BACTERIOLOGIE SPECIALĂ - ÎNDRUMĂTOR DE LUCRĂRI PRACTICE 2015

LUCRAREA PRACTICĂ NR.7

GENUL CLOSTRIDIUM
SPECII PATOGENE PRIN TOXICITATE ȘI VIRULENȚĂ

Clostridiile virulente și toxigene sunt germenii gangrenei gazoase, boală comună omului și
animalelor. Fiecare specie în parte determină boli infecțioase ale animalelor și infecții localizate în
diverse organe și țesuturi la om și animale, după cum urmează:
 Clostridium chauvoei (sinonim: Cl. feseri): cărbunele emfizematos (cărbune
simptomatic, armurar); specii receptive: taurinele, bubalinele, ovinele, rumegătoarele
sălbatice și uneori suinele.
 Clostridium septicum (sinonim: Cl. oedematismaligni; nume comun: vibrionul septic al
lui Pasteur): bradsotul (braxy) la oi și capre; edemul malign al porcului; infecții
accidentale la om (apendicite, infecții puerperale);
 Clostridium novyi (sinonim: Cl. oedematiens) cu 4 biotipuri (A,B,C,D) pe baza
proporțiilor cantitative dintre cele 5 fracțiuni care alcătuiesc toxina:
- tipulA: boala capului mare la berbec;
- tipul B: hepatiă necrozantă la oaie, asociată frecvent infestației cu
Fasciola hepatica, parazitul având rolul de vector;
- tipul C: osteomielită la bubaline;
- tipul D: hemoglobinuria bacilară a bovinelor;
 Clostridium perfringens (sinonime: Welchia agni, Welchia perfringens): enterite și
enterotoxiemii la toate speciile de animale, iar la om, toxiinfecții alimentare și infecții
cu diverse localizări (apendicite, colecistite, meningite, septicemii etc.).
Întrucât conduita diagnosticului în infecțiile cu clostridii virulente și toxigene este foarte
asemănătoare iar entitățile morbide determinate de primele trei specii de clostridii sunt mai rar
întâlnite, în continuare vom detalia doar specia Cl perfringens, care este frecvent incriminată etiologic
în infecțiile animalelor tinere.

69
BACTERIOLOGIE SPECIALĂ - ÎNDRUMĂTOR DE LUCRĂRI PRACTICE 2015

CLOSTRIDIUM PERFRINGENS

I. Istoric și taxonomie
Cl. perfringens (sinonime: Welchia agni, Welchia perfringens) a fost izolat și descris complet
în 1892 de Welch și Nuttal, care au izolat bacteria din organele unui cadavru uman.

II. Ecologie
Bacteria este ubicvitară, prezentă sub formă de spori în sol, furaje, alimente, apă, aer și în
calitate de comensal- condiționat patogen, în intestinul gros la om și animalele sănătoase.

III. Infecția naturală

Bolile produse de Cl perfringens se încadrează în grupul denumit generic anaerobioze, care se
manifestă prin tulburări gastrointestinale și leziuni de tip necrotic și degenerativ la nivelul unor organe
interne. Speciile cele mai afectate sunt:
- ovinele: enterotoxiemia oilor adulte (tipul ,,Struck"), dizenteria
anaerobă a mieilor;
- suinele: dizenteria anaerobă a purceilor (enterita necrozată
infecțioasă);
- taurinele: enterotoxiemia anaerobă a vițeilor (enterotoxiemia
hemoragică);
Anaerobiozele mai afectează păsările, iepurii și animalele de blană și foarte rar, cabalinele și
carnasierele (Perianu T.și colab., 2011).

IV. Conduita diagnosticului etiologic.

 examenul bacterioscopic direct se efectuează pe frotiuri din conținutul intestinal și
este orientativ, existând prezumția de anaerobioză dacă predomină bacilii cu
morfologie caracteristică. Confirmarea diagnosticului se face prin izolarea bacteriei și
punerea în evidență a toxinei perfringens în conținutul intestinal.
 examenul bacteriologic propriu-zis
1. Condiții de cultivare
Clostridium perfringens este anaerob dar, spre deosebire de celelalte clostridii, tolerează
prezenţa unor cantităţi reduse de oxigen. Bacteria se cultivă pe medii uzuale anaerobe (V.F., V.L.,
Kitt-Tarozzi etc.) la temperatura optimă de 43-450C și Ph 6,5 – 7,5.

70
BACTERIOLOGIE SPECIALĂ - ÎNDRUMĂTOR DE LUCRĂRI PRACTICE 2015

Pentru izolare din alimente, se folosesc medii speciale cu substanțe selective: mediul SPS
(sulfit-polimixina B- sulfadiazină), mediul TSC (triptonă – sulfit – cicloserină ) ș.a.
2. Caractere culturale
În mediile lichide: cultură abundentă, turbiditate, spumozitate la suprafață, miros de unt
rânced.
Pe suprafața mediilor solide: colonii de tip S, cu centrul mai opac, de culoare gri și marginile
transparente.
În profunzimea mediilor solide: colonii de formă lenticular–discoidală și producție de gaz
abundentă încât dilacerează mediul.
Pe geloză-sânge de cal : hemoliză intensă și completă (fig7.1. ).

Fig. 7.1.Clostridium perfringens -cultură pe geloză-sânge

infectionnet.org

3. Caractere morfologice
Clostridium perfringens este un bacil Gram pozitiv scurt și gros (4-8/1,5 μm), cu capete
rotunjite, dispus izolat, uneori diplo și în lanțuri scurte, sporulat, capsulat, neciliat (fig.7.2.).
Sporul este oval, cu poziție centrală sau subterminală și deformează discret forma vegetativă.
Sporogeneza in vitro se realizează greu dar poate fi stimulată prin adaos de peptonă și sulfat de
magneziu sau amidon.
Capsula este sintetizată doar în organism și este evidențiabilă prin metoda de colorare Casares-
Gill sau cu tuș de China.

Fig. 7.2. Clostridium perfringens – forme vegetative și sporulate, col. Gram, MO x 1000,
71
http://thefoodpoisoninglawyers.com/
BACTERIOLOGIE SPECIALĂ - ÎNDRUMĂTOR DE LUCRĂRI PRACTICE 2015

4. Caractere biochimice
Cl. perfringens are un metabolism intens, dispunând de numeroase enzime:
- fermentează cu producție de gaz :glucoza, zaharoza, lactoza, maltoza, manoza, inozitolul;
- lichefiază gelatina în 1-3 ore;
- produce hidrogen sulfurat;
- nu produce indol;
- intensă activitate lecitinazică;
- reduce nitrații în nitriți;
- puternic sulfitoreducător, înegrind mediile care conțin sulfit de sodiu și un compus feric
(fig.7.3.)

Fig.7.3 Clostridium perfringens –colonii sulfitoreducătoare în profunzimea mediului SPS

5. Caractere antigenice și de patogenitate

Cl. perfringens posedă antigene somatice comune (O) și antigene specifice de biotip.
Patogenitatea este dată de virulență (conferită de acțiunea antifagocitară a capsulei) și
toxicitate.
Toxina este alcătuită din 14 fracțiuni notate cu literele alfabetului grecesc, dintre care 4 sunt
majore (alfa, beta, epsilon, iota) prin efectul lor letal. Pe baza proporției fracțiunilor majore ale toxinei,
în cadrul speciei Cl. perfringens au fost identificate 6 biotipuri notate cu literele A,B,C,D,E,F.
Tipizarea tulpinilor se face prin reacția de seroneutralizare cu seruri antitoxice specifice de
biotip. Neutralizarea toxinei se verifică prin inoculare i.v. la șoareci .
Biotipurile de Cl. perfringens se deosebesc nu numai prin compoziția toxinei, care rămâne criteriul de
bază, ci și prin alte însușiri: gazda receptivă și tipul de infecție, patogenitatea în condiții experimentale
pentru cobai, termorezistența sporilor ș.a.
Cl. perfringens sintetizează și o enterotoxină cu implicații în toxiinfecțiile alimentare.

72
BACTERIOLOGIE SPECIALĂ - ÎNDRUMĂTOR DE LUCRĂRI PRACTICE 2015

6. Infecția experimentală
Testarea patogenității se efectuează în mod obișnuit pe cobai, prin inoculare i.m pe fața internă
a coapsei. Tulpinile virulente omoară cobaiul, cu variații ale DLM de o tulpină la alta și de la un biotip
la altul. Animalul prezintă la locul inoculării un flegmon gazos, edem și depilație. Moartea apare după
12-48 ore, prin septicemie. Din leziunile locale, cavitatea peritoneală și organele interne se izolează
tulpina de Cl. perfringens inoculată.

V. Sensibilitatea față de factorii de mediu și substanțe antimicrobiene

Sporii sunt distruși la 100°C în 2-3 minute. Bacteria manifestă sensibilitate la eritromicina,
cloramfenicol, streptomicină, tetraciclină, teramicină. Pentru eficiența tratamentului, antibioterapia se
asociază cu seroterapia.

VI. Imunoprofilaxia
Preparatele imune utilizate în profilaxia și terapia anaerobiozelor sunt următoarele:
- vaccinul contra anaerobiozelor la animale – suspensie concentrată de
anacultură și anatoxine de Clostridium perfringens, tipurile A,B,C,D
inactivate prin formol și adsorbite pe gel de hidroxid de aluminiu.
- vaccinul contra anaerobiozei la purcei – amestec în părți egale de
anacultură și anatoxină din Cl. perfringens, tipurile A și C inactivate prin
formol și adsorbite pe gel de hidroxid de aluminiu.
- ser antigangrenos polivalent – obținut pe cal prin hiperimunizare cu tulpini
de Cl. perfringens, tipurile A, B, D.
- ser antigangrenos pentru porcine – obținut din sângele animalelor
hiperimunizate cu tulpini de Cl. perfringens, tipurile A și C.
- ser contra dizenteriei anaerobe a mieilor - obținut din sângele animalelor
hiperimunizate cu tulpini de Cl. perfringens, tipul B.

73
BACTERIOLOGIE SPECIALĂ - ÎNDRUMĂTOR DE LUCRĂRI PRACTICE 2015

74