ANALISIS DE MEZCLA DE SUSTANCIAS ABSORBENTES POR REGRESION

LINEAL MULTIPLES

Jesús David Bolaño Jiménez1, Marcos Fidel Jiménez Barros

1
, Facultad de Ciencias Básicas, Universidad del atlántico, Km 7 Vía Puerto,
Barranquilla, Atlántico.
________________________________________________________________

Abstract.
El objetivo de esta práctica es obtener las concentraciones reales de dos estándares por
separados y en disolución, hallando sus absortividades molar de las especies en cada longitud de
ondas dada, representando unos espectros múltiples pero no solapados. Las mediciones o
señales (absorbancias) de cada especie se obtuvieron por medio de espectrofotometría Uv-Vis

KEYWORDS O PALABRAS CLAVES

Espectrofotometría, Ley de Lambert-Beer, absortividad molar, Uv-Vis, Absorbancia,

Transiciones electrónicas, Orbitales moleculares.

1. INTRODUCCION

La ley de Beer también se aplica a soluciones que contengan más de una clase de especie
absorbente. Suponiendo que no haya interacción entre las distintas especies, la absorbancia total
para un sistema multicomponente se expresa como

Aτоtаɩ=A ₁+ A ₂+ …+ A n

¿ ϵЬ с ₁+ ϵЬс ₂+…+ ϵЬcn

En la que los subíndices 1, 2,..., n se refieren a los componentes absorbentes

Limitaciones a la aplicabilidad de la ley de Beer

Pocas excepciones pueden encontrarse a la idea generalizada de que existe una relación lineal
entre la absorbancia y la longitud de la trayectoria. Por el contrario, cuando b es constante se
suelen encontrar desviaciones a la proporcionalidad directa entre la absorbancia medida y la
concentración. Algunas de estas desviaciones son fundamentales y representan limitaciones
reales de la ley. Otras ocurre como consecuencias de la manera wn que se realizan la medidas de
absorbancia, o como resultado de los cambios químicos asociados a las variaciones de
concentración; estas dos últimas se conocen a veces, respectivamente como desviaciones
instrumentales y desviaciones químicas
Desviaciones químicas

Se producen desviaciones de la ley de Beer cuando n analito se disocia, asocia o reacciona con
un disolvente, para dar lugar a un producto que presenta un espectro de adsorción diferente que
el del analito. Los indicadores acido/base constituyen un ejemplo frecuente de este
comportamiento. Por ejemplo el cambio de color asociado a un indicador típico Hln proviene
del desplazamiento del equilibrio

HLn H+ + In-

Desviaciones instrumentales con radiación policromática

El cumplimiento estricto de la ley de Beer solo se observa con una radiación verdaderamente
monocromática; esta observación constituye también otra manifestación del carácter límite de
esta ley. Por desgracia, rara vez se puede usar de forman más o menos simétrica de longitudes
de ondas

La siguiente deducción muestra el efecto de la radiación policromática en la ley de Beer.

Considérese un haz formado por solo dos longitudes de ondas λʹ y λʹʹ. Suponiendo que la ley
de beer se aplique individualmente y de forma estricta a cada una de ellas, se puede escribir para
la radicación λʹ

Pʹ ₀
Aʹ =log =ϵʹbc
Pʹ

Pʹ ₀
=10 ϵʹbc
Pʹ

Pʹ =Pʹ ₀ 10−ϵʹbc

De manera análoga para λʹʹ

Pʹʹ=Pʹʹ ₀ 10−ϵʹʹbc

Cuando una medida de absorbancia se realiza con una radiación compuesta por ambas
longitudes de onda, la potencia del haz emergente de la solución viene dada por (Pʹ + Pʹʹ) y la
del haz procedente del disolventes por (Pʹ₀ + Pʹʹ₀). Por tanto, la absorbancia medida AM es

(Pʹ ₀+ Pʹʹ ₀)
Aᴍ=log
( Pʹ + Pʹʹ )

Sustituyendo Pʹ y Pʹʹ resulta

2
 Pʹ ₀+ Pʹʹ ₀
Aᴍ=log
Pʹ ₀ 10−ϵʹbc + Pʹʹ ₀ 10−ϵʹʹbc

Aᴍ=log ( Pʹ ₀+ Pʹʹ ₀ )−log ⁡(Pʹ ₀ 10−ϵʹbc + Pʹʹ ₀ 10−ϵʹʹbc )

Ahora bien, cuando ϵʹ = ϵʹʹ, esta ecuación se simplifica a

Aᴍ=ϵʹbc

Y se cumple la ley de Beer. Sin embargo, tal como se indica figura 1. Cuando las
absortividades molares son distintas, la relación entre Aᴍ y la concentración no sigue siendo
lineal; es más, a medida que aumente la diferencia entre ϵʹ y ϵʹʹ cabe esperar mayores
desviaciones respecto a la linealidad. Esta deducción puede ampliarse de forma que incluya más
longitud de ondas; el efecto seguiría siendo el mismo

Figura 1. Desviaciones de la ley de Beer con luz policromática. Se han

Supuesto dos radiaciones de onda λʹ y λʹʹ para las que el adsorbente
Tiene las absortividades molares indicadas

Es un hecho experimental que las desviaciones de la ley de Beer resultante de la utilización de

un haz policromatico no son perceptibles siempre que la radiación usada no abarque una región
espectral, en la que el absorbente presente grandes variaciones de adsorción en función de la
longitud de onda.

Análisis de mezclas de sustancias absorbentes

3
La absorbancias total de una disolución a una longitud de onda dad es igual a la suma de las
absorbancias e los componentes individuales presentes. Esta relación hace posible la
determinación cuantitativa de los constituyentes individuales de una mezcla. Incluso si el
espectro se superpone. Considérese, por un ejemplo, el espectro de M y de N, que se muestra en
la figura 2. Obviamente, no existe ninguna longitud de onda en la cual la absorbancia de la
mezcla sea debido simplemente a uno de los componentes; así, un análisis de ambos M y N, es
imposible con una única medida. Sin embargo, las absorbancias de la mezcla a las dos
longitudes de onda λʹ y λʹʹ se pueden expresar como sigue:

Aʹ = ϵʹbcM + ϵʹbcN (a λʹ)

Aʹʹ = ϵʹʹbcM + ϵʹʹbcN (a λʹʹ)

Las cuatro absortividades molares ϵʹ M, ϵʹN, ϵʹM ʹy ϵʹʹN pueden evaluarse a partir de disoluciones
estándares individuales de M y de N, o mejor, a partir de las pendientes de sus representaciones
de la ley de Beer. Las absorbancias de la mezcla Aʹ y Aʹʹ, se determinan experimentalmente, al
igual que b, la anchura de la cubeta. Así a partir de estas dos ecuaciones, pueden calcularse
fácilmente

Figura 2. Espectro de absorción de una mezcla de dos componentes.

Las concentraciones de los constituyentes individuales C M y CN. Estas relaciones son válidas
solo si se cumple la ley de Beer si los dos componentes se comportan independientemente uno
de otro. La mayor precisión de un análisis de este tipo se alcanza cuando se eligen longitudes de
ondas en las que las diferentes entre las absortividades molares sean grandes.

Se puede analizar mezclas que contengan más de una especie absorbente, al menos en principio,
si se hacen más medidas de absorbancia para cada componente añadido. Sin embargo, las
indeterminaciones en los datos obtenidos se hacen mayores a medida que el número de medidas
aumentan.

4
 2. EXPERIMENTAL

Se prepararon dos
disoluciones o estándares con
concentraciones conocidas

Una disolución de permanganato de Otra disolución de dicromato de potasio

potasio (KMnO4), 4,252mM en un matraz (K2Cr2O7), 100,12mM en un matraz
aforado de 25ml se pesa 0,0168g de aforado de 25ml, se pesa 0,7361g de
KMnO4 se diluye con agua destilada hasta K2Cr2O7 se diluye con agua destilada
el aforo hasta el aforo

De la disolución se toman (1,0; 1,2; 2,4;
3,5; 4,7) ml y se diluye en matraces
aforados de 50ml, con agua destilada
tenemos 5 estándares de la disolución
patrón
De la disolución se toman (0,2; 0,4; 0,6;
0,8; 1,0) ml y se diluye en matraces
aforados de 50ml con agua destiladas
tenemos 5 estándares de la disolución
patrón

De terminar las absorbancias de cada uno

de los estándares a diferentes longitudes
de ondas de máxima absorbancias de cada
disolución

Se toma espectros de cada disolución de uno

de los estándares diluido y de una muestra
problema que contiene en disolución las
muestras o disoluciones patrones con
concentraciones desconocidas

5
3. RESULTADOS Y DISCUSION

Preparación de las disoluciones estándares para multiplex componentes en disoluciones

permanganato de potasio (KMnO4) [4mM] en 25ml y dicromato de potasio (K 2Cr2O7) [100mM]
en 25ml.

Cuantos gramos de permanganato de potasio se necesita para preparar 4mM en 25ml MM =

158,034g/ml

4 mmol 1 mol 158,034 g

Xg= × 0,025 l× × =0,0158 g
l 1000 mmol 1 mol

Y con el porcentaje de pureza para el permanganato de potasio es 99%

0,0158 g
Xg= ×100=0,015959≈ 0,0160 g
99 %

Pero se pesó 0,0168g de permanganato de potasio la concentración real del estándar es

1mol 1000 mmol

0,0168 g × ×
158,034 g 1 mol
mM = =4,252 mM
0,025l

Cuantos gramos de dicromato de potasio se necesita para preparar 100mM en 25ml MM =

249,085g/ml

100 mmol 1 mol 294,085 g

Xg= × 0,025 l× × =0,7352 g
l 1000 mmol 1 mol

Y por sus porcentaje del dicromato de potasio es 99.9%

0,7352 g
Xg= × 100=0,7359 g
99.9 %

Se pesó 0,7361g del dicromato de potasio la concentración real del estándar es

1 mol 1000 mmol

0,7361 g × ×
294,085 g 1 mol
mM = =100,12 mM
0,025 l

6
Tabla 1. Resultados de la práctica. Para el permanganato de potasio
Absorbancia, A (cubeta de 1,00cm)
Std Concentración[mM 524nm 430nm
]
1 0,0850 O,221 0,120
2 0,1020 0,256 0,070
3 0,2041 0,604 0,037
4 0,2976 0,718 0,020
5 0,3997 1,076 0,138

Disoluciones del estándar de permanganato de potasio

Estándar patrón = 4,252mM

C1 = 4,252Mm V1= volumen utiliza para la dilución de permanganato
C2 = desconocida V2 = 50ml

Para el primer estándar de dilución

C1V1 = C2V2 C2 = C1V1 ÷ V2

C2 = (4,252mM) (0,001 L) ÷ 0,050 L = 0,0850mM
Para el segundo estándar de dilución
C1V2 = C2V2 C2 = C1V1 ÷ V2
C3 = (4,252mM) (0,0012 L) ÷ 0,050 L = 0,1020mM
Para el tercer estándar de dilución
C1V1 = C2V2 C2 = C1V1 ÷ V2
C2 = (4,252mM) (0,0024 L) ÷ 0,050 L = 0,2041mM
Para el cuarto estándar de dilución
C1V1 = C2V2 C2 = C1V1 ÷ V2
C2 = (4,252mM) (0,0035 L) ÷ 0,050 L = 0,2976mM
Para el quinto estándar de dilución
C1V1 = C2V2 C2 = C1V1 ÷ V2
C2 = (4,252mM) (0,0047 L) ÷ 0,050 L = 0,3997mM

Abs VS [mM]
1.2 1.08
1 f(x) = 3.05 x − 0.13
R² = 0.94
0.8 0.72
Absorbancia

0.6
0.6

0.4
0.26
0.2
0
0
0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4 0.45
Concentración

Figura 3. Curva de calibración para la disolución de KMnO 4, a una longitud de onda

máxima de 524 nm.

7
 abs vs [mM]
0.16
0.14
0.14
0.12
0.12
0.1
Absorbancia

0.08 0.07
f(x) = 0.03 x + 0.07
0.06 R² = 0.01
0.04
0.04
0.02
0.02
0
0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4 0.45
Concentración

Figura 4. Curva de calibración para la disolución de KMnO 4, a una longitud de onda

máxima de 430 nm.

Tabla 2. Datos experimentales para el Dicromato de potasio

Absorbancia, A (cubeta de 1,00cm)
Std Concentración[mM 524nm 430nm
]
1 0,40048 0,022 0,305
2 0,80096 0,015 0,374
3 1,20144 0,036 0,602
4 1,60192 0,035 0,787
5 2,0024 0,126 1,097

Disoluciones estándar para el dicromato de potasio

Para el primer estándar de dilución

C1V1 = C2V2 C2 = C1V1 ÷ V2
C2 = (100,12mM) (0,0002 L) ÷ 0,050 L = 0,40048mM
Para el segundo estándar de dilución
C1V1 = C2V2 C2 = C1V1 ÷ V2
C2 = (100,12mM) (0,0004 L) ÷ 0,050 L = 0,80096mM
Para el tercer estándar de dilución
C1V1 = C2V2 C2 = C1V1 ÷ V2
C2 = (100,12mM) (0,0006 L) ÷ 0,050 L = 1.20144mM
Para el cuarto estándar de dilución
C1V1 = C2V2 C2 = C1V1 ÷ V2
C2 = (100,12mM) (0,0008 L) ÷ 0,050 L = 1,60192mM
Para el quinto estándar de dilución
C1V1 = C2V2 C2 = C1V1 ÷ V2
C2 = (100,12mM) (0,001 L) ÷ 0,050 L = 2,0024mM

8
 Abs vs [mM]
1.2 1.1
1 f(x) = 0.5 x + 0.03
R² = 0.96 0.79
0.8
Absorbancia

0.6
0.6
0.37
0.4 0.31

0.2

0
0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8 2 2.2
Concentración

Figura 5. Curva de calibración para la disolución de K 2Cr2O7, a una longitud de onda

máxima de 430 nm.

Abs vs [mM]
0.14
0.13
0.12

0.1
Absorbancia

0.08 f(x) = 0.06 x − 0.02

R² = 0.64
0.06

0.04 0.04 0.04

0.02
0.02 0.02

0
0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8 2 2.2
Concentración

Figura 6. Curva de calibración para la disolución de K2Cr2O7, a una longitud de onda de

524 nm.

Tabla 3. Datos experimentales de la muestra problema (MP)

Absorbancia, A (cubeta de 1,00cm)
524nm 430nm
MP 0,639 0,513

9
 MP
1.2

0.8
Absorbancia

0.6

0.4

0.2

0
350.0 400.0 450.0 500.0 550.0 600.0 650.0 700.0 750.0
Longitu de Onda

Figura 7. Espectro de la disolución problema, un barrido de 700 nm – 400 nm.

Los espectros para las soluciones de dicromato y permanganato son los siguientes :

0.5000

0.4000

0.3000
Absorbancia

0.2000

0.1000

0.0000
350.0 400.0 450.0 500.0 550.0 600.0 650.0 700.0 750.0

-0.1000

-0.2000
Longitud de Onda

Figura 8. Espectro de la solución patrón de KMnO4, barrido desde los 700-400 nm.

10
 1.2000

1.0000

0.8000
Absorbancia

0.6000

0.4000

0.2000

0.0000
350.0 400.0 450.0 500.0 550.0 600.0 650.0 700.0 750.0
-0.2000
Longitud de Onda

Figura 9. Espectro de la disolución patrón de K2Cr2O7, barrido desde los 700-400 nm.

1.2000

1.0000

0.8000
Absorbancia

0.6000

0.4000

0.2000

0.0000
350.0 400.0 450.0 500.0 550.0 600.0 650.0 700.0 750.0
-0.2000
Longitud de Onda

Figura 10. Sobreposición de los espectros de KMnO4 y K2Cr2O7.

Principalmente como estas son disoluciones coloridas, podemos predecir en que parte del
espectro estará la longitud de onda máxima, por ejemplo en la solución de KMnO 4 la cual
absorbe color verde, y transmite al ojo humano el color purpura ( color complementario ) tiene
una longitud de onda máxima que se encontrara entre los 500-560 nm. Por otro lado
encontramos el K2Cr2O7 el cual absorbe el color azul y transmite el color amarillo, posee su
longitud de onda máxima entre el intervalo de 435-480 nm.

El espectro de absorción de las disoluciones patrones anteriores muestran una creciente al

comenzar, esto debido a que la concentración es muy cercana a la del blanco, esta se comienza
a separar poco a poco del rango inicial y alcanza su punto máximo de absorbancia, para así,
entonces, permitir asegurar que la concentración es aquella que juega el papel más importante
dentro de la disolución, puesto que si se tiene una concentración muy baja, la absorbancia se
verá influenciada directamente debido a que estas son directamente proporcionales. Esto es

11
debido a que “se absorben aquellas frecuencias que son capaces de producir excitación
electrónica”, pero luego se nota en el espectro como desciende debido a que ya no existe un
equilibrio en la solución que le permita al compuesto absorber la intensidad incidente
optimizando la transmitancia mucho más que la absorbancia. Como se dijo anteriormente la
absorbancia es directamente proporcional a la concentración, por tanto, siempre que la
concentración de la disolución se aumente, la absorbancia aumenta también. Toda vez que
exista una gráfica interpolable, será posible, por medios gráficos determinar la concentración de
las sustancias problema, pero al ser un medio gráfico, arroja un margen de error considerable.

Cabe resaltar que hay una gran cantidad de factores que originan variaciones en los valores de
λmax y εM en un espectro, entre estos se incluye el pH, la polaridad del solvente o moléculas
vecinas y la orientación de los cromóforos vecinos; y cada uno afecta de forma particular. Por
ejemplo, variaciones originadas por cambios de pH son debidas al efecto de éste sobre la
ionización del compuesto

Un punto que se puede resaltar en el espectro es el de la figura 8, en el cual se presentan una

serie de longitudes de ondas máximas, en este caso se notan 5 para ser concisos, estas se hacen
notar debido a que el metal presente en la disolución (KMnO 4) presenta cinco estados de
oxidación (Mn+2, Mn+3, Mn+4, Mn+6, Mn+7), por ende, se afirma que cada uno de esos estados de
oxidación se hacen notar en el espectro como una variedad de longitudes de onda máximas,
claro está que el número de longitudes es igual al número de estados de oxidación de la especie.

Para obtener una curva de calibrado de un compuesto se preparan soluciones de diferentes

concentraciones del mismo, determinándose para cada una de ellas el valor de absorbancia a
λmax. Estos valores de absorbancia se representan en el eje de abscisas (eje de x) y los de
concentración en el eje de ordenadas (eje de y). Se observará que, a bajas concentraciones, el
aumento de concentración se corresponde con un incremento lineal en la absorbancia (zona de
cumplimiento de la ley de Lambert-Beer). A concentraciones altas la linealidad se pierde y se
observa que la línea se aplana, por lo que las medidas son poco fiables.

Tomando las curvas de calibración (figura 3, 4, 5 y 6) se nota que no son líneas rectas que
demuestren 100% la linealidad de la ley de Beer-Lambert, esto debido a los errores
instrumentales que traen estipulados los materiales usados en el laboratorio y los errores
personales, es decir, aquellos errores presentes en la preparación de cada una de las
disoluciones, incluyendo la disolución patrón y las disoluciones preparadas a partir de la
anteriormente nombrada. La absorbancia de una disolución es directamente proporcional a su
concentración, a mayor número de moléculas mayor interacción de la luz con ellas; también
depende de la distancia que recorre la luz por la solución (paso óptico) a igual concentración,
cuanto mayor distancia recorre la luz por la muestra más moléculas se encontrará; y por último,
depende de ε, una constante de proporcionalidad denominada coeficiente de extinción el que es
específico de cada cromóforo. Un punto que se debe de tomar en cuenta para la linealidad
también es la celda o también denominado paso óptico, todas las celdas tienen imperfecciones
menores que frecuentemente no pueden ser detectadas a simple vista, y como consecuencia las
pérdidas por reflexión y dispersión de radiación no son las mismas en diferentes secciones de
esta, por ende el valor arrojado de la señal analítica tendrá siempre un minúsculo error.

12
Para hallar la concentración de la disolución problema se realizó el siguiente procedimiento:

Datos:

C1: KMnO4  0,1907 M

C2: K2Cr2O7  1,0143 M

Coeficientes de absortividad molar para el KMnO 4:

ε: 3,0474 a 524 nm
ε: 0,0311 a 430 nm

Coeficientes de absortividad molar para el K2Cr2O7:

ε: 0,0569 a 524 nm
ε: 0,4987 a 430 nm

1. A 1=ε 1 bC 1+ε 1 bC 2 λ=430 nm

2. A 2=ε 2 bC 1+ε 2 bC 2 λ=524 nm

Reemplazando los valores en 1 y 2.

0,513=0,0311 ( 1 ) C 1+ 0,4987 ( 1 ) C 2 430 nm

0,513−0,4987 C 2
C 1=
0,0311

0,639=3,0474 ( 1 ) C 1+ 0,0569 ( 1 ) C 2 524 nm

0,639=3,0474 ( 0,513−0,4987
0,0311
C2
)+0,0569 C 2
0,513 0,4987 C 2
0,639=3,0474 ( 0,0311 −
0,0311 )
+ 0,0569C 2

0,639=50,27−48,87 C 2+0,0569 C 2

0,639=50,27−48,93C 2

0,639−50,27=−48,93 C 2

−49,631
C 2= =1,0143 M
−48,93

0,639=3,0474 ( 1 ) C 1+ 0,0569 ( 1 ) C 2 524 nm

13
 0,639=3,0474 C 1+0,0569(1,0143)

0,639=3,0474 C 1+0,0577

0,639−0,0577=3,0474 C 1

0,0,5813=3,0474 C 1

0,05813
C 1= =0,1907 M
3,0474

CONCLUSIÓN.

Por medio de esta práctica se logró familiarizarse y aprender el uso correcto y manejo del
espectrofotómetro de absorción UV-visible por medio de sustancias que presentan color y que
por medio de la espectrofotometría se puede observar su región de absorbancia en determinada
longitud de onda que nosotros podemos manejar de acuerdo a nuestras necesidades, así como
lograr determinar en qué región se encuentra un compuesto si es que este es desconocido,
ayudándonos también al graficarlo para facilitar la determinación del mismo.

En esta práctica aprendimos a utilizar el espectrofotómetro el cual nos sirvió para medir, en
función de la longitud de onda, este también se puede utilizar para la cuantificación de
sustancias, que fue lo que nosotros realizamos con espectrofotómetro de absorbancia
básicamente obtuvimos mejorar la resolución de los espectros obtener mayor sensibilidad.
Estuvo interesante la práctica porque fue la primera vez que pudimos utilizar el
espectrofotómetro de absorbancia y así poderlo ocupar con mucho más facilidad.

Se pudo realizar exitosamente el experimento ya que al colocar muestra nuestra muestra se

obtuvo la medida de la cantidad de luz de absorción del compuesto, para la obtención de su
longitud de onda.

REFERENCES
[1] Skoog D, Holler F, Crouch S. Principios de Análisis Instrumental. Cengage Learning
Editores,
6ta edición. México 2008.

[2] Kenneth A. Rubinson y Judith F. Rubinson. Análisis Instrumental Prentice Hall. Madrid
2001.

[3] Rousseau F, Rouessac A. Análisis químico: métodos y técnicas instrumentales modernas.

Mac
Graw Hill/ Interamericana de España, Madrid 2003

[4] Skoog, d.a.; leary j.j., holler f. james; principios de análisis instrumental, 5° ed.; ed. mcgraw-
hill (1998).

14
ANEXOS.

1. Se quiere determinar la concentración (mol/L) de dos sustancias (KMnO 4 y K2Cr2O7)

que conforman una muestra problema en disolución acuosa. Para ello se registra el
espectro en el visible de cada uno de estos dos compuestos en disolución acuosa de
forma independiente, así como otro de la muestra analizar. El paso óptico es de 10 mm.
Para obtener las concentraciones de estos compuestos se suministran los siguientes
datos a una longitud de onda de 430 y 524 nm:

A430: 0,513
A524: 0,639

ε: 3,0474 a 524 nm
ε: 0,0569 a 524 nm
ε: 0,4987 a 430 nm
ε: 0,0311 a 430 nm

15