UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

Universidad del Perú. DECANA DE AMÉRICA

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
Departamento Académico de Microbiología y Parasitología Básica y
Aplicada

BIOTECNOLOGÍA
• Áreas de interés de la biotecnología
• Aplicaciones
• Microorganismos de interés biotecnológico,
aislamiento, identificación y conservación.

MSc. NELSON BAUTISTA CRUZ

Junio, 2020
 BIOTECNOLOGÍA
• Conjunto de técnicas aplicadas a la obtención de productos
mediante la actividad metabólica de organismos vivos.

• Cualquier aplicación tecnológica que utilice sistemas biológicos,

organismos vivos, o derivados de los mismos, para generar o
modificar productos o procesos para un uso específico.

• Utilización de microorganismos o partes del organismo (células,

enzimas, genes, proteínas, glúcidos…) para la obtención de un
proceso, producto o un servicio.
 ÁREAS DE INTERÉS DE LA BIOTECNOLOGÍA

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 APLICACIONES DE LA BIOTECNOLOGÍA
Obtención de productos
• Producción de biomasa microbiana
• Producción de sustancias químicas como
ácido cítrico, ácido glutámico, aminoácidos,
etc.
• Producción enzimática de sustancias químicas
especiales, como determinados isómeros
ópticos, etc.
• Producción microbiana o enzimática de
antibióticos y vitaminas.
• Producción a gran escala de sustancias
químicas, como etanol, butanol, acetona,
ácido acético, etc.
• Producción de antígenos, anticuerpos,
agentes terapéuticos y de diagnóstico
• Productos para la agricultura y la ganadería.
• Productos para la industria alimentaria.
• Tecnologías más limpias o menos
contaminantes
 ACPLICACIONES DE LA BIOTECNOLOGÍA
Biosensores
PROCESOS
• Ingeniería genética
• Cultivo de células vegetales y proteínas
unicelulares
• Fermentaciones industriales
• Biocatálisis
• Bioremediación
• Ingeniería de procesos

Fotobiorreactores

Tratamiento de aguas Fermentaciones industriales

residuales
 HISTORIA DE LA BIOTECNOLOGÍA
Biotecnología antigua
• Cuando se iniciaron con cultivo plantas (10,000 años a.c)o crianza de animales, a elaborar cerveza o vino
o a producir queso, se estaban aplicando los principios de la biotecnología.

• El término biotecnología, fue planteado por Karl Ereky en 1919 para describir la interacción entre
biología y tecnología.
Hitos relevantes de procesos biotecnológicos:

• Bebidas alcohólicas
• Elaboración de cerveza (3000 a. C.)
• Elaboración de pan (3000 a. C.),
• Elaboración de vinagre (s. XIV),
• Descripción de las células de levaduras por
Leeuwenhoek (1689),
• Descubrimiento de las propiedades fermentativas de
las levaduras por parte de Erxleben (1818).
 HISTORIA DE LA BIOTECNOLOGÍA

Biotecnología moderna

• Fusiona los procesos y métodos biológicos

antiguos y modernos con las técnicas de la
ingeniería química y electrónica.
• Fusiona la microbiología, genética, biología
molecular, bioquímica con la ingeniería de
procesos
• Se inicia con la producción a escala industrial
de la penicilina (1994).
• Mas tarde se inició la producción de enzimas:
la primera aplicación fue la obtención de
edulcorantes y el empleo de lipasa y
proteasa en los detergentes.
• Luego se obtuvieron enzimas específicas por
manipulación genética, con esto se inicia la
segunda generación de la biotecnología
moderna.
 HISTORIA DE LA BIOTECNOLOGÍA

Biotecnología contemporánea
▪ La biotecnología empieza considerarse como ciencia moderna con el avance de la biología
molecular y la genética en los años ’70
▪ Estos avances desembocaron en las técnicas de clonación y ADN recombinante
▪ Abarca un amplio campo de productos y servicios apoyados en los avances de las técnicas de la
ingeniería genética.
▪ En 1982 se produce el primer producto recombinantes: la insulina humana
▪ En el 1990 se inicia el proyecto Genoma Humano
▪ Actualmente existe empresas de biotecnología dedicadas a las técnicas del ADN recombinante.

Tecnologías en la biotecnología contemporánea

• ADN recombinante (ingeniería genética)
• Cultivo de tejidos vegetales
• Cultivo de células de mamífero
• Biocatalizadores
• Tratamiento y reutilización de productos residuales
por métodos biotecnológicos (biorremediación)
• Fermentaciones
• Obtención biotecnológica de combustibles y materia
prima Orgánica como alternativa al petróleo
• Ingeniería de procesos biotecnológicos.
 MICROORGANISMOS DE INTERÉS BIOTECNOLÓGICO
Incluye microrganismo que pueden ser utilizados en las diferentes
áreas de la biotecnología, tales como: hongos, bacterias y virus
Tiene la capacidad:
• De producir compuestos químicos para usos en humano o animales
• De ser usado como suplemento nutricional
• De producir transformación materias primas
• De depuración de contaminantes del agua, suelos y el aire
• De ser usado como hospedador de genes
• De ser usado como fábricas celulares
 MICROORGANISMOS PRODUCTORES DE ANTIBIÓTICOS

Antibiótico Organismo productor Organismos blanco Sitio o modo de acción

Penicilina Penicilliumchrysogenum(H) Bacterias Gram + Síntesis de la pared

Cefalosporina Cephalosporiumacremonium (H) Bacterias Gram + y - Síntesis de la pared
Bacitracina Bacillus subtilis(B) Bacterias Gram + Síntesis de la pared
Polimixina B Bacillus polymyxa (B) Bacterias Gram + Membrana celular
Anfotericina B Streptomyces nodosus (B) Hongos Membrana celular
Eritromicina Streptomyces erythreus (B) Bacterias Gram + Síntesis proteica
Neomicina Streptomyces fradiae (B) Bacterias Gram + y - Síntesis proteica
Streptomycin Streptomyces griseus (B) Bacterias Gram - Síntesis proteica
Tetraciclina Streptomyces rimosus (B) Bacterias Gram + y - Síntesis proteica
Vancomicina Streptomyces orientalis (B) Bacterias Gram + Síntesis proteica
Gentamicina Micromonospora purpurea (B) Bacterias Gram + y - Síntesis proteica

Rifampicina Streptomyces mediterranei(B) M. tuberculosis Síntesis proteica

Griseofulvina Penicillium griseofulvum (H) Hongos dermatófitos Microtúbulos

 MICROORGANISMOS DE INTERÉS BIOTECNOLÓGICO

• Sacharomyces cerevisiae: enzimas de uso alimentario,

reactivos y para limpieza
• Lactobacillus: producción de ácido láctico, antibióticos
• Lactococcus: antibióticos
• Streptococcus: ácido láctico
• Bididobacterium: transformación de productos
• Leuconostoc: alcohol, ácido láctico
• Escherichia coli: enzimas, Ag, Interferones, hormonas
• Bacillus thuringiensis: biofertilizantes
• Spirulina y el hongo Fusarium: proteínas para piensos
• Alcaligenes eutrophus: plásticos biodegradables
• Acidithiobacillus ferrooxidans: obtención de metales
PRODUCTOS BIOTECNOLÓGICOS
PRODUCTOS BIOTECNOLÓGICOS
 PRODUCTOS BIOTECNOLÓGICOS
USO TERAPÉUTICO
METABOLITOS PRIMARIOS

y hongos filamentosos
METABOLITOS SECUNDARIOS
 AISLAMIENTO, IDENTIFICACIÓN DE CEPAS
NATIVAS

Recolección de fuentes
de cepas

Aislamiento de las cepas

https://biotrendies.com/verduras/alcachofa
Identificación
genotípica

Conservación de cepas

Crioconservación Liofilización

https://superstarfloraluk.com/1560075-Lactobacillus-Microscope.html
 Recolección de fuentes naturales y aislamiento

• Se define la partes de las fuentes

naturales
Recolección de fuentes • Vegetal: hojas, frutos, tallos,
naturales fluorescencias
• Heces humanas y de animales

• Crecimiento en caldo o sustrato natural

Aislamiento de cepas • Subcultivo por agotamiento en agar
• Cultivos aislados puros

• Tinción Gram
• Morfología celular
• Prueba de catalasa
• Prueba de oxidasa
Conservación a
-80ºC
 Identificación genotípica de cepas aisladas

Extracción de ADN FastDNA® KIT

Mezcla de componentes de
reacción de amplificación
https://www.mpbio.com/product.p
hp?pid=116540400&country=223
.
Cebador Secuencia
94 ºC x 10 min, seguido por 30 ciclos de 94
27 F 5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’ PCR de 16S rDNA ºC x 45 seg, 55 ºC x 30 seg, 72 ºC x 45 seg
y finalmente 72 ºC x 10 min
1492 R 5'- TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3’

Revelado con bromuro de etidio 0,4

μg/mL en un tampón Tris Borato EDTA a
Electroforesis en gel de
pH 8 durante 2 h a 80 V agarosa 1.5%

Kit de purificación de banda de gel

GFX PCR DNA Purificación de ADN

Secuenciador de ADN ABI 3130 (Applied

Biosystems)
Secuenciación de los
amplicones

BLAST (NCBI) Análisis de las secuencias Identificación Homología

de especie ≥ 97%
seqMatch - RDP-II en las bases de datos
 CONSERVACIÓN DE LAS CEPAS

En la actualidad existe dos tecnologías de conservación para

largo plazo:
• Crioconservación: congelamiento a < -80ºC
• Liofilización
CRIOCONSERVACIÓN
✓ Congelación bajas temperaturas
✓ Detiene el metabolismo de los microorganismos
✓ Se utilizan crioprotectores que reducen el daño
✓ La temperatura oscila de -70 a -139 °C
Objetivos
• Mantener de la viabilidad
• Mantener la estabilidad genotípica y fenotípica
• Mantener la pureza de la cepa
 CRIOPROTECTORES

✓ Son sustancias que minimizan el daño durante la congelación

✓ Limitan la formación de hielo
✓ No son tóxicas para el microorganismo
✓ Tiene la capacidad de penetrar fácilmente la membrana celular y se unen
a los electrolitos o al agua.
Los mas usados son:
• Glicerol
• Sacarosa
• Lactosa
• Glucosa
• Ácido glutámico
REQUISITOS PARA LA CRIOCONSERVACIÓN
✓ Deben ser cultivos jóvenes
✓ La concentración final del número de células de 2 a 6 x 106
ufc/ml
✓ Uso de los crioprotectores a concentración óptima
✓ Distribución rápida en los crioviales
✓ Disminución rápida de temperatura
 LIOFILIZACIÓN
• Método de conservación de las cepas que consiste en la
deshidratación a muy bajas temperaturas aplicando el vacío.
• Es el método más utilizado por las colecciones internacionales de
cultivos tipo para la conservación de los microorganismos.
• Se obtienen utilizando los liofilizadores
REQUISISTOS
✓ Deben ser cultivos jóvenes
✓ Las células deben ser suspendidas en los crioprotectores
✓ La concentración final del número de células > a 107 ufc/ml

VENTAJAS
✓ Mayor tiempo de conservación (años)
✓ Fácil manipulación
✓ Fácil transporte
✓ Relativamente menor costo
✓ Fácil de dosificación de las cepas