Sunteți pe pagina 1din 5

Culturi de celule

Prin definitie , o celulă este cea mai mică unitate a lumii vii care poate avea o
existenţă independentă şi, prin urmare, celulele pot fi cultivate în laborator (in
vitro), dacă li se asigură anumite condiţii. Celulele procariote sunt mai putin
pretentioase in cee ace priveste conditiile de mediu de aceea ele pot fi cultivate
cu usurinta .Cultivarea celulelor eucariote este mai complicată şi necesită un
anumit grad de expertiză.
Culturi primare şi culturi secundare
Culturile primare(primo-culturi) sunt realizate astfel :
• Se utilizează drept sursă ţesuturi provenite de la un organism viu.
• Acestea sunt disociate prin mijloace mecanice (triturare, omogenizare
mecanică realizată cu ajutorul unui aparat electric numit omogenizator) sau
enzimatice (tripsină, colagenază).
• Celulele astfel separate se vor inmulţi intr-un recipient de cultivare
• Când a fost ocupat tot spaţiul de cultură din recipientul respectiv, este
necesar să se
treacă la repicajul celulelor din cultura primară (transferul unor celule
pentru a iniţia o nouă
cultură), formându-se astfel o cultură secundară (sub-cultură, pasaj).
După 100 de repicaje (numite şi pasaje), intervine fenomenul de senescenţă
(îmbătrânire) iar celulele nu mai sunt utilizabile.
Identitatea celulelor cultivate şi speranţa lor de viaţă este influenţată nu
doar de
originea lor in vivo, ci şi de poziţia acestora în cadrul ţesutului respective:
• celulă stem- în condiţii adecvate, vor avea o durată de viaţă prelungită,
• celulă precursoare : o durată de viaţă mai limitată.
• celulă diferenţiată matură

Linii de cellule
O linie de celule reprezintă o populaţie de celule provenite dintr-o cultură primară
la prima
subcultură.
O linie de celule este finită dacă are o durată de viaţă limitată (finită) in vitro, sau
continuă, cu condiţia de a fi replicate regulat.
Celulele normale, non-hematopoietice, sunt dependente de ancoraj si
necesita sa se ataşeze la o suprafaţă (substrat) pentru a supravieţui. Pentru aceste
celule aderente (la substrat), repicajul necesită desprinderea lor de pe suport,
ceea ce se realizează cu ajutorul unei scurte incubări într-o soluţie de tripsină-
EDTA(o enzimă capabilă să degradeze proteinele responsabile de aderenţa pe
care celulele o manifestă între ele şi faţă de substrat).

Condiţii de cultură pentru celule


Supravietuirea si proliferarea celulelor in vitro depind de compoziţia mediului de
cultură, pH-ul acestuia, presiunea osmotică, volumul şi frecvenţa de reînnoire a
mediului. Celulele animale sunt cultivate în mediu lichid, sub o atmosferă umedă,
la 37 °C, sub o presiune parţială a CO 2 (în general 5%).
Mediul de cultură trebuie să furnizeze toţi nutrienţii esenţiali substraturile
metabolice. Acesta însă nu poate asigura viabilitatea celulelor pentru mai mult de
câteva ore, fiind necesară şi asigurarea unei surse de factori de creştere şi a altor
substanţe. Timp de zeci de ani, acestea au fost asigurate de serul fetal bovin.
In plus, pentru cresterea celulelor este necesară menţinerea pH-ului într-un
anumit interval cu ajutorul unor substanţe tampon, pentru a limita efectele
deşeurilor acide produse de celule.
Aplicaţii în domeniul farmaceutic ale culturilor de celule:
• evaluarea toxicităţii
• efectului farmacologic al anumitor medicamente
• obţinerea unor medicamente prin biotehnologii, în culturi de celule
transgenice.
1.Ce este o cultură de celule?
Este procesul prin care celulele sunt crescute in mod controlat, in general in
afara mediului lor natural.

2. La ce servesc culturile de celule?


Furnizeaza o metoda usoara dar costisitoare pentru cercetatari in diferite
domenii , de exemplu pentru a gasi tratamente pentru boli cum ar fi
cancerul de piele,. Se folosesc, de asemena pentru a studia fiziologia
normala si biochimia celulelor , efectele medicamentelor si al
componentelor toxice asupra celulelor, mutageneza si carcinogeneza.Se
mai folosesc pentru fabricarea la scala larga a vaccinurilor si a proteinelor
terapeutice .

3. Ce fel de celule se pot cultiva?


Se pot cultiva apropae toate tipurile de cellule. In functie de originea lor
exista 2 tipuri de culturi: Celule ce se cultiva imediat dupa colectarea lor
dintr-un organism viu se numesc culture primare . Culturile secundare sunt
cele care provin din culturile primare sau din linii de cellule.
De asemenea, putem gasi si cellule aderente sau non aderente, in functie
de nevoia lor de ancorare.

4. De ce este important procesul de adeziune celulară?


Adeziunea celulara este importanta pentru celulele aderente care trebuie
cultivate fiind ancorate pe un substrat solid sau semi-solid. Pentru aceste
cellule, adeziunea este cruciala pentru a supravietui, creste, inmultii si
diferentia.

5. Ce conţine mediul de cultură de bază?


O sursa de carbon, cum ar fi glucoza, vitamin, saruri anorganice si amino
acizii.

6. La ce se foloseşte mediul de cultură RPMI-1640?


Este folostii pentru suspensii de cellule cum ar fi limfocitele. Este
transparent pentru ca nu contine rosu de fenol.
7. Ce reprezintă DMEM?
Reprezinta unul dintre cele mai utilizate medii de cultura a celulelor
aderente. Pe lamga componentele sale de baza, el prezinta si rosu de fenol
ce functioneaza ca un indicator de Ph si protejeaza mediul de actiunea
daunatoare a luminii.

8. De ce se utilizează serul la cultivarea celulelor?


Serul este sursa primara a factorilor de crestere si de adeziune, a
hormonilor, lipidelor si mineralelor pentru culturile de cellule. Serul
regleaza permeabilitatea membrane si este un purtator de lipide , enzyme,
micronutrienti in cellule.

9. Care este rolul hotei?


Hota protejeaza mediul de lucru de praf si de alte elemente contaminante
mentinand un flux de aer constant , unidirectional si filtrat deasupra
suprafetei de lucru

10. Ce modificări se aduc suprafeţei de polistiren a vaselor de cultură


pentru celulele dependente de ancoraj?
Suprafata trebuie modificata chimic pentru a fruniza substratul( pentru
anumite linii de cellule este necesar un substrat special, cum ar fi Poly-D-
Lisina sau colagenul)

11. În ce condiţii se pot adăuga antibiotice la mediul de cultură?


Antibioticele se pot adauga doar in ultima instanta si pe termen scurt,
trebuie eliminate din cultura cat de repede posibil.

12. Ce reprezintă ATCC?


Este o institutie ce verifica liniile de cellule preparate in vitro, in Statele
Unite.

13. Care sunt cele trei modalităţi în care se poate face autentificarea
celulelor?

Analiza STR, analiza curbei de crestere a celulei si detectarea mycoplasmei.


14. De ce se adaugă bicarbonat de sodiu la mediul de cultură?
Pentru a echilibra Ph ul extracellular.

15. Ce reprezintă confluenţa?


Este raportul zonei ocupate de cellule si spatiul total disponibil.

16. Cât timp se incubează celule cu tripsină? Ce se adaugă apoi pentru a


inhiba activitatea tripsinei?
Se incubeaza cu tripsina timp de 2-3 minute dupa care se adauga mediu
complet.

17. Ce este contaminarea încrucişată?


Contaminearea cu alte cellule.

18. Care este rolul agentului crioprotector?


Acesta reduce punctul de inghetare al mediului si permite o racier lenta de
un grad Celsius pe minute, reducand riscul de a se forma cristale de gheata
ce pot dauna celulelor.

19. Ce măsuri de protecţie trebuie luate la utilizarea azotului lichid?


Halat de laborator, sort de cauciuc, manusi izolatoare si masca de protectie
tip scut.