AMINOÁCIDOS

Fecha de entrega:Marzo 15/2020

Agudelo Sanchez Luis,Betancourt Shirly Stefani,Castrillón Arias

Enrique,Guerrero Sergio Alejandro,Peláez Giraldo Angie Daniela

Laboratorio De Bioquímica-Facultad De Ciencias Básicas Universidad

Santiago De Cali.

luisagudelo1996@gmail.com​,shirlyb0729@​gmail.com,ecastrillonarias@gma
il.com​, ​sergio.guerrero00@usc.edu.co​, ​daniipelaez09@gmail.com​.

RESUMEN

Para el desarrollo de esta práctica se realizaron 3 diferentes aplicaciones se

soluciones (Alanina, Ácido aspártico, Leucina, mezcla de alanina, leucina y ácido
aspártico) ensayos cualitativos con ninhidrina como visualizador para la
diferenciación esto con el objetivo de identificar aminoácidos presentes. De igual
forma se observó una mancha analítica para caracterizar una muestra en un papel
indicador para cromatografía la cual finalizó en el reconocimiento de albúminas;
debido a la especificidad de cada una de estas pruebas y a las características
estructurales de cada aminoácido se consiguió reconocer la presencia o ausencia
de ellos en la muestra analizada.

palabras clave:​ ​reactivo de millon, ninhidrina, albúmina, cromatografía.

 I. INTRODUCCIÓN

Los aminoácidos son las unidades tetraédrico de los aminoácidos, es el

químicas o elementos constitutivos de hidrogeno (The medical biochemistry
las proteínas que a diferencia de los page.2015). Y es precisamente el
demás nutrientes contienen agrupamiento tetraédrico de cuatro
nitrógeno.Los aminoácidos son grupos diferentes alrededor el carbono
biomoléculas formadas por (C) lo que confiere la actividad óptica de
Carbono, (H) Hidrógeno, (O) Oxígeno los aminoácidos. Las dos formas
y (S) Azufre.Son componentes especulares objeto-imagen se llaman
primarios de las proteínas (pues a isómero L y D; solamente los
partir de ellas se sintetizan las aminoácido L son constituyentes de
cadenas polipeptídicas largas) y su las proteínas. (Stryer, L. 1975).
estudio es de gran importancia para
entender la bioquímica de los Para poder identificar aminoácidos
organismos vivos ya que participan en dentro de una proteína se puede
funciones celulares diversas, como utilizar una técnica que requiere
la transmisión nerviosa y la equipo mínimo llamada cromatografía,
biosíntesis de porfirinas, purinas, utilizada por primera vez en 1903 por
pirimidinas y urea. (Garritz, A, el botánico ruso M. T. Sweet. Dicha
Gasque, L. & Martínez, A.. 2005.) técnica presenta dos fases: una
estacionaria y otra móvil. (Murray, R.
Los polímeros cortos de aminoácidos, et al. 2013). La clave de la separación
péptidos, desempeñan funciones en cromatografía es que la velocidad
importantes en el sistemas con la que mueve cada sustancia
neuroendocrino como hormonas, depende de su afinidad relativa por
factores liberadores de hormona, ambas fases (equilibrio de
neuromoduladores o distribución). Así, los componentes
neurotransmisores. Los afines a la fase estacionaria avanzan
α-aminoácidos de los péptidos y más lentamente que los más afines a
proteínas (menos la prolina) está la fase móvil. Por lo tanto, el medio
formada por un ácido carboxílico y un cromatográfico (papel filtro en el caso
grupo funcional amino, los cuales de la cromatografía de papel) es un
están unidos al mismo átomo de controlador de la velocidad de las
carbono tetraédrico, a su vez, los sustancias que constituyen a la
grupo R que distinguen a un mezcla, para así lograr su separación
aminoácido de otro, también se (Técnicas cromatográficas,2007).
encuentran unidos al carbón α
(omitiendo a la glicina, en donde el De forma más específica, en la
grupo R es el hidrógeno). Por último, cromatografía de papel, los
la cuarta sustitución en dicho carbono aminoácidos presentes se separan en
la fase móvil de la mezcla de ● Plancha de calentamiento
componentes polares y no polares
● 1 erlenmeyer de 500 ml 1 vaso de
miscibles. A medida de que la fase precipitados de 500 ml
móvil asciende por el papel, sus
componentes polares se asocian con ● 1 papel para cromatografía
los grupos polares del soporte, por lo
● 1 estufa a 110º C
tanto el solvente se hace
progresivamente menos polar ● 1 rociador
conforme asciende. Gracias a esto, los
● 1 secador de pelo
aminoácidos se dividen en una fase
estacionaria polar y en una fase móvil
menos polar. Así, los aminoácidos no
Reactivos
polares migran más lejos al pasar la
mayor proporción de su tiempo en ● Nitrito de sodio(10 g/l)
fase móvil, mientras que los
aminoácidos polares viajan una menor ● Reactivo de ninhidrina
distancia desde el origen, ya que ● Ácido nítrico concentrado
pasan más tiempo en fase
estacionaria (Murray,R. et al. 2013). ● Solvente: Etanol + Agua +
Amoniaco (80-10-10 en volumen)
Por último, después de haber
● NaOH 10 M
eliminado el solvente al secarlo al aire,
los aminoácidos se visualizan usando ● Ácido acético
ninhidrina, lo que formará productos
● Fenol(1 g/l)
de color púrpura o morado con los
α-aminoácidos.Para verificar la ● Nitroprusiato de sodio(20 g/l)
relación entre la distancia recorrida por
la sustancia y la distancia recorrida por ● Reactivo de Millón
el disolvente hasta el frente del ● Papel indicador de pH
eluyente se determina el Rf de los
aminoácidos encontrados en el ● Mezcla de aminoácidos(1 g/l) de
alanina, leucina y ácido aspártico.
sistema empleado.
● Soluciones (1 g/l) de los
MÉTODOS Y MATERIALES aminoácidos: prolina, ácido
aspártico,leucina,
Materiales: glicina, alanina, tirosina,
fenilalanina, triptófano, cisteína,
● 30 tubos de ensayo metionina, lisina y asparagina.

● 3 gradillas

● 4 pipetas de 5 ml

● 2 pinzas para tubos

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL RESULTADOS

Se tomó un trozo de papel para

cromatografia en el cual se trazó una
línea a 2 cm del borde inferior, AMINOÁ DISTANC VALOR
midiendo 2 cm de distancia de la línea CIDO IA RF
inicial se colocó 3 aplicaciones de las RECORRI
soluciones (Alanina, Ácido aspártico, DA (cm)
Leucina,mezcla de alanina, leucina y LEUCINA 4
ácido aspártico) es puntos separados,
entre las aplicaciones de cada ACIDO 1
ASPARTI
sustancia se utilizó el aire caliente del
CO
secador para obtener un secado más
rápido y eficiente. Al finalizar las 3 ALANINA 2,8
aplicaciones y verificar que las
MEZCLA 4
muestras estuvieran secas en su
totalidad, se procedió a poner el papel
para cromatografia en un erlenmeyer
el cual contiene el solvente, teniendo
especial cuidado en que el borde de
las muestras quede sumergido en el
solvente y tratando que el papel no
quede inclinado.

Se tapó el erlenmeyer y se dejó

avanzar el cromatograma hasta un
nivel próximo del borde
DISCUSIÓN
superior,sacamos el papel y se
expuso al aire frío de un secador, una
vez seco se roció ninhidrina que actúa
como un agente poderoso para
visualizar las bandas de separacion de
CONCLUSIONES
aminoacidos y se dejó en aire caliente
de un secador por unos minutos,
● Identificamos la presencia de
después se observó las manchas, se
proteínas en una muestras de
rodeó su contorno y se determinó el
mediante pruebas cualitativas,
centro de la mancha.
del mismo modo reconocimos
algunos de los aminoácidos
presentes en ellas por medio de
las reacciones que ocurrieron
en cada caso de acuerdo al
 radical o al grupo
caracteriza al aminoácido.
● Por medio de la mancha
analítica identificamos, que la
muestra en su composición
contiene albúminas.
que ● Técnicas cromatográficas
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/a
rchivero/M.Cromatogrficos_6700.p
df
● Guia laboratorio de bioquímica.
Luz Dary Caicedo.

● Identificamos estructuralmente
diferentes aminoácidos
RESPUESTA DE PREGUNTAS DE LA
presentes en determinadas
GUIA
proteínas o en su defecto como
aminoácidos libres. 1. En qué consisten las manchas
observadas?

R//: Las manchas observadas son de

● Para la reacción de acuerdo al aminoácido que fue
ninhidrina, observamos que hidrolizado.En estas manchas se
dio positivo para la muestra pueden identificar los aminoácidos por
problema, la metionina. En el tinción.
caso de la albúmina sólo se
notó una leve coloración. 2. Qué explicaciones pueden darse a
Pero ello denota la las diferencias de migración
observadas?
presencia de aminoácidos.
R//: Los factores que influyen en la
separacion por cromatografia son
la polaridad, la mayor o menor
velocidad de desplazamiento a lo
BIBLIOGRAFÍA largo de la columna depende
directamente de la estructura de
❏ Murray, R. et al.2013. Harper
cada molécula así como de los
Bioquímica Ilustrada. 29ª edición.
grupos funcionales que pueda
Editorial McGraw-
poseer .El motivo principal es su
Hill. Págs: 17
diferencia en la polaridad,
● Garritz, A, Gasque, L. & Martínez, moléculas más polares quedan
A.. 2005. Química Universitaria. 1ª mas retenidas en la fase
Edición. estacionaria es decir “ corren
Editorial Pearson. México. Pág: 138. menos”,mientras que las moléculas
más polares se ven menos
● Stryer, L. 1975. Bioquímica. retenidas y avanzan a mayor
Editorial Reverté. Venezuela. Pág:
velocidad arrastradas por el
14
eluyente.
3. para cada uno de los casos Esta prueba es positiva tanto para
explique los fundamentos químicos proteínas como para aminoácidos. En
de las reacciones vistas y escriba aquellos casos donde no da positiva la
las ecuaciones correspondientes. prueba de Biuret​, da positiva la de
ninhidrina, e indica que no hay
La reacción xantoproteica observamos proteínas pero sí hay aminoácidos
resultados positivos para el libres.de un ph 4 y 8.
triptófano, albúmina y el fenol, debido
a sus anillos fenólicos, los cuales por
la nitración del anillo bencénico
presente en los residuos de
aminoácidos y la albúmina se
obtienen nitrocompuestos de color
amarillo. Los anillos Benceno del
Triptófano están activados y
reaccionan fácilmente, mientras que el
benceno de la Fenilalanina no tiene
sustituyentes que lo activan y no
reacciona o reacciona con más
dificultad.

La ninhidrina es un poderoso agente

reactivo común para visualizar las
bandas de separación de ​aminoácidos
por ​cromatografía o electroforesis​,
también es utilizada con fines
cuantitativos para la determinación de
aminoácidos​ Reacciona con todos los
aminoácidos alfa cuyo ​pH se
encuentra entre 4 y 8, dando una
coloración que varía de azul a violeta
intenso. Este producto colorido
(llamado púrpura de Ruhemann) se
estabiliza por resonancia, la coloración
producida por la ninhidrina es
independiente de la coloración original
del aminoácido.