27/03/2020

Sânge și produse din sânge

cu rol terapeutic

https://www.dreamstime.com/royalty-free-stock-image-dna-blood-cells-digital-illustration-colour-
background-image37761976

Sângele – componente

1
 27/03/2020

Funcțiile componentelor sanguine

https://www.slideshare.net/bijay19/blood-blood-transfusion-and-blood-products

Produse din sânge utilizate ca biofarmaceutice

➢ Sânge total
➢ Concentrat eritrocitar (masă eritrocitară)
➢ Concentrat trombocitar (masă trombocitară)
➢ Concentrat granulocitar
➢ Plasmă și fracțiuni proteice din plasmă – albumină, imunoglobuline
➢ Factori de coagulare (fibrinogen, factori VIIa, VIII, IX și XIII)

https://www.slideserve.com/rendor/blood-components-and-plasma-
derivatives

2
 27/03/2020

• Scurt istoric al utilizării produselor din sânge:

1901- Karl Landsteiner – sistemul de grupe ABO - fundamentul științific al transfuziilor
Anii 1920 – dezvoltarea de sisteme anticoagulante pentru stocarea sângelui donat
Anii 1950 – utilizarea pe scară largă a sistemelor de plastic pentru colectarea și
separarea aseptică a componentelor de sânge
• Dezavantaj major al utilizării sângelui și produselor din sânge:
- Risc de transmitere accidentală a unor agenți patogeni (virusuri hepatice B,C,
HIV, Citomegalovirus - CMV, Treponema pallidum, protozoare – Plasmodium
falciparum)
• Orice donator de sânge trebuie mai întâi testat pentru:
• Antigenul pentru hepatită B - hepatitis B surface antigen (HBsAg)
• Anticorpi anti-HIV
• Anticorpi anti-virus hepatic C (HCV)
• Anticorpi anti-sifilis
!!! Aplicarea riguroasă a regulilor de bună practică de fabricație (good
manufacturing practice - GMP) presupune:
• screening atent al tuturor donatorilor de sânge/donărilor
• eliminarea/inactivarea agenților patogeni în etapele procesării prin metode
specifice (încălzirea sau tratamentul chimic nu sunt posibile în mod obișnuit)
• produsele fracționate sunt mai sigure (precipitare, purificare cromatografică utile la
separarea patogenilor de produsul final)
• screening atent al tuturor produselor finale
5

Sânge total unitate adult

• Sânge venos, de origine umană, recoltat aseptic pe soluție anticoagulantă

sterilă, apirogenă (heparină, acid citric dextroză – ACD, citrat fosfat dextroză
adenină - CPDA-1), fără conservanți (circa 63 mL)
• Lichid de culoare rosu închis care după un timp de repaus sau centrifugare se
separă în sediment de globule roșii și supernatant-plasma, între care poate
apărea o peliculă fină alb gălbuie - strat leuco-plachetar
• Volumul unei unități adult ≈ 400+/-10% mL + volum anticoagulant - max.450 ml
• Stocat în spații frigorifice, la 2–8oC, termen valabilitate scurt (48 h – heparină,
21 zile – ACD, până la 35 zile – CPDA-1)
• Temperatura de transport – max.+10oC
• ! Screening pentru agenți patogeni, grupă sanguină ABO și Rh
➢ Recomandat ca:
• Terapie de substituție – leziuni cu pierderi de sânge, chirurgie, oncologie
• Terapie suplimentară (factori de coagulare, Ig, plachete, hematii) – rar

3
 27/03/2020

• Procesarea sângelui total

https://professionaleducation.blood.ca/en/transfusion

Concentrat eritrocitar standard

(masă eritrocitară)

• Sediment eritrocitar (și stratul său leuco-plachetar) de origine umană, de

culoare roșu închis, preparat aseptic după decantarea supernatantului plasmatic
obținut după centrifugarea unei unități adult de sânge total
• Recoltat în sistem de pungi închis, cu volum corespunzător de sol. anticoagulantă
și de conservare sterilă, apirogenă
• Volum minim - 150 mL, inclusiv cantit. reziduală de soluție anticoagulantă și de
conservare (citrat dextroză adenină)
• Conținut minim de hemoglobină – 45 g Hb/unitate, hematocrit 60-80%
➢ Valabilitate – stocare la 2-8oC – echivalent cu proba de sânge total originală
- congelat la -65oC – 3 ani
- după deschiderea pungii – 24 ore
➢ Recomandat pentru:
• Terapie de substituție la pacienți cu anemie severă (Hb<7-8g/dL)

4
 27/03/2020

Concentrat trombocitar standard

(masă trombocitară)

• Trombocite (plachete) dintr-o singură unitate adult de sânge integral

resuspendate în 40-60 ml de plasmă din același sânge
• Obținere în sistem de pungi închis, steril, apirogen - culoare gălbuie, aspect
turbid la agitare ușoară
• Centrifugări seriate la 18-24oC, perioadă finală de repaus cel puțin o oră
• Conservat între +20 și +24oC pe dispozitiv cu agitare lentă, continuă
• Conține cel puțin 5.5x1010 plachete/unitate
• Termen de valabilitate – folosit în maxim 72 h de la colectarea sângelui
• Eliminate pungile cu turbiditate și culoare alterate, ce prezintă coaguli
➢ Recomandat ca:
• Profilactic/ terapeutic
• Pentru a preveni/minimiza trombocitopenia (de ex. hemoragii)

https://elentra.healthsci.queensu.ca/assets/modules/clerk_bloodtrans_draft/plat
elet_concentrate.html

Concentrat granulocitar unitar

• Concentrat obținut de la un singur donor prin centrifugare diferențială sau prin
leucafereză utilizând un separator de celule
• Afereza (H. Cullis, 1072) – tehnică extracorporală în care sângele donorului este
trecut printr-un aparat care separă - prin centrifugare, absorbție selectivă sau
filtrare - un anumit component, restul întorcându-se în circulația donorului
• Tipuri de afereză:
• Plasmafereză
• Leucafereză – separare PMN, bazofile, eozinofile
• Eritrocitafereză
• Trombocitafereză
• Colectare de celule stem

Fig. Sângele intră în

centrifugă, separare în
componente – plasmă,
leucocite, hematii – care pot
fi colectate separat
https://cdn.ymaws.com/www.apheresis.org/resource/collection
https://www.canventa.com/donation-types/
https://en.wikipedia.org/

10

5
 27/03/2020

• Utilizat rar – infecțiile sunt controlate cu antibiotice

- concentratul de la un singur donor are
insuficiente celule și poate fi contaminat cu hematii

• Donorul poate fi stimulat medicamentos pentru creșterea nr. de granulocite

• Recoltat aseptic în recipient autorizat, steril, apirogen
• Suspensie celulară în lichid fără semne vizibile de hemoliză, culoare alb-gălbuie
• Conține 1-2x1010 granulocite/unitate
• Volum – 200-500 mL, inclusiv cantit. reziduală de soluție anticoagulantă și de
conservare, de agentul de sedimentare a hematiilor introdus
• Trebuie să fie compatibilitate de grup sanguin acceptor - donor
• Termen de valabilitate - se depozitează la 4o C, însă
granulocitele trebuie transfuzate în 8h, cel mult în 24h
➢ Recomandat pentru:
• Pacienți cu cancer – recoltare de la membrii familiei
• Hipoplazie mieloidă
• Pacienți cu neutropenie severă - <500/mL
• Pacienți cu febră 24-48 h, cu infecții bacteriene
sau fungice care nu răspund la terapia cu antibiotice

https://www.physiciansplasma.com/leukapheresis-guide-ebook/leukapheresis-machine/

11

Plasmă proaspătă congelată

• Există mai multe produse tip plasmă care se pot obține:
- plasmă proaspătă congelată
- plasmă congelată
- crioprecipitat
- plasma stocată
• Plasma proaspăt congelată - obținută aseptic dintr-o singură unitate de sânge
adult total după centrifugare și îndepărtarea eritrocitelor sau prin separare
directă (plasmafereză) în primele 6 ore de la recoltare
• Preparată în recipient autorizat, închis, steril, apirogen
• Sistemul de congelare să permită congelarea completă în maxim 6 ore de la
debut la temperatură - 30oC (pentru a conserva factorii de coagulare și alte
proteine plasmatice)
• Se ține în carantină până când donorul revine pentru donare și este testat din nou
pentru markeri ai unor boli infecțioase ce nu ar fi putut fi evidențiate inițial
• Volum minim - 150 mL și ține cont de cantit. reziduală de soluție anticoagulantă
și de conservare – se înscrie pe pungă
➢ Termen de valabilitate – stocare la - 30oC – 1 an
➢ Recomandată pentru:
• Corectarea deficiențelor în factori de coagulare
• Tratarea șocului volemic la pierderi de plasmă în caz de arsuri, sângerări masive
12

6
 27/03/2020

• Plasmă congelată - obținută aseptic dintr-o singură unitate de sânge adult total
după centrifugare și îndepărtarea eritrocitelor sau prin separare directă
(plasmafereză) în primele 24 ore de la recoltare
• Preparată în recipient autorizat, închis, steril, apirogen
• Conține cca 50% din factorii de coagulare labili (factorii V-proaccelerina și VIII)
• Se ține în carantină până când donorul revine pentru donare și este testat din
nou pentru markeri ai unor boli infecțioase ce nu ar fi putut fi evidențiate inițial
• Volum minim - 200 mL și ține cont de cantit. reziduală de soluție anticoagulantă
și de conservare – se înscrie pe pungă
➢ Termen de valabilitate – stocare la - 30oC – 1 an
➢ Recomandată pentru:
• Sursă adecvată pentru tratamentul deficiențelor moderate de factori coagulare
• Plasmă stocată - obținută aseptic, prin centrifugare și îndepărtarea eritrocitelor
dintr-o singură unitate de sânge adult total păstrat 24 ore la 4oC după recoltare
sau după crioprecipitare
• Preparată în recipient autorizat, închis, steril, apirogen
• Nivel scăzut al factorilor labili ai coagulării și fibrinogenului
➢ Recomandată pentru:
• Pacienții care necesită creșterea volumului plasmatic, substituire de proteine
dacă factorii de coagulare labili nu sunt necesari

13

• Crioprecipitat - obținut prin dezghețarea controlată la 4oC a plasmei congelate

• Este sursă de factor VIII (circa 2% mai mult), factor von Willebrand, fibrinogen,
factor XIII, fibronectină
• Supernatantul eliminat este plasmă stocată
➢ Termen de valabilitate – stocare la 4oC – 5 săptămâni
la - 30oC – 2 ani
➢ Recomandat pentru:
• Transfuzia de crioprecipitat este indicată pentru:
- hipofibrinogenemie/disfibrinogenemie
- boala von Willebrand
- hemofilia A
- deficiența de factor XIII
- managementul sângerărilor asociate terapiei trombolitice
• Crioprecipitatul nu trebuie folosit pentru a trata sepsisul, a prepara un sigilant
de fibrină (fibrin glue/fibrin sealant) - formulă chirurgicală (pe bază de
fibrinogen și trombină bovină) utilizată pentru a forma un cheag de fibrină ce
sigilează o leziune (hemostază, vindecare răni)

• Plasma poate fi procesată în produse stabile: albumină, Ig, factori de coagulare

(70% din factorii labili V-proaccelerina și VIII-factorul antihemofilic A și inhibitorii
naturali)
14

7
 27/03/2020

• Înlocuitori de sânge/plasmă
• Substanțe care pot înlocui sângele pentru a menține volumul sanguin
• Administrați i.v. pentru a menține volemia
• Expanderi cristaloizi – soluții apoase de săruri – ser fiziologic, Ringer,
dextroză
• Expanderi coloidali – molecule mari, insolubile
- dextrani
- gelatină
- derivați de amidon
- albumină
• Exercită o presiune osmotică similară celei a proteinelor plasmatice și
mențin volumul vascular și presiunea sanguină
• Inerți farmacodinamic, non-pirogenici, non-alergenici, non-antigenici
• Nu au capacitatea de a transporta gazele respiratorii
➢ Recomandări de administrare
• După hemoragii, arderi, sepsis, șoc

Advantaje – efect prelungit comparativ cu cei cristaloizi

Dezavantaje – cost ridicat, totuși risc pentru reacții de hipersensibilitate

15

• Dextrani
• Polizaharide – monomeri de D-glucoză uniți prin
leg. α-1,6 și α-1,3 glicozidice
• Produși natural de microorganisme variate

➢ Preparate comerciale
• Lactobacteriaceae (Leuconostoc mesenteroides)
• Variate preparate de dextrani care diferă prin
Mr și gradul de ramificare
• Mr variate (1, 40, 60, 70, 110 kDa)
• Obținere – prin depolimerizarea moleculelor
native sau sinteză directă

16

8
 27/03/2020

➢ Recomandări:
Soluția 6% de dextrani cu Mr mare (70, 75, 100 kDa) sau 10% de
dextran cu Mr 40 kDa – presiune osmotică similară proteinelor
plasmatice
• Expansiunea de scurtă durată a volumului plasmatic,
prevenirea/tratarea șocului datorat hemoragiei
• Inhibarea agregării hematiilor
• Prevenirea/tratarea tulburărilor tromboembolice postoperatorii
• Îmbunătățirea fluxului sanguin

! Risc de - șoc anafilactic sever

- insuficiență renală acută (dextranii 40 și 70)

17

Produse derivate din plasmă

Produs derivat Preparat disponibil

Albumină Albumină
Fracțiune proteică
plasmatică
Factori de coagulare Factor VIII concentrat
Factor IX concentrat
Antitrombină III
Imunoglobuline Ser imun nespecific
Rh globulină
Hepatită B globulină
Varicella-Zoster globulină
Globulină anti-tetanos

18

9
 27/03/2020

Fracțiuni majore obținute la procesarea plasmei

1940 – ”Cohn fractionation process” – crioprecipitare, modificare pH, concentrație etanol

și temperatură pentru a separa facțiunile I-V
Perfecționare ulterioară – separare factori de coagulare, i.v. Ig, antitrombină III, albumină

https://marketingresearchbureau.com/plasma-industry/history-of-plasma-fractionation/

19

• Albumina
• Cea mai abundentă proteină din plasmă ≈ 4.5g/L
• Sintetizată și secretată de ficat
• Conține 585 aa, Mr 65.5 kDa, neglicozilată, 17 punți disulfurice
• Rol de a menține preseiunea osmotică și de transport al unor componente
variate (acizi grași liberi, ioni, bilirubină, medicamente)
➢ Recomandată pentru:
• Terapie pentru înlocuirea volumului
• Expansiunea volumului plasmei în caz de hemoragie, șoc, arsuri, edeme
edema
• Terapie pe termen scurt la pacienții cu hipoproteinemie
• Ca soluție apoasă, conentrată (15–25%) sau izotonică (4–5% ), cu
stabilizator (caprilat de sodiu), fără conservanți

20

10
 27/03/2020

➢ Metode de obținere:
• Fracționarea plasmei/serului normal
• Purificare din placentă
✓ Screening-ul sursei pentru agenți patogeni
✓ Purificare, stabilizare (cu caprilat de sodiu) și sterilizare prin filtrare
✓ Introducere aseptică în containere sterile
✓ Tratament la temperatură 60oC, 10 h - (↓ ag. patogeni viabili)
✓ Incubare la 30–32oC timp de 14 zile, examinare pentru semne de creștere
microbiană
• Tehnologia ADN recombinant
✓ Gena HSA și ADNc exprimate în diferite
sisteme procariote (E. coli, B. subtilis,
S. cerevisiae)
✓ Dezavantaje – molecula mare
nr. mare de punți disulfurice (17)
rHSA are cost ridicat

21

Medicamente biologice pentru hemostază

HEMOSTAZA – oprirea rapidă a sângerării după o leziune vasculară
❑ Agregarea și aglutinarea plachetelor sanguine la locul lezării vasculare →
”infundarea”locului de pierdere de sânge
❑ Constricția locală a vasului →↓curgerea vasculară în aria respectivă
❑ Inducerea cascadei de coagulare
Fibrinogen (solubil) → monomeri de fibrină insolubili → agregare → formarea
cheagului (tromb) care sigilează zona lezată

22

11
 27/03/2020

Cascada coagulării

23

24

12
 27/03/2020

Tulburări de coagulare
• Hemofilii – defecte genetice – pierderea expresiei/secvență alterată a unui
factor de coagulare
• Asociate deficienței factorilor VIII sau IX
❶ Hemofilia A – hemofilia clasică, hemofilie
• Tulburare recesivă X-linkată, consecința unor niveluri reduse/ absenței
complete a complexului factorului VIII (lipsa producției de factor VIIIc)
Boala von Willebrand – lipsa ambelor componente ale complexului VIII matur

Factorul VIII matur funcțional – complex între factorul VIIIc (heterodimer) și

copiile factorului von Willebrand (vWF) care stabilizează factorul VIII față de
proteoliză și permite asocierea cu plachetele la locul lezării vasculare

25

Tratamentul hemofiliei A
➢ Factor VIII nativ purificat obținut de
la donatori
• Cromatografie de afinitate cu
anticorpi monoclonali anti factor VIII
• Produsul final este filtrat steril, umplut în recipiente
care sunt sigilate și liofilizate
• Stocare de scurtă durată la < 8oC
Dezavantaje
• Contaminarea produsului cu anticorpul monoclonal
• Eluarea de pe coloana de imunoafinitate poate determina denaturare
• Posibilitatea transmiterii de agenți patogeni nu e eliminată complet
➢ Factor VIII obținut prin tehnologia ADN recombinant (rFVIII)
✓ Advate®, Recombinate® (Baxter Hyland) – în celule transfectate de ovar de
hamster (CHO – Chinese Hamster Ovary Cells)
✓ Refacto® (Wyeth) – în celule CHO transfectate
✓ Kogenate® (Bayer)– celule transfectate de rinichi de hamster (BHKC – BabyHamster
Kidney Cells)

26

13
 27/03/2020

❷Hemofilia B – boala Christmas – deficit de factor IX

Tratament
• Administrare i.v. a unui concentrat de factor IX
➢ Fractionarea sângelui uman - purificare prin cromatografie de imunoafinitate
cu anticorpi monoclonali murini anti-IX imobilizați
- parțial pur – produsul conține cantități reduse de factori II, VII , X – util
pentru tratarea defectelor de coagulare determinate de lipsa tuturor factorilor
➢ Factor IX recombinant (BeneFix®, Wyeth) – produs în linie de celule CHO

• Factor VIIa
• Folosit la pacienții cu hemofilie A și B care dezvoltă anticorpi față de factorii
VIII/IX
• Factorul VIIa poate activa etapele finale comune ale cascadei coagulării
independent de factorii VIII și IX
• Factor VII recombinant (NovoSeven®, Novo Nordisk) – exprimat în celule
BHKC a formă monocatenară care se activează spontan la factor VIIa în timpul
purificării

27

Anticoagulanți – medicamente biologice

• Folosiți pentru a trata defectele de coagulare care pot conduce formarea de

trombi (cheaguri de sânge în vase) care:
→ Obstrucționează transportul O2 la țesuturi → infarct miocardic, accident
vascular cerebral
→ Se pot detașa, circula prin sânge și bloca în alt vas obstrucționând circulația
sângelui (embolism)
• Administrați pacienților cu boală coronariană, după infarct/ accident
vascular pentru a preveni accidentul, episoadele recurente

28

14
 27/03/2020

Heparină

• glicosaminoglican puternic încărcat negativ

• component intracelular al mastocitelor (ficat, plămân, piele)
• anticoagulant natural – legare și activare antitrombina III→ inactivarea unor
factori de coagulare (IIa, Ixa, Xa, Xia, XIIa)
• eficientă, relativ ieftină
• original extrasă din ficat
• în prezent obținută din plămân bovin,
mucoasă gastrică porcină
• soluție 5000UI/mL i.v.
Dezavantaje
• Răspuns clinic nepredictibil - necesită
un cofactor și poate fi neutralizată de
factorul plachetar 4 și glicoproteina
bogată în histidină (produsă în ficat,
monocite, macrofage)
• Incapabilă să inhibe trombina legată de
fibrină

29

Hirudină

• anticoagulant din saliva de lipitoare Hirudo medicinalis

• Polipeptidă cu 65 aa, Mr 7000 Da, Tyr63 sulfatată
• Două domenii
- Domeniul N-terminal globular stabilizat prin 2 legături S-S
- Domeniul C-terminal elongat – conținut crescut de aa acizi
• Legare de trombină cu inactivarea acesteia

Avantaje terapeutice:
• Se leagă direct de trombină
• Nu necesită cofactor
• Risc mai scăzut de a induce
hemoragii accidentale
• Imunogen slab

30

15
 27/03/2020

Hirudina în terapie

• Material insuficient din surse naturale pentru a susține trialurile clinice

• Gena hirudinei a fost clonată (anii 1980) și exprimată în diferite sisteme de
recombinare genetică - E. coli, B. subtilis, S. cerevisiae
• Derivați de hirudină recombinantă (lepirudin) disponibili clinic:
➢ Lepirudin (Refludan, Mr = 6.98 kDa) – aprobat în 1997
• Inserția unei gene sintetice a hirudinei (cu o plasmidă) în tulpină de S.
cerevisiae și purificarea produsului prin tehnici de fracționare variate
• Pentru menținerea statusului anticoagulant, pentru a preveni
complicațiile potențiale – trombocitopenia heparin-indusă și/sau
embolismul asociat

➢ Bivalrudin (Angiomax, Mr = 2.18 kDa)

• Domeniu activ optimizat de 20 aa din secvența hirudinei
• Stabilitate crescută prin includerea unui D-aminoacid
• Pentru pacienți cu angină instabilă care necesită intervenție
coronariană percutanată

31

Antitrombină

• Cel mai abundent inhibitornatural al coagulării

• Inhibă trombina (factor IIa), factorii Ixa,Xa
• Se leagă direct de trombină – complex 1:1
• Glicoproteină monocatenară - 432 aa, Mr58 kDa, cu patru lanțuri
oligozaharidice
• Concentrația plasmatică - 150 mg/mL

➢ Deficiența genetică de AT – actvitate AT redusă/absentă în plasmă →

risc crescut de formare a unui cheg/ embol de sânge
➢ Deficiența dobândită – indusă de medicamente (heparină,
estrogeni), boli hepatice (↓ sinteza AT)

32

16
 27/03/2020

hAT recombinantă în terapie

• Primul medicament biologic din animale transgenice aprobat

• Glicoproteină, 432 aa, Mr≈57 kDa
• Produsă de capre transgenice prin tehnologia ADN recombinant -
expresia directă a AT în lapte
• Secvență identică cu a proteinei native
• Profil de glicozilare diferit → afinitate crescută pentru heparină

➢ Atryn (GTC Biotherapeutics, Inc., Framingham, MA)

Recomandată pentru:
• Prevenirea evenimentelor tromboembolice perioperator și
peripartum la pacienți cu deficit ereditar de AT

33

Agenți trombolitici – medicamente biologice

Fibrinoliza – scindarea enzimatică a cheagului de fibrină

• Plasmina – serin protează capabilă să degradeze fibrina polimerizată

• Intervin mai mulți factori în controlul acțiunii plasminei
– urokinaza, activatorul tisular al plasminogenului (tPA) – activează
- α2-inhibitorul plasminogenului (α2-PI) - inhibă

34

17
 27/03/2020

35

Activatorul tisular la plasminogenului (tPA), fibrinokinaza

• Cel mai important activator fiziologic al plasminogenului
• Serin protează cu 527 aa
• Sintetizat predominant de celulele endoteliale
• Se găsește în sânge sub două forme cu activitate fibrinolitică
✓ tip I tPA – polipeptid monocatenar
✓ tip II tPA – bicatenar, derivat proteolitic din tipul I, se asociază
predominant cheagului în timpul lizei

• Activează plasminogenul direct la

suprafața cheagului de fibrină:
- conține două situsuri în proximitate de
legare simultană a plasminogenului și tPA →
declanșare cascadă trombolitică la suprafața
cheagului

36

18
 27/03/2020

tPA în terapie
❑ tPA de primă generație
➢ Alteplaza (Activase, Genentech), aprobată în 1996
• Glicoproteină cu 527 aa purificată, din tehnologia ADNr
• Sintetizată cu un ADNc pentru tPA natural uman produs
într-o linie celulară de melanom uman
• Obținută prin inserarea genică a ADNc în celule CHO
care secretă apoi tPA identic celul uman în mediul de
cultură
Recomandată pentru:
✓ Managementul infarctului miocardic acut la adulți:
îmbunătățirea funcției ventriculare după IMA,
reducerea incidenței insuficienței cardiace
congestive și a mortalității post-IMA
✓ Managementul accidentului vascular ischemic:
îmbunătățirea recuperării neurologice și reducerea
incidenței de apariție a unor dizabilități
✓ Managementul embolismului pulmonar acut
✓ Tromboză venoasă profundă

37

❑ tPA produs prin inginerie genetică

• Profil terapeutic îmbunătățit: acțiune rapidă, timp de înjumătățire în plasmă
prelungit
➢ Reteplaza (Ecokinase, Retavase, Rapilysin)
• tPA neglicozilat, Mr 39.6 kDa, produs de E coli.
• Producere bazată pe generarea unei secvențe
nucleotidice sintetice codificatoare a unui tPA
mai scurt ce conține doar domeniile
responsabile de selectivitatea pentru fibrină
și activitatea catalitică
• Timp de înjumătățire crescut
• Difuzie în cheag mai bună, capacitate de
degradare crescută
➢ Tenecteplaza (TNKase)
• Glicoproteină r-tPA, 527 aa, produsă în celule
CHO cells
• Secvență diferă de a tPA nativ (6 aa diferiți)
• Timp de înjumătățire prelungit (15–19 min)
• Rezistență crescută la PAI-1 (inhibitor natural)

38

19
 27/03/2020

➢ Streptokinaza (Streptase)
• Proteină extracelulară bacteriană-tulpini de Streptococcus haemolyticus grupa C
• 1933 – demonstarea abilității SK de a induce liza cheagului de sânge
• Efect trombolitic – legare specifică și strânsă la plasminogen, inducerea unui
modificări conformaționale care îl face activ proteolitic → complexul
streptokinază–plasminogen catalizează conversia plasminogenului inactiv la
plasmina activă
Dezavantaje
✓ Proteină bacteriană antigenică → răspuns alergic (prurit până la șoc
anafilactic)
✓ Risc crescut de hemoragii
✓ Plasminogenul activat de SK poate liza fibrinogenul liber → scade nivelul
fibrinogenului și este compromisă capacitatea henostatică
✓ Nerecomandat pacienților cu tulburări de coagulare, risc de sângerare (ulcere)
Recomandată pentru:
✓ Agent trombolitic folosit frecvent pentru următ. tulburări tromboembolice:
- embolism pulmonar ce poate cauza insuficiență cardiacă acută și moarte subită
- tromboză venoasă profundă
- ocluzii arteriale
- infarct miocardic acut

39

➢ Urokinase-type plasminogen activator (uPA)

• Serin protează produsă de rinichi, identificată în plasmă și urină
• Aptă sa scindeze proteolitic plasminogenul la plasmină
• Au fost izolate două variante active ale enzimei - 54 kDa și 33 kDa
• Urokinaza se obține prin:
✓ Purificare directă din urină umană
✓ Tehnologia ADNr

Recomandată pentru:
✓ Agent trombolitic folosit frecvent pentru următ. tulburări tromboembolice:
- embolism pulmonar ce poate cauza insuficiență cardiacă acută și moarte subită
- tromboză venoasă profundă
- ocluzii arteriale
- infarct miocardic acut

Avantaj:
– originea umană → risc scăzut de reacții adverse imunologice

40

20