ALGORITMUL

DIAGNOSTICULUI
IN VIROZE
 Etapele diagnosticului
virusologic

n Orientarea diagnosticului (suspiciunea

de viroză)
n Recoltarea produsului patologic
n Transportul produselor patologice
n Direcţiile diagnosticului virusologic
 Etapele diagnosticului
virusologic

n Orientarea diagnosticului
n Recoltarea produsului patologic
n Transportul produselor patologice
n Direcţiile diagnosticului virusologic
 Formular de trimitere pentru diagnostic
virusologic
Adresa spitalului/policlinicii/
cabinetului ce trimite produsul
patologic
Nume, prenume pacient
Date clinice, suspiciune
diagnostic
Tipul produs patologic
Tipul tratamentului administrat
in prealabil
Analiza solicitata
Semnatura, parafa medicului
Medicul caruia i se va
comunica rezultatul (tel, fax, e-
mail)
Sex, Varsta
Data debutului
simptomatolgiei
Data, ora recoltarii
Date epidemiologice (contact
cu boli infectioase
transmisibile, vectori, calatorii
in zone endemice pt o anumita
boala, vaccinari)
V. Varicela - Zoster
 Etapele diagnosticului
virusologic

n Suspiciunea de viroză
n Recoltarea produsului
patologic
n Transportul produselor patologice
n Direcţiile diagnosticului virusologic
Recoltarea probelor
- locul & timpul potrivit

POLIO (enterovirusuri)
RECOLTAREA PRODUSELOR PATOLOGICE

S T E R I L !!!
Conteinere sterile pentru recoltarea si transportul
produselor patologice
RECOLTAREA PRODUSELOR PATOLOGICE
STERIL!!!
Recoltarea produselor patologice
 PRODUSE PATOLOGICE
n Sânge - 3-5 ml prin punctia venoasa aseptica, pe anticoagulant.
Virusuri frecvent izolate: virusuri care disemineaza viremic si agentii etiologici ai
febrelor hemoragice.
n Materiile fecale - 4-8 g in solutie de Mg SO4 (stabilizeaza infectivitatea
enterovirusurilor).
Virusuri frecvent izolate: enterovirusuri, rotavirusuri, calicivirusuri, mai rar
adenovirusuri enterice.
n Secretii nazo faringiene
a) spalatura nazo faringiana se obtine cu ajutorul unor tampoane cu
coada (sterile) introduse in cornetul nazal inferior.
b) aspiratul nazofaringian se obtine folosind un speculum nazal prin
administrarea a 3 ml ser fiziologic in nari cu o seringa atasata la un tub de
plastic.
c) lavaj traheobronsic se obtine prin bronhoscopie in conditii speciale
de catre personal calificat
Virusuri frecvent izolate: virusurile gripale A si B, virusurile paragripale,
adenovirusuri, rhinovirusuri, coronavirusuri, virusul respirator sincitial,
v.rujeolos, v. rubeolos, v. urlian.
n Lichid cefalorahidian (LCR) - 5-6 ml prin punctie rahidiana, inainte de
inceperea tratamentului.
Virusuri frecvent izolate: virusul rabic, unele arbovirusuri.
PRODUSE PATOLOGICE
n Saliva. Se recolteaza saliva de langa ductul Stenon cu tampon steril.
Frecvent este limitata la diagnosticul infectiei rabice.
n Lichid vezicular - Colectarea lichidului din vezicule, bule, pustule se face
dupa dezinfectia prealabila a regiunii cutanate sau mucoase. Se perforeaza
vezicula cu un ac atasat la o seringa de tuberculina sau cu ajutorul unei
pipete.
Virusuri frecvent izolate: HSV I, HSV II si VZV.
n Urina -100 ml - orice specimen urinar obtinut prin abstinenta de la mictiune
timp de 2 ore este adecvat pentru diagnosticul virusologic.
Virusuri frecvent izolate. V. citomegalic, v. rujeolos.
n Tampoane vaginale, lavaj cervico-vaginal, tampon uretral de la nivelul
colului uterin si uretrei (atat la femeie cat si la barbat); cu tampoane sterile,
respectiv periuta citologica (pentru uretra masculina), fara toaleta prealabila
a regiunii.
Virusuri frecvent izolate: virusuri herpetice si papilomavirusuri; diagnostic
BTS, uretritelor, leziunilor veziculare si hiperplazice genitale.
n Biopsia tisulara. Fragmente de organ recoltate în câtiva ml de solutie
salina + ser de vitel 10% + antibiotice în concentratiile folosite în culturile de
celule.
 Etapele diagnosticului
virusologic

n Suspiciunea de viroză
n Recoltarea produsului patologic

nTransportul produselor
patologice
n Direcţiile diagnosticului virusologic
Transportul probelor recoltate
nRapid

nLa rece
nSigur
¨ ambalare riguros corecta
¨ etichetarea cu semn biorisc
¨ documentatie in legatura cu
agentul biologic transportat
 Etapele diagnosticului
virusologic

n Suspiciunea de viroză
n Recoltarea produsului patologic
n Transportul produselor patologice

nDirecţiile diagnosticului
virusologic
 DIRECŢIILE DIAGNOSTICULUI
VIRUSOLOGIC
1. Izolarea virală

2. Demonstrarea prezenţei
virusului / componentelor sale

3. Diagnosticul serologic
Izolarea
virusurilor
Izolarea virusurilor
3 sisteme de izolare folosite în virusologie

n Culturi de celule
n Ou de găină embrionat
n Animalul de laborator
Izolarea virusurilor
in culturi de celule
 Izolarea pe culturi de celule

Neinfectate = EFECTE CITOPATICE

Infectate cu v. variolic

HEK 293 HeLa BSC-40

 Izolarea virala prin inoculare pe OGE

Pocks-uri pe Membrana Chorio-alantoindiana OGE - v. variolic

 DIRECŢIILE DIAGNOSTICULUI
VIRUSOLOGIC
1. Izolarea virală

2. Demonstrarea prezenţei
virusului / componentelor sale

3. Diagnosticul serologic
Detectia directa
a particulei
virale
Microscopia electronica
n Coloratia negativa
¨ acetat de uranil
¨ acid fosfotungstic
n Metode care cresc sensibilitatea
(106-108 particule/ml)
n Metode de concentrare:
¨ ultracentrifugare
¨ difuzia in agar
¨ centrifugare directa pe grila de ME
 Microscopie electronica
Coloratie negativa

vaccinia

variola
Detectia directa a
componentelor
virale
Acid nucleic
Antigene virale
 Detectia directa a acidului
nucleic viral - PCR
ADN polimeraza

Thermocycler
Detectia directa a antigenelor
virale – ELISA (test imuno-enzimatic)
Detectia directa a antigenelor virale
– reactia de imunofluorescenta (IF)
(test rapid de detectie a Ag)
 DIRECŢIILE DIAGNOSTICULUI
VIRUSOLOGIC
1. Izolarea virală

2. Demonstrarea prezenţei
virusului / componentelor sale

3. Diagnosticul serologic
Diagnosticul serologic in infectiile virale

Raspuns
imun
Raspuns
secundar
imun
primar
Diagnosticul serologic
n pe probă unică de ser - anticorpi antivirali de
tip IgM (răspunsul imun primar) - ELISA de
captură
n pe probe pereche de ser
- proba I - la debut
- proba II - la 2-3 săptămâni
ELISA tehnica indirectă sau de competiţie

¨ seroconversia
n In proba I nu există anticorpi
n In proba II apar anticorpi specifici virusului de detectat
¨ creşterea semnificativă a titrului de anticorpi între
cele 2 probe (de minim 4 ori)