METODO DE REDUCCION DEL AZUL DE METILENO

DISCUSIÓN:
Los estudios comparativos de Resazurina y Azul de Metileno como indicadores
de la calidad bacteriológica han sido material de estudio por diferentes
investigadores. Se ha encontrado que el test de Resazurina en “una hora” es
me nos confiable que el test de Azul de Metileno en leche que contiene gran
número de microorganismos, ya que existe dificultad para distinguir matices de
coloración de la resazurina durante el periodo de reducción. Por consiguiente,
se ha tomado como referencia el tiempo de reducción de la Resazurina en la
coloración rosa; Johns y Howson establecen que existe una muy buena
correlación entre los tiempos de reducción para Resazurina y Azul de Metileno,
la proporción es de 3 a 4. Consecuentemente el test de Resazurina, usando el
color rosa como punto final puede ser considerado tan preciso como el test de
Azul de Metileno como indicador del contenido bacterial de la leche. Además, el
tiempo de reducción de la Resazurina es menor que el del Azul de Metileno.
Según Barrett y Keenan, el uso de la Resazurina da más información de la
calidad de la leche que cualquier otro indicador químico por presentar una
escala de coloración. El propósito del trabajo de los autores fue presentar datos
que indicaran, que el test de Resazurina cuenta con una propiedad adicional
como indicador de calidad por encima del Azul de Metileno que está
relacionado con sus coloraciones.

OBJETIVOS:
 Que el alumno determine la presencia de microorganismos en leche de
vaca, mediante el tiempo de reducción del azul de metileno.
 Verificar la actividad de una enzima de óxido de reducción.
 Estimar el numero de microorganismos presentes en un alimento
mediante la prueba de la reductasa.
RESULTADOS:

En esta imagen se observa el

color que se torna la leche de
vaca al mezclar la leche de vaca
con el azul de metileno para la
prueba de actividad de una
enzima de óxido de reducción.

En la siguiente imagen de pude

observar que la leche no se decolora
lo cual quiere decir que esta en un
buen estado en caso la leche se
hubiera decolorado significaría que
esta en mal estados y hay presencia
de microorganismos.
 Aquí podemos observar la prueba de
determinación de carbohidratos
mediante el Lugol.
Las muestras de leche que tienen un
color blanco es porque no hay
presencia de carbohidratos, pero en
la que torna color negro es por que se
agregó harina para que el Lugol
pueda reaccionar y determine la
presencia de carbohidratos

CONCLUCIONES:
 A lo largo de este objeto de aprendizaje se ha descrito el método para la
realización de la prueba de la decoloración del colorante azul de metileno o
prueba de la reductasa bacteriana. Esta prueba resulta muy útil a la hora en la
industria láctea puesto que la velocidad a la que se produce el cambio de color
del indicador azul de metileno es directamente proporcional al número de
gérmenes presentes. De esta manera se puede determinar de manera indirecta
la calidad higiénica de la leche.
También se concluyo que gracias al lugol se puede determinar la presencia de
carbohidratos en la leche ala misma vez se determino los rangos de la acidez
de la leche.

CUESTIONARIO
1. ¿Qué es el potencial redox?
El potencial redox es una forma de medir la energía química de
oxidación reducción mediante un electrodo, convirtiéndola en energía
eléctrica. El potencial redox es positivo cuando se produce una
oxidación y negativo cuando se produce una reducción. Normalmente,
las reacciones redox vienen acompañadas de cambios de pH en el
medio.
2. ¿Qué correlación existe entre el número de microorganismos en
una muestra alimenticia y el tiempo de reducción del azul de
metileno?
El principio de la prueba de reducción con azul de metileno se basa en
que el potencial de óxido reducción (Eh) de la leche fresca aireada es de
+0.35 a +0.40 voltios, el cual se debe principalmente al contenido de O2
disuelto en el producto. Si por cualquier causa ese O2 es separado, el
Eh disminuye. Esto ocurre cuando los microorganismos crecen en la
leche y consumen el O2. Si el número de microorganismos es muy
elevado, el consumo de O2 será mayor y por consiguiente el Eh caerá
rápidamente; si por el contrario, el número de microorganismos es
pequeño, el Eh disminuirá lentamente.
3. ¿Una muestra de carne tendrá los mismos valores de Eh en toda su
masa?
Una muestra de carne no tiene igual Eh en toda su masa ya que esta
puede tener particularidades donde se centre mayor cantidad de
microorganismos, es decir que existen partes de la masa cárnica que
puedes estar más afectadas que las otras.
4. Señale dos muestras alimenticias en las que se pueda aplicar la
prueba de reductasa:
Puede ser usado para otros alimentos como por ejemplo jugos de frutas
y variedades, en los que se encuentran los jugos de soya, piña y otros,
sobre todo alimentos líquidos en los que también se podría observar el
viraje de color del azul de metileno u otro colorante a usar.
5. ¿Qué razones hacen difícil la determinación de Eh en alimentos?
Debe tenerse en cuenta que existen factores que pueden afectar el
tiempo de reducción, entre ellos el tipo de microorganismo, el número de
leucocitos, el periodo de exposición a la luz, la cantidad de O2 disuelto y
la tendencia de la leche a elevar los microorganismos hacia la superficie
a medida que se va separando la crema en el tubo de prueba. Es así
como ciertos microorganismos (Lactococcus lactis) son más activos en
su capacidad reductora que otros, mientras que existen algunas
especies que son muy poco activas en este sentido (Estreptococos
agalactia, Bacillus subtilis, microorganismos termodúricos). Por otra
parte, a medida que aumenta el número de leucocitos en la leche y su
exposición a la luz natural o artificial, el tiempo de reducción tiende a
reducirse, mientras que la agitación y la tendencia de la crema a
ascender (arrastrando los microorganismos) son factores que tienden a
retardar el tiempo de reducción.