicilinaza sunt rare, de
aceea, rezistenta la penicilina a meningococilor ramane un marker epidemiologic cu
capacitate discriminatorie buna.
5
caracteristiciintracelulari, dar interpretarea frotiului este ingreunata de flora polimorfa
vaginala. Cultura este si in acest caz, obligatorie.
6
terapeutice cele mai bune se obtin cu cefalosporine generatia a III-a si
fluoroquinolone.
3. Branhamella catarrhalis:
- coci Gram negativi, comensal al cailor respiratorii superioare, ce poate determina la
om angine, otite medii, sinuzite, pneumonii, bronhopneumonii (pe fond de
imunodepresie post- gripala, rujeola, tuse convulsiva).
- Diagnostic: importanta majora o are frotiul colorat Gram din sputa, aspirat bronsic,
secretii traheo- bronsice: coci Gram (-) dispusi in diplo, gramezi, intra si extra-
leucocitari, mucus, fibrina. Izolarea se face pe geloza sange si geloza chocolat, dupa
incubare 24-48 ore, la 37°C, in atmosfera imbogatita cu 3-5% CO2, umiditate.
- Identificarea: colonii lucioase, gri, rotunde, 3-5 mm diametru. Examenul microscopic
din coloniile caracteristice confirma prezenta cocilor Gram negativi in diplo.
- Testele oxidazei si catalazei: pozitive, ca si la neisserii,
- Nu fermenteaza zaharurile (G-, L-, M-, Z-),
- DNA-aza : (+),
- Este beta- lactamazo- producatoare,
- Singurul coc Gram (-), oxidazo- catalazo- (+), betalactamazoprducator izolat din
secretii otice, sinusale, tract respirator superior si inferior este Branhamella
catarrhalis.