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Actividades

y datos para uso de simulador

Fotometría UV-VIS

Introducción
La fotometría UV-Visible como técnica instrumental basa su principio en la medición de la
transmitancia (T) o absorbancia (A) de soluciones con compuestos que absorben radiación
en la región ultarvioleta visible que están en celdas transparentes que tienen una longitud
de trayectoria en cm. [1]. El instrumento de medición es el Espectrofotómetro UV-Visible.

La técnica constituye una de las herramientas más útiles
con las que cuenta el científico para el análisis
cuantitativo. Entre las características importantes de los
métodos espectrofotométricos y fotométricos están 1)
gran aplicabilidad tanto para sistemas orgánicos como
inorgánicos, 2) buena exactitud (por lo regular, se
encuentran incertidumbres relativas de 1 a 3%, 3)
adquisición de datos fácil y adecuada, entre otras [1].

Figura 1. Espectrofotómetro UV-Vis [2]

Principio de medición
Consultar y analizar el principio del método fotometría UV-VIS, la correspondiente ecuación
(ley de Beer-Lambert) así como las variables que influyen en la medición de la absorbancia
de las especies absorbentes.

Obtención de un espectro de un compuesto.


Mediante la herramienta simulador de espectrofotómetro uv:
https://www.liceoagb.es/quimiorg/spec203.html,
Identificar la longitud de onda para la que se produce el máximo de absorbancia.

Escoger alguno de los dos compuestos.
El barrido espectral se inicia desde la mayor longitud de onda (750 nm) hasta la menor
longitud de onda (350 nm) leyendo cada 20 nm en general, pero cada 10 nm entre el dato
anterior y el posterior a aquel en que haya observado un máximo de absorción.

Imagen de herramienta simulador de
espectrofotómetro UV

a. Registrar captura de pantalla del
resultado,
b. Elaborar en excel el gráfico del
correspondiente espectro, comparar
resultados con información de la
literatura. ¿coincide con la λmax de la
literatura?
VI IBEROLAB

Duymovich, C., Acheme, R;


Espectrofotómetros y fotocolorím
Tabla 4. Cálculos y evaluación de resultados de verificación Acta Bioquímica Clínica Latinoa
c. Utilizar ecuaciones para considerar si el instrumento es aceptable/óptimo [3]:
de espectrofotómetros. Herington ERG (1977) Recomm
realisation of physicochemic
Parámetros Cálculos Resultados wavelength. Pure and Applied C
Exactitud de Aceptable: Herman, L. (2004) Perform
la longitud E = λm- λref UV ± 1 nm spectrophotometers. Analytical
de onda Vis ± 3 nm performance verification. (Ed.)
X.M.Zang. John Wiley&Son
Exactitud %Error = Am – Aref 100 Error entre ± 2% Optima USA.Capítulo 10,153-172.
fotométrica Aref Error entre ± 3% Aceptable IRAM 301/ISO 17025 (2005) Req
Precisión CV% = SD .100 CV%<0,5% optima de los laboratorios de ensayo y ca
d. Según el rango espectral
fotométrica del instrumento,
x se trata de un espectrofotómetro
CV%< 1% aceptable UV o UV-
Manual de Uso Metrolab 330. Esp
Visible, justificar. Graficar Am vs Aref. Metrolab.
Calcular con una Manual de Uso Metrolab Plus 160
Linealidad r ≥0,999 Aceptable Marca Metrolab.
regresión lineal el
fotométrica Mavrodineanu R, Baldwin JR (
Elaboración de curva de calibración a la λmax
coeficiente de regresión
standard reference material for s
(r).
Mediante la herramienta simulador de espectrofotómetro uv: Special Publication 260–68 , NIS
Luz difusa o
https://www.liceoagb.es/quimiorg/spec203.html, T<0,01 ó A >2 Varcoe J.S. (2001) Clinical
parásita
instrumentation. A Practical Cou
Hacer curva de calibración a la λmax.
E = exactitud; m= longitud de onda medida; ref = longitud de onda de Co.Pte. Ltd. Capítulo 1, 1-63.
referencia; Am = Absorbancia medida; Aref = Absorbancia de referencia;
CV% = coeficiente de varianza; SD = desvío estándar; x = media de los
Cambiar a modo Molarity (molaridad) (asumir la celda de la muestra a 1cm),
datos; T = tramitancia; A = absorbancia.
a. Demostrar gráficamente que la absorbancia varia linealmente con la concentración (al
menos 6 concentraciones diferentes),
b. Registrar captura de pantalla de un resultado.
7. Conclusiones
c. El gráfico debe contener el título y los títulos de los ejes con las unidades de medida
correspondientes,
En la bibliografía consultada, la mayoría de las
d. Calcular e identificar ecuación de la recta, coeficiente de determinación y la
verificaciones se realizan en el rango del espectro UV (200 -
sensibilidad, 400 nm), ésto se debe a que la información disponible está
orientada a la verificación de espectrofotómetros destinados
e. ¿Si una solución problema da una absorbancia por fuera de la curva, que se debe hacer
al análisis de muestras farmacéuticas y bioquímicas.
para entrarla al rango de absorbancia de los patrones?.
También esto influye sobre los valores de aceptabilidad de
los resultados obtenidos para los equipos. La región del
Preguntas para resolver
espectro utilizada en la mayoría de los análisis químicos de
1. Es necesario no tocar la cubeta en los lados que cruzan el camino óptico y limpiar
muestras de suelo y agua para uso agropecuario, es la región
suavemente todos los lados con papel sin pelusa. ¿Por qué?
del Vis (400 - 800 nm), por lo que es necesario proponer
2. Aunque la cafeína absorbe la luz, es incolora. ¿Por qué?
soluciones de referencia, que puedan preparse en el
Referencias laboratorio, y demostrar, además, que las mismas pueden
ser utilizadas para evaluar en éste rango del espectro.
1. Skoog, D. A., Holler, F. J., & Nieman, T. A. (2001). Principios de Analisis Intrumental.
Quinta Asimismo
Edición. debería evaluarse
McGraw - laHill
posibilidad de modificar los de España.
/ Interamericana
rangos de aceptabilidad de los
https://doi.org/10.1017/CBO9781107415324.004 parámetros propuestos. Esto
se debe a que, al tratarse de muestras para uso agropecuario,
2. Espectrofotómetro 4255. Disponible en:
tal vez pueda permitirse una mayor flexibilidad en los
http://www.ictsl.net/productos/01d63694a80f7db0d/0000009b4c0ac8a2e.html
valores aceptados para los espectrofotómetros utilizados en
3. M.P., A.,
éstaN.S., K., M., O., & D., C. (2012). Guia para la verification de
disciplina.
espectrofotometros UV-VISIBLE utilizados en el analisis de suelo y agua. VI
IBEROLAB, pp. 1–4.
BIBLIOGRAFIA
ASTG-4 (2005) Technical guide: UV/Vis Spectrophotometers - Calibration

Procedures. International Accreditation New Zealand (IANZ).
http://www.ianz.govt.nz/publications2/pdfs/ASTG4_UV-
VIS_Spectro.pdf
Blázquez, J. (2005) Calibración de espectrofotómetros para la medida
directa de absorbancias. III Congreso Virtual Iberoamericano. Gestión de
Calidad en Laboratorios.
http://www.iberolab.org/opencms/opencms/congreso/IberolabIII2005/ind
ex.html
Burke, R.W. y Mavrodineanu, R. (1977) Certification and use of acidic

Contenido de reporte

Nombre y código de los estudiantes
Asignatura y código
Nombre de docente

Principio del método de medición correspondiente y herramienta utilizada,
Resultados, gráficos y cálculos correspondientes,
Capturas de pantalla correspondientes,
Respuestas a las preguntas,
Análisis de resultados,
Conclusiones generales,
Referencias,
Tipo paper!!.

Fecha de entrega: mayo 27 10:00 am.