Aislar friedelin del corcho y reducirlo a friedelinol y epifriedelinol.

Un proyecto que involucra espectrometría de RMN y modelado

molecular

Joseph W. Lefevre,* Kristin I. McNeill, and Janet L. Moore

Chemistry department, State University of New York (SUNY) at Oswego, Oswego,
NY 13126; *lefevre@oswego.edu

El aislamiento de productos naturales 3. Reducción de friedelin a una

continúa siendo ampliamente mezcla de alcoholes
utilizado en el laboratorio de química diastereoméricos usando NaBH4 o
orgánica de pregrado. Numerosos Na metal.
artículos en esta Revista han cubierto 4. Análisis de las mezclas de
el aislamiento de una amplia variedad productos usando espectrometría H
de estructuras orgánicas (1-38). Los NMR y modelado molecular.
ejemplos populares son trans-anetol
(1-3) y cafeína (14-16). Sin embargo,
con la excepción del colesterol (17,
20), un triterpeno modificado, ningún
experimento de laboratorio reportado
en este Journal se ha referido a la
química de los triterpenos, una gran
clase de productos naturales.

El proyecto

Friedelin, un triterpeno pentacíclico,

se aisló por primera vez del corcho en
1807 (39). Desde entonces se ha
aislado de plantas numerosas (40).
Se ha presentado un experimento
que involucra el aislamiento de
friedelin del corcho utilizando una
serie de recristalizaciones (41), al
igual que la reducción de friedelin
(42). Desarrollamos un extenso
proyecto para las especialidades de
química en nuestro Laboratorio de
Química Avanzada que se dividió en
cuatro sesiones de 3 horas:
1. Aislamiento de friedelin crudo a
partir de un acetato de etilo (EtOAc)
extracto de corcho molido.
2. Friedelin purificante usando
cromatografía flash
Figura 1. Esquema de purificación
para friedelin.
Utilizando modelos generados por
computadora 3-D, los estudiantes
determinaron tres ángulos diedros
asociados con el protón CHOH de los
alcoholes friedelinol y epifriedelinol,
que a su vez se usaron para calcular
las constantes de acoplamiento
vecinal correspondientes (valores J)
utilizando una ecuación Karplus
modificada (43) . Finalmente, estos /
valores se compararon con los reales
adquiridos del espectro de RMN.
El proyecto brinda a los estudiantes
una valiosa experiencia en las
técnicas importantes de
cromatografía de capa fina (TLC),
cromatografía instantánea,
espectrometría de RMN y modelado
molecular. El modelado molecular
combinado con RMN se ha
convertido en una herramienta
importante en el laboratorio de
pregrado (44). Este proyecto puede
usarse en un laboratorio orgánico de
segundo semestre o en un laboratorio
avanzado que incorpore productos
químicos naturales. También es ideal
para un proyecto abierto de
investigación de alto nivel para
estudiantes de química, ya que los
compuestos relacionados también se
pueden aislar durante la
cromatografía instantánea.
Resultados y discusión
Aislamiento de Friedelin crudo
Durante el primer período de
laboratorio, el corcho de laboratorio
molido se calentó a reflujo en EtOAc.
Durante el período de reflujo, se
realizó una TLC en una muestra
comercial de friedelin para determinar
el disolvente correcto para la
separación por cromatografía
ultrarrápida (45) que se realizará la
semana siguiente. Las manchas se
visualizaron con reactivo de
pulverización de vainillina. Al final del
período de reflujo, el corcho se
eliminó por filtración. La evaporación
lenta del filtrado produjo cristales
brutos de friedelin.
Depurar friedelin
En el segundo período, la friedelina
bruta se purificó por cromatografía
ultrarrápida, usando TLC para
controlar las fracciones. El esquema
de purificación se describe en la
Figura 1.
Reducción de Friedelin
Durante la tercera semana, los
estudiantes trabajaron en parejas. Un
estudiante redujo 40 mg de friedelin
usando NaBH4 mientras que el otro
usó Na metal. Las reacciones se
controlaron mediante TLC. La
reacción de NaBH4 fue muy limpia,
produciendo un rendimiento del 80-
90% de los alcoholes en 10 minutos.
La reacción de Na metal fue más
lenta, produciendo un rendimiento del
70-80% de producto crudo en 70
minutos. Una discusión de los
resultados estereoquímicos de
reducciones de NaBH4 y Na metal
cyclohexanones se incluye en el
folleto del estudiante. Las reacciones
se muestran en la Figura 2. En
general, las reducciones de NaBH4
de ciclohexanonas sin impedimento
se producen principalmente por
ataque axial de hidruro, produciendo
el alcohol ecuatorial. Este resultado
está dramáticamente alterado, sin
embargo, por la presencia de un
sustituyente axial en la posición C-3 o
C-5 (46). Por lo tanto, reducción de
NaBH4 de friedelin, con un axial
grupo metilo en C-3, produce
principalmente el alcohol axial,
epifriedelinol. Las reducciones de
ciclohexanonas usando Na metal en
disolventes alcohólicos producen el
alcohol ecuatorial más estable (47)
independientemente del patrón de
sustitución (48). Por lo tanto, la
reducción de friedelin con Na metal
produce principalmente el alcohol
ecuatorial, friedelinol.

Análisis de las mezclas de productos
En el período final de laboratorio, los
productos de cada reacción se
analizaron por espectrometría de H
NMR. La región de 3,25 a 3,75 ppm
se expandió y la señal CHOH (Ha) de
cada diastereómero se integró. Los
resultados se muestran en la Figura
3. Para ayudar a los estudiantes en
sus asignaciones máximas, se
incluyeron discusiones detalladas del
patrón de división del protón
correspondiente (H) en los
compuestos del modelo más simple
mentol y neomentol en el folleto del
alumno. Los estudiantes aplicaron
estos argumentos para identificar
friedelinol y epifriedelinol. Como es
evidente por la comparación de las
Figuras 3 y 4, el patrón de división de
Ha de friedelinol coincide con el de
mentol, mientras que H, de
epifriedelinol coincide con el de
neomenthol. Estas comparaciones
directas son posibles porque los
patrones de sustitución son similares
y cada una de las cuatro moléculas
existe en esencialmente una
conformación. Por lo tanto, las
divisiones para los protones Ha son
predecibles. El protón axial, Ha, de
friedelinol está dividido por los
protones trans-diaxiales H, y He en
un triplete (J-10.3 Hz). El protón
ecuatorial, Hd, con un ángulo diedro
de 57 ° con respecto a Ha, divide
cada línea del triplete en doblete (J-
4,8 Hz), produciendo un doblete de
tripletes. El ancho de la señal
completa es de 25 Hz. El protón
ecuatorial, H, del epifriedelinol está
dividido por los protones axiales Hb y
He y el protón ecuatorial Hd. Dado
que los tres ángulos diedros están
próximos a 60 °, los valores / son
pequeños (2-3 Hz). Un resultado de
multiplete ampliado, con un ancho de
solo 8 Hz. Por lo tanto, los patrones
de división y los anchos relativos de
las señales para Ha se usaron para
identificar los productos. Los
estudiantes también usaron los
cambios químicos relativos de H,
como confirmación adicional. En
general, el protón ecuatorial resuena
a un valor de ppm más alto que el
protón axial (49). Por lo tanto, H de
epifriedelinol y friedelinol resuena a
3.71 y 3.32 ppm, respectivamente.
Finalmente, los estudiantes
calcularon tres valores J para
friedelinol y epifriedelinol usando una
modificación Ecuación de Karplus (eq
1), que tiene en cuenta el átomo de
oxígeno altamente electronegativo
(43).
3
JH-H = A cos2 w – B cos w + i[D+E
cos2(+F |i|)](1)
donde A- 13.7, B-0.73, D-0.56, E-2.47 y F-
16.99).
Los primeros dos términos A y B son
términos de Karplus. El parámetro x,
explica la diferencia en
electronegatividad entre el i-ésimo
sustituyente y el hidrógeno. Para el
oxígeno, xi 1.24. El término E es +1 o
-1 dependiendo del ángulo diedro, o.
Para determinar los ángulos diedros,
los estudiantes construyeron cada
alcohol en Chem Window e
importaron cada estructura en
SymApps. Un modelo 3-D fue
generado por SymApps utilizando
una modificación de campo de fuerza
MM2 modificada. Los estudiantes
localizaron los ángulos diedros
correctos y, usando la ecuación 1,
calcularon los valores / valores
pertinentes. Como es evidente en la
Tabla 1, los valores calculados están
en excelente acuerdo con los reales.
Los programas alternativos de
modelado molecular como Chem3D,
PCModel, CAChe o HyperNMR
también se pueden usar para
determinar los ángulos diedros.
determinados a partir de SymApps y
vieron que estos valores se
comparaban favorablemente con los
reales.

El proyecto fue exitoso en numerosos

aspectos. Primero, los resultados
fueron reproducibles. Los Peligros
rendimientos de friedelin puro El diclorometano y el metanol son
promediaron 85 mg y los tóxicos e irritantes. y el hexano y el
rendimientos brutos para las acetato de etilo son inflamables e
reducciones de NaBH4 y metal Na irritantes. La inhalación de estos
promediaron 85% y 74%, solventes debe evitarse, al igual que
respectivamente. el contacto entre los ojos, la piel y la
segundo, en comparación con el ropa. El reactivo de pulverización TLC
mentol y el neomentol, los contiene ácido sulfúrico concentrado,
estudiantes identificaron que es tóxico y causa quemaduras
correctamente los productos graves. Los estudiantes deben usar
principales y secundarios de cada guantes y gafas protectoras, y las
reacción. En tercer lugar, los placas TLC se deben rociar solo en
estudiantes determinaron el pariente una campana de ventilación bien
de los productos a partir de los ventilada para evitar inhalar los
espectros de RMN y vieron que los vapores. Se debe tener cuidado al
resultados estereoquímicos de las reducir friedelin. Las reacciones
dos reacciones eran muy diferentes. deben realizarse en una campana de
Las cantidades relativas promedio de humos y los estudiantes deben usar
friedelinol y epifriedelinol fueron 8.6% guantes, gafas y batas de laboratorio.
y 91.4%, respectivamente, en la El borohidruro sódico es
reducción de NaBH4 y 92.6% y 7.4% relativamente seguro de usar, pero es
respectivamente, en la reducción de inflamable y corrosivo y reacciona
Na metal (Fig. 3). Finalmente, los con soluciones ácidas para formar
estudiantes calcularon los valores J a hidrógeno gaseoso altamente
partir de los ángulos diedros inflamable. El tetrahidrofurano es
altamente inflamable e irritante para
los ojos y el sistema respiratorio, y
puede formar peróxidos explosivos.
El alcohol isopropílico es altamente
inflamable. El sodio del metal es
corrosivo y reacciona violentamente
con agua para formar gas de
hidrógeno. Se debe manipular con
pinzas y exponer al aire al mínimo a
la hora de pesar las esferas. Las
esferas de metal de sodio se deben
agregar lentamente a la solución a
reflujo de alcohol isopropílico y
tetrahidrofurano. Una solución de
reflujo necesaria para disolver la
friedelin. No encontramos problemas
con la reducción de metal de sodio
usando estas condiciones y en Aldrich Chemical Co., P.O. Box
precauciones.
Agradecimientos
Agradecemos a los estudiantes de
SUNY Oswego en Advanced
Chemistry Laboratory por su diligente
trabajo en este proyecto.
Agradecemos a la National Science
Foundation (NSF) por su continuo
apoyo a los laboratorios orientados a
proyectos en SUNY swego.
Específicamente, reconocemos el
Programa de Instrumentación y
Mejora de Laboratorio (ILI) de NSF
para proporcionar financiación parcial
(subvención n.º 228-0388A) para la
compra de un espectrómetro de RMN
Varian INOVA de 300 MHz.
Agradecemos a Larry Fuller por la
obtención de una licencia de red para
el uso de SymApps y Chem Window
adquiridas a través de una
subvención del programa SUNY
Oswego Student Computer Access.
Finalmente, agradecemos a SUNY
Oswego por proporcionar fondos
equivalentes para el espectrómetro
de RMN y por el continuo apoyo de
nuestro programa de Química.
Material complementario
Los materiales complementarios
disponibles en este número de JCE
en línea son un folleto detallado para
el alumno y Notas para el instructor,
que contienen comentarios sobre el
experimento, listas de equipos y
reactivos, y respuestas a las
preguntas en el folleto del alumno.
Notas
1. La friedelina bruta está disponible
2060, Milwaukee, WI 53201.
2. El protón -OH de friedelinol y
epifriedelinol no causó división
adicional en ninguna de las muestras.
Sin embargo, el protón-OH de mentol
puede acoplarse al protón CHOH, lo
que complica el partidn de división.
Para eliminar este acoplamiento
residual, se agitaron pocos
miligramos de resina Dowex en forma
de H con la muestra en el tubo de
RMN antes de adquirir el espectro.
3. Chem Window y SymApps, Bio-
Rad Laboratories, Sadtler Division,
3316 Spring Garden Street, Filadelfia,
PA 19104.