LP.

13 - 14: IDENTIFICAREA STREPTOCOCILOR ALFA-HEMOLITICI

IDENTIFICAREA PNEUMOCOCILOR ŞI ENTEROCOCILOR.
EXAMENUL BACTERIOLOGIC AL SPUTEI ÎN INFECŢII CU
MICROORGANISME OPORTUNISTE.

Obiective: La sfârşitul lucrării practice studenţii vor fi capabili să:

1. descrie etapele de identificare a pneumococilor;
2. descrie etapele de identificare a enterococilor;
3. descrie condiţia microbiologică a etajului infraglotic al căilor respiratorii;
4. enumere cei mai frecvenţi agenţi etiologici ai pneumoniei lobare acute;
5. enumere produsele patologice recoltate în infecţiile tractului respirator inferior;
6. prezinte etapele examenului bacteriologic al unei probe de spută şi să aprecieze
semnificaţia clinică a pneumococului izolat din spută.

1. Identificarea Streptococcus pneumoniae (pneumococ)

1. Caractere microscopice: diplococi gram pozitivi ovali/lanceolaţi, cu axul
longitudinal în prelungire, capsulaţi
2. Caractere de cultivare: pretenţioşi nutritiv, facultativ anaerobi, carboxifili, α-
hemolitici, cu autoliză centrală (colonii crateriforme)

http://microbe-canvas.com/Bacteria/gram-positive-cocci/streptococci/catalase-negative/alpha-
hemolysis/cells-in-pairs-or-chains/vancomycin-susceptible-1/streptococcus-pneumoniae.html

3. Testul de sensibilitate la optochin (sensibili=pneumococi; rezistenţi=streptococii

viridans, streptococii de grup D, enterococii)

https://www.studyblue.com/notes/note/n/bio205-biochemical-test-pics/deck/7295333

4. Testul de bilioliză (coloniile solubile în bilă=pneumococi)

5. Test de patogenitate pentru şoarece (pozitiv)
6. Identificare antigenică (latex aglutinare pentru evidenţierea antigenului capsular)

1
2. Identificarea enterococilor
1. Caractere microscopice: coci sferici/ovali, gram pozitivi, în perechi/scurte lanţuri
2. Caractere de cultivare: puţin exigenţi nutritiv, facultativ anaerobi, α/
β/nehemolitici, cresc la pH de 9,6 şi la temperaturi între 10-45°C, cresc în bulion
cu 6,5% NaCl, cresc în prezenţa a 40% bilă şi hidrolizează esculina (test bilă-
esculină)
3. Rezistenţi la optochin

3. Condiţia microbiologică a etajului infraglotic al căilor respiratorii: practic steril.

Infecţiile tractusului respirator inferior interesează:
 traheea şi bronşiile: traheobronşite, bronşite;
 parenchimul pulmonar: bronşiolite, pneumonii lobare acute, bronhopneumonii,
pneumonii interstiţiale, abcese.

4. Principalii agenţi etiologici ai pneumoniilor lobare acute:

 Streptococcus pneumoniae

2
 - Haemophilus influenzae
- Moraxella catarrhalis
- Bacili Gram negativi

5. Produse patologice:
a) Probe contaminate pe traiectul de eliminare: sputa; aspirat
hipofaringian; lichid de spălătură bronho-alveolară;
b) Probe necontaminate (şuntează contaminarea orofaringiană): aspirat
bronho-alveolar pe cateter protejat (prin bronhoscopie); aspirat
transtraheal.
Alte produse patologice: aspirat pleural, sânge (hemoculturi), urină (detecţia
antigenului capsular al pneumococului).

3
 SPUTA este recoltată după toaleta cavităţii bucale, prin tuse spontană, profundă şi
supravegheată. Probele de spută, prelevate într-un recipient steril, cu gura largă şi capac
ermetic, sunt expediate imediat laboratorului pentru a fi examinate în cel mult o oră de la
prelevare. Este interzisă refrigerarea probelor.

6. Examenul bacteriologic al sputei în infecţii cu microorganisme oportuniste

 Examen macroscopic:
- probele cu aspect spumos, apoase sunt calitativ necorespunzatoare sunt respinse de
la examinarea microbiologică.
 Decontaminarea probei de spută:
- fragmente mucopurulente - spălare în 3 băi succesive de ser
fiziologic steril
 Examen microscopic al frotiului colorat Gram.
a. cu mărire 100 X – triaj citologic de calitate:

Număr celule/câmp Calificative pentru Calificative pentru

(media pe 5-10 câmpuri) CI CES
1-9 0 0
10-24 +1 -1
≥ 25 +2 -2

Scorul de calitate Q = suma algebrică a calificativelor pentru CI şi CES la care se

adaugă calificativul + 1 pentru prezenţa fibrinei
 Q ≥ 1→ produs cu scor de calitate corespunzător (permite diagnosticul
prezumtiv rapid al agentului etiologic)
 Q < 1→ produs cu scor de calitate necorespunzător
b. cu mărire 1000X - numai pentru produsele cu scor Q ≥ 1 :
i. se urmăresc câmpuri la distanţă de cel puţin 3 diametre de CES,
ii. ≥ 10 bacterii din aceeaşi categorie microscopică asociate cu ≥ 3 CI
/câmp ►criteriul asociaţiei semnificative a bacteriilor cu celule
inflamatorii;
iii. ≥ 10 bacterii din aceeaşi categorie microscopică / câmp semnifică ≥
106 bacterii/ml probă ( corespunzător concentraţiei din focarul de
infecţie) ► criteriul cantitativ.

http://www.creeaza.com/familie/medicina/FAMILIA-Streptococcaceae629.php

 Cultivarea probelor
- izolare semicantitativă pe agar-sânge cu striu de S. aureus (satelitism H. influenzae)
- au semnificaţie clinică izolatele predominante şi în cantitate mare (ajung până în
cadranul 3/4).
  Identificarea bacteriei cu semnificaţie clinică (vezi schema de identificare a
streptococilor α-hemolitici)
 Antibiograma
- testare difuzimetrică pe agar Mueller-Hinton cu 5% sânge de berbec a
sensibilităţii pneumococului faţă de: Penicilină (utilizăm disc de Oxacilină de 1 μg),
aminopeniciline (Amoxicilină), cefalosporine de generaţia a-II-a (Cefuroxima) şi a-III-a
(Ceftriaxona, Cefotaxima), macrolide (Eritromicină), carbapeneme, fluorochinolone
(Levofloxacin), Cloramfenicol, trimetoprim-sulfametoxazol, glicopeptide
(Vancomicină).
- Pentru tulpinile de pneumococ cu rezistenţă la Penicilină se determină CMI
pentru a stabili nivelul de rezistenţă: - rezistenţă joasă: tratament cu doze mari de
Penicilină
- rezistenţă înaltă: exclude Penicilina şi tratamentul include
cefalosporine de generaţia a-II-a sau a-III-a, carbapeneme, macrolide sau glicopeptide.

SCHEMA DE IDENTIFICARE A STREPTOCOCILOR ALFA-HEMOLITICI

Streptococ α-hemolitic

Testul bilă – esculină Optochin

(+) (-) Sensibil Rezistent

Enterococi,
Streptococi grup D streptococi viridans, pneumococ streptococi viridans,
pneumococ streptococi grup D,
enterococi
test de bilioliză
Bulion sare (6,5%) identificare antigenică

Prezenţa creşterii absenţa creşterii

Enterococi streptococi grup D

În sală se găsesc:
1. Cultura pneumococ pe geloză sânge
2. Testul catalazei: apa oxigenată, lame, beţişoare, pipetă
3. Testul de sensibilitate la Optochin.
4. Frotiuri de spută colorate Gram
5. Frotiuri de cultură colorate Gram
6. Antibiograme difuzimetrice pentru pneumococ
7. E-test la Penicilină pentru pneumococ