Teoria BQ PDF

Universidad de Vigo Facultad de Ciencias
BIOQUÍMICA II (2º Grado Biología)

Dra. Mª Pilar Suárez Alonso (psuarez@uvigo.es)
Tema 1. BIOSEÑALIZACIÓN
1. Conceptos generales
2. Moléculas señal (ligandos)
2.1. Características generales
2.2. Clasificación según su radio de acción
2.3. Mecanismos general de acción
2.4. Características de la unión la molécula señal-receptor
3. Receptores y vías de señalización
3.1. Clasificación según su localización celular
3.2. Receptores intracelulares
3.3. Receptores de membrana
3.3.1. Tipos de ligandos
3.3.2. Elementos que participan en la transducción señales a través de receptores de membrana
3.3.3. Tipos de receptores de membrana
3.3.3.1.Receptores GPCR
3.3.3.2. Receptores tirosin-quinasa
3.3.3.3. Receptores citoquinas
Bioseñalización
1. CONCEPTOS GENERALES
Primeras células aparecen hace 3.5 millones años (≈ actuales procariotas)

BIOSEÑALIZACIÓN
Capaces de desarrollar sistemas de comunicación con su entorno:
 Comprobar y reconocer cambios en el medio que las rodea:
 Variaciones Tª, pH
 Presencia de nutrientes respuesta celular adecuada
 Presencia de otros microorganismos…
Estos sistemas se vuelven más complejos en los organismos pluricelulares para:

 Mantener unidas las células que conforman los diferentes tejidos
 Permitir la coordinación entre los diferentes tipos celulares
 Estos sistemas son los mismos que en procariotas (adaptados al medio interno/externo)
 Se basan en:
 Presencia de RECEPTORES DE MEMBRANA (proteínas membrana plasmática)
Unión específica receptor-ligando
TRANSDUCCIÓN
DE LA SEÑAL un cambio (actividad de ciertas proteína intracelulares)
respuesta celular
BIOSEÑALIZACIÓN, capacidad de las células para reconocer determinadas señales externas o internas y ejecutar una respuesta acorde a dicha señal
 Existen una gran variedad de señales biológicas y respuestas celulares
 Mecanismos para detectar las moléculas señal y TRANSDUCIRLAS a cambios intracelulares son:
 poco numerosos y están evolutivamente muy conservados

Bioseñalización
BIOSEÑALIZACIÓN puede actuar a dos niveles:
➊ INTERCELULAR (Transmisión de señales entre las células)

Adhesión celular
➋ INTRACELULAR (Transmisión de señales externas al interior de la célula), permite regular procesos como:
PROLIFERACIÓN CELULAR
Duplicación ADN
Factores de crecimiento promueven el ciclo celular
Inicio de la mitosis
DIFERENCIACIÓN CELULAR
Cada tipo celular presenta una estructura y morfología en relación a su función
Cambios morfológicos síntesis de determinadas proteínas
SUPERVIVENCIA y APOPTOSIS
Supervivencia y Apoptosis (muerte celular programada) depende de la presencia o ausencia

de ciertos factores de crecimiento
El equilibrio entre ambas permite regular el nº células y el desarrollo del organismo
METABOLISMO, control de las vías catabólicas y anabólicas
PROCESOS FISIOLÓGICOS: visión, olfato, impulso nervioso….
Crecimiento y desarrollo del organismo

Procesos patológicos CÁNCER, PARKINSON, ALZEHEIMER….
Bioseñalización
2. MOLÉCULAS SEÑAL (LIGANDOS)

2.1. CARACTERÍSTICAS GENERALES
Proliferación celular
BIOSEÑALIZACIÓN INTRACELULAR
Diferenciación celular
Supervivencia o apoptosis
Metabolismo
Proceso fisiológico específico
Son siempre moléculas extracelulares

Producidas y liberadas por células productoras de señales
Célula diana presenta receptores de membrana (proteínas) que reconocen específicamente a la molécula señal
Provocan una respuesta molecular específica en la célula diana “target cell”
Respecto a la concentración celular de las moléculas señal:

 orden de μM ó pM. En cambio, la [glucosa]= 4 mM
 Aumenta varios órdenes de magnitud como respuesta a un estimulo en un periodo muy corto de tiempo
 Al cesar el estimulo, la molécula señal es rápidamente degradada, recuperándose sus niveles basales
Bioseñalización
Según su naturaleza química pueden ser:
 Capaces de atravesar la membrana celular

 Liposoluble  Interior celular se unirán a su receptor nuclear o citosólico específico
 Pueden ser: Hormonas esteroideas, tiroideas, retinoides
 No atraviesan la membrana celular

 Hidrosoluble  Se unirán a su receptor específico de membrana plasmática
 Pueden ser: Iones, péptidos, nucleótidos, aas, azúcares, hormonas de naturaleza proteica
Bioseñalización
2.2. CLASIFICACIÓN SEGÚN SU RADIO DE ACCIÓN
ENDOCRINA:
 Molécula señal se originan en un tejido o “glándula”
 Son las denominadas, hormonas
 Se almacenan en vesículas secretoras hasta su liberación (estímulo) sangre célula diana
PARACRINA:
 La célula emisora y diana se encuentran próximas
 Molécula señal es liberada al espacio extracelular
 Rápidamente captada por la matriz extracelular de la célula diana

 Ejemplo: Neurotransmisores
AUTOCRINA:
 Molécula señal es producida y liberada por la misma célula
 Molécula señal se une a receptores de su propia superficie.
 Ejemplo: Factores de crecimiento
Dependiente de contacto:
 Molécula señal está anclada a la membrana de la célula emisora
 Es muy importante en procesos:
 reconocimiento celular
 diferenciación celular
 Mantenimiento de la estructura tisular
Bioseñalización
Algunas moléculas señal pueden comportarse diferente modo:
PARACRINA: transmisión del impulso nervioso

 ADRENALINA
ENDOCRINA: regulación del metabolismo glucídico y lipídico
 FACTOR DE CRECIMIENTO EPIDÉRMICO (EGF):
Membrana plasmática
C. emisora Actúan sobre si misma
AUTOCRINA
EGF sufre escisión proteolítica Actuar células diana adyacentes (PARACRINA)

C. emisora
Actuar células diana alejadas (ENDOCRINA)
2.3. MECANISMO GENERAL DE ACCIÓN DE LA MOLÉCULA SEÑAL
1. Síntesis de la molécula señal en la célula productora en respuesta a un estímulo externo u interno
2. Liberación de la molécula señal por la célula productora
3. El transporte de la molécula señal hasta la célula diana
4. Detección de la señal por una proteína receptora específica
5. Cambio en la célula diana inducido por la formación del complejo receptor-señal
6. Eliminación de la señal, interrumpiendo la respuesta celular
Los pasos 4 y 5 supone un proceso muy complejo

La información no se transmite directamente al interior celular
Ocurre mediante un sistema muy complejo de señalización celular conocida TRANSDUCCIÓN DE SEÑALES
Bioseñalización
2.4. CARACTERÍSTICAS DE LA UNIÓN RECEPTOR-MOLÉCULA SEÑAL
1. ESPECÍFICA
 Complementariedad molecular: receptor- molécula señal

 Intervienen enlaces no covalentes
 Semejante a la unión enzima-sustrato
 Unión es específica pero también versátil:
 Un mismo receptor puede reconocer señales diferentes

 Una misma señal puede actuar sobre diferentes tipos celulares Generando diferentes respuestas celulares
Bioseñalización
2. AFINIDAD
 Receptor presenta una ALTA AFINIDAD por su ligando o señal

 Su constante afinidad, Kd presenta valores 10-10 M Puede detectar concentraciones picomoles del ligando
 Presenta cooperatividad
3. SATURABLE
 En la célula el n0 de receptores para una determinada señal es grande.

 Aunque basta con un 10-20% de ocupación para obtener una máxima respuesta NIVEL DE SATURACIÓN DEL RECEPTOR
4. REGULACIÓN DEL NÚMERO DE RECEPTORES EN ACTIVO
 [molécula señal] es muy altos, el propio receptor provoca su inactivación

 Esto es lo que se conoce como DESENSIBILIZACIÓN O CONTRAREGULACIÓN
 Esta inactivación temporal se puede llevar a cabo:
 disminución del número de receptores

 Inactivación del receptor
 Inactivación de la ruta de señalización
 [molécula señal] vuelve a valores por debajo de un determinado umbral Sistema vuelve a ser sensible
Bioseñalización
5. AMPLIFICACIÓN DE LA SEÑAL POR CASCADAS ENZIMÁTICAS
 Ocurre cuando la señal activa un receptor asociado a una enzima, activándola

 Esta enzima cataliza la activación de muchas moléculas de un 2º enzima
 Y así sucesivamente hasta alcanzar la molécula diana final
 Esta cascada provoca amplificaciones (varias órdenes magnitud en miliseg)
6. INTEGRACIÓN DE LAS SEÑALES
 Las células presentan la capacidad de recibir múltiples señales y producir respuestas unificadas según sus necesidades
INSULINA
Cs. hepáticas [GLUCOSA] en sangre
GLUCAGÓN
Bioseñalización
3. RECEPTORES Y VÍAS DE SEÑALIZACIÓN
3.1. TIPOS DE RECEPTORES
Interior celular (INTRACELULARES)  Receptores citosólicos

 Receptores nucleares
 Receptores acoplados a la proteína G

Localización celular
 Receptores con tirosin-quinasas
 Receptores tirosin-quinasa
Membrana plasmática celular (DE MEMBRANA)
 Receptores citoquinas
Bioseñalización
3.2. RECEPTORES INTRACELULARES
Son macromoléculas de origen proteico, localizadas:

 citosol
 núcleo celular
Responden a ligandos de naturaleza liposoluble (moléculas apolares):
 Hormonas esteroideas
 Hormonas tiroideas capaces de atravesar la membrana plasmática (difusión simple)
 Retinoides
Receptores intracelulares pueden funcionar como activadores ó inhibidores transcripcionales

En mamíferos se conocen varios tipos receptores intracelulares:
FAMILIA RECEPTORA NOMBRE RECEPTOR LIGANDOS

ER (receptor estrógenos) Estradiol
PR (receptor progesterona) Progesterona
Receptores esteroideos AR (receptor andrógenos) Testosterona
GR (receptor glucocorticoides) Cortisol
MR (receptor minerolocorticoides) Aldosterona
Receptores tiroideos TR (receptor hormonas tiroideas) Triiodotirosina (T3)
RAR (receptor ácido retinoico) Ácido trans-retinoico
Receptores retinoico
RXR (receptor ácido retinoico) Ácido cis-retinoico
Receptores vitamina D VDR (receptor vitamina D3) Hidroxicolecalciferol
LXR (receptor X Hígado) Hidroxicolesterol
Receptores lipídicos
FXR (receptor X farnesoide) Ácidos biliares
PPAR (receptor del factor activador
PPAR de la proliferación de peroxisomas Ácidos grasos
Implicados en funciones reguladoras de la proliferación, división y diferenciación celular

Bioseñalización
3.2.1. ESTRCUTURA DEL RECEPTOR INTRACELULAR:
Se puede dividir en:
 Dominio encargado de activar la transcripción

 tamaño variable
 extremo N-terminal del receptor
 Dominio encargado de unirse al DNA (reconocer HREs)

 Muy conservada
 Tamaño: 66 – 68 residuos
 Dominio para unir su ligando (hormona) correspondiente

 Tamaño es muy variable: 25 (VDR); 603 (MR)
 Está situado en el extremo C-terminal
 Secuencia de este dominio es bastante específico
 Mutaciones en su secuencia aminoacídica pueden provocar la pérdida de respuesta hormonal
Región HRE (hormonal response element) del DNA:

 Poseen la misma longitud y estructura
 Difieren en su secuencia nucleotídica
 Esta secuencia es específica del receptor (secuencia consenso)
Hay 2 tipos de receptores intracelulares:

 Tipo I
 Tipo II
Bioseñalización
 Formado por el mismo monómero (homodímero)

 Se localizan en el citosol
 Tipo I
 Están unidos a Hsp 70 ó Hsp90 (proteína de choque térmico) forma inactiva
 Receptores: ER, PR, AR,GR
1. Hormona entra en el citoplasma y se une al complejo receptor-Hsp70

2. Hsp 70 se disocia y el receptor se dimeriza, exponiendo una señal de localización nuclear
3. Receptor dimérico + hormona pasan al núcleo
4. Se unen al elemento HRE del DNA
5. Receptor actúa como un activador trancripcional (gen diana) respuesta celular
 Formado por monómero diferentes (heterodímero)

 Se localizan siempre en el núcleo
 Tipo II
 Están unidos a HRE del DNA y a un correpresor forma inactiva
 Receptores: TR, RAR, VDR, RXR RXR-TR, RXR-RAR, RXR-VDR
1. Hormona migra por el citoplasma y difunde a través de la membrana nuclear

2. En el núcleo, se une a su correspondiente heterodímero
3. Esta unión provoca un cambio conformacional, liberándose el correpresor
4. Receptor actúa como un activador trancripcional (gen diana) respuesta celular
 Ciertos receptores necesitan un coactivador, RNA activador del receptor de esteroides (SRA)
 SRA es un RNA de unos 700 nucleótidos
En ambos tipos receptores, la respuesta celular es lenta

Bioseñalización
3.3. RECEPTORES DE MEMBRANA

3.3.1. TIPOS DE LIGANDOS:
Naturaleza proteica:
Insulina
Citoquinas
Glucagón
Factores de crecimiento
Molécula pequeñas pero de elevada polaridad:

Catecolaminas:
Adrenalina
Noradrenalina
Nucleósidos
Nucleótidos
Iones: Ca2+
Aminas biógenas:
Histamina
Serotonina
Moléculas lipófilas
Prostaglandinas
Bioseñalización
3.3.2. ELEMENTOS QUE PARTICIPAN EN LA TRANSDUCCIÓN SEÑALES A TRAVÉS DE LOS RECEPTORES DE MEMBRANA
Proteínas quinasas
Proteínas fosfatasas
Proteínas G:
Proteínas G monoméricas
Proteínas G triméricas
Proteínas adaptadoras
Enzimas efectoras:
Adenilato ciclasa
Fosfolipasa C (PLC):
Fosfolipasa C b
Fosfolipasa C g Tándem adenilatociclasa – cAMP – proteína quinasa A
Formación y función de segundos mensajeros Tándem PLC b – DAG / IP3 / Ca2+ – Proteína quinasa C / proteínas de unión al Ca2+
cAMP
Ión Ca2+
Diacilglicerol (DAG)
Inositol 1,4,5-trifosfato (IP3)
Bioseñalización
PROTEÍNAS QUINASAS :
Son enzimas con actividad quinasa

Se encargan de fosforilar a otras proteínas (actúan como el sustrato de la reacción)
Se clasifican dentro de:
Clase 2 -Transferasas
Subclase 7- Fosfotransferasas.
 Utilizan ATP como donante grupo P
Subsubclase 1. El grupo aceptor: -OH (Tyr, Ser, Thr)
Entre las proteínas quinasas, cabe destacar, PROTEÍNA TIROSINA QUINASA (PTK)
Forman parte del propio receptor

Localización Citosol
Asociadas a la membrana plasmática
Tirosina
Dirigida contra
Serina ó treonina (o ambos)
Fosforilación
Moduladas Unión a otras proteínas (adaptadoras)
Cambios en los niveles de los 2º mensajeros
Otras proteínas quinasas que intervienen en las vías de señalización:

PKA, PKG, PKC, MAPK (fosfo-Ser/Thr), Sos, Src, JAK, RTKs (fosfo-Tyr); PI3K (fosforila lípidos)
Bioseñalización
PROTEÍNAS FOSFATASAS :
Son enzimas que eliminan el grupo P unido a un residuo de Ser, Thr, Tyr de otra proteína (forma fosforilada)
Se clasifican dentro de:

Clase 3 -Hidrolasas
Subclase 1- Fosfatasas
Fosfatasas permiten “apagar” las señales intracelulares una vez que la molécula señal ha hecho llegar su mensaje a la célula
Hay 4 grandes grupos de proteínas fosfatasas:
Reconocen únicamente fosfo-Tyr, PROTEÍNAS TIROSINAS FOSFATASAS (PTP)
 Asociadas a la membrana plasmática, poseen:
 varios dominios con actividad fosfatasa
 Citosólicas, presentando:
 1 dominio con actividad fosfatasa
 varios dominios SH2 (permiten interaccionar con otras proteínas)
Reconocen únicamente fosfo-Ser/Thr, PROTEÍNAS Ser/Thr FOSFATASAS (PPP y PPM)
Reconocen fosfo-Tyr como fosfo-Ser/Thr, PROTEÍNAS TIROSINA FOSFATASA DE ESPECIFICIDAD DUAL
Reconocen fosfo-His, PROTEÍNAS HISTIDINA FOSFATASA

Bioseñalización
PROTEÍNAS G:
GTP
Pertenecen a la superfamilia: GTPasas reguladoras
Capaces de unirse a los nucleótidos: GTP y GDP
Hidrolizan el GTP a GDP + Pi
g b a
Posee actividad GTPasa intrínseca
GDP
Presentan una alternancia entre dos formas:
Forma activa unida al GTP
 Es imprescindible reemplazar el GDP por GTP para activar la proteína G

 Este proceso está catalizado por los intercambiadores de nucleótidos de guanosina (GEFs: proteína Sos……)
 GEFs actúan como su receptor activado (receptor unido al ligando)
 Proteina G activa expone regiones de su estructura antes ocultas, interruptor I y II
 Ambos interruptores están unidos entre sí por el grupo g fosfato del GTP (bucle P)
 Interruptores interaccionan con las proteínas posteriores en la ruta de señalización
 Esto lo harán hasta que la actividad GTPasa de la proteína G hidrolice el GTP a GDP
 Al cortar uno de los grupos P del GTP, se rompe conexión con los 2 interruptores
 El cambio conformacional ocultará de nuevo los interruptores
Forma inactiva unida al GDP
 Promovida por su actividad GTPasa intrínseca, hidrolizando el GTP a GDP

 Esta actividad es estimulada por los moduladores de la actividad GTPasa (como la proteína GAP)
 Estos moduladores determinarán cuanto tiempo estará la proteína G activa
Bioseñalización
TIPOS DE PROTEÍNAS G:
PROTEÍNAS G MONOMÉRICAS, formadas por 1 subunidad polipeptídica
 Ras, interviene en la señalización “dowstream” de los receptores tirosina quinasa

 ARF, Rab, interviene en el transporte de vesículas
 Ran, implicada en transporte de proteínas a través de membrana nuclear
 Rho, coordinación del ciclo celular
Ras
PROTEÍNAS G TRIMÉRICAS, formadas por 3 subunidades: a, b, g

 Subunidad α:
 Lugar de unión al GDP ó GTP, y su actividad GTPasa
 En algunas proteínas G está miristilada, en otras está palmitilida
 Subunidad b y g :
 Responsables de la unión a la membrana y permitir la interacción con el complejo hormona-receptor
 La subunidad g:
 Está prenilada: posee una cadena isoprenoide C20 unida covalentemente a su extremo C terminal.
 Le ayuda a anclar la proteína a la membrana y facilita las interacciones proteína-proteína
Bioseñalización
Bioseñalización
PROTEÍNAS ADAPTADORAS
Proteínas señalizadoras que intervienen en la transducción señal pueden presentar:
Dominio catalítico y dominios de unión
Solamente dominio de unión

Los dominios de unión reconocen secuencias específicas de otras proteínas, uniéndose a ellas.
Tipos de dominios de unión:
Dominios SH2, reconocen residuos de fosfotirosina.
Dominios PTB, reconocen también residuos de fosfotirosina.
Dominios SH3 y WW, reconocen residuos de prolina.
Algunas veces pueden contener un solo tipo de dominio o distintas combinaciones, reconociendo varias proteínas a la vez
Permitirá la interacción proteína-proteína indispensable para obtener una respuesta celular acorde a la señal química recibida
Bioseñalización
ENZIMAS EFECTORAS y SEGUNDOS MENSAJEROS
Son enzimas señalizadoras que participan en la transducción de la señal
➊ ADENILCICLASA - cAMP - PROTEÍNA QUINASA A (PKA)
Adenilciclasa es una proteína transmembrana, presentando:
2 dominios integrales de membrana (6 hélices a transmembrana)
2 dominios catalíticos (lado citosólico)
 Son capaces de unirse al ATP citosólico y transformarlo en cAMP
Actúa como un segundo mensajero en la transducción señal hormonal
Activa a la proteína quinasa dependiente de cAMP (proteína quinasa A, PKA)

Bioseñalización
PROTEÍNA QUINASA A (PKA) presenta 2 formas:
Formada por:
Forma inactiva  2 subunidades catalíticas idénticas (C)
 2 subunidades reguladoras idénticas (R)
Forman un complejo tetramérico R2C2 catalíticamente inactivo
R2C2 está unido a una proteína de anclaje (AKAP)
Es inactiva debido a que el dominio autoinhibidor de la subunidad R está
unido al sitio del sustrato de la subunidad C

Forma activa
Cuando cAMP se une a la subunidad R un cambio de conformación
Este cambio mueve el dominio autoinhibidor de la subunidad C
Conlleva la disociación del complejo R2C2 2 subunidades C catalíticamente activas
Su papel es catalizar la fosforilación de diversas proteínas diana, activándolas o inhibiéndolas
respuesta celular
Bioseñalización
Bioseñalización
➋ FOSFOLIPASA C – DAG, IP3, Ca2+ - PROTEÍNA QUINASA C (PKC)

Fosfolipasa C (PLC) también denominada Fosfodiesterasa de fosfatidil inositol fosfato
Sustrato: es un derivado del fosfatidilinositol (glicerofosfolípido de membranas):
PIP2 (fosfatidil inositol 4,5 bisfosfato)
Se conocen 2 isoenzimas de la fosfolipasa C implicadas en la transducción de señales: PLC b y PLC g
Se caracterizan por presentan un dominio catalítico y varios dominios de unión:
 Domino PH en el extremo N terminal (± 120 aas): lugar donde se une el sustrato.

 Dominio EF-HAND conecta el dominio PH con el catalítico.
 Dominio C2, contiguo al dominio catalítico, encargado de la unión con las cabezas polares del fosfolípido
permiten posicionar el centro catalítico para acceder al enlace fosfodiester del PIP2
PLC b presenta un dominio carboxi terminal para interaccionar con la proteína Gq (receptores GPCR, a-adrenérgicos)
PLC g posee además dominios SH2 y SH3, lo que le permite interaccionar con los receptores RTKs
Bioseñalización
Fosfatidilinositol (PI) se caracteriza por presentar:
un grupo polar: inositol
 Localizado en el citosol
 Puede sufrir fosforilación-desfosforilación en distintas posiciones diferentes fosfoinosítidos unidos a membrana
Proteínas quinasas – proteínas fosfatasas
[fosfoinosítidos] intracelular se encuentra regulado por diferentes
señales extracelulares, a través de:

Receptores GPCR asociados a la proteína Gq
Receptores tirosin-quinasa (RTKs)
Receptores citoquinas
Bioseñalización
FOSFOLIPASA Cb cataliza la hidrólisis del enlace fosfodiéster de su sustrato (PIP2), que está unido a la membrana, en:
Inositol 1,4,5 trifosfato (IP3), hidrosoluble que difunde al citosol

1,2 diacilglicerol (DAG), lipófilo que se mantiene unido a la membrana
 IP3 y DAG actuán como 2º mensajeros

 IP3, se encarga de abrir los canales del Ca2+ del RE liso
 DAG, activa a la proteína quinasa C (PKC)
fosforilación de diversas proteínas

diana, activándolas o inhibiéndolas
respuesta celular
Bioseñalización
➌ Ca2+- PROTEÍNA QUINASA DEPENDIENTE DEL Ca2+/CALMODULINA (CaM quinasas)
Ca2+ en muchos tipos celulares actúa como segundo mensajero en la transducción de señales
En células no estimuladas, [Ca2+] citosólica es muy baja (< 0,2 mM) debido al papel de las bombas Ca2+- ATPasas, localizadas en:
Membranas de RE liso y mitocondria

Membrana plasmática
En el interior de RE liso y mitocondria, Ca2+ está unido a una proteína, calsecuestrina (capaz de unir hasta 50 iones/molécula)
Ciertos estímulos provocan la salida del Ca2+ del RE liso y mitocondria, aumentando [Ca2+] citosólica hasta 10 mM
Estos cambios en la [Ca2+] intracelular son detectados por proteínas de unión de Ca2+ :
Calmodulina:
 Pequeña proteína, es una subunidad integral: proteína quinasa dependiente de Ca2+/ calmodulina (CaM quinasas)
 Calmodulina posee 4 sitios de unión al Ca2+ de elevada afinidad (Kd entre 0.1 – 1 mM)
 Esto provoca un cambio conformación CaM quinasa activa
fosforilar determinadas enzimas diana,

activándolas o inhibiéndolas
respuesta celular
 Exocitosis en neuronas y células endocrinas

 Contracción muscular
 Reordenamiento del citoesqueleto
3.3.3. TIPOS DE RECEPTORES DE MEMBRANA
Existen varios tipo de receptores de membrana. Destacamos:
Receptores membrana acoplados a la proteína G (GPCR)
Receptores que activan proteínas tirosin-quinasas
3.3.3.1. RECEPTORES DE MEMBRANA ACOPLADOS A LA PROTEÍNA G (GPCR)
Son receptores estrechamente asociados con las proteínas G triméricas

La transducción de señales a través de receptores GPCR está definida por 3
componentes esenciales:
Receptor GPCR
Proteína G trimérica:
forma activa (unida a GTP) RESPUESTA
CELULAR
inactiva (unida a GDP) RÁPIDA
Proteína efectora o canal iónico (membrana plasmática)
Cascada de la transducción señal va desde proteína G activada hasta la

proteína diana que llevará a cabo la respuesta celular (pasos 3 al 6):
Proteínas diana (citosol): RESPUESTA CELULAR RÁPIDA

Activación CREB (núcleo): RESPUESTA CELULAR LENTA
RESPUESTA CELULAR LENTA
Bioseñalización
Genoma humano codifica 350 receptores GCPR para detectar: hormonas, factores crecimientos….., y 500 para el gusto y olfato
GPCR son glicoproteínas transmembrana que presentan varios dominios:
➊ Dominio en el extremo N terminal, extracelular, donde se fijará el ligando
➋ Dominio transmembrana formado por 7 regiones α-helicoidales
➌ Dominio en el extremo C terminal situado en la cara citosólica
Asa C3 y, en algunos casos, asa C2 son muy importantes para la unión con la proteína G
A este grupo pertenece los RECEPTORES ADRENÉRGICOS
ALFA:
Presentan estructuras idénticas
 α1
 α2 Sus secuencias aminoacídicas son completamente diferentes
RECEPTORES ADRENÉRGICOS Dicha secuencia determina:
BETA:
ligando que fija
 b1
 b2 proteína G con la que interactúa
Fuerte implicación en el metabolismo:

 ADRENALINA
 GLUCAGÓN
Bioseñalización
VÍA b-ADRENÉRGICA: VÍA DE SEÑALIZACIÓN DE LA ADENILATO CICLASA
Ligando (1º mensajero): hormona

Adrenalina en músculo esquelético y tejido adiposo
Glucagón en hígado
Receptor GPCR: b-adrenérgico
Proteína Gs
Enzima efectora: adenilato ciclasa cAMP (2º mensajero) activación PKA
Bioseñalización
PKA activada, va a ejercer su acción reguladora en el citosol modificando:

actividad de diversas enzimas por fosforilación (en residuos Ser/Thr específicos)
Fosforilación de las enzimas diana puede provocar:
Un aumento en la actividad catalítica

Una disminución de la actividad catalítica
RESPUESTA CELULAR RÁPIDA
Ejemplo más claro es el control de la degradación del glucógeno hepático
Transducción de la señal mediada por la adenilciclasa en cada paso se produce una
amplificación de la señal hormonal original en varios órdenes de magnitud
Esto explica porque no es necesaria elevadas [hormona] para obtener una

respuesta celular adecuada
Bioseñalización
Una pequeña fracción de PKA activada también es capaz de alterar la transcripción génica:
➌ Translocación de la subunidad C de la PKA activada al núcleo
➍ En el núcleo activa por fosforilación un factor de transcripción,

Proteína de Fijación de CRE (CREB)
➎ CREB fosforilado se fija a :

genes objetivo que contiene la secuencia CRE
CRE o elemento de respuesta cAMP, (cAMP

response element binding protein) hace
referencia a una secuencia de DNA específica de
aquellos genes regulados por el cAMP
un coactivador (CBP/P300), que liga la proteína CREB a la

maquinaría de transcripción basal, permitiendo que CREB
estimule la transcripción de dichos genes.

Bioseñalización
INTERRUPCIÓN DE LA RESPUESTA DEL RECEPTOR b-AGRENÉRGICO y adenilato ciclasa
Cualquier vía de transducción de señal debe ser desconectada cuando el estímulo ha finalizado
Además, estas vías se adaptan a la presencia continuada de la señal, pierden sensibilidad proceso de desensibilización
Principales mecanismos para desconectar los Receptores b-adrenérgicos:
➊ Actividad GTPasa intrínseca de la proteína G
Inactivación de la proteína G no hay activación adenilato ciclasa célula dejará de responder al estímulo
➋ Desaparición del AMP cíclico
La eliminación del segundo mensajero Inactivación de PKA

Paralización cascada de fosforilación de proteínas implicadas célula dejará de responder al estímulo
➌ Activación de proteínas Gi
Inactivación de adenilato ciclasa

No se produce la síntesis cAMP célula dejará de responder al primer estímulo
➍ Bloqueo de la activadad GTPasa de las proteínas Gs ó Gi
Se produce una alteración de la actividad adenilato ciclasa, aumentándola o reduciéndola

Respuesta celular es anómala
➎ Disminución del número de receptores: desensibilización
Desensibilización de los receptores cuando la señal es persistente célula dejará de responder al estímulo
Bioseñalización
➊ Actividad GTPasa intrínseca de la proteína Gs
Ciclo de activación-inactivación de la proteína Gs
 Velocidad de inactivación de Gs depende de la actividad GTPasa intrínseca de la subunidad a

 Esta actividad es muy débil
 Es estimulada fuertemente por proteínas GAP (proteínas activadoras de la actividad GTPasa)
 GAP a su vez, son reguladas por otras proteínas
Bioseñalización
➋ Desaparición del AMP cíclico
cAMP posee un periodo de vida muy corto

Su hidrólisis a 5´-AMP es catalizado por nucleótido cíclico fosfodiesterasa
Insulina activa a esta enzima, y por tanto, promueve el cese de las activaciones producidas por el cAMP
Metilxantinas: teofilina (té) y cafeína (café) inhiben la actividad de la fosfodiesterasa
Estas moléculas incrementan el tiempo de vida medio del cAMP potencian los efectos de la adenilato ciclasa
Activación del catabolismo

Eliminación de sales y líquidos (diuréticos)
Bioseñalización
➌ Activación de proteínas Gi
Versatilidad de proteínas G triméricas permite que diferentes tipos de complejos H-R modulen una misma proteína efectora
Adrenalina Se unen a sus receptores específicos

Activación adenilato ciclasa ⇈ niveles cAMP
glucagón Activan a la misma proteína GS
Promueven la misma respuesta celular
Es proporcional a la [proteína GS activada] por ambas hormonas
 estimuladoras se unen receptores b-adrenérgicos, activando Gs

Hormonas
 inhibidoras se unen a receptores a-adrenérgicos, activando Gi
Subunidad Gbg en ambos tipos de proteínas G es idéntica

Subunidades Ga y sus receptores correspondientes son diferentes
Mecanismo de activación de GSa y Gia es idéntico (Gsa. ATP) y (Gia . ATP)
GSa · GTP y Gia · GTP interactúan de forma diferente con la adenilciclasa:
 GSa · GTP estimula su subunidad catalítica ⇈ niveles cAMP estimula respuesta celular
 Gia · GTP inhibe su subunidad catalítica ⇊ niveles cAMP inhibe respuesta celular
Bioseñalización
➍ Bloqueo de la actividad GTPasa de las proteínas Gs ó Gi
Ciertas toxinas bacterianas cuyas dianas son las proteínas G interfieren en los procesos de bioseñalización del huésped
Toxina del cólera producida por Vibrio cholerae cataliza la reacción de:
 transferencia del grupo ADP-ribosilo del NAD+ intracelular a subunidad Gsα de una proteína Gs
Bloquea su actividad GTPasa intrínseca Gs permanecerá activa continua activación adenilciclasa
[cAMP] crónicamente elevada PKA crónicamente activada, fosforilando

 Canal de Cl-
células epiteliales del intestino
 Intercambiador de Na+- H+
Salida NaCl provoca una salida masiva agua a través del intestino (respuesta al desequilibrio osmótico)
Deshidratación grave y pérdida de electrólitos muerte celular y del individuo infectado
Bioseñalización
Bordetella pertussis infecta el tracto respiratorio, destruyendo las células ciliadas epiteliales implicadas en la eliminación del moco
Provoca la enfermedad de la tos ferina
Genera la Toxina de pertussis, catalizada transferencia del grupo ADP-ribosilo del NAD+ intracelular a subunidad Gai
Bloquea su actividad GTPasa intrínseca Gi permanecerá activa continua inhibición adenilciclasa
[cAMP] crónicamente baja PKA crónicamente inactiva
No hay acción ciliar, es necesario una tos muy fuerte para eliminar el moco
Originando la tos típica de esta enfermedad, que ayuda a propagar la enfermedad
Bioseñalización
➎ Disminución del número de receptores: desensibilización

Cuando un receptor acoplado a una GS expuesto a la estimulación hormonal puede sufrir:
DESENSIBILIZACIÓN HOMÓLOGA
 Cuando el receptor b-adrenérgico está unido a su ligando (ej: adrenalina)
 La proteína, receptor b-adrenérgico quinasa (b-ARK, o tb conocido como GRK2) interactúa con las subunidades bg de la GS
 Esta interacción le va a permitir fosforilar varios residuos Ser del extremo C-terminal del receptor b-adrenérgico
 Fosforilación del receptor crea un lugar de unión para la proteína, b-arrestina (b-arr), lo que provoca:
 No interacción receptor-proteína GS
 Unión de 2 proteínas al complejo barr-receptor:
AP-2 y clatrina
 Internalización del receptor por endocitosis (vesículas endocíticas)
 En este estado son receptores inactivos
 Serán desfosforilados y devueltos a la membrana plasmática (activos),
RESENSIBILIZACIÓN del sistema para la adrenalina

Bioseñalización
VÍA a-ADRENÉRGICA: VÍA DE SEÑALIZACIÓN A TRAVÉS DE LA FOSFOLIPASA C (isoforma b)

Ligando (1º mensajero): hormona (adrenalina en el tejido hepático)
Receptor GPCR: a-adrenérgico
Proteína Gq
Proteína efectora: fosfolipasa Cb (PIP2) DAG, IP3 (2º mensajeros) activación PKC y la abertura de los canales Ca2+
Esta ruta tb se denomina ruta de los fosfoinosítidos o del fosfatidil inositol
Las señales del fosfoinosítido son limitadas por:

hidrólisis del GTP en Gqa (paso 8)
inositol polifosfato 5-fosfatasa, que actúa sobre el IP3 para generar IP2 (paso 9)
Bioseñalización
Activación de la proteína quinasa C depende la interacción entre los dos segundos mensajeros de esta vía (DAG e IP3):
En ausencia de estimulo hormonal, PKC se encuentra en el citosol sin actividad catalítica.
IP3 ⇈[Ca2+] citosólico fijación de PKC inactiva a la membrana plasmática PKC activada por DAG
PKC activada
Ca2+-calmodulina (CaM quinasa activada)
FOSFORILAN
proteínas diana (modulan su actividad) factores de transcripción
Proteínas citoesqueleto (modificando expresión génica)
RESPUESTA CELULAR RÁPIDA RESPUESTA CELULAR LENTA
IP3 se une al canal del Ca2+ localizado en membrana RE liso

Este canal es una gran proteína formada por 4 subunidades idénticas
Cada subunidad posee un sitio de unión al IP3
⇈[Ca2+] citosólico es momentáneo

Bombas Ca2+-ATPasas, lo devuelven RE liso o al exterior
Las reservas de Ca2+ del RE liso se pueden agotar

Para recargarlo es necesario que intervenga un canal Ca2+ (TRP canal) presente en la
membrana plasmática
Desaparición Ca2+ en el RE liso conduce a un cambio conformacional del IP3-canal Ca2+,

que se une al TRP canal abriéndolo
Bioseñalización
3.3.5. RECEPTORES QUE ACTIVAN TIROSIN-QUINASAS
Hay 2 amplias categorías de receptores que activan proteínas tirosin-quinasas:
Receptores tirosin-quinasas (RTK)

La actividad tirosin-quinasa forma parte intrínseca de la cadena polipeptídica del receptor
Viene codificada por el mismo gen
Receptores de citoquinas
Receptor y la tirosin-quinasa son dos moléculas proteicas diferentes
Codificadas por genes diferentes
La enzima tirosin-quinasa (JAK, Janus kinase) es citosólica y está íntimamente unida al receptor
Bioseñalización
3.3.5.1. RECEPTORES TIROSINA QUINASA (RTKs)
ESTRUCTURA MOLECULAR: presentan tres regiones o dominios bien diferenciados,

Un dominio extracelular (N-terminal) con un sitio de unión al ligando
Un dominio a-transmembrana
Segmento citosólico que incluye un dominio con actividad tirosina quinasa
Mayoría de estos receptores son monoméricos (Ej: EGF)

Otros son dímeros (Ej: receptor de insulina)
En ausencia de su ligando, permanecen unidos por puentes disulfuro
TIPOS DE LIGANDOS:
Péptidos solubles o unidos a membrana
Hormonas proteicas:
 Hígado
Insulina Regulan expresión de genes que controlan el metabolismo de glúcidos y lípidos  Músculo
 Tejido adiposo
Factores de crecimiento para tipos celulares específicos:
Factor crecimiento neuronal (NGF)
Factor de crecimiento derivado de las plaquetas (PDGF)
Factor de crecimiento de los fibroblastos (FGF)
Proliferación y diferenciación de tipos celulares específicos
Factor de crecimiento epidérmico (EGF)
Neurregulinas 1 y 2
Factor de crecimiento derivado de tumores (TGF-a)
Bioseñalización
ACTIVACIÓN DEL RECEPTOR RTK:
RTK no estimulado (en reposo) posee una actividad tirosina quinasa muy baja debido a:
Su labio de activación no está fosforilado

Y presenta una conformación que bloquea la actividad tirosina quinasa
- OH - OH
- OH - OH
RTK unido al ligando causa un cambio de conformación, promoviendo:
La dimerización de los dominios extracelulares del RTK

Esto conlleva a que sus segmentos transmembrana y dominios citosólicos se acerquen
Favorece que la actividad tirosina quinasa de una subunidad fosforile un residuo Tyr del
labio activación de la otra subunidad
- OH - OH
- OH - OH
Cambio conformación en el labio activación que desbloquea actividad quinasa

Disminuye la Km para el ATP y sustrato (otras proteínas)
Permite la fosforilación de:
 residuos Tyr del dominio citosólico del receptor
 Proteínas diana
TRANSDUCCIÓN SEÑAL CORRIENTE ABAJO

Bioseñalización
RTK activado
EXTERIOR CELULAR
VÍA NUCLEAR VÍA CITOSÓLICA

dependiente Ras-MAP quinasa independiente Ras-MAP quinasa
Transducción señal corriente abajo desde el receptor activado
GRB2/Sos PLCg
PI 3-quinasa
Ras PIP2
DAG IP3 PIP3
Raf
[Ca2+] cit PDK1/PDK2
MEK
CaM-calmodulina
PKC Otras quinasas PKB
MAP-quinasa
Regulación de proteínas
Control del metabolismo celular
CITOSOL RESPUESTA CELULAR RÁPIDA
NÚCLEO
MAP-quinasa
Control de la proliferación celular

Regulación de genes RESPUESTA CELULAR LENTA
Bioseñalización
VÍA DEPENDIENTE DE Ras-MAP quinasa:
Receptores RTK
Activan la vía dependiente de la proteínas Ras-MAP quinasa
Características de la proteína Ras
Es una pequeña proteína G monomérica

Está unida covalentemente a la membrana plasmática a través de un lípido
Se encuentra entre dos formas alternas:
 Forma activa, con el GTP unido (Ras-GTP)

Igual que la subunidad Ga de las proteínas G triméricas
 Forma inactiva, con el GDP unido (Ras-GDP)
Ras no está unida directamente al receptor de membrana

Los dominios que se unen al GTP poseen una estructura similar de la subunidad Ga
Presenta una actividad GTPasa intrínseca mucho más baja que Ga
 Velocidad hidrólisis GTP es mucho más lenta que en la subunidad Ga
 Tiempo de vida promedio del GTP unido a Ras es ≃ 1 min en comparación con el complejo Ga-GTP
Activación-desactivación de la proteína Ras
Activación Ras está acelerada por los factores de intercambio de guanina nucleótido (GEFs) (Ej: proteína Sos)
GEFs se une al complejo Ras-GDP disociación del GDP unido
GTPs se une espontáneamente a la proteína Ras “vacía” liberando GEFs y Ras-GTP
Hidrólisis posterior del GTP unido a GDP provoca la desactivación Ras

Las proteínas activadoras de la actividad GTPasa intrínseca de Ras (GAP) aceleran la hidrólisis del GTP
Bioseñalización
Receptores RTK GRB2

Activan Ras Vínculo entre receptor activado - Ras
Receptores citoquinas Sos
CARACTERÍSTICAS DE LAS PROTEÍNAS: GRB2 y Sos
GRB2 es una proteína adaptadora, sin actividad enzimática

 Sirve como plataforma de conexión entre el receptor activado – Sos
 Posee 1 dominio SH2, que:
 Se une a un residuo fosfoTyr específico del receptor activado
 Porta 2 dominios SH3, que:
 Se unen a la proteína Sos mediante secuencias ricas en Pro
 Secuencias de Pro permiten extensos contactos con el dominio SH3
Sos es una proteína de intercambio de guanina nucleótido (GEF)

 Cataliza la conversión Ras-GDP (inactiva) a Ras-GTP (activa)
Formación del complejo receptor activado – GRB2 – Sos (cara citosólica memb. plasmática)
Depende de la habilidad GRB2 de unir simultáneamente al receptor activado y Sos

Unión de Sos a Ras-GDP provoca cambios conformacionales en el interruptor I y II
 Liberando el GDP y permitiendo la unión del GTP
Unión del GTP induce otro cambio de conformación en los interruptores I y II:
 Liberando a Sos y permite Ras-GTP

interaccione con la siguiente proteína en la
vía Ras/MAP quinasa
Bioseñalización
Transducción señales corriente abajo de Ras

cascada de activación muy conservada de 3 proteínas quinasas
Ras-GTP Raf activada MEK activada MAP quinasa activada
En células no estimuladas, la proteína Raf se encuentra:

Fosforilada
Unida proteína 14-3-3 dimérica, donde :
Raf inactiva
 Uno de los monómeros está unido a la fofoserina-259 del dominio regulador N-terminal de proteína Raf
 Otro de los monómeros está unido a la fosfoserina-621 en el dominio quinasa C-terminal de proteína Raf
Ras-GTP activa se une al dominio regulador N-terminal de proteína Raf, lo que provoca:
Desfosforilación de un residuo de Ser que mantiene unidas las proteínas Raf y 14-3-3
Fosforilación de otros residuos en la proteína Raf
Activación del dominio quinasa de Raf
Desactivación de Ras-GTP a Ras-GDP conlleva a :

Liberación del complejo Raf activa-proteína 14-3-3
Raf activa fosforila a la proteína quinasa, MEK,
activándola
MEK fosforila de forma específica una treonina-183 y

tirosina-185 en el labio de activación de la proteína MAP
quinasa, activándola
MAP es una quinasa que fosforila residuos de Ser y Thr de
Conocida tb
diversos factores de transcripción respuesta
como proteína
celular lenta
ERK
Bioseñalización
Bioseñalización
VÍA INDEPENDIENTE DE Ras-MAP quinasa: Activación de las proteínas quinasas: PKC, PKB y PDK
Receptores RTK
Activan vía señalización que involucra a fosfolípidos fosforilados
Derivados fosfatidil-inositol
Lípidos de membrana = fosfoinosítidos
Activan vía señalización IP3/DAG a través de la fosfolipasa (PLCg)
PLCg posee dominios SH2 que se unen a residuos fosfotirosinas del receptor activado
Esto permite situar a la PLCg muy cerca de su sustrato unido a la membrana, fosfatidil 4,5-bifosfato (PIP2)
Actividad tirosin-quinasa del receptor activado se encarga a su vez de activar a la PLCg
PLCg activada se encarga hidrhidroliza el PIP2, generando: IP3 y DAG
⇈ [Ca2+] cit
Activa PKC
Respuesta celular rápida

Respuesta celular lenta
Desempeñan papeles centrales en el crecimiento y metabolismo celular
Bioseñalización
Receptores RTK
activan vía señalización de fosfoinosítidos, reclutando a la enzima fosfatidilinositol-3-fosfato quinasa (PI-3 quinasa, PI-3K)
PI-3K es una proteína heterodimérica, portadora de:

 1 subunidad catalítica
 1 subunidad reguladora, portadora de:
 1 dominio SH2
permiten su unión con otras proteínas
 1 dominio SH3
Interacción PI-3K + receptor RTK activado
cambios en la conformación de su subunidad reguladora
activando la subunidad catalítica de PI-3K
 Se desplaza cerca de la membrana plasmática

 Ahora puede acceder a uno de sus 2 sustratos,
 Estos serán fosforilados en la posición 3 del inositol
 Estos actúan como transductores señales corriente abajo
Muchas proteínas quinasas se activan al unirse a uno de estos dos fosfoinositidos
Recordar que estos compuestos están siempre unidos a la membrana plasmática
Entre ellas destacamos, proteína quinasa (PKB), también conocida como Aka ó Akt
Bioseñalización
PKB, es una proteína Ser/Thr quinasa citosólica, portadora de:

Dominio quinasa
Dominio regulador PH, muy conservado, que se une con una alta afinidad a sus dos posibles sustratos:
 Fosfatidilinositol 3, 4- bifosfato
 Fosfatidilinositol 3, 4, 5- trifosfato (PIP3)
Ambos compuestos lipídicos están en la membrana plasmática

Su función es ahora reclutar PKB hacia la membrana
En células no estimuladas :
[PI-3 fosfatos] celular es muy bajo
PKB está en el citosol en forma inactiva
En células estimuladas :
[PI-3 fosfatos] celular aumenta considerablemente
PKB se acopla a estos compuestos a través de su dominio PH
La unión PKB – PI-3K conlleva a:
 Reclutamiento de esta proteína quinasa hacia la membrana plasmática

Activación parcial PKB
 Liberación de la inhibición del sitio catalítico por el dominio PH
Máxima activación PKB depende, además, del reclutamiento de otras 2 proteínas quinasas
 PDK1
 PDK2
Bioseñalización
PDK1 es reclutada a la membrana plasmática por su unión al PI-3 fosfato a través de su dominio PH
 Permanecen asociadas a la membrana plasmática y difunden por ella

PKB unida PI-3- fosfato
 Esto les permiten acercarse lo suficiente, asegurando que:
PDK1 unida PI-3-fosfato
 PDK1 fosforile a PKB sobre un residuo específico de Thr en su labio de activación
 PDK2 fosforila un segundo residuo de Ser en el labio de activación de PKB
Activación total PKB
Tarda entre 5 – 10 min

Efectos pueden durar hasta varias horas
PKB activada se disocia de la membrana plasmática al citosol, donde:
Fosforilan e inactivan proteínas proapoptóticas citosólicas como la Bad (respuesta celular rápida)
Fosforila al factor transcripción FOXO3, Evita muerte celular
 reduciendo su capacidad de inducir la expresión de varios genes proapoptóticos (respuesta celular lenta)
Fosforilan (activando o inactivando) ciertas proteínas implicadas en el control del metabolismo celular (respuesta celular rápida)
Bioseñalización
VÍA INDEPENDIENTE DE Ras-MAP quinasa: Inactivación de la PI-3K
Fosforilación de la PI-3K es reversible
Su inactivación por desfosforilación es llevada a cabo por la fosfatasa, PTEN
Es una fosfatasa con una especificidad muy amplia

Es capaz de desfosforilar residuos Ser, Thr y Tyr
Se especula con que su principal función es la desfosforilación del grupo 3P de la PI-3K
Una sobreexpresión fosfatasa PTEN en células de mamíferos provoca su apoptosis
⇊ [PIP3] No hay Activación PKB Efecto des-apoptótico promovido por PKB no se produce
Apoptosis y muerte celular
En ciertos cánceres humanos, se ha observado una delección del gen para la fosfatasa PTEN
Provocando un crecimiento descontrolado de las células cancerígenas
⇈ [PIP3] ⇈ Activación PKB
Aumenta el efecto des-apoptótico promovido por PKB
Estimula el avance del ciclo celular

Incrementa la velocidad de proliferación
Bioseñalización
3.3.5.2. RECEPTORES CITOQUINAS
Los ligandos de las CITOQUINAS son proteínas que controlan el crecimiento y diferenciación de tipos celulares específicos:
Prolactina, diferenciación de células epiteliales de glándula mamaria en células en acino productoras de leche
Interferones a, defensas frente virus
Interleucinas:
Interleucin-2, proliferación y formación de linfocitos T en la médula ósea
Interleucin-4, producción de anticuerpos en los linfocitos B
G-CSF, producción y diferenciación de granulocitos (inactivan bacterias y otros patógenos)
Eritropoyetina (EPO), regulan diferenciación, proliferación ó apoptosis de los eritrocitos
, y sus JAK unidos apenas tiene actividad q

Receptores de citoquinas se caracterizan por:
No tienen actividad proteína tirosina-quinasa intrínseca
Presentan 3 regiones o dominios bien diferenciados.
1 dominio extracelular (N-terminal) encargado de unirse al ligando específico
1 dominio a-transmembrana
1 dominio citoplasmático
En ausencia del ligando, el receptor aparece en forma homodímero
Su dominio citoplasmático está unido a 1 o varias proteína tirosinas quinasas citosólica (JAK)
Estas proteínas JAKs apenas tienen actividad quinasa
Son activadores o inhibidores de la transcripción génica RESPUESTA CELULAR LENTA

Bioseñalización
VÍA SEÑALIZACIÓN RECEPTORES CITOQUINAS JAK-STAT: VÍA DE SEÑALIZACIÓN A TRAVÉS DE ERITROPOYETINA
Unión del ligando provoca un cambio de conformación que mantienen juntos a los dominios de las quinasas JAK asociadas
JAK asociadas se fosforilan entre ellas en un residuo de Tyr del labio de activación
Esta fosforilación conduce a un cambio de conformación que incrementa la afinidad por el ATP (activación de JAK)
JAK activadas, fosforilan en primer lugar varios residuos de tirosina en el dominio citosólico del receptor
Varios de estos residuos fosfotirosina servirán como lugar de unión para proteínas portadoras de dominios SH2
Entre estas proteínas, destacamos los factores de transcripción, STAT
Bioseñalización
Todas las proteínas STAT contienen:

Dominio de unión N-terminal al DNA
Dominio SH2 que se une a 1 o más fosfotirosinas específicas del dominio citosólico del receptor
Domino C-terminal que porta un dominio de tirosina crítico
Cuando una STAT monomérica se une a su receptor, su tirosina C-terminal es fosforilada por JAK
STAT fosforilado pierde afinidad y se disocia espontáneamente del receptor
Las tirosinas fosforiladas del receptor que han quedado libres sirven para unir nuevos monómeros de STAT
STAT fosforiladas y libres formar dímeros entre ellas: dominio SH2 de cada una de ellas se une a la fosfotirosina del otro
La dimerización de STAT provoca un cambio conformacional exponiendo la señal de localización nuclear (SLN)
Dímeros STAT núcleo, y se unen a potenciadores específicos (secuencias reguladoras del DNA)
Estos potenciadores regulan la transcripción de genes diana
STAT5 + receptor EPO (células progenitoras eritroides) induce la transcripción del gen:
BcL-XL evita la apoptosis y facilita la proliferación y diferenciación a eritrocitos
STAT5 + receptor prolactina (células glándulas mamarias) induce la transcripción de los genes
que codifican ciertas proteínas de la leche
Bioseñalización
VÍA SEÑALIZACIÓN RECEPTORES CITOQUINAS JAK-STAT: INTERRUPCIÓN DE LA RESPUESTA DEL RECEPTOR EPO
Hay dos mecanismos para finalizar la transducción de la señal desde el receptor de la eritropoyetina (EpoR):
REGULACIÓN A CORTO PLAZO llevada a cabo por fosfotirosinas-fosfatasas
 Esta proteínas suprimen la actividad tirosina quinasa
 SPH1, fosfatasa, disminuye la señal de varios receptores de citoquinas
 SPH1 se une al receptor de citoquinas e inactiva la proteína JAK asociada
 SPH1 posee:
 un dominio catalítico fosfatasa
 2 dominios SH2
 En una célula en reposo, sin estimulo por una citoquina
 Uno de sus dominios SH2 de la SPH1 está unido físicamente al dominio fosfatasa, inactivándolo
 En una célula estimulada por una citoquina
 Dominio SH2 bloqueado se une a un residuo fosfotirosina específico del receptor activado
 Esta unión provoca un cambio conformacional que:
 Pone de manifiesto el dominio fosfatasa de SPH1
 Este se coloca de forma adyacente al residuo fosfotirosina del labio de activación de JAK
 Eliminando su grupo fosfato, e inactivando a JAK
 JAK ya no puede fosforilar ni al receptor y a sus sustratos (STAT…)

Bioseñalización
REGULACIÓN A LARGO PLAZO llevada a cabo por un mecanismo de retroalimentación negativa
 Interviene una proteína SOCS
 Finalizan la señal de transducción por citoquinas

 Estos reguladores negativos actúan de 2 modos:
 Primeramente,
 Domino SH2 de varias proteínas SOCS se une a la fosfotirosinas del receptor activado
 Esto evita la unión de otras proteínas de señalización con dominios SH2 (ej: STAT..)
 Inhibe de forma competitiva la señalización del receptor
 Una proteína SOCS, SOCS-1 se une a una fosfotirosina en el labio de activación de JAK quinasa, inhibiéndola
 En segundo lugar,
 Todas las proteínas SOCS poseen un dominio especial, caja SOCS
 Caja SOCS favorece el proceso de ubiquitinazación de la proteína JAK quinasa
 Finalmente, JAK será degrada en el proteasoma
 Apaga permanentemente todas las vías de señalización por JAK

Bioseñalización
Receptores citoquinas activados también pueden poner en marcha la vía dependiente Ras-MAP quinasa, y por tanto, regular la expresión génica

Tema 2. REGULACIÓN METABÓLICA Y HORMONAS IMPLICADAS
1. Regulación hormonal
2. Hormonas pancreáticas
2.1. Síntesis, secreción y papel de la insulina
2.2. Síntesis, secreción y papel del glucagón

3. Hormonas de la médula adrenal: adrenalina
4. Hormonas tiroideas
5. Hormonas de la corteza adrenal

Regulación metabólica y hormonas implicadas
1. REGULACIÓN HORMONAL
No existe en procariotas ni en organismos eucariotas inferiores
Es realmente un sistema de integración metabólica
En mamíferos, esta integración metabólica obedece de forma coordinada al sistema nervioso y hormonal:
Sistema nervioso, forma una red tupida que se extiende por todo el organismo
Coordinar todo el metabolismo en respuesta a estímulos externos o internos
Generando impulsos electroquímicos del SNC que estimulan la secreción hormonal de las glándulas endocrinas
sangre transducción de señales

Hormonas células diana regulación sobre determinadas rutas metabólicas
SISTEMA ENDOCRINO HUMANO secreta una gran variedad de hormonas que le permiten al organismo:
Mantener la homeostasis: niveles de glucemia (70 – 110 mg/dl) insulina – glucagón
Responder a estímulos externos: preparación para la “huida” adrenalina - noradrenalina
Controlar diversos procesos fisiológicos, como: diferenciación sexual, ciclo menstrual y embarazo hormonas sexuales
Hormonas actúan sobre algunas de las enzimas reguladoras de determinadas vías metabólicas
Catalizan etapas irreversibles

Cinéticas de tipo sigmoidal (cooperativismo) y muchas de ellas son alostéricas
Algunas están controladas mediante mecanismos de modulación covalente
La ACTUACIÓN HORMONAL puede generar 2 tipos de respuesta en la célula:
RESPUESTA LENTA NUCLEAR

La hormona provoca cambios en la expresión de ciertos genes
Conlleva: un aumento o una represión de la síntesis de una proteína ⇈ o ⇊ actividad

Pueden ser: factores de crecimiento, hormonas esteroideas, tiroideas y retinoides
RESPUESTA RÁPIDA CITOSÓLICA

Hormona modula la actividad de ciertas proteínas (modificación covalente)
A este grupo pertenecen hormonas polipeptídicas y catecolaminas
Principales hormonas implicadas en la regulación metabólica
Hormonas pancréaticas (naturaleza polipeptídica): insulina y glucagón
Derivadas de aminoácidos: adrenalina, triiodotironina (T3 y T4)
Esteroideas: glucocorticoides y mineralocorticoides

2. HORMONAS PANCRÉTICAS
PÁNCREAS, es un órgano glandular muy grande

Mayor parte del páncreas se corresponde con su porción exocrina:
Productora de enzimas digestivas: tripsina, quimiotripsina, RNasa A, a-amilasa, fosfolipasa A2
duodeno (intestino delgado) para participar en la digestión
1 – 2% se corresponden con islotes de Langerhans (porción endocrina): diferentes tipos celulares especializados en producir:
Células A, (a, 25%) : glucagón
Células B (b, 60%): insulina
Células D, (d): somatostatina
Células PP ó F: polipéptido pancreático
Células G: gastrina
Hormonas son liberadas capilares sanguíneos vena porta hígado y resto de tejidos
Función: mantener la homeostasis energética en la célula
Hormonas de los islotes se influyen mutuamente:
Insulina suprime la secreción de glucagón

Glucagón estimula secreción de insulina y somatostatina
Somatostatina suprime la secreción de las otras tres
Cada una de ellas es capaz de suprimir su propia secreción
(acción autocrina)
2.1. INSULINA
1
2.1.1. Estructura molecular
2 cadenas polipeptídicas:
Cadena A de 21 aas
20 10
Cadena B de 30 aas
1
Unidas por 3 puentes disulfuro:
21
2 intercatenarios
1 intracatenario
10
30
2.1.2. Síntesis y secreción
Gen insulina: brazo corto del cromosoma 11 de humanos

Se sintetizada como PREPROINSULINA
1 cadena polipeptídica de 109 aas, con 4 secciones diferentes:
Péptido señal : 23 aas
Cadena B
Péptido C
Cadena A
Preproinsulina pasa al RE rugoso transformaciones posttraducionales:
➊ Una peptidasa corta el péptido señal generando, PROINSULINA

➋ Se pliega en única cadena polipeptídica de 86 aas, con 3 secciones:
Cadena A, que se extiende: Gly (posición 66) – Asn (posición 86)
Cadena B, que se extiende: Phe (posición 1) - Thr (posición 30)
 Ambas cadenas están unidas por los 3 puentes disulfuro
Péptido C, que se extiende: Arg (posición 31) - Arg (posición 65)
almacena
REr ap. Golgi, conteniendo también diversas proteasas
en microvesículas
gránulos de secreción
citosol
PROINSULINA sufre una escisión proteolítica, liberando:
Insulina activa, formada por 2 cadenas: A y B unidas por 3 puentes S-S
Péptido C
Este paso es promovido por una serie de estímulos externos sobre la célula b pancreática
Secreción requiere :
ATP
dependiente de la [Ca2+] citosólica
Gránulos de secreción se liberan su contenido al torrente sanguíneo por exocitosis
No todos los gránulos son liberados, una parte se degradan en los lisosomas
2.1.3. Control de la secreción
Secreción de insulina es activada y regulada por la interacción de:
ACTIVADORES PRIMARIOS, se corresponden con los siguientes sustratos:
AAs: especialmente Arg, Lys, Leu (dietas ricas en proteínas)
Ácidos grasos libres y cuerpos cetónicos (dietas ricas en grasas)

Su metabolización provoca un ⇈ [ATP] en cs b pancreás
Otros monosacáridos: manosa y fructosa
GLUCOSA
 Es el estímulo más importante para la secreción de insulina
 Páncreas secreta insulina ante el ⇈ de la glucemia (señal de que hay abundancia de combustible metabólico)
 Valor de glucemia normal: [glucosa] = 3.6 – 5.8 mM (70 - 110 mg/dl)
 Cs b responden a [glucosa] superiores a 5.5 mM
 Glucosa entra en las cs b mediante un transporte pasivo facilitado, transportador GLUT2
 Metabolización de la glucosa va a generar la señal para liberar la insulina al torrente sanguíneo
ACTIVADORES SECUNDARIOS:
SISTEMA NERVIOSO AUTÓNOMO: estimulación b-adrenérgica (acetilcolina)
HORMONAS PANCREÁTICAS: glucagón
HORMONAS GASTROINTESTINALES:
 Colecistoquinina
 Secretina
 Gastrina Glucosa estimula la secreción de estas hormonas, explicando:

 GLP-1 (glucagon like-péptido)
administración oral de glucosa produce una estimulación de
 GIP (Polipéptido inhibidor gástrico)
secreción de insulina más efectiva que de forma intravenosa
Después de una comida copiosa un rápido ⇈ [glucosa en sangre] , provocando
⇈ secreción de insulina
⇊ secreción de glucagón
El ⇈ [glucosa en sangre] entra por GLUT2 a las células b pancreáticas, donde:
Glucosa G6P, proceso catalizado por la glucoquinasa (“sensor” de la glucosa en las células b).
G6P no es convertida en glucógeno
Baja actividad de la ruta pentosas fosfato
Sin actividad de la lactato deshidrogenasa,
Toda G6P que entra pasa a la glucólisis hasta piruvato acetilCoA ciclo Krebs ⇈ [ATP]
Síntesis ATP (fosforilación oxidativa) en la célula b está relacionada con la [glucosa] disponible
⇈ [ATP] en la célula b provoca:
Cierren canales K+ regulados por ATP de la membrana plasmática
Se reduce la salida de K+ DESPOLARIZACIÓN membrana
abertura de los canales de Ca2+ regulados por voltaje
⇈ [Ca2+] citosólico
liberación de los gránulos con insulina activa por exocitosis

El incremento en la secreción insulina en respuesta al aumento [glucosa en sangre] es bifásica:
La liberación insulina provoca un ⇊ [glucosa en sangre], ya que, estimula la captación de glucosa por tejidos sensibles a la insulina
Las células b detectan la caída de [glucosa en sangre], junto con una ⇊ actividad glucoquinasa liberación insulina decae o cesa
Esta regulación por retroalimentación mantiene la [glucosa] ± constante durante los periodos de ayuno – ingesta
Vida media insulina: 3 a 5 min
Se secretan 30 unidades de insulina al día en adultos sanos
Insulina es catabolizada principalmente por insulinasas en hígado, riñón y placenta

2.1.4. Transducción de la señal a través de la insulina
2.1.4.1. Estructura del receptor de insulina (IR)
Es una glucoproteína con actividad Tyr-quinasa intrínseca (RTKs)
IR al unirse a la insulina se autoautofosforila en residuos de Tyr
IR es un heterotetrámero compuesto por 4 subunidades unidas por puentes S-S:
2 subunidades α
Localizadas en la región extracelular
Contienen sitios de unión a la insulina
dos subunidades β
Portan una porción extracelular, una a-transmembranal, y una intracelular
En la porción intracelular se sitúa el dominio con actividad de Tyr-quinasa, y consta de 3 regiones bien diferenciadas:
 dominio catalítico de Tyr-quinasa, en la región juxtamembranal, portando 1 sitio de unión a ATP y 2 sitios de
fosforilación: Tyr965 y Tyr972

 Asa de activación en donde se encuentran las Tyr1158, Tyr1162 y Tyr1163, autofosforilación de estos tres residuos
aumenta de 10 a 20 veces la actividad de quinasa del receptor

 extremo carboxilo terminal con 2 sitios de fosforilación: Tyr1328 y Tyr1334 , no implicadas en la señalización del
receptor
En células no estimuladas, subunidades α ejercen un papel regulador sobre las subunidades β, inhibiendo la capacidad del
receptor para autofosforilarse
En células estimuladas por la unión insulina al receptor, las subunidades α sufren cambios conformacionales que permiten que las
subunidades β se activen y sean capaces de autofosforilarse en residuos de Tyr

2.1.4.2. TRANSDUCCIÓN DE LA SEÑAL INDUCIDA POR INSULINA
VÍA NUCLEAR DEPENDIENTE DE Ras-MAP quinasa
Cuando el receptor IR activado interacciona con dos tipos de proteínas:
 Shc B
A
 IRS, contienen:
 1 dominio PH, alta afinidad
a los fosfoinositoles
 1 dominio PTB de unión a
fosfotirosinas
 IRS-1, implicada en el metabolismo glucídico
 IRS-1 fosforilado (activo), se convierten en sitios de
unión y activación de proteínas con dominios SH2
RESPUESTA LENTA (nuclear)
Activa la síntesis de proteínas en general y en concreto de:
 Proteína fosfatasa 1 (PP-1)
 Enzimas glucólisis, lipogénesis y glucogenogénesis
Inhibe la síntesis de PEPCK y glucogenólisis

VÍA INDEPENDIENTE DE Ras-MAP quinasa: Activación proteína quinasa: PKB
Principal mecanismo por el cual la insulina regula el metabolismo glucídico y lipídico
Transducción de señales: se inicia cuando el receptor IR activado (fosforilado) interacciona con IRS-1 IRS-1 (fosforilado)
Esto provoca la activación de la enzima PI-3K PDK1 + PDK2 activación PKB regular por fosforilación otras enzimas, como:
 Glucógeno sintasa 3 quinasa (GSK3):
 En su forma activa (desfosforilada, GSK3-OH) se encarga de inactivar por fosforilación glucógeno sintasa: GSa GSb
⇊ síntesis de glucógeno
 Su forma inactiva (fosforilada, GSK3-P), no ocurre la inactivación de la glucógeno sintasa
⇈ síntesis de glucógeno
 Proteína fosfatasa 1 (PP-1), activándola,
 Se encargará de desfosforilar a enzimas como:
 GS, activando aún más la síntesis de glucógeno
 Glucogeno fosforilasa (GP)

forma activa a inactiva
 Lipasa sensible a hormonas (HSL)
inhibiendo la degradación de glucógeno y TAGs
 Fosfodiesterasa dependiente de AMPc (PDE), que pasa AMPc a AMP, y por tanto, elimina las señales promovidas por PKA
En músculo y tejido adiposo, la insulina usando la vía PI3K/ PDK1/PKB, también promueve:
 La translocación del transportador de glucosa, GLUT4, de compartimentos intracelulares a la membrana plasmática.
GLUT 4
2.1.5. Efectos metabólicos de la insulina

Hígado
Tejidos sensibles a la insulina (diana) son Tejido muscular: esquelético, liso y cardíaco
Tejido adiposo
En general, podemos decir que es una hormona ANABÓLICA y ANTICATABÓLICA
Efecto global: disminución [glucosa sanguínea] actuando sobre todo en el metabolismo glucídico y lipídico
Los efectos de la insulina puede ser rápidos (vía citosólica) o lentos (vía nuclear)
⇈ captación de glucosa a través del transportador GLUT2

vía glucolítica ⇈ actividad GK, PFK-1, PK
Estimula la síntesis de las 3 enzimas anteriores
vía ruta pentosas fosfato (G6PDH)
Hepatocytes have glucokinase (hexokinase IV)
AUMENTA actividad de
– Has higher Km than other hexokinases
PDH
• 10 mM vs. 4 mM ⇈ actividad ACC y FFA
• So, glucose-6-phosphate is not made ⇈ producción TAGs
⇈ ATP-citrato liasa y enzima málica
when [glucose low] (other tissues
lipogénesis ⇈ colesterol
need it) ⇈ hidroxi-metil-glutaril reductasa
⇈ Lipoproteínas (VLDL)
– Not inhibited by glucose-6-phosphate
Estímula síntesis enzimas lipogénesis
• So g6p can be made continually
⇈ actividad GS y PP-1
vía glucogenogénica ⇈ síntesis glucógeno
Estimula síntesis de PP-1
DISMINUYE actividad de
⇊ actividad GF
⇊ degradación glucógeno
vía glucogenolítica ⇈ actividad PP-1
Estimula síntesis de PP-1
⇊ actividad FBPasa-1
vía gluconeogénica
Inhibe síntesis de PEPCK y G6P-asa
vía cetogénica
(glucoquinasa)
⇈ captación de glucosa por translocación GLUT4 a la membrana

actividad de la vía glucolítica
⇈ actividad PFK-1, PK
actividad de la vía glucogenogénica
AUMENTA ⇈ actividad GS y PP-1 ⇈ síntesis glucógeno
actividad de la PDH
la captación y utilización de cuerpos cetónicos
Actividad de la bomba de Na+/K+, favoreciendo la entrada de K+ en la célula
Estimula los canales de Ca2+ y Pi
Favorece la entrada de AAs estimulando síntesis de proteínas

Inhibe degradación proteica
captación de glucosa por translocación GLUT4 a la membrana

actividad de la vía ruta pentosas fosfato: G6PDH para generar NADPH
AUMENTA
la degradación glucosa como fuente de glicerol fosfato
la lipogénesis (síntesis TAGs)

⇈ captación de ácidos grasos
⇈ actividad lipoproteína lipasa que degrada los TAGs presentes en lipoproteínas
Estimula síntesis y posterior acumulación de TAGs
Inhibe la lipólisis intracelular

Estado de buena nutrición: hígado lipogénico

2.2. GLUCAGÓN
2.2.1. Estructura molecular
1 cadena polipeptídica: 29 aas
Sintetizado y secretado por las células A de los islotes de Langerhans del páncreas
Pm = 3.485 Daltons, descubierto por Kimball y Murlin (1923)
2.2.2. Síntesis y secreción
Se sintetizada como PREPROGLUCAGÓN
Formado por una cadena polipeptídica de 180 AAs a partir del gen GCG:
Localizado brazo grande del cromosoma 11 (humanos)
Formado por 6 exones y 5 intrones
Preproglucagón PROGLUCAGÓN (160 Aas)
escisión proteolítica de la secuencia N-terminal (PS)
Este proceso ocurre en el RE rugoso y aparato de Golgi

PROGLUCAGÓN se expresa en:
Páncreas (células A)
Intestino delgado (porción terminal)
SNC
Procesamiento posttraduccional del proglucagón rinde diferentes tipos

de péptidos dependiendo del tejido
Debido a la expresión diferencial de un grupo de enzimas, llamadas
prohormona convertasas (PC)
Hay varios tipos de estas enzimas, cada tipo tienen la capacidad de
romper el proglucagón en lugares específicos
Productos inactivos:
 Glicentina (enteroglucagón)
 Polipéptido pancreático relacionado con la glicentina (GRPP)
 Fragmento mayor de proglucagón (MPGF)
 Péptido separador-1
 Péptido separador-2
Productos activos:
 Oxintomodulina: puede que participe en la inhibición de la secreción y motilidad gástrica y de las secreciones pancreáticas
 GLUCAGÓN: interviene en el metabolismo glucídico y lipídico
 GLP-1: suprime la liberación de glucagón y potencia la producción de insulina
 GLP-2: funciones aún no especificadas, probablemente contribuya en la proliferación de células epiteliales en el intestino
Secreción de glucagón es activada y regulada por la interacción:
ACTIVADORES PRIMARIOS, sustratos:
⇊ [Glucosa en sangre]:
 Durante la noche y períodos ayuno (escasez de combustible metabólico) hipoglucemia liberación glucagón
Aminoácidos:
 Dietas hiperproteicas + bajas en glúcidos ⇈ liberación glucagón gluconeogenésis: conversión de aas en glucosa
 ⇈ [glucosa], provocará secreción de insulina ⇊ [glucosa]
 Esto explica porque el glucagón estimula la secreción de insulina
Sistema Nervioso Autónomo: estimulación b-adrenérgica (adrenalina)
 Durante períodos de estrés, trauma o ejercicio intenso.
 Altos niveles de adrenalina estimulan secreción de glucagón aunque los niveles de glucosa en sangre sea elevada
 Es un mecanismo de preparación del organismo para cuando se incrementa el consumo de glucosa
Secreción de glucagón es inhibida y regulada por la interacción:
ACTIVADORES PRIMARIOS, sustratos:
⇈ [Glucosa en sangre]: Después de una ingesta alta de glúcidos, en respuesta coordinada con la insulina
Ácidos grasos libres y cuerpos cetónicos (dietas ricas en grasas)
Hormonas pancreáticas y gastrointestinales :
insulina, somatostatina, secretina, GLP-1

2.2.4. Transducción de la señal a través del glucagón
La principal función es la regulación de la homeostasis de la glucosa en el hígado
El receptor del glucagón: b-adrenérgicos acoplado a proteína Gs
Glucagón + receptor activación proteína Gs adenilatocilasa ⇈ [cAMP ] activación PKA
PKA se encarga de activar diversas proteínas por fosforilación de residuos de Ser y Thr
El receptor de glucagón está presente en:

Hígado, principal órgano efector
Tejido adiposo
Músculo esquelético carece de receptores de glucagón
La respuesta hormonal puede ser:
Rápida a nivel citosólico con la fosforilación de proteínas implicadas en el metabolismo, principalmente glucídico y lipídico
Lenta a nivel nuclear (a través de la pKA) con la activación o represión de la transcripción de genes de las proteínas anteriores
2.2.5. Efectos metabólicos del glucagón
En general, podemos decir que es una hormona ANTICATABÓLICA
Efecto global: aumento [glucosa sanguínea] actuando sobre todo en el metabolismo glucídico y lipídico
A nivel de carbohidratos
 ESTIMULA:
 Glucogenólisis activa la GP, aumentando la secreción de glucosa y ⇈ [glucosa sanguínea]
 Gluconeogénesis, proporcionando mayor disponibilidad de sustratos para ser convertidos en glucosa
 Favorece la captación de aas desde la sangre
 Aumenta la expresión de enzimas gluconeogénica: G6Pasa, PEPCK, FBPasa-2 (⇊ [F 2,6-P2])]
 INHIBE:
HÍGADO
 Glucólisis: Disminuye la expresión de la PK

 Glucogenogénesis: inactivando la GS
A nivel de lípidos
 Estimula formación de cuerpos cetónicos

 inhibe el almacenamiento de triglicéridos
A nivel de proteínas
 estimula la absorción de los aminoácidos y el catabolismo de compuestos nitrogenados

ADIPOSO
 Activando a la lipasa sensible a hormonas (HSL), implicada en la degradación TAGs

TEJIDO
 estimula la lipólisis  aumentando la concentración de ácidos grasos en la sangre

 Incrementa la liberación de glicerol a la sangre hígado (sustrato gluconeogénico)
Metabolismo energético en el hígado durante el ayuno prolongado o en la diabetes mellitus no controlada

Hígado glucogénico o cetogénico, respectivamente
3. HORMONAS MEDULA ADRENAL
3.1. ADRENALINA
3.1.1. Síntesis, estructura molecular y secreción
mineralocorticoides: aldosterona,….
glucocorticoidess: cortisol, cortisona
andrógenos: DHAE, androstenodiona
Catecolaminas: adrenalina, noradrenalina
Sintetizada en la médula adrenal (células cromafines) de las glándulas suprarrenales
Se forma a partir de la tirosina, presente en la sangre en altas concentraciones:
Tyr Dopamina Noradrenalina (NA)
Phe
Noradrenalina puede seguir 2 caminos:

Se almacena en gránulos
Difunde al citoplasma adrenalina (feniletanolamina N-metiltransferasa (PNMT)
 Adrenalina sintetizada se almacena en los gránulos cromafines


Síntesis, almacenamiento y secreción del contenido de los gránulos cromafines es activada por:
Estrés metabólico, provocados por situaciones de:

Ayuno
Ejercicio físico
Situaciones: alerta, miedo, ansiedad, heridas, reacciones alérgicas…
Hormonas hipotalámicas: adrenocorticotropa (ACTH)
Hormonas esteroideas (glucocorticoides): cortisol
SNC por neurotransmisores: acetilcolina
transmite
Estrés médula adrenal (neurona preganglional), liberando acetilcolina
 provocando la abertura de los canales de Ca2+ regulados por voltaje:
 ⇈ [Ca2+] estimulando liberación gránulos cromafines (exocitosis)
ACTH:
 incrementa actividad de enzimas involucradas en la síntesis de catecolaminas:
 tirosina hidroxilasa
 dopamina b-hidroxilasa
 estimula a la corteza suprarrenal para que libere cortisol:
 ⇈ expresión de PNMT en las cs cromafínicas síntesis de adrenalina
Hormonas pancreáticas: glucagón
La secreción de adrenalina es inhibida y regulada por la interacción:
Hormonas pancreáticas: Insulina

3.1.3. Transducción de la señal a través de la adrenalina
Tejidos sensibles a la adrenalina
Hígado Se secreta en pocos en pocos segundos

Tejido muscular: esquelético, liso y cardíaco Su efectividad se puede dar entre uno y tres minutos
Tejido adiposo Puede aumentar el metabolismo normal hasta un 100%
Adrenalina interacciona con sus receptores en serpentina (GCPR) de tipo:
Receptor a1 que se acopla proteína Gq estimula PLCb (DAG y IP3)
Receptores b1, b2 que se acoplan proteína Gs estimulan adenilato ciclasa (⇈ formación cAMP)
La respuesta hormonal puede ser:
Rápida a nivel citosólico con la fosforilación de proteínas implicadas en el metabolismo, principalmente glucídico y lipídico
Lenta a nivel nuclear con la activación o represión de la transcripción de genes de las proteínas anteriores
Adenilato Ciclasa
Receptor b Ruta transducción señal de la adrenalina
inactivo
AC
músculo y tejido adiposo
Proteína G inactiva
adrenalina Activación de proteína G trimérica
AC
Receptor b
activo
Proteína G inactiva
AC
Intercambio de GDP por GTP
cAMP
RESPUESTA RÁPIDA CITOSÓLICA
Fosforilación de enzimas del

Inactive Activated
PKA PKA metabolismo glucídico y lipídico
Inactive Nucleus
CBP CREB
RESPUESTA LENTA NUCLEAR Secuencia CRE
Activación o inhibición de la transcripción génica
Síntesis o represión de la síntesis de enzimas del metabolismo glucídico y lipídico

Ruta de señalización de la adrenalina

en el hígado
adrenalina
RESPUESTA
RÁPIDA
CITOSÓLICA
Fosforilación de enzimas
del metabolismo
glucídico y lipídico
3.1.4. Efectos metabólicos de la adrenalina
EFECTOS FISIOLÓGICOS:
Acelera el ritmo cardíaco: frecuencia e intensidad

Aumenta la presión sanguínea
Aumenta la tasa de respiración y posee un efecto broncodilatador
⇈ captación O2
Provocan vasodilatación en arterias y venas de los órganos principales para recibir más sangre
⇈ flujo O2 sangre ⇈ [ATP]
Dilatación de las pupilas y disminución presión intraocular (mejor visión para “ver el peligro”)
⇈ flujo nutrientes
Provocan vasoconstricción de los vasos en piel, mucosas y riñón Explica la palidez del rostro
Disminuye el tono, motilidad y secreción gástrica e intestinal (se detiene la digestión)
Puede ocasionar retención urinaria
EFECTOS METABÓLICOS:
ESTIMULA:
Glucogenólisis hepática y muscular :
 Activa la GP e inactiva GS por fosforilación dependiente de AMPc
 Aumenta la salida de glucosa hepática a la sangre para ser enviada principalmente a los músculos
Degradación anaeróbica muscular de la glucosa hasta ácido láctico

 Activa la PFK-1 a través de la PFK-2 (⇈ [F 2,6-P2])
Lipólisis (movilización de los TAGs del tejido adiposo)

 Activa la HSL y perilipina por fosforilación dependiente de AMPc
Secreción de glucagón como consecuencia de la caída de glucosa en sangre,

 Activa la gluconeogénesis a partir del lactato generado
INHIBE: secreción de insulina

4. HORMONAS TIROIDEAS
4.1. Síntesis, estructura molecular y secreción
Tiroides es una glándula endocrina, situada justo debajo de la nuez de Adán
Compuesta por 2 lóbulos unidos entorno al cuello y en forma de mariposa a ambos lados de la tráquea
Unidad funcional de esta glándula son :
Folículos tiroideos, cerrados de 100 – 300 mm de diámetro, constituidos :
Principalmente por las células epiteliales cuboidales (células tiroideas ó cs A)
 Secretan un material proteico (coloide), almacenándolo en el lúmen del folículo
 Coloide está compuesto puesto por moléculas de tiroglobulina unida al I2
Entre los folículos, y en menor cantidad aparecen las células C o parafoliculares
Tiroides se encarga de secretar 3 tipos de hormonas:
Calcitonina, relacionada con el metabolismo del calcio (Células C)
Hormonas relacionadas con el yodo y con el metabolismo basal (células A):
Tiroxina (T4)
 Se corresponde con 93% de la secreción tiroidea
 Su [T4] es mucho más alta en sangre que la de T3
 Su acción persiste mucho más tiempo
Triyodotironina (T3)
 Se corresponde con 7% de la secreción tiroidea
 Su acción es muy rápida y 4 veces más potente que la de T4

PRODUCCIÓN, SECRECIÓN y RECICLAJE de las hormonas tiroideas a la sangre requiere de varios pasos:
Es ingerido con la dieta en forma de ion yoduro (I-)

Sangre célula folicular mediante un transportador simporte (NIS) localizado en su membrana basal
1. Captación del yoduro
Este realizado un cotransporte de: 2 I- por 1 Na+
Hormona tiroestimulante adenohipofisiaria (TSH) regula la captación de I-
2. Transporte del I- coloide usando un transportador antiporte (pendrina) que intercambia I- por Cl-
Es una glucoproteína, sintetizada en RE rugoso y modificada en el complejo de Golgi

3. Síntesis de la tiroglobulina (TG) Está formada por unas 70 moléculas del aminoácido tirosina
Es almacenada en vesículas y secretadas por exocitosis hacia el coloide
I- es oxidado por una peroxidasa ubicada en la membrana apical de la célula folicular para formar I2
4. Oxidación del I-
I2 se unirá con la tirosina de la tiroglobulina
I2 reaccionan con las Tyr de la TG pudiendo producir:
5. Yodación de la Tyr  Unión átomo de I produce T1 (monoyodotirosina)
 Unión de 2 átomos de I produce T2 (diyodotirosina)
Unión de T1 + T2 = T3 (triyodotirosina)
6 y 7. Unión de T1 y T2 y almacenamiento T1, T2, T3 y T4 se almacenan unidas a TG (coloide)
Unión de T2 + T2 = T4 (tiroxina)
TG unida a las hormonas tiroideas pasa a la célula folicular por pinocitosis

8. Secreción hormonas tiroideas En la célula folicular se unen a los lisosomas
Proteasas actúan sobre la TG liberando: T1, T2, T3 y T4
9. Desyodación de T1 y T2 mediante desyodasas, liberando I- y reciclando TG de nuevo al coloide por exocitosis
10. Liberación de T3 y T4 liposolubles:
Difusión pasiva sangre
En la sangre se unen a diferentes proteínas
transportadoras hasta los órganos diana:
 globulina fijadora de tiroxina
 Transtirretina
 Albúmina
4.2. Control de la secreción

Reacciones de la formación de las hormonas T3 y T4
Control de la secreción y liberación de las hormonas tiroideas depende de:
Hormona liberadora de tirotropina (TRH) del hipotálamo
Hormona tiroestimulante (TSH) adenohipofisiaria
⇊ [T3]
⇊ [T4] estimulan secreción TRH (hipotálamo)
⇊ niveles del metabolismo
estimula a la secreción de TSH (hipófisis)
 captación del I-
 síntesis y secreción de T3 y T4
 crecimiento de las células foliculares
T3 y T4 devuelven metabolismo a sus valores normales
⇈ [T3] [T4] inhibe liberación:
 TRH y TSH (retroalimentación negativa)

4.3. Transducción de la señal a través de las hormonas tiroideas
Tejidos sensibles a la T3 y T4 son:

Hígado
Tejido muscular: esquelético, liso y cardíaco
Tejido adiposo
Son hormonas lipofílicas que pueden atravesar la membrana plasmática (tte pasivo)
Cuando T3 y T4 penetran en la célula, mayoría T4 se convierte en T3 mediante una desyodasa
El receptor T3 está localizados en el núcleo celular
4.4. Efectos metabólicos de las hormonas tiroideas
De modo general, aumenta el metabolismo celular al:

 Activar el catabolismo energético
 Incrementar el nº y actividad mitocondrial estimula la función celular y formación de ATP
 Aumentar la actividad de la Na+ K+ ATP-asa estimula el transporte de iones por la membrana
 Aumentar el nº de receptores de lipoproteínas LDL en el hígado
HÍGADO
Induce la síntesis de enzimas implicadas en:
 Glucogenólisis
Incrementan [glucosa en sangre]
 Gluconeogénesis
 Ciclo de la urea: carbamoil P sintetasa I
 b-oxidación de ácidos grasos
 Síntesis de ácidos grasos: enzima málica (concentraciones muy altas de T3)
MÚSCULO
 Glucogenólisis
 Degradación de proteínas
TEJIDO ADIPOSO
 Lipólisis
 Síntesis de ácidos grasos: FFA y ACC incrementan [ácidos grasos] (concentraciones muy altas de T3)
5. HORMONAS CORTEZA ADRENAL
Corteza adrenal constituye la mayor parte de la glándula suprarrenal
Esta glándula se divide en 3 partes, especializadas en la síntesis de:
Mineralocorticoides: regulan el metabolismo hídrico de Na+ y K+ en el riñón

Glucocorticoides: regulación metabolismo glucídico, lipídico y proteico
Esteroides sexuales: contribuyen al desarrollo de las caracteres sexuales secundarios
Todos ellos se sintetizan a partir del colesterol
Sus rutas de síntesis se localizan en el RE liso y mitocondrias
5.1. GLUCOCORTICOIDES
90 – 95% cortisol liberado a la sangre, está unido a la proteína plasmática, globulina fijadora de cortisol (CBG ó transcortina)
 Vida media: 60 – 90 min
Corticosterona plasmática se une en menor medida a las proteínas plasmáticas. Vida media: 50 min
Entre los factores que desencadenan la liberación de cortisol, destacamos:
Estrés físico o mental

Situaciones de ayuno
La secreción está bajo el control del eje hipotálamo – hipófisis – corteza adrenal a través de:
Hormona liberadora de corticotropina (CRH)

Hormona adrenocorticotropa (ACTH)
un rápido efecto sobre la zona fascicular y reticular de la corteza adrenal producción [cortisol]
5.1.3. Transducción de la señal en glucocorticoides
Mayoría de los tejidos son sensibles a los glucocorticoides, pero sobre todo:
Hígado
Tejido muscular: esquelético, liso y cardíaco
Tejido adiposo
Son hormonas lipófilas que atraviesan la membrana plasmática (tte pasivo)

Su receptor son intracelulares y localizados en el citosol
Inducen la transcripción génica (respuesta celular lenta)
5.1.4. Efectos de los glucocorticoides
EFECTOS FISIOLÓGICOS:
Antiinflamatorios, antialérgicos y Inmunodepresor (inhibe el desarrollo de linfocitos T)
HÍGADO
ESTIMULA:
 Captación de aas y síntesis de proteínas
 Gluconeogénesis a partir de aas  Glucemia en sangre (hiperglucemia)

Diabetes suprarrenal
 Glucogenólisis  Puede generar incremento de tolerancia a la glucosa
INHIBE:
 captación de glucosa por tejidos periféricos (piel, músculo y tejido conjuntivo) por ⇊ de la expresión de GLUT 4
 Equivale a un efecto antiinsulínico
MÚSCULO
ESTIMULA:
 Degradación de proteínas hasta aas ⇈ [aas plasmáticos] que serán enviados al hígado
 Si los [cortisol] es muy elevado y continuado puede derivar en:
 atrofia, debilidad, fatiga muscular pérdida de masa muscular

 Adelgazamiento de piel
 Retraso y alteraciones en la capacidad cicatrizante e incluso osteoporosis

TEJIDO ADIPOSO
ESTIMULA:
 Lipólisis ⇈ [TAGs plasmáticos]
 Facilitan la acción de las catecolaminas (adrenalina y noradrenalina)
 Redistribución de la grasa corporal: mayor cantidad grasa en el tronco superior (tórax y cabeza)
INHIBE: captación de glucosa inhibición de la lipogénesis


Tema 3A. METABOLISMO DEL GLUCÓGENO
1. Estructura del glucógeno

2. Degradación del glucógeno (glucogenólisis)
3. Síntesis del glucógeno (glucogenogénesis)
Regulación del metabolismo del glucógeno
1. ESTRUCTURA DEL GLUCÓGENO
Procariotas y eucariotas almacenan el exceso de glucosa en forma de polímeros muy ramificados:

Almidón: plantas
Glucógeno: bacterias, hongos y animales
Polímero D-glucosa con uniones α(1→4) y ramificaciones α(1→6) cada 8-14 residuos de glucosa
Presenta:
 1 único extremo reductor
Facilita el papel de las enzimas : GP y GS
 1 extremo no reductor en cada punto de ramificación
El glucógeno se almacena en el citosol bajo dos formas diferentes.

 partículas β esféricas (21 nm Ø): 55.000 residuos de glucosa y 2.000 extremos no reductores (músculos)
 partículas α , en roseta (100-400 nm Ø): 20 y 40 partículas β (hígado)
Shrearer & Graham (2004):

AMPK: proteínas quinasa activadas por AMP
AGL: enzima desramificadora de glucógeno
Molécula de glucógeno está siempre unido a la glucogenina GP: glucógeno fosforilasa
GPK: glucógeno fosforilasa quinasa
Unidos a los gránulos están también presentes: GSK: glucógeno sintetasa quinasa
GNIP: glucogenina interactuando con proteínas
 Enzimas implicadas en su síntesis y degradación GN: glucogenina

GS: glucógeno sintetasa
BE: enzima ramificadora de glucógeno
 Proteínas directamente implicadas en su regulación PTG: proteína de unión al glucógeno
PP1: fosfoproteína fosfatasa 1
GM/PPP1R6: subunidad reguladora de la PP1
En vertebrados, los principales tejidos de almacenamiento de glucógeno son:
Músculo esquelético, (1 – 2% de su peso; 16 g/kg)

Cantidad glucógeno/masa muscular total es muy superior a la presente en hígado
Su contenido varía dependiendo de la tasa de trabajo muscular: puede disminuir hasta 100 veces su peso
Hígado, (10% de su peso; 65 g/kg)

Esta cantidad es muy variable, depende directamente de la dieta y necesidades energéticas del organismo
Razón del metabolismo glucídico: almacenar excedentes de glucosa (hígado) y liberarla cuando escasea (hígado al resto de tejidos)
Humanos: [glucosa sérica] fluctúa entre 3.6 – 5.8 mM (70-110 mg/l)
Necesario regular coordinamente las rutas que aportan y consumen glucosa
Aunque el rendimiento energético del glucógeno es inferior al de la grasa, ORGANISMOS ACUMULAN GLUCÓGENO POR VARIAS RAZONES:
Procesos de degradación y síntesis del glucógeno son mucho más rápidos al ser hidrosoluble
 Glucosa procedente degradación glucógeno puede ser metaboliza tanto en:
 Aerobiosis, rindiendo 30 – 32 ATP
 Anaerobiosis, rindiendo 2 lactato (derivado hacia vía gluconeogénica) y 2 ATP
Grasas no pueden ser utilizadas como fuente de energía en ausencia de O 2 (no funciona la CTE y fosforilación oxidativa)
Grasas no rinden de forma neta glucosa en animales (carecen del ciclo glioxilato):
 hígado no podría suministrar glucosa para otros tejidos (metabolismo celular es dependiente de glucosa)
 Por el contrario, el excedente de glucosa si se puede almacenar como grasa
Sin embargo, la síntesis de glucógeno es un proceso que requiere energía en forma de ATP
¿entonces por qué no almacenamos directamente glucosa en la célula?
Si el excedente se almacenase como glucosa libre, provocaría que:
 [glucosa citosólica] >>> [glucosa en sangre] implicaría la necesidad de un tte activo (gasto ATP)
 En la célula, la mayor parte glucosa entra por tte pasivo facilitado o bien acoplado a un Tte activo,
Si todo el glucógeno hepático (P m= 107 daltons) estuviese en forma de glucosa libre en el citosol, su [] = 0.4 M
 Esto altera la presión osmótica del hepatocito entrada H2O LISIS CELULAR
 Contrariamente, la misma masa de glucosa en forma de glucógeno solo representa una [] de 0,01 µM
La acumulación de glucógeno es finita:
 Su carácter hidrofílico le permite atrapar moléculas H2O en su estructura (ocupa mucho espacio)
 Grasa al ser lipofílica no retiene agua, puede acumularse en mayor cantidad con menos peso y además, genera más ATP
 Explicando porque los organismos almacenan la mayor parte del excedente glucosa en forma de TAGs
2. DEGRADACIÓN DEL GLUCÓGENO
Implica ruptura secuencial de sus unidades de glucosa desde sus numerosos extremos no reductores (carecen grupo OH en el C1)
Se puede producir mediante:
DEGRADACIÓN HIDROLÍTICA DEGRADACIÓN FOSFOROLÍTICA

Ruptura:  adición de una molécula de H2O  adición del grupo fosfato
Catálisis:  α-amilasas y α-glucosidasas  glucógeno fosforilasa (fosforilasa, GP)
Productos:  unidades de glucosa libre  unidades de glucosa 1P
 Glucosa es fosforilada antes de entrar a las  G1P G6P (fosfoglucomutasa, PGM)
vías metabólicas, mediante:  Implica un ahorro energético de ATP
 Hexoquinasa (tejidos extrahepáticos)
 Glucoquinasa (hígado)
En el reino animal, hay 2 principales fuentes de glucosa derivadas del metabolismo de polisacáridos:
EXTERNO Digestión de los polisacáridos del alimento Almidón de los vegetales degradación hidrolítica
Glucógeno de otros animales
Movilización del glucógeno lisosomal degradación hidrolítica
INTERNO
Movilización de las reservas intracelulares de glucógeno degradación fosforolítica
Los mecanismos generales de la síntesis y movilización del glucógeno endógeno son idénticos en hígado y músculo
Las enzimas implicadas difieren en aspectos muy sutiles como su regulación alostérica papel del glucógeno en cada tejido
GLUCOGENÓLISIS necesita la participación secuencial de 3 enzimas citosólicas
 GP
 Enzima desramificadora de glucógeno
 PGM
GP cataliza el ataque fosforolítico del enlace α(1→4) que une dos residuos de glucosa localizados en los extremos no reductores
Este ataque libera un residuo glucosa terminal en forma de G1P
GP actúa repetidamente sobre los extremos no reductores en cada rama del glucógeno
 Elevada ramificación molécula de glucógeno favorece su rápida
degradación, liberando unidades de glucosa (G1P) a partir de los

extremos no reductores localizados en cada punto de ramificación
GP se para a 4 residuos de glucosa de un punto de ramificación α(1→6)
Ahora interviene la enzima desramificante de glucógeno

Esta enzima presenta 2 actividades bien diferenciadas:
➊ Actividad transferasa, corta y transfiere 3 residuos de glucosa del

punto de ramificación al extremo de otra ramificación
➋ Actividad α(1→6) glucosidasa, rompiendo el enlace α(1→6) que une

este residuo de glucosa a la cadena principal de glucógeno
 Este proceso se realiza mediante un ataque hidrolítico
 Conlleva a la liberación 1 molécula de glucosa libre
 Ahora la nueva ramificación puede ser atacada por la GP
La acción continuada de GP y enzima desramificante, genera:
G1P (90%) que es transformada en G6P (PGM)

Glucosa libre (10%)
El DESTINO G6P generada varia dependiendo del tejido:
Hígado:
Capacidad gluconeogénica y glucogenolítica
Actividad G6Pasa: G6P glucosa libre sangre:
 Mantener la glucemia sanguínea
 Suministrar glucosa a los tejidos extrahepáticos en período de ayuno, entre comidas, esfuerzo físico, stress....
Conllevan a una caída de glucosa sanguínea
Músculo:
Capacidad glucogenolítica
Sin actividad gluconeogénica
G6P glucosa libre sangre
Sin actividad G6Pasa
G6P es enviada principalmente hacia la vía glucolítica
 Aerobiosis
contracción muscular (uso propio)
 Anaerobiosis
DESTINO GLUCOSA LIBRE generada en la glucogenólisis debe fosforilarse a G6P, proceso catalizado por:
Hexoquinasa en músculo
Esta es la única etapa de la glucogenólisis que consume ATP
Glucoquinasa en hígado
También puede ser enviada directamente a la sangre (hígado)

3. SÍNTESIS DEL GLUCÓGENO
Síntesis de glucógeno es especialmente importante en hígado y músculo esquelético

No es un proceso inverso a su degradación
Conversión directa de G1P glucógeno + Pi, es termodinámicamente desfavorable (∆G°) en condiciones fisiológicas:
Es imprescindible un aporte de energía, requiere que se acople un proceso exergónico

Necesita de la participación de un intermediario altamente energético, un nucleótido-azúcar, UDP-glucosa:
GLUCOGENOGÉNESIS necesita la participación de varias enzimas citosólicas
PGM
UDP-glucosa pirofosforilasa + pirofosfato inorgánico hidrolasa
Glucógeno sintasa (GS)
Enzima ramificadora de glucógeno
BIOSÍNTESIS DE GLUCÓGENO SE REALIZA EN VARIAS FASES:
Transformación de glucosa a UDP-glucosa
 UDP-glucosa actúa como un donante “activado” de un grupo glucosilo
Reacción de la glucógeno sintasa
 Transfiere el grupo glucosilo de la UDP-glucosa a un grupo OH de un

extremo no reductor de la molécula de glucógeno
 La unión se realiza por un enlace glucosídico α (1→4)
 Síntesis no requiere directamente ATP

 Se consumen moléculas de UTP, formado a partir de:
Hay un gasto energético

Ramificación del glucógeno
 Proceso catalizado por la enzima ramificadora de glucógeno
 Transfiere un fragmento terminal (6 ó 7 residuos) desde el extremo no reductor de una rama de glucógeno con al
menos 11 residuos al grupo OH situado en C6 de un residuo de glucosa del interior del polímero
11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1
11 10 9 8 7 6 5
4 3 2 1
 Conlleva la formación de 2 nuevos extremos NO reductores

 Sobre este nueva rama puede actuar la GS
 La ramificación del glucógeno hace que sea más soluble en agua y que aumente el nº extremos no reductores
Facilita el papel de GP y GS
GS puede alargar una molécula de glucógeno pero no puede iniciar de novo una nueva cadena de glucógeno:
Este proceso requiere un cebador:
Una cadena de unos 8 residuos de glucosa unidas entre si por enlaces α(1→4) unida a la proteína, glucogenina
Glucogenina actúa como cebador y como catalizador
SÍNTESIS DE NOVO DE GLUCÓGENO se realiza en 2 pasos:
Primer paso
Transferencia del grupo glucosilo desde la UDP-glucosa al grupo OH (Tyr194 ) de la glucogenina

Proceso es catalizado por la actividad glucosiltransferasa de la glucogenina
Segundo paso:
adición secuencial de otros 7 residuos de glucosa, procedentes de la UDP-glucosa
Proceso catalizado por la actividad elongasa de la glucogenina
A partir de aquí continúa la GS + enzima ramificadora
Glucogenina permanece dentro de la partícula β,

unida covalentemente al único extremo reductor de
la molécula del glucógeno
Glucógeno se degrada y resistetiza en sus ramas

externas y su núcleo interno apenas se modifica a
largo de la vida de la célula

Tema 3B. REGULACIÓN DEL METABOLISMO DEL GLUCÓGENO
4. REGULACIÓN DEL METABOLISMO DEL GLUCÓGENO

4.1. Características de la enzima glucógeno fosforilasa quinasa (GPK)
4.2. Características de la enzima glucógeno fosforilasa (GP)
4.2.1. Regulación de la GP en músculo esquelético

4.2.2. Regulación de la GP en hígado
4.3. Característica de la enzima proteína fosfatasa-1 (PP-1)
4.3.1. Regulación de la PP-1 en músculo esquelético

4.3.2. Regulación de la PP-1 en hígado
4.4. Características de la glucógeno sintasa (GS)
4.4.1. Regulación de la GS en músculo esquelético

4.4.2. Regulación de la GS en hígado
4. CONTROL DEL METABOLISMO DEL GLUCÓGENO
Los procesos opuestos de degradación y síntesis son regulados usando los mismos mecanismos pero de forma inversa:
CONTROL ALOSTÉRICO
Estricto CONTROL HORMONAL llevado a cabo mediante mecanismos de MODIFICACIÓN COVALENTE por fosforilación – desfosforilación
Insulina
Glucagón (+) importantes. Respuesta celular lenta y rápida
Adrenalina
Hormonas tiroideas
Respuesta celular lenta
Hormonas esteroideas: cortisol
Principales enzimas reguladas:

Degradación: GP
Síntesis: GS
Aunque otras enzimas también están fuertemente reguladas:
Glucógeno fosforilasa quinasa (GPK)

Glucógeno sintasa 3-quinasa (GSK3)
Proteína fosfatasa-1 (PP-1)
Fosfoproteína fosfatasa inhibidor-1
Por tanto, CUANDO UN MECANISMO ACTIVA UNA VÍA, AUTOMÁTICAMENTE ESTÁ DESACTIVANDO LA OTRA
Ejemplo: TEJIDO HEPÁTICO:
Glucagón, activa la glucogenólisis e inhibe la glucogenogénesis
Insulina, todo lo contrario

4.1. CARACTERÍSTICAS DE LA ENZIMA GLUCÓGENO FOSFORILASA QUINASA (GPK)
Enzima encargada de activar por fosforilación a la glucógeno fosforilasa
GPK es una proteína quinasa dependiente de Ca2+/CaM
Presenta 4 subunidades (a, b, g, d) organizada en un hexadecámero

Subunidad a, b: portan un residuo de Ser susceptible de ser fosforilado
Subunidad g: función catalítica
Subunidad d, se corresponde con la calmodulina
Está sometida a un DOBLE CONTROL, activándose por:

Por modificación covalente (fosforilación), en respuesta a:
 HÍGADO (Glucagón)
b-adrenérgicos + Gs Aden. Ciclasa ⇈ AMPc] activa PKA
 MÚSCULO (adrenalina)
Por regulación alostérica por ⇈ [Ca2+] citosólico GPKb-OH GPKa-P

(parcialmente activa) + ⇈ [Ca ] cit
2+
 [Ca2+] de 1 mM pueden activar parcialmente la GPK

 ⇈ [Ca2+] se produce en respuesta a: GPKa-P
(totalmente activa)
 HIGADO: Adrenalina (a-adrenérgicos + Gq) PLCb IP3 + DAG
⇈ [Ca2+] cit GPb-OH GPa-P

Activa PKC
Activa proteínas quinasas dependientes Ca2+
 MÚSCULO: estímulos nerviosos (acetilcolina) canales iónicos Ca2+ dependientes de voltaje (membrana) ⇈ [Ca2+] cit
ACTIVACIÓN TOTAL de la GPK implica la intervención de ambos mecanismos
CONCLUSIÓN: fosforilación y ⇈ [Ca2+] tienen un efecto sinérgico sobre GPK y GP sobre la glucogenólisis
4.2. CARACTERÍSTICAS DE LA GLUCÓGENO FOSFORILASA (GP)
Presenta una estructura molecular muy similar en músculo e hígado
Es una enzima citosólica con regulación alostérica, modificación covalente (control hormonal)
Forma funcional: homodímero
Cada subunidad posee 3 grandes dominios de gran importancia biológica:
Centros catalíticos
Centro activo, Pi (extremo C-terminal)
Centro de unión cosustrato: piridoxal fosfato (vit B6), indispensable en la reacción
Centro de almacenamiento de glucógeno, que permite la unión covalente a los gránulos de glucógeno
Centro de modificación covalente:
sitio de fosforilación reversible: Ser14 (extremo N-terminal)
Centros alostéricos:
Centro de unión a nucleótidos

Situadas en la zona
 Activador: AMP
de interacción entre
 Inhibidor: ATP las 2 subunidades
Centro de unión glucosa-6P
Centro de unión a la glucosa libre: muy próxima al centro activo

GP existe entre 2 formas interconvertibles entre sí mediante modificación covalente:
Fosforilasa a (GPa), forma activa, fosforilada en la Ser14
Fosforilasa b (GPb), forma inactiva, desfosforilada en la Ser14
Ambas formas (a y b) existen en equilibrio entre dos estados:
 Estado T, tenso y menos activo (baja afinidad por el sustrato)
 Estado R, relajado y más activo (alta afinidad por el sustrato)
En la célula los equilibrios están desplazados hacia:
 GPb, hacia forma T inactiva (actividad muy baja, basal)
 GPa, hacia la forma R más activa (actividad muy alta)

4.1.1. Regulación de la glucógeno fosforilasa EN MÚSCULO : alostérica y/o por modificación covalente (control hormonal)
PAPEL GLUCOGENÓLISIS MUSCULAR: obtención unidades de glucosa vía glucolítica (ATP) para mantener contracción muscular
La velocidad de degradación glucógeno está vinculada a la velocidad de la contracción muscular
REGULACIÓN ALOSTÉRICA:
Célula muscular en reposo:
No necesita ATP (NO ES NECESARIO DEGRADAR GLUCÓGENO)
GP está preferentemente en de GPb (estado T)
Célula muscular en plena actividad:
Aumenta contracción muscular alto consumo ATP generan altas [AMP] celular
⇈ [AMP] estimula el desplazamiento conformacional de la GPb: estado T (inactivo) estado R (activo)
 GPb en estado T, el centro activo está oculto (⇊ afinidad por Pi)
 Desbloquea el centro activo mayor acceso del sustrato al centro activo
 GPb en estado R posee un centro catalítico más accesible
 Cadena lateral Arg569, localizada en el sitio de unión a PLP y Pi, gira ⇈ afinidad del enzima por Pi
Esta activación favorece degradación del glucógeno a glucosa glucólisis ATP contracción muscular
ATP y G6P actúan como efectores alostéricos negativos

Ambos favorecen el estado T de la GPb
ATP compite con el AMP CARGA ENERGÉTICA CELULAR: controla la transición de la GPb del estado T al R
G6P se acumula si no pasa a otras vías (además no existe G6Pasa en músculo)
La finalidad no es generar glucosa para ser enviada a la sangre
ATP y G6P, son productos de la oxidación de la glucosa ejercen un mecanismo de retroinhibición sobre la GP
MODIFICACIÓN COVALENTE Y CONTROL HORMONAL:
Situaciones de alerta, stress o el trabajo muscular provocan:
⇈ [adrenalina] b-adrenérgicos GS adenilato ciclasa ⇈ [cAMP] PKA

Activan totalmente GPK
estimulación nerviosa del músculo (acetilcolina) ⇈ [Ca2+] cit
GPb-OH GPa-P
 Fosforilación de la GPa promueve cambios conformacionales, desplazándola del estado T al estado R (máxima actividad)
 GPa no sufre un control alostérico por los niveles de AMP, ATP y G6P
 Activación GP mediante alosterismo y fosforilación conllevan a la glucogenólisis muscular necesaria para la contracción muscular
4.1.2. Regulación de la glucógeno fosforilasa EN HÍGADO : alostérica y/o por modificación covalente (control hormonal)
PAPEL GLUCOGENÓLISIS HEPÁTICA: obtención de unidades glucosa tejidos extrahepáticos, cuando ⇊ [glucosa sanguínea]
Célula hepática: GP está preferentemente en de GPa (estado R):
Produciendo glucosa de forma continua a no ser que reciba otro tipo de señal
Proceso de fosforilación de la GPb en GPa es idéntica a la del músculo
Bajo el control hormonal de:
glucagón (b-adrenérgicos + GS) adenilato quinasa ⇈ AMPc PKA
Adrenalina (a-adrenérgicos + Gq) PLCb IP3 + DAG
GPa hepática muestra regulación alostérica por glucosa (efector negativo)
Presencia de altas [glucosa] citosol hepático provocan:
GPa en estado R se desplace a un estado T (baja actividad)
No hay necesidad de degradar el glucógeno almacenado
Finalmente, glucosa también promueve la conversión nuevamente de GPa en GPb
GPa hepática no sufre un control alostérico por los niveles de AMP, ATP y G6P, debido a que en el hígado:
No hay cambios drásticos en la carga energética
G6P se transforma rápidamente en glucosa libre por acción del enzima glucosa-6-fosfatasa
Glucosa libre es rápidamente enviada a la sangre tejidos extrahepáticos

4.3. CARACTERÍSTICAS DE PROTEÍNA FOSFATASA 1 (PP-1)
Muchas de las enzimas reguladoras del metabolismo mantienen un equilibrio entre sus formas:
Fosforilada - Desfosforilada gracias a la actividad de una proteína quinasa y una proteína fosfatasa, respectivamente
Fosfoproteína fosfatasa-1 (PP1): elimina hidrolitícamente los grupos P de enzimas:
GPa (Ser14) MÚSCULO

GPKa (presentes en las subunidades a, b)
GSb
Fosfoproteína fosfatasa inhibidor 1
PP1 está controlada de forma diferente en músculo e hígado
4.3.1. Regulación de la PP1 EN MÚSCULO
PP1 está formado por 2 subunidades:
Subunidad catalítica, denominada PP1c
Sola es inactiva, posee ⇊⇊ afinidad glucógeno

Se activa cuando se une a la subunidad GM
Subunidad reguladora, denominada GM de unión al glucógeno, que tiene 2 sitios de fosforilación:
Sitio 1, fosforilado por la PKB (vía insulina a través de la ruta citosólica de la enzima PI-3K)
 Provoca la unión permanente entre la GM + subunidad PP1c + glucógeno PP1 activa
Sitio 1 y 2, fosforilados por la PKA (vía adrenalina)
 Produciendo la liberación subunidad catalítica (PP1c) al citosol PP1 parcialmente inactiva

PP1 parcialmente inactiva PP1 totalmente inactiva

fosfoproteína fosfatasa inhibidor 1
fosfoproteína fosfatasa inhibidor-1, está a su vez, regulada por modificación covalente, mostrando 2 formas:
Forma a, activada por fosforilación a través de la PKA
Forma b, desactivada por desfosforilación a través de la propia PP1
MÚSCULO
PP1 activa
 Inhibe por desfosforilación GPa → GPb

 Inhibe por desfosforilación GPKa → GPKb
 Activa por desfosforilación GSb → GSa
Incremento síntesis glucógeno
PP1 inactiva (enzimas permanecen en su forma):
 GPKa
activa por fosforilación (PKA)
 GPa
 GSb, inhibida por fosforilación (PKA y otras quinasas)
Incremento degradación glucógeno
GPa es capaz de inhibir directamente a la PP1
PP1 muscular presenta también una activación alostérica por glucosa-6-fosfato
⇈ [G6P] celular, sería un indicador de que no se está utilizando inhibe la degradación y activa la síntesis de glucogéno
⇈ [adrenalina]
(b-adrenérgicos + GS) adenilato quinasa
Principales sistemas de control de la degradación glucógeno (fosforilación – desfosforilación) en el músculo promovido por la adrenalina
4.3.2. Regulación de la PP1 EN HÍGADO
PP1 está unida al glucógeno a través de su subunidad reguladora, GL

Subunidad GL, no está sujeta a control por fosforilación como la GM del músculo
Actividad de su subunidad catalítica: PP1c.GL está controlada por su unión a la enzima GPa
GPa (estado T y R) está fuertemente unida a la proteína PP1
La conformación espacial de GPa en estado R hace que:
 2 residuos fosforilados Ser14 quedan escondido en la molécula y, por tanto,
 PP1 no tiene acceso a esos grupos P
 Consecuentemente, GPa hepática no es desfosforilada por la PP1
En presencia de ⇈ [glucosa] (inhibidor alostérico de la GPa), se produce un cambio conformacional:
 GPa en estado R GPa en estado T
 GPa en el estado T expone sus residuos fosforilados de Ser14
 Estos residuos son ahora desfosforilados por la PP1: GPa GPb
 GPb posee muy baja afinidad por el complejo PP1.GL, liberándola
 Se observado que, cuando el 90% GP está en forma b, se produce la liberación de la PP1

4.4. CARACTERÍSTICAS DE GLUCÓGENO SINTASA
Enzima homotetramérica (en vertebrados)
No hay diferencias estructurales entre las isoformas, hepática y muscular
No poseen grupo prostético
También está asociada a los gránulos de glucógeno
Al igual que la GP se regula también por :
Modificación covalente, presentando 2 formas interconvertibles por fosforilacion – desfosforilación
GSb, fosforilada e inactiva

Lo contrario a la GP
GSa, desfosforilada y, en este caso, se corresponde con la forma activa
La desfosforilación: GSb GSa es catalizada por la PP1
La forma totalmente desfosforilada se corresponde con la forma a totalmente activa
PP1 activa PP1 inactiva (enzimas permanecen en su forma):
 Inhibe por desfosforilación GPa → GPb  GPKa

 Inhibe por desfosforilación GPKa → GPKb  GPa
 Activa por desfosforilación GSb → GSa  GSb, inhibida por fosforilación (PKA,GPKa, GSK3, y otras quinasas)
ACTIVA síntesis glucógeno ACTIVA degradación glucógeno

Inhibe degradación glucógeno Inhibe síntesis glucógeno
GS presenta 9 residuos diferentes de Ser susceptibles de ser fosforilados (en cada subunidad):
 Dispersos en la secuencia proteica
 Formados grupos o cluster
Fosforilación provoca un cambio conformacional en GS ⇊⇊ afinidad UDP-glucosa
GS puede ser fosforilada por 11 proteínas quinasas diferentes
Estas proteínas quinasas pueden fosforilar uno o mas residuos de Ser (sitios de fosforilación)
El grado de inactivación que produce cada quinasa va a depender de:
 nº sitios que se han fosforilado
 Tipo de sitio implicado
La proteína quinasa reguladora más importante: glucógeno sintasa quinasa 3 (GSK3) y caseína quinasa I (CKI)
GSK3 añade grupos P a 3 residuos de Ser cerca del extremo C-terminal fuerte inactivación GS
La acción de GSK3 es jerárquica:
 Caseína quinasa II (CK2) fosforila primeramente sitio 5 un lugar de reconocimiento o cebado para GSK3
 GSK3 fosforila secuencialmente en dirección N-terminal, los sitios: 3c 3b 3a
 Alternativa: quinasa DYRK2 fosforile sitio 4, creando otro lugar de cebado para GSK3, sin que intervenga CKII
REGULACIÓN ALOSTÉRICA: afecta únicamente a la GSb (forma fosforilada e inactiva) del músculo
Cs musculares en reposo, predomina GSa promueve síntesis glucógeno
Durante contracción muscular, estímulos nerviosos provocan un ⇈ [Ca2+], activando a diversas proteínas quinasas por fosforilación:
 PKC
Activan degradación glucógeno
 GPK GP
 CaMKII Promueve el paso GSa a GSb Inhibe síntesis glucógeno
Efector alostérico positivo: G6P
G6P es el precursor de la UDP-glucosa
 actúa como un sustrato indirecto de GS
Realmente constituye un bucle de retroactivación
[G6P]  1 mM reactiva la síntesis de glucógeno (sin haber estímulo externo):
 G6P se une a su sitio alostérico cambio conformacional en GSb
 Es capaz de eliminar el papel inhibitorio de la fosforilación
 Favorece su desfosforilación por la PP1: GSb GSa (estado R)
No ocurre en hígado: ⇈ [G6P] glucosa libre sangre

G6Pasa
Hígado: glucagón (indica baja glucosa sanguínea) y
adrenalina (necesidad de huir o luchar) tienen el
efecto de maximizar la salida de glucosa a la
sangre, activando las vías glucogenolítica y
gluconeogénica
Músculo: adrenalina aumenta la degradación de
glucógeno y la vía glucolítica para proporcionar ATP
para la contracción muscular
LIVER

Tema 4. REGULACIÓN DEL METABOLISMO DE LA GLUCOSA
1. Regulación de la glucólisis – gluconeogénesis

1.1. Regulación de la hexoquinasa y glucosa 6P fosfatasa
1.2. Regulación de la FPK-1 y FBPasa-1
1.2.1. Papel de la fructosa 2,6 bisfosfato y regulación del enzima bifuncional (FPK-2/FBPasa-2) en hígado
1.2.2. Papel de la fructosa 2,6 bisfosfato y regulación del enzima bifuncional (FPK-2/FBPasa-2) en corazón
1.2.3. Papel de la fructosa 2,6 bisfosfato y regulación del enzima bifuncional (FPK-2/FBPasa-2) en músculo esquelético
1.3. Regulación piruvato quinasa, piruvato carboxilasa y fosfoenolpiruvato carboxiquinasa
Regulación del metabolismo de la glucosa
1. REGULACIÓN DE LA GLUCÓLISIS - GLUCONEOGÉNESIS
 Hk o Gk
GLUCÓLISIS Catabolismo glucosa  PFK-1
 PK
Ambas son rutas principalmente citosólicas
Ambos procesos deben controlarse de manera recíproca
 glucosa-6-fosfatasa
GLUCONEOGÉNESIS Síntesis de novo glucosa  FBPasa-1
 PC + PEPCK
GLUCÓLISIS es una RUTA UNIVERSAL y ANFIBÓLICA con una doble función:

Oxidación de la glucosa con el fin de OBTENER ATP
Aeróbica hasta CO2 y H2O = 30 - 32 ATP
Anaeróbica hasta lactato, etanol……= 2 ATP
Aportar precursores para reacciones de síntesis
Aminoácidos para síntesis de proteínas
Ribosa 5P para la síntesis de nucleótidos…
Glicerol-fosfato para síntesis de lípidos (TAGs, glicerofosfolípidos)
Síntesis de colesterol
Síntesis de polisacáridos y aminoazúcares de la matriz extracelular y/o pared celular
Almacenamiento de reservas glucídicas (almidón, glucógeno…)
La velocidad de conversión de glucosa en piruvato está regulado para cubrir ambas necesidades celulares
GLUCONEOGÉNESIS ocurre principalmente en el hígado y, en menor medida en la corteza renal y en las células epiteliales del intestino delgado
Principal misión es la generación de glucosa de novo (a partir de compuestos no glucídicos) cuando:
reservas de glucógeno se han agotado
no hay aporte de glucosa de la dieta
Está muy relacionada con aquellas rutas celulares que están implicadas en la generación de los sustratos gluconeogénicos
Glicerol, procedente de la degradación de los TAGs (almacenados en el hígado o en el tejido adiposo)
Propionil CoA, procedente de la degradación de ácidos grasos de cadena impar de la dieta
AAs, procedentes de la degradación de proteínas
 Ala, es uno de los sustratos gluconeogénicos (Ciclo glucosa - alanina)
Lactato, procedente de la glucólisis anaerobia de eritrocitos y músculo esquelético bajo condiciones de hipoxia (Ciclo de Cori)
1.1. REGULACIÓN DE LA HEXOQUINASA – GLUCOSA-6-FOSFATASA
HEXOQUINASA (EC 2.7.1.1) es una transferasa, encargada de transferir un grupo fosfato desde el ATP a una hexosa (fosforilación):
GLUCOSA + ATP GLUCOSA-6-P + ADP
Es una enzima de baja especificidad, ya que puede fosforilar a diversas hexosas: glucosa, manosa y fructosa
En humanos, existen 4 ISOENZIMAS codificados por 4 genes diferentes:
HEXOQUINASA I, se conocen 5 variantes o isoformas producidas por splicing alternativo del RNAm:
Isoforma 1 (HKI): presente en todas las células
Isoforma 2 (HKI-R), específica de eritrocitos
Isoforma 3 y 4 (HKI-ta/tb), específicas del tejido testicular
Repasar conceptos y características de isoenzimas:
Isoforma 5 (HKI-td), específicas del tejido testicular
Tema 4, segunda parte (diapositiva 20)
HEXOQUINASA II, forma predominante en los tejidos musculares
HEXOQUINASA III, forma predominante en leucocitos

HEXOQUINASA IV (Glucoquinasa, GK), se conocen 3 isoformas
Isoforma 1, se expresa específicamente en las células b de los islotes pancreáticos
Isoforma 2 y 3, expresadas en el hígado
DIFERENTES ISOENZIMAS DE LA HEXOQUINASA EN MÚSCULO E HÍGADO REFLEJAN SU DIFERENTE PAPEL EN EL METABOLISMO GLUCÍDICO:
Músculo (tejido glucolítico): consumidor de glucosa para producir el ATP, necesario para la contracción de las fibras musculares
Hígado (tejido gluconeogénico): implicado en el mantenimiento de la homeostasis de la glucosa en el organismo
Altos índices de glucemia: capta el excedente de glucosa en sangre y la guarda en forma de glucógeno ó lípidos
Bajos índices de glucemia: genera glucosa de novo a partir de los denominados sustratos gluconeogénicos
EN MÚSCULO, predominan las hexoquinasas I y II, caracterizadas por:
Presentar una ALTA afinidad (Km muy baja) por la glucosa

Capaces de fosforilar glucosa incluso a concentraciones muy bajas
Glucosa-6P generada puede ir hacia :
vía glucolítica
dependiendo de las necesidades energéticas de la célula muscular
vía glucogenogénica
Normalmente, [glucosa sérica] = 4 – 7 mM, por lo que en la célula muscular tiene lugar:
Alta tasa de transporte de glucosa hacia el interior del miocito

Proceso favorecido por los transportadores de glucosa (GLUT4), cuya Km para la glucosa está entorno 5 mM
 Provoca un ⇈ [glucosa] intracelular
(Gráfica) observamos como la Hexoquinasa está semisaturada a [glucosa] muy bajas, entorno a 0,1 mM
Actividad HK a [glucosa] normales e incluso bajas en sangre (periodos de ayuno, ejercicio prolongado) está muy cercana a su Vmax
 Es decir, está a saturación
Normalmente, el paso limitante de cualquier vía metabólica suele ser la 1º reacción
 Ej (vía glucolítica), ese paso limitante determinaría la velocidad a la cual se transforma la glucosa en piruvato
En músculo: paso limitante de la vía glucolítica, no es el 1º, sino el 3º , catalizado por la enzima PFK-1 (F6P pasa a F1,6 diP)
Esto ocurre porque G6P es un metabolito intermediario que puede ser desviado hacia otras rutas:
 Síntesis de glucógeno (coincidiendo con ⇈ [glucosa] en sangre y baja actividad muscular)
 Ruta pentosas fosfato (como fuente de ribos 5P y NADPH) para la célula muscular
Esto nos ayuda a entender por que la Hexoquinasas del músculo presentan únicamente CONTROL ALOSTÉRICO, siendo:
Inhibidor: Glucosa-6P
 ⇈ [G6P] aparecen cuando la PFK-1 está inhibida:
 Si esta enzima no funciona se termina acumulando altas [F6P] en la célula muscular
 Esta F6P es isomerizada a G6P por la enzima glucosa 6P isomerasa (cataliza una reacción reversible)
 Ahora los altas [G6P] terminan por inhibir a la hexoquinasa
HK G6P-isomerasa PFK-1
Glucosa G6P F6P F1,6BP
inhibido
EN HÍGADO, se encuentra la glucoquinasa, caracterizada por:

Presenta una BAJA afinidad (Km muy ALTA) por la glucosa
(Gráfica) observamos está semisaturada a [glucosa] entorno a 10 mM
 Concentración muy superior a la concentración normal de la glucosa (4-6 mM) en sangre
Cuando [glucosa sangre] aumenta (ej: después una comida rica en glúcidos)
 Glucosa entra en el hepatocito promovido por la insulina a través de los transportadores de glucosa (GLUT2)
 Estos poseen una Km para la glucosa entre 15- 20 mM
 Solo empezarán a pasar glucosa hacia el hepatocito cuando [glucosa sérica] este entorno a su Km
 A estas concentraciones, la actividad GK no está saturada
 su actividad puede seguir aumentando incluso a [glucosa]  20 mM
Cuando [glucosa sangre] es baja (ej: entre comidas o en ayuno)
 Hígado activa la vía gluconeogénica
 [glucosa generada] es rápidamente exportada a la sangre (GLUT4)
 En este momento, los GLUT4 realizan su papel a la inversa,
transportan glucosa desde el hepatocito a la sangre
 Proceso favorecido por la baja [glucosa sérica]
 Por tanto, [glucosa en el citosol] será más baja que la Km de GK
 no habrá actividad glucoquinasa

CONTROL ALOSTÉRICO de la Glucoquinasa,

no es inhibida por la G6P, puede seguir funcionando a muy ⇈⇈ [G6P]
 Normalmente, la [G6P hepáticos] son muy bajos debido a que seguirá diferentes vías dependiendo de las necesidades celulares:
 Exportada en forma de glucosa libre gracias a la presencia del enzima Glucosa 6P-asa
 Almacenada en forma de glucógeno gracias a la presencia de actividad glucógeno sintasa
 Desviada hacia la ruta de las pentosas fosfato
Inhibidores:
 Fructosa-6P
 Presencia de una proteína reguladora específica del hígado, que se une de forma reversible a la GK
 Esta unión ancla a la glucoquinasa dentro del núcleo del hepatocito
 Este mecanismo se ve reforzado por la presencia de altas [F6P]
o En situaciones de ayuno: [glucosa sérica] <<< 4 - 6 mM
 F6P desencadena la inhibición de GK por la proteína reguladora, que la ancla en el núcleo
 Esto favorece que el hígado no compita con el resto de órganos por la escasa glucosa
Activadores:
 Fructosa-1P, provoca la separación del complejo temporal entre la proteína reguladora - glucoquinasa
 Altas [glucosa libre]
 Dietas ricas en glúcidos ⇈ [glucosa sérica] entra al hepatocito a través de GLUT2
o Cuando [glucosa] en el citosol aumenta, ésta se equilibra con la glucosa del núcleo (Tte a través de los poros nucleares)
 Glucosa compite con la F6P, provocando la disociación del complejo proteína reguladora – GK
 GK puede pasar de nuevo al citosol
 Conclusión : altas [Glucosa] activa GK
 Fructosa (dieta) es convertida en F1P disociación proteína reguladora - GK Activa GK
Además, GK presenta una regulación por inducción de su síntesis

Insulina a través de la vía nuclear dependiente Ras-MAPquinasa promueve la transcripción del gen de la GK
Esto contribuye a disminuir los niveles de glucosa en sangre
En los pacientes diabéticos la falta de insulina provoca una menor [GK] hepática glucosa no puede ser retirada de la sangre
GLUCOSA-6-FOSFATASA (EC 3.1.3.9) es una enzima hidrolasa

Cataliza el último bypass de la vía gluconeogénica para evitar el paso irreversible de la hexoquinasa de la vía glucolítica:
G6P + H2O GLUCOSA + Pi
Está localizada en la cara interna (lumen) del RE liso
No presenta regulación por:

alosterismo
modulación covalente (control hormonal)
Su actividad depende de la [G6P], su sustrato
Presenta regulación a largo plazo por hormonas:

activan su síntesis: glucagón, glucocorticoides y hormonas tiroideas
inhiben su síntesis: insulina
1.2. REGULACIÓN DE LA FOSFOFRUCTOQUINASA-1 y FRUCTOSA 1,6-BISFOSFATASA
PFK-1 (EC 2.7.1.1) es una transferasa, encargada de transferir un grupo fosfato desde el ATP a la F6P
F6P + ATP F1,6diP + ADP
Es el punto de control más importante de la vía glucolítica

Hay tres isoformas diferentes de PFK-1 en mamíferos:
PFK1-M del músculo
PFK1-L del hígado
PFK1-P de plaquetas o cerebro
PFK-1 forma una estructura homotetramérica (4 subunidades idénticas)
Monómeros forman homodímeros (mínima actividad catalítica)

Estos se asocian para formar homotetrámeros completamente activos
 Equilibrio entre monómeros, dímeros y tetrámeros depende de la
presencia de ciertos moduladores alostéricos

En el músculo, PFK-1 se pueden asociar con:
 Proteína calmodulina (CaM)
 Filamentos de actina (PFK-1 activa)
 Microtúbulos (PFK-1 menos activa)

PFK-1 presenta de forma excepcional ÚNICAMENTE una REGULACIÓN DE TIPO ALOSTÉRICO

Sin embargo, PFK-1 puede ser fosforiladapor diversas proteínas quinasas en residuos de Ser, Thr o Tyr en respuesta a:
Insulina
Adrenalina
Neurotransmisor: serotonina
no implica un mecanismo de modulación covalente
 No existe una forma fosforilada activa y otra desfosforilada inactiva
no promueve grandes cambios ni en la estructura ni en la actividad del enzima
Pero si modifica su comportamiento frente a sus efectores alostéricos:

 Disminuye su susceptibilidad a la inhibición por ATP
PFK-1 en su forma tetramérica presenta dos conformaciones: T y R

T, baja afinidad por su sustrato, F6P
R, alta afinidad por la F6P
Posee 2 sitios catalíticos para sus sustratos: F6P y ATP
Y varios lugares de unión para sus moduladores alostéricos:
Activadores: ADP, AMP, Fructosa 2,6-bisfosfato
Favorecen la conversión de los dímeros en tetrámeros
Favorecen la conformación R
Inhibidores: ATP, citrato, lactato
Favorecen la conversión del tetrámeros R en T
Favorece la aparición de dímeros menos activos

La fosforilación ocurre siempre sobre el tetrámero en conformación R
REGULACIÓN ALOSTÉRICA PFK-1 presenta matices bien diferentes en hígado y músculo
pH INTRACELULAR (sólo en músculo esquelético)
⇊ pH celular inhibición PFK-1
 Este descenso es consecuencia de un aumento de la glucólisis anaeróbica, productora de lactato
 Lactato inhibe PFK-1
o Permite proteger al músculo de posibles lesiones celulares al producirse altas [lactato]
o Membrana plasmática del miocito posee transportadores específicos que cotransporta lactato y H+ a la sangre
 Consecuentemente se produce un descenso del pH sanguíneo podrían derivar en una acidosis láctica
o La inhibición del lactato sobre la PFK-1 evita, en cierto modo, una posible acidosis en la sangre
 Lo que podría desencadenar en la muerte del individuo
 Adrenalina es capaz de fosforilar a la PFK-1 a través de PKA
 No vuelve más activa a la PFK-1
 Reduce la inhibición del lactato sobre la PFK-1
o Permite mantener la vía glucolítica activa más tiempo para obtener ATP (y así poder huir del león)
 Esta caída del pH del miocito potencia además, el efecto inhibidor del ATP sobre la PFK-1
⇊ pH celular no tiene ningún efecto sobre la PFK-1 HEPÁTICA
 no es una señal metabólica para el hígado, ya que este no produce lactato
 Hígado capta el lactato sanguíneo para reconvertilo en glucosa (gluconeogénesis)

EFECTORES ALOSTÉRICOS:
Carga energética celular
Rango fisiológico: 0.6 – 0.9
 Tenemos que tener en cuenta que el ATP es: F6P + ATP F1,6diP + ADP
 uno de los sustratos de la PFK-1
 un producto final de la glucólisis
 ATP tiene 2 sitios de unión a la PFK-1:
 sitio catalítico
 sitio regulador
 (Gráfica) observamos que a bajas [ATP] en el citosol:
 curva de saturación para su sustrato (F6P) es casi hiperbólica
o El sitio regulador del ATP está desocupado
o PFK-1 se encuentra totalmente en el estado R máxima afinidad por F6P
 (Gráfica) observamos que a altas [ATP] en el citosol:
 curva saturación para la F6P pasa a ser de tipo sigmoidal
o ATP se ha unido a su sitio regulador inhibe PFK-1

o PFK-1 se encuentra totalmente en el estado T disminuye la afinidad por F6P
 ⇈ Carga energética es indicativo de altas [ATP] inhibe PFK-1 y, por tanto inhiben la vía glucolítica
 ⇊ Carga energética es indicativo de altas [ADP] o [AMP] activa PFK-1, y por tanto activan la vía glucolítica
 Este efecto es mucho más marcado en el músculo esquelético (fuertes variaciones de ATP) que en hígado (fluctuaciones son menores)
[Citrato] en músculo y hígado
 Es un intermediario clave en la oxidación aeróbica de la acetilCoA procedente de:
 Piruvato (glucólisis)
 ácidos grasos Entra al ciclo de Krebs

 aminoácidos
 La oxidación de estos compuestos ⇈ [citrato mitocondrial]
 Si el ciclo de Krebs está inhibido (altos niveles de ATP y NADH) ocurre que:
 Parte del citrato mitocondrial pasa al citosol (lanzadera del citrato) ⇈ [citrato] citosólico
o En el caso del músculo, es indicativo de que está en reposo o bien con una actividad muy baja
o En el caso del hígado, indica la abundancia de precursores biosintécticos
o En ambos casos, no es necesario degradar más unidades de glucosa
 ⇈ [citrato] citosólico, termina por inhibir a la PFK-1, es decir, a la vía glucolítica
 Además también potencia el papel inhibitorio del ATP sobre la PFK-1

[Fructosa 2,6 bisfosfato]
 En HÍGADO,
 PFK-1 no depende tanto de la carga energética, ya que, sus fluctuaciones son menos marcadas que en músculo
 Precisa un mecanismo más sutil que le permita realizar control de forma estricta los niveles de glucemia en sangre:
⇊ [glucosa en sangre]: glucagón liberado por las células a del páncreas estimula al hígado a:
o producir y liberar glucosa a la sangre y que deje de consumirla independientemente de su carga energética, mediante
 Activación de la glucogenólisis: glucógeno G6P Glucosa libre sangre
 Activación de la vía gluconeogénica usando como precursores lactato, glicerol y aas
⇈ [glucosa en sangre]: insulina liberada por las células b del páncreas estimula al hígado a :
o Aumentar la captación de glucosa y su utilización como:
 Combustible (activa la glucólisis)
 Almacenamiento de reservas de glucosa en forma de glucógeno (activa la glucogenogénesis)
 Síntesis de TAGs y colesterol a partir del excedente de glucosa (activa la lipogénesis)
 Este rápido control hormonal de los niveles de glucemia principalmente a través de las vías:
 Degradación (glucólisis)
Está mediada a través de la fructosa 2,6- bisfosfato (F2,6-P2)
 Síntesis (gluconeogénesis)
 En MÚSCULO:
 la regulación de la PFK-1 depende en mayor medida de su carga energética
o sus fluctuaciones son muy marcadas dependiendo de la actividad muscular
 Y, en menor medida, por el papel ejercido por la F2,6 biP

 Fructosa 2,6-bisfosfato actúa de forma recíproca (enciende una vía y apaga la opuesta):
 Activa a FPK-1 de la glucólisis
 Inhibe a FBPasa-1 de la gluconeogénesis
 Cuando Fructosa 2,6-bisfosfato se une a su centro alostérico en la PFK-1, provoca:
o Un aumento de la afinidad de la PFK-1 por su sustrato (F6P)
o Y, una reducción de la afinidad de la PFK-1 por sus efectores alostéricos negativos, ATP y citrato
 En las células hepáticas, a concentraciones fisiológicas de sus sustratos, ATP y F6P así como la de sus efectores (+):
o PFK-1 está virtualmente inactiva en ausencia de F2,6-P2
o Presencia de F2,6-P2 (mM) dispara la actividad PFK-1
o Perfil sigmoideo de la velocidad frente [F6P] se torna hiperbólico en presencia de F2,6-P2 1 mM
 Gráfica, observamos como en presencia de 1 mm de F2,6-P2, :
 La afinidad del la PFK-1 por la F6P ha aumenta considerablemente, su Km para la F6P es
ahora muy muy inferior al 0.1 mM

 Y entorno a ese valor ya se ha alcanzado la saturación, es decir, Vmax, de la PFK-1
FBPasa-1 (EC 2.7.1.1) es una hidrolasa:

Catalizada el segundo bypass de la vía gluconeogénica para evitar el paso irreversible de la PFK-1 de la vía glucolítica:
F1,6-P2 + H2O F6P + Pi
Es una enzima alostérica, cuyos moduladores principales son:
Inhibidores: AMP; F2,6-P2
 (Gráfica) observamos el comportamiento de la activida FBPasa-1 a diferentes concentraciones de F1,6 biP (su sustrato):
 En presencia de su inhibidor principal (F2,6-P2) , la actividad FBPasa-1 está inhibida (línea roja)
o la representación de Michaelis-Menten pasa a ser de tipo sigmoidal
 Mientras que, en ausencia de F2,6-P2 , la actividad FBPasa-1 es muy alta (línea azul)
o la representación de Michaelis-Menten es claramente hiperbólica

¿CÓMO EJERCE SU PAPEL REGULADOR LA FRUCTOSA 2,6 BISFOSFATO?
1. Ejerce su efecto regulador a concentraciones muy bajas
 Constante de inhibición (Ki )del AMP = 25 mM

 Ki de la fructosa 2,6 biP = 2.5 mM
 Activa a FPK-1 de la glucólisis
 Inhibe a FBPasa-1 de la gluconeogénesis
2. Sus niveles celulares , es decir, su presencia o ausencia en el citosol, dependen de la actividad del enzima bifuncional (PFK-2/FBPasa-2)
Enzima bifuncional está presente en la célula como una única cadena polipeptídica
Sin embargo, procede de la fusión de 2 genes diferentes (codificaban 2 proteínas diferentes)

En hígado está formada por:
1 Dominio regulador, extremo N-terminal
 Porta un residuo de Ser (modulación covalente por fosforilación – desfosforilación)
1 Dominio con actividad quinasa (PFK-2)
 Encargado de generar la fructosa 2,6 biP en el citosol
1 Dominio con actividad fosfatasa (FBPasa-2)
 Encargado de eliminar la fructosa 2,6 biP del citosol
Estos 2 dominios nunca están activos o inactivos al mismo tiempo:
 si el dominio quinasa está ON, el dominio fosfatasa estará en OFF
 Si el dominio fosfatasa está OFF, el dominio quinasa estará en ON

1.2.1. REGULACIÓN DE LA ENZIMA BIFUNCIONAL PFK-2/FBPasa-2 EN EL HÍGADO
CONTROL ALOSTÉRICO a través de la F6P
Activa a la PFK-2 (dominio quinasa)

Inhibe a la FBPasa-2 (dominio fosfatasa)
MEDIANTE MODIFICACIÓN COVALENTE por fosforilación – desfosforilación (residuo Ser32, adyacente al dominio quinasa):
Forma fosforilada : PFK-2 (inactiva) y FBPasa-2 (activa)

fuerte control hormonal (insulina y glucagón)
Forma desfosforilada: PFK-2 (activa) y FBPasa-2 (inactiva)
HÍGADO
Xilulosa 5P también ejerce un papel regulador sobre los niveles de F2,6-P2
Este azúcar es uno de los productos generados en la ruta de las pentosas fosfato
Favorece el incremento de la glucólisis después una ingesta rica en glúcidos:
⇈ [glucosa] en la célula hepática ⇈ [G6P] puede pasar a:
vía glucolítica
Ruta pentosas fosfato ⇈ [xilulosa 5P], activa alostéricamente PP2A
Desfosforila PFK-2/FBPasa-2
PFK-2 activa
FBPasa-2 inactiva
⇈⇈ [F 2,6-BP]
Intermediarios síntesis ác. grasos
⇈ [acetilCoA] (glucólisis)
Activa: PFK-1 Glucólisis
⇈ [NADPH] (ruta pentosas-P)
Inhibe: FBPasa-1 Gluconeogénesis
⇈ [xilulosa 5P] está activando la síntesis de ácidos grasos en el citosol de la célula hepática en respuesta a la alta ingesta de glúcidos
1.2.2. REGULACIÓN DE LA ENZIMA BIFUNCIONAL PFK-2/FBPasa-2 EN CORAZÓN
Corazón expresa una isoenzima diferente de la enzima bifuncional hepática

Presenta 2 dominios reguladores, uno en el extremo N-terminal y otro en el extremo C-terminal
Su fosforilación por diversas proteínas quinasas conlleva a un aumento de la actividad quinasa (PFK-2)
Células coronarias en condiciones de hipoxia cambian a una glucólisis anaeróbica para tratar de mantener la producción de ATP (contracción)
Esto conduce a un proceso anómalo denominado isquemia
Durante la isquemia, se activa una proteína quinasa dependiente AMP (AMPK) que se encarga de:
 Fosforilar a la enzima bifuncional activando más el dominio PFK-2 ⇈ [F2,6-P2]
activa glucólisis
1.2.2. REGULACIÓN DE LA ENZIMA BIFUNCIONAL PFK-2/FBPasa-2 EN EL MÚSCULO ESQUELÉTICO
Músculo esquelético presenta una isoenzima sin regulación covalente por fosforilación – desfosforilación
Está regulada por los niveles de F6P
En este caso, F6P actúa tanto como sustrato y como activador alostérico
Si aumenta [F6P] (indica disponibilidad de sustrato glucolítico) aumento de la actividad PFK-2 ⇈ [F2,6-P2]
activa glucólisis
1.3. REGULACIÓN DE LA PIRUVATO QUINASA, PIRUVATO CARBOXILASA Y FOSFOENOLPIRUVATO CARBOXIQUINASA
PIRUVATO QUINASA (EC 2.7.1.40) es una transferasa, transferir un grupo fosfato desde el PEP al ADP
PEP + ADP PIRUVATO + ATP
Es un proceso de fosforilación a nivel de sustrato:
En humanos, existen 3 isoenzimas que difieren en distribución tisular como en respuesta a los moduladores:
Isoenzima L (hígado)
Codificadas por el gen PKLR, generadas por splicing alternativo
Isoenzima R, (eritrocitos)
Isoenzima M, con 2 isoformas formadas a partir de un splicing alternativo del gen PKM :
M1 presente en músculos, corazón y cerebro
M2 detectable en tejido fetal temprano y presente en la mayoría de los tejidos adultos, y en células cancerosas
La enzima es un homotetrámero
Las isoformas M1 y M2 están únicamente reguladas por alosterismo
Las isoenzimas R y L presentan regulación alostérica y modulación covalente por fosforilación – desfosforilación
REGULACIÓN ALOSTÉRICA de las isoenzimas L (hígado) y M (músculo):
Activadores
 PEP, sustrato reacción
 Fructosa 1,6 diP (activación anterógrada)

 Asegura que la F1,6BP formada alcance su transformación a piruvato
Inhibidores:
 piruvato, producto reacción
 Acetil CoA, procedente de la b-oxidación de ácidos grasos de cadena larga
 Permite reducir el flujo glucolítico cuando están disponibles otros combustibles metabólicos (grasas y proteínas)
 ATP, elevada carga energética inhibe la degradación de la glucosa
 Alanina (únicamente en la isoenzima L del hígado)
 Asociada al ciclo de la glucosa – alanina
 Acopla el metabolismo de aminoácidos y glúcidos en el músculo
 Periodos de escasez de glúcidos en la dieta, consume sus propias proteínas
 Ala, es el principal aminoácido precursor de glucosa en el hígado
 Bajo estas condiciones, Ala inhibe PK inhibe glucólisis
 Esto no sucede en el músculo porque la Ala es enviada a la sangre y no se acumula
en el citosol de las células musculares

REGULACIÓN MODIFICACIÓN COVALENTE de la isoenzimas L (hígado) y control hormonal
Forma activa (desfosforilada): Fuerte afinidad por Ala y ATP

Forma inactiva (fosforilada): Menor afinidad por PEP y F1,6diP
⇊ [glucosa sangre]
 ⇊ [glucosa sérica] glucagón PKA

fosforila
PK, inactivándola
inhibe la glucólisis
⇈ [glucosa sangre] insulina
 Bajo estas condiciones, el hígado no consume glucosa a través de la vía glucolítica, y en su lugar, la exporta a la sangre
 Cuando los niveles de glucosa vuelvan a aumentar se produce la liberación de insulina, que:
o Inhibe la liberación de glucagón
o A través de la vía citosólica de la PI-3K activa PKB, la cual se encarga de activar a:
 PP1, que desfosforila a la PK, es decir, la devuelve a su forma activa
 Fosfodiesterasa, que transforma el AMPc en AMP, y por tanto desactiva a la PKA
PK es también una enzima inducible por medio de la insulina, la cual activa su expresión génica en dietas ricas en glúcidos
Se ha observado que individuos diabéticos presentan una menor tasa de expresión de PK
PIRUVATO CARBOXILASA (EC 6.4.1.1) es una ligasa, que cataliza el paso de piruvato a oxalacetato (proceso mitocondrial)
piruvato + HCO3- + ATP OAA + ADP + Pi
Es un homotretámero
Cada subunidad está unida una molécula de biotina a través de un residuo de Lys (grupo e-amino) localizado en el centro activo
Realmente la reacción que cataliza se puede dividir en 2 subetapas:
1. Biotina es carboxilada Biotina-enzima + ATP + HCO3- CO2-Biotina-enzima + ADP + Pi

Subetaparegulada Carboxibiotina
2. Carboxilacion del piruvato carboxibiotina + ADP + Pi + Piruvato Biotina-enzima + oxalacetato (OAA)
La regulación es únicamente alostérica
ACTIVA:
piruvato carboxilasa
Altas [AcetilCoA] INHIBE:
piruvato quinasa (PEP  piruvato)
PDC (piruvato  acetilCoA)
Es un indicador de la presencia de otros combustibles para generar ATP a través del ciclo Krebs
Se puede pasar más carbonos hacia la ruta gluconeogénica
FOSFOENOLPIRUVATO CARBOXIQUINASA (EC 4.1.1.32) es una liasa, que cataliza:
OAA + GTP Piruvato + GDP + CO2 (proceso citosólico)
Regulada únicamente a nivel transcripcional

gen PEPCK posee una región promotora muy compleja capaz de integrar distintas señales hormonales a través de diferentes factores de
transcripción, coactivadores, correpresores y elementos de respuesta:
Glucagón
Glucocorticoides activa transcripción PEPCK
Horm. tiroideas
Insulina, inhibe transcripción PEPCK


Tema 5. REGULACIÓN DE LAS RUTAS CENTRALES DEL METABOLISMO
1. Respiración celular
2. Complejo Piruvato deshidrogenasa (PDC)
2.1. Destino del piruvato y papel del complejo PDC
2.2. Regulación del PDC
3. Regulación del ciclo de Krebs
4. Regulación de la cadena de transporte electrónico y fosforilación oxidativa
Regulación de las rutas centrales del metabolismo
1. RESPIRACIÓN CELULAR
Se pude definir como el conjunto de procesos moleculares mediante los cuales las células consumen O2 y producen CO2
Ocurre en 3 fases principales:
1. Combustibles orgánicos (glúcidos, lípidos y aas) se oxidan hasta compuestos de 2

átomos C, portando un grupo acetilo, AcetilCoA
2. Grupo acetilo de la AcetilCoA se oxida hasta CO2 en el ciclo Krebs

Dicho proceso libera energía en forma de: GTP y transportadores electrónicos
(coenzimas) en forma reducida, NADH y FADH2
3. NADH y FADH2 se oxidan en la cadena de tte electrónico (CTE), liberando H+ y e-

Los e- son transferidos hasta el O2, aceptor electrónico final de la CTE
Durante este proceso se libera suficiente energía para generar ATP a partir de ADP +
Pi (fosforilación oxidativa)
Ciclo Krebs y CTE son vías posteriores a la glucólisis, surgen después a la aparición de las cianobacterias
Estas son las responsables de la concentración de O2 en el planeta
Diapositiva de repaso
2. PIRUVATO DESHIDROGENASA (PDH)
2.1. DESTINO AERÓBICO DEL PIRUVATO Y PAPEL COMPLEJO PDC
Catalizada por el complejo multienzimático de la PDH (matriz mitocondrial), realiza una descarboxilación oxidativa irreversible
Complejo PDC necesita de la participación de 5 coenzimas, los cuales actúan de forma secuencial:
Tiamina pirofosfato (TPP), unido al enzima E1

Lipoamida, unida covalentemente al enzima E2
Coenzima A, libre en solución en la matriz mitocondrial
FAD+, unida al enzima E3
NAD+, libre en solución en la matriz mitocondrial
Complejo PDC está formada en eucariotas por 6 componentes proteicos:

3 proteínas implicadas en la catálisis (E1 E2 E3)
1 proteína de unión a E3 (E3BP)
2 proteínas reguladoras específicas:
 Piruvato deshidrogenasa quinasa (PDK)
 Piruvato deshidrogenasa fosfatasa (PDP)
La enzima E2 presenta varios papeles:

Actúa como un andamio en la organización del complejo PDC
Conecta los 3 componentes (E1, E2 y E3) que participan en las reacciones enzimáticas secuenciales del complejo
A través de sus dominios lipoilo, ancla las subunidades de la PDK al complejo
Diapositiva nueva
2.2. REGULACIÓN DEL COMPLEJO PDC
Este complejo es clave en el metabolismo glucídico, modulado mediante
1. MECANISMOS ALOSTÉRICOS:
altas [piruvato]
ACTIVADORES altas [NAD+]
altas CoA
altas [acetilCoA]
INHIBIDORES inhibición por producto
altas [NADH]
Diapositiva nueva
2. MODIFICACIÓN COVALENTE por fosforilación - desfosforilación
Este mecanismo afecta únicamente a la propia PDH (E1, sobre su subunidad a) del complejo PDC
Puede sufrir fosforilación en 3 residuos de serina diferentes
Forma activa (forma a) desfosforilada gracias a la PDP

Forma inactiva (forma b) fosforilada gracias a la PDK
 Complejo PDC no está regulada directamente por la acción del glucagón (hígado) o adrenalina (otros tejidos) a través de la PKA
 En músculo, estímulo nervioso (acetilcolina) ⇈ [Ca2+ ]cit activación PDP activa PDH (E1 complejo PDC) ⇈ oxidación acetilCoA
 En tejido adiposo y hepático, después de una ingesta rica en calorías, insulina vía citosólica PI3K PKB, la cual se encarga de:
 Activar PDP activa PDH (E1 complejo PDC) favoreciendo síntesis de acetilCoA a partir de los glúcidos, lípidos y proteínas (dieta),
 Inactivar a la PDH quinasa y, por tanto, la síntesis de lípidos (ácidos grasos, colesterol…..
 En ambos tejidos, PDH quinasa también está regulada

alostéricamente por:
altas [acetilCoA]
ACTIVADORES altas [NADH]
Altas [ATP]
altas [piruvato]
altas [NAD+]
INHIBIDORES
altas CoA
Altas [ADP]
3. REGULACIÓN DEL CICLO DE KREBS
3.1. ETAPAS DEL CICLO
 Paso ➍ se forma un compuesto tioéster muy energético,

succinil Coenzima A.
 La ruptura del enlace tioéster es acoplada a una
fosforilación a nivel de sustrato ➎ de GDP a GTP
 Etapas ➊,➌ y ➍ son irreversibles:

 Citrato sintasa
 Isocitrato deshidrogenasa
 a-cetoglutaratodeshidrogenasa
9 ATP
 Las demás son reversibles
 Ciclo de Krebs opera únicamente en condiciones aeróbicas
 Requiere el suministro continuado de NAD+ y FAD+
 NADH y FADH2 generados en el ciclo se reoxidan cuando transfieren sus e- al O2 a través de la CTE síntesis ATP
 Esta formación de ATP se denomina fosforilación oxidativa
 Velocidad del ciclo depende de las necesidades de ATP

3.2. NATURALEZA ANFIBÓLICA DEL CICLO DE KREBS
 Oxidación completa compuestos (glúcidos, lípidos y aminoácidos) confluyen en el Ciclo Krebs (ruta central del metabolismo)
 Los intermediarios del propio ciclo Krebs también sirve como fuente para sintetizar otras moléculas
CITRATO, interviene en:

 Síntesis ácidos grasos (citosol): requiere
acetil-CoA. Permite sacar acetil-CoA de la
mitocondria al citosol para la lipogénesis.
 biosíntesis de colesterol (RE liso)
α-CETOGLUTARATO, interviene en:

 biosíntesis de aminoácidos: Glu y sus
derivados.
 Dichos aas intervienen en la síntesis de las
bases púricas
OXALACETATO interviene en:

SUCCINIL-CoA, precursor de:
 gluconeogénesis (citosol)
 síntesis de porfirinas implicadas en la
 síntesis de aminoácidos: Asn y sus derivados.
formación de grupos hemo (citocromos)
 Dichos aas intervienen en: síntesis de bases púricas y pirimidínicas
 Y de forma indirecta a través de PEP en otros aas (Ser, Gly, Cys…)
Diapositiva nueva
3.3. REGULACIÓN DEL CICLO DE KREBS
Flujo de metabolitos a través de este ciclo está fuertemente controlado

La velocidad de este ciclo viene definida por:
Disponibilidad de sustratos: acetilCoa, oxalacetato, coenzimas oxidadas
Modulación alostérica de las 3 enzimas reguladoras (retroinihibición por el producto):
Citrato sintasa
Isocitrato –DH
Complejo a-cetoglutarato-DH
No poseen regulación covalente

4. REGULACIÓN DE LA CADENA TRANSPORTE ELECTRÓNICO Y FOSFORILACIÓN OXIDATIVA
Mitocondrias están formado por 4 subregiones:

Membrana externa
Espacio intermembrana
Membrana interna
Matriz
Membrana interna está muy plegada, formando las crestas que se proyectan hacia el interior
La densidad de las crestas depende de la actividad respiratoria
A mayor actividad mayor nº y grado de empaquetamiento de las crestas
Metabolismo celular genera gran cantidad de coenzimas reducidos (NADH, FADH2) en:
NADH
Gliceraldehído 3P-DH Citosol
Glucólisis: gliceraldehído 3P + NAD+ + Pi 1,3 bisfosglicerato + NADH
Oxidación del piruvato: Complejo PDC

Piruvato + CoA + NAD+ acetilCoA + NADH
isocitrato-DH
Ciclo de Krebs: Isocitrato + NAD+ a-cetoglutarato + NADH
a-cetoglutarato-DH
a-cetoglutarato + NAD+ + CoA succinilCoA + NADH Mitocondria
MDH
Malato + NAD+ OAA + NADH
b-hidroxiacilCoA-DH
b-oxidación ácidos grasos: L-b-hidroxiacil-CoA + NAD+ b-cetoacilCoa + NADH
FADH2
Succinato-DH
Ciclo de Krebs: Succinato + FAD+ Fumarato + FADH2
Mitocondria
acilCoA-DH
b-oxidación ácidos grasos: acil-CoA + FAD+ enoilCoA + FADH2
NADH, FADH2 mitocondriales son reoxidados en la CTE (membrana mitocondrial interna)
Esta reoxidación está acoplado a la síntesis de ATP (fosforilación oxidativa)
Recordar que la fosforilación oxidativa ocurre en la matriz mitocondrial
NADH citosólico debe ser transportado hasta la matriz mitocondrial (no pueden atravesar membrana mitocondrial interna)
Este transporte es mediante las lanzaderas de protones, que varían dependiendo del tejido
Efecto neto: NADHcit FADH2mit

Cerebro
Efecto neto: NADHcit NADHcit
Músculo esquelético vertebrados
Hígado
Músculo insectos voladores
Riñón
CTE está formada por proteínas transportadoras de electrones

Localización celular: membrana mitocondrial interna
Forma libre: coenzima Q, citocromo c
Forman complejos multienzimáticos: I, II, III, IV
CTE
NADH, FADH2 transfieren e- NAD+ , FAD+
Reoxidándose a
Componentes de la CTE actúan secuencialmente en orden creciente de sus potenciales redox (E0)
Aceptor final e- es el 02, reduciéndose a H20
NADH + H+ + ½ 02 NAD+ + H20

ΔG0 = - 220 kJ/mol
El flujo de electrones desde el NADH al O2 es:
Complejo I ubiquinona (QH2) complejo III citocromo c (libre) complejo IV O2
El flujo de electrones desde el FADH2 al O2 es:
Complejo II (SDH) ubiquinona (QH2) complejo III citocromo c (libre) complejo IV O2

G3PDH
AcilCoA-DH
Los complejos I, III y IV realizan 2 funciones:

Transfieren e-
Actúan como bombas de H+
generando gradiente químico (pH)
Pasan H+ desde la matriz mitocondrial al espacio intermembrana
gradiente eléctrico (Δψ)
El complejo II es la enzima SDH del ciclo de Krebs

Genera FADH2
No es una bomba de H+ (no participa generación del pH)
CTE y fosforilación oxidativa están acopladas
Peter Mitchell en 1961 propuso la hipótesis del acoplamiento quimiosmótico, donde ocurre:
 Serie de reacciones de oxido-reducción, exergónicas y consecutivas perfectamente acopladas

 Parte energía liberada en la transferencia e- desde el NADH y FADH2 a través de los complejos hasta el 02 se usa para:
 bombear H+ fuera de la matriz mitocondrial al espacio intermembrana
Generando
1. Gradiente químico por la diferencia de concentración de H+ dentro y fuera de la matriz mitocondrial (ΔpH):
 pH más ácido espacio intermembrana

 pH alcalino en la matriz mitocondrial
2. Gradiente eléctrico (Δψ) que se origina con la separación de cargas cuando un H+ cruza la membrana sin un contraión
energía electroquímica almacenada en este tipo de gradiente, denominada FUERZA PROTÓN-MOTRIZ, representa una forma de
conservación de la energía liberada en la transferencia de e- a través de la cadena respiratoria
 Impulsa el retorno de los H+ a la matriz mitocondrial
 Es impermeable al paso de H+
Membrana mitocondrial interna
 H+ pasan por semicanales de subunidad F0 del complejo V
Fuerza protón - motriz  Proporciona la energía para la síntesis de ATP

 Proceso catalizado por la subunidad F1 del complejo V
 Esta fosforilación tiene lugar:
 En la matriz mitocondrial
 sin necesidad de ningún compuesto intermediario
ATP, ADP y Pi son moléculas cargadas
No difunden libremente a través de la membrana mitocondrial interna
Requieren 2 tipos proteínas transportadoras (membrana mitocondrial interna)
1. ATP-ADP translocasa
posee un único centro activo para unir: ATP ó ADP

Flujo de ATP y ADP están acoplados (tte antiporte) + Fuerza protón-motriz
Importa ADP a la matriz mitocondrial

Exporta ATP al citosol
2. Fosfato translocasa
La entrada Pi (H2PO4-) a la matriz acoplada al paso de H+ (tte simporte)
Estimaciones de la producción de ATP por fosforilación oxidativa:

Se basan en el nº de H+ bombeados por cada par de electrones transferidos:
Por cada 4 H+ que pasan la m. mitocondrial Interna 1 molécula de ATP
3 H+ pasan directamente por el complejo V

1 H+ a través de la actividad fosfato translocasa
Diapositiva nueva
4.1. REGULACIÓN DE CTE Y FOSFORILACIÓN OXIDATIVA
Ambos procesos están regulados por:
Presencia de sus sustratos:

NADH
Su ausencia conduce a la inhibición de CTE
FADH2
O2
Por el gradiente de pH:
pH ácido en la matriz mitocondrial inhibe el bombeo de H+ por los complejos reduce la velocidad de tte e-
Se inhibe la cadena respiratoria
Pero no la fosforilacion oxidativa
Por regulación enzimática:
Todas las etapas de la CTE son reversibles
Salvo el paso catalizado por la citocromo oxidasa (complejo IV):
Cit c red + ½ O2 Cit c ox + H2O
Está regulada por:

sus niveles de sustrato (citocromo c reducido y O2): si hay suficiente sustratos la enzima es activa
Niveles energéticos:
 Activadores: ⇈ [ADP], ⇈ [NADH]
 Inhibidores: ⇈ [ATP]
Diapositiva nueva
Sin embargo, la velocidad de la CTE en condiciones fisiológicas normales está ligada íntimamente a las necesidades de ATP
Electrones no se mueven a través de la CTE hasta el O 2 si al mismo tiempo el ADP no se fosforila a ATP
Ambos procesos están acoplados
célula produce solo la cantidad de ATP que se requiere de inmediato para mantener sus funciones
El control de la respiración aerobia por el ADP se domina control respiratorio

La formación de ATP está fuertemente relacionada con el denominado, cociente de acción de masas del ATP:
[ATP]
[ADP][Pi]
Las cantidades relativas de ATP y ADP en la matriz dependen en gran medida de ADP-ATP translocasa y fosfato translocasa
En este sentido, la ATP sintasa (Complejo V):
Inhibida: ⇈ [ATP] (mecanismo de retroinhibición)
Activada: ⇈ [ADP] y ⇈ [Pi]
Además, los niveles de ADP, NADH, FADH2 y O2 regulan la velocidad del ciclo Krebs
⇊ [ADP], el NADH y FADH2 no se pueden reoxidar en la CTE ciclo Krebs se hace más lento (no hay NAD+, FAD+)
⇈ [ADP], la fosforilación oxidativa se acelera, el NADH y FADH2 se reoxidan en la CTE ciclo Krebs se hace más activo
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4.2. DESACOPLAMIENTO DEL CONTROL RESPIRATORIO: Efectos de inhibidores externos
Hay 3 grupos de moléculas que pueden actúan como inhibidores:
Inhiben la cadena de transporte electrónico
Se unen a alguno de los componentes de la CTE

Bloquean su capacidad para cambiar entre sus formas oxidada – reducida
 Consecuentemente, inhiben la CTE
 Ej: cianuro
Inhiben la fosforilación oxidativa (actúan directamente sobre complejo V)
Interaccionan con la ATP sintasa (complejo V)

Impiden el paso de los H+ a través de su subunidad F0
 Consecuentemente, no hay síntesis de ATP
 Ej: oligomicina
Agentes desacoplantes
Son capaces de crear canales a través de la membrana

mitocondrial interna, por donde pasan los H+ desde el
espacio intermembrana a la matriz mitocondrial
Pero, entonces los H+, no van a pasar el canal de la
subunidad F0 del complejo V
 Inhibe la sintesis de ATP mitocondrial
 Ej: dinitrofenol
Diapositiva nueva
4.3. DESACOPLAMIENTO REGULADO DEL CONTROL RESPIRATORIO
Ocurre en el tejido adiposo marrón (BAT) presente en:
Organismos que hibernan para mantener su Tª corporal

Seres humanos recién nacidos
Mamíferos adaptados al frío extremo (cetáceos, úrsidos,…)
Este tejido se caracteriza por presentar:
1. Elevado nº de mitocondrias, las cuales poseen una alta tasa de respiración celular
requiere un buen suministro de O2 presenta una elevada vascularización
2. Alta densidad de receptores α y β-adrenérgicos situados cerca de numerosas terminaciones simpáticas
3. Gran cantidad de vacuolas lipídicas que garantizan el aporte de sustratos (lípidos)

4. b-oxidación de los ácidos grasos es derivada a la producción de calor (termogénesis sin tiritar)
5. Expresan de forma exclusiva una proteína desacoplante (UCP-1) o termogenina (marcador bioquímico y molecular)
UCP-1, es una proteína integral de la membrana mitocondrial interna
 Forma un canal propio para el flujo de H+ desde el espacio
intermembrana a la matriz mitocondrial

 Generarando un “cortocircuito en el complejo V”
 Energía del gradiente H+ se disipa en forma de calor al pasar
por el canal de la termogenina

 Esta ruta se activa al descender la Tª corporal
 Presencia UCP-1 en la membrana mitocondrial aumenta durante la
exposición al frío.
Diapositiva nueva
La sensación de frío desencadena la liberación de noradrenalina, que desencadena:
El proceso de la termogénesis con una rápida movilización (lipólisis) de los TAGs

almacenados en las vacuolas lipídicas del tejido adiposo marrón
Noradrenalina adenilato ciclasa AMPc PKA
PKA Lipasa sensible a hormonas
Degradación TAGs ácidos grasos libres generar calor
(vía nuclear) Incremento de la expresión UCP-1
La rápida oxidación de los ácidos grasos generados, es posible gracias a:

 elevado número de mitocondrias presentes en estos adipocitos
 y su elevada vascularización
NADH, FADH2 generados en la b-oxidación pasan a:
 En estos adipocitos, la CTE está asociada a UCP-1 no se
sintetiza ATP pero si CALOR
 El calor es distribuido al resto del organismo a través de la
circulación sanguínea

Tema 6. REGULACIÓN DEL METABOLISMO LIPÍDICO
1. Procedencia y digestión de los lípidos de la dieta

2. Absorción lipídica
3. Destino de los lípidos de la dieta
4. Lipoproteínas: estructura y función
5. Metabolismo y regulación del colesterol
6. Regulación de la movilización (lipólisis)
7. Degradación de los FFA (b-oxidación)
8. Degradación de los FFA (formación de cuerpos cetónicos)
9. Regulación de la degradación de FFA
10. Regulación de la biosíntesis de FFA
Regulación del metabolismo lipídico
1. PROCEDENCIA Y DIGESTIÓN DE LOS LÍPIDOS DE LA DIETA
 5 – 25 % peso corporal son lípidos

Mamíferos
 90% lípidos son TAGs tejido adiposo blanco y pardo
Este contenido lipídico procede principalmente de :
➊ La dieta: digestión y absorción no está sometida a regulación

➋ Biosíntesis de novo (hígado)
Lípidos intracelulares Procesos regulados
➌ Reservas del tejido adiposo
➍ Lipoproteínas: proteínas transportadoras de lípidos
Adulto ingiere entre 60 - 150 g lípidos/día:

90% son TAGs
10% restante son:
 Lípidos membranas
 Ácidos grasos libres
 Vitaminas y hormonas liposolubles
Todos ellos se caracterizan por su alto grado hidrofobicidad
 Supone un problema para su proceso digestivo (enzimas están en una fase acuosa)
Digestión de los lípidos ingeridos da lugar a compuestos igualmente apolares o con cierto carácter anfipático
Estos compuestos apolares podrían atravesar la bicapa lipídica sin necesidad de un transportador pero:
Tienen tendencia a reagruparse porque son muy apolares forman grandes gotas lipídica (micelas), dificultando su absorción
Estos problemas se solucionan de dos formas :

Incrementando el área de contacto entre la fase acuosa y la fase lipídica
Solubilizando los lípidos con detergentes (sales biliares)
1.1. FASE DIGESTIVA
1.1.1. FASE GÁSTRICA
Digestión lipídica comienza con los TAGs

Estos son hidrolizados por las lipasas ácidas:
Lingual, secretada en la boca
Gástrica, secretada en el estómago
Características de la lipasa lingual:
Sintetizada por las glándulas serosas de la lengua
Poseen un pH óptimo entre 4.5 – 5.5
Su secreción aumenta conciertos estímulos:
 mecánico (comida boca)
 nervioso (SN parasimpático)
No requiere la participan de:
 sales biliares
 colipasa.
Su acción continúa en el estómago, ya que es resistente a la pepsina gástrica.
Es una acil-ester-hidrolasa de alta especificidad:
 reconoce la posición sn-3 de los TAGs
Características de la lipasa gástrica:
 Secretada por las células del estómago
 Posee un pH óptimo entre 3 – 6
 Sus características estructurales y catalíticas son muy similares a la lipasa lingual
El resto de lípidos son digeridos en el intestino delgado

TAGs son totalmente insolubles en agua:
Recordar que tienden a formar gotas lipídicas.
Su digestión tiene lugar en la estrecha interfase lípido – agua
Su velocidad de hidrólisis es muy lenta
Se generan productos que pasan a formar parte de la interfase lípido – agua, donde:
Grupos polares quedan en contacto con el medio acuoso:
Grupos apolares dispuestos hacia el interior de dicha interfase
 La degradación provoca que la interfase lípido – agua aumente de tamaño
 aunque el volumen lipídico es el mismo formación de gotas de emulsión

 A esto hay que sumar el papel del movimiento mecánico del estómago
facilitando el papel de estas lipasas

PRODUCTOS GENERADOS POR LA ACCIÓN DE LAS LIPASAS ÁCIDAS:
FFA de cadena corta (C4-10) situados en la posición sn-3 del TAGs original
Debido a su pequeño tamaño son solubles en el contenido gástrico

Son absorbidos por las células de la mucosa gástrica pasando directamente a la sangre donde se unen a la albúmina
Viajan hasta el hígado por la vena porta
 Recordar: es un tejido principalmente gluconeogénico no glucolítico
Conclusión:
TAGs con ácidos grasos de cadena corta en posición sn-3 serán un aporte
energético de muy rápida disposición metabólica tras la actividad de esta lipasa
FFA de cadena media o larga (>>C12) situados en la posición sn-3 del TAGs original
1, 2- diacilglicéridos
Muy pequeña proporción de 2-monoacilglicéridos
continuarán su tránsito hacia el duodeno (intestino delgado)

1.1.2. FASE INTESTINAL
Jugo gástrico en el duodeno provoca la liberación de 2 hormonas:
Secretina, estimula al páncreas para que secrete HCO 3- al intestino delgado:
Permite neutralizar el pH del jugo gástrico
Favorecer la actividad de las enzimas digestivas:
 Poseen pH óptimos cercanos a 7.0
Colescistoquinina (CCK), encargada de estimular:
porción exocrina páncreas par que libere enzimas (en forma de zimógenos)
Liberación de la enzima proteolítica, enteropeptidasa (cs intestinales):
 Encargada de activar los zimógenos a enzimas digestivas activas
En el tramo intestinal, DUODENO-YEYUNO-ILEÓN ocurre:
la digestión de los TAGs que no fueron digeridos en la fase anterior junto con el resto de lípidos
Velocidad de digestión de estos lípidos depende del área interfase lípido – agua, la cual aumenta:
Movimientos peristálticos del intestino
Acción emulsionante de las sales biliares
Actividad de 3 lipasas digestivas de origen pancreático:
 Lipasa pancreática
 Carboxil-ester hidrolasa (Esterasa lipídica)
 Fosfolipasa A1 y A2
 Estas enzimas actúan siempre en la interfase lípido – agua
 Liberando productos con grupos polares

ACCIÓN EMULSIONANTE DE LAS SALES BILIARES
 Sintetizados en el hígado a partir del colesterol

 Secretados unidos a la taurina o glicina, almacenándolas en la vesícula biliar duodeno
 A pH fisiológico son moléculas ionizadas, actuando como detergentes biológicos
 Parte polar Poseen por tanto un carácter anfipático
 Parte apolar Pueden interactuar con las clases lipídicas
 Funciones:
 Emulsionan gota lipídica en micelas más pequeñas denominadas micelas mixtas
 aumentan la superficie de contacto de las enzimas pancreáticas
 Facilita la actuación de las lipasas e incluso participan en su activación
 Favorecen la absorción intestinal (enterocitos) de:
 productos de la degradación de los lípidos
 vitaminas liposolubles (A, D, E, K)

ACCIÓN DE LA LIPASA PANCREÁTICA
 Actúa en la interfase lípido – agua
 Su acción hidrolítica junto con una isomerasa transforman secuencialmente TAGs en FFA libres:
 Su interacción con la interfase lípido – agua requiere que las micelas lipídicas contengan:
 Fosfatidilcolina
 Sales biliares
 Colipasa pancreática (90 aas)
 Forma un complejo 1:1 con la lipasa
 Se secreta por el páncreas exocrino en forma de zimógeno
 Procolipasa inactiva colipasa activa + decapéptido

tripsina
 Lipasa pancreática se sintetiza y se secreta junto con las sales biliares en forma inactiva
 Lipasa pancreática no es un zimógeno
 Su activación requiere de la presencia de la colipasa y de las sales biliares
 Centro activo de la lipasa está parcialmente tapado en ausencia de micelas lipasa está inactiva
 Presencia de micelas + colipasa, reorganización estructural, centro activo quedando expuesto lipasa activa
ACCIÓN DE LA CARBOXIL-ESTER HIDROLASA
 Puede actuar sobre los enlaces éster de las posiciones:
 sn-1, sn-2 o sn-3 a partir de:
 1,2- diglicéridos
 2,3- diglicéridos
 2-monoacilglicéridos
 no a partir de triglicéridos
 Sobre grasas de origen marino que contengan ácidos grasos de cadena larga (≥ C20)
 Ésteres de colesterol
 Ésteres de vitamina A
 Ésteres de ácidos carboxílicos
 Productos generados por esta enzima son:
 2-monoacilgliceroles
 Ácidos grasos libres de diferente longitud y grado de saturación procedentes de las posiciones sn-1 y sn-3 de TAGs
 Glicerol
ACCIÓN DE LA FOSFOLIPASA A1 y A2
Cataliza la hidrólisis de los fosfolípidos en la posición sn-1 y sn-2 respectivamente, liberando:

 Ácido graso
 Lisofosfolípido
tripsina
Se sintetiza como profosfolipasa A fosfolipasa A
Para ser totalmente activas necesitan la presencia de las sales biliares
2. ABSORCIÓN LIPÍDICA
Mezcla de productos procedentes de la degradación lipídica:

ácidos grasos
mono y diacilgliceroles
lisofosfatido, colesterol
Vitaminas liposolubles
En principio, todos estos compuestos apolares deberían ser capaces de atravesar las membranas de los enterocitos,
Pero, rodeando a la mucosa intestinal existe una capa acuosa que IMPIDE el paso de los lípidos
Por ello, las micelas mixtas juegan un papel esencial en la absorción lipídica
 Están formadas por las sales biliares + los productos de la degradación de lípidos
 Migran hacia la capa acuosa que rodea a la mucosa intestinal contactando con la membrana del enterocito
 Este contacto permite, ahora, la absorción lipídica (difusión pasiva):
 Casi completa para ácidos grasos libres y monoacilgliceroles (son parcialmente hidrosolubles)
 Es mucho menor a medida que aumenta su insolubilidad: 30 - 40% del colesterol de la dieta
 Ácidos biliares se reciclan para formar otras micelas mixtas y proseguir la digestión.
 En el ileón son absorbidos, pasando a la sangre Hígado

Reciclaje enterohepatico de ácidos biliares
3. DESTINO DE LOS LÍPIDOS DE LA DIETA
Dentro del enterocito, el destino de los ácidos grasos depende de la longitud de su cadena hidrocarbonada:
ácidos grasos de cadena corta (C4–10)
 Debido a su pequeño tamaño son solubles en el citosol del enterocito
albúmina
 Salen a la sangre sin modificarse hígado
vena porta
Ácidos grasos de cadena media y larga (≥ C12)

 Son insolubles en el citosol del enterocito
 Deben unirse a una proteína citosólica, proteína intestinal fijadora de ácidos grasos, (I-FABP)
 Esta proteína incrementa notablemente su solubilidad
 El complejo (I-FABP – ácido graso) es transportado hasta el RE liso donde serán de nuevo resintetizados como TAGs
 El glicerol necesario para este proceso puede proceder de:
 Glucosa Glicerol-P
 2-monoacilgliceroles
 TAGs son empaquetados + otros lípidos en quilomicrones (lipoproteínas) al resto del organismo
4. LIPOPROTEÍNAS: estructura y función
Poseen diferente composición lipídica y proteica

Todas presentan una estructura esférica común:
Función: tte de lípidos exógenos o endógenos por el sistema linfático y sanguíneo a todos los tejidos
En humanos, se conocen varios tipo de lipoproteínas:
 quilomicrones (intestino)
muy baja densidad
 VLDL
 IDL, densidad intermedia hígado
 LDL, baja densidad
 HDL, alta densidad (intestino, hígado)
 VHDL (ácidos grasos + albúmina (sangre)
La parte proteica de las lipoproteínas se denominan, apolipoproteínas

 Estas apolipoproteínas pueden actuar como:
 Cofactores de las enzimas implicadas en el metabolismo de lípidos
 Ligandos para los receptores de lipoproteínas presentes en las membranas celulares
 Participan en la estructura de la lipoproteína

3.1. Quilomicrón (QM)
Se pueden distinguir 3 tipos de quilomicrones:

Quilomicrones nacientes:
Sintetizados RE liso del enterocito
Están formados por:
 Apolipoproteínas: Apo A-I, A-II, A-IV, B-48 (exclusiva de QM)
 Lípidos: triglicéridos (85 - 92%), fosfolípidos (6 - 12%), colesterol (1 - 3%)
Liberados por exocitosis desde membrana basolateral del enterocito linfa sangre tejidos periféricos
Quilomicrones maduros:
QM nacientes (sangre) intercambian componentes con las HDL maduras adquiriendo Apo C-II y Apo E QM maduros
QM maduros reconocen sitios de unión en las células endoteliales (capilares sanguíneos) de los tejidos periféricos:
 TAGs son hidrolizados por la lipoproteína lipasa plasmática (LPL-1)
 enzima localizada en la cara externa de la célula endotelial
 LPL-1 es activada por la Apo C-II, heparina e insulina
 Productos hidrólisis: glicerol y ácidos grasos que pasan a las células del tejido adyacente.
Remanentes de quilomicrones:
Aparecen a medida que sus TAGs son hidrolizados ⇊ [TAGs]
Son ricos en colesterol
Devuelven la Apo C-II a las HDL
El hígado los retoma mediante endocitosis a través del receptores LDL que reconocen Apo E
Células endoteliales de los sinusoides hepáticos presentan Lipoproteína lipasa hepática (LPL-2 ó HL) con 2 funciones:
 Ayuda a la captación de los remanentes de quilomicrones
 Hidroliza los restantes TAGs y fosfolípidos

Quilomicrones, por tanto, son los encargados de redistribuir:

TAGs de la dieta: tejido muscular, adiposo, pulmones y riñones
Colesterol de la dieta: hígado
3.2. Lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) y formación de las lipoproteínas de densidad intermedia (IDL) y baja (LDL)
VLDL se sintetizan en el RE liso y ap. Golgi de los hepatocitos

Compuestos por:
Colesterol libre (25%)
Fosfolípidos (15%)
TAGs (60%), que proceden de:
 Ingesta excesiva de grasas
 Síntesis de novo (lipogénesis) hepática (alta ingesta de glúcidos)
 TAGs recaptados de los remanentes de quilomicrones y de las IDL
Apolipoproteínas: destacamos Apo B-100

VLDL se liberan por exocitosis al torrente sanguíneo, donde adquieren:
Las apolipoproteínas: Apo E y Apo C-II a partir de las HDL maduras, convirténdose en las VLDL nacientes
Función: transportar lípidos endógenos principalmente al tejido adiposo (almacenamiento) y muscular (fuente de energía), donde:
Enzima lipoproteína lipasa plasmática (LPL-1) se encarga de degradar casi el 90% de TAGs transportado por las VLDL
Esto va acompañado de la pérdida de la Apo C-II, que retorna a las HDL circulantes
 Estos cambios dan lugar a la formación de los remanentes de VLDL (conocidas como IDL)
IDL tiene dos destinos metabólicos:

Entorno al 50% de las IDL retornar al hígado:
Mediante endocitosis a través del receptor LDL que reconoce Apo B-100 y Apo E
En el hígado son catabolizadas por la enzima Lipoproteína lipasa hepática (HL) a glicerol y ácidos grasos libres
El otro 50%, permanecen en circulación y dan origen a las LDL por acción de dos enzimas:
LPL-1, que hidroliza parte su contenido de TAGs
Proteína Transferidorade ésteres de colesterol (CETP), que le permite captar ésteres de colesterol de las HDL maduras
LDL tiene dos destinos posibles:

Retornar al hígado (70%)
LDL es endocitada por el receptor LDL que reconoce Apo B-100
Ir hacia tejidos extrahepáticos (30%)
3.3. Incorporación de lipoproteínas LDL a las células
Las células obtienen el colesterol a partir de:

Síntesis de novo a partir de acetilCoA
Captación de las lipoproteínas LDL ricas en colesterol y ésteres de colesterol
Se realiza por endocitosis mediada por receptores de la LDL (LDLR)
 Los Receptores LDL se disponen en la superficie celular en pequeñas fosas recubiertas de la proteína, clatrina
 Son glucoproteínas transmembrana que reconocen específicamente la Apo B-100
A-D: síntesis (RE rugoso – Golgi) y pasan a la membrana por exocitosis

1. Se produce la interacción entre Apo B-100 (LDL) y el receptor (LDLR)
2. Invaginación y formación de vesículas recubiertas de clatrina
3. Eliminación de la cubierta de clatrina
4. Vesículas son ahora los endosomas tempranos (pH ≈ 5)
 A este pH, LDL se disocia de su receptor
5-6. Reciclaje del receptor

7. Endosoma se fusiona con los lisosomas primarios para dar lugar a los
lisosomas secundarios, donde:
 Apo B-100 es degradada en sus aminoácidos
 Ésteres de colesterol es hidrolizado: FFA y colesterol libre
8. Liberación de colesterol que puede ir por 2 caminos:

a) Esterificarse por la enzima acilCoA colesterol acil-transferasa (ACAT),
dando lugar a la formación de gotitas
b) Entrar al Re liso para derivar en otros compuestos
⇈ [colesterol] en el RE liso provoca: ⇊ síntesis del enzima HMG-CoA reductasa (síntesis colesterol) y del receptor LDL
3.4. Lipoproteínas HDL
Constituyen una población heterogénea de lipoproteínas con diferentes:

Tamaños
Contenido de apolipoproteínas y lípidos
Entre sus funciones destacamos:
Extraer el exceso de colesterol de los tejidos extrahepáticos
Transportarlo al hígado
Su conversión en sales biliares Transporte inverso del colesterol

Eliminación a través del intestino grueso
 Representa un mecanismo ateroproctector (prevención de lesiones aterosclerótica en vasos sanguíneos)
 También poseen características anti-inflamatorias, anti-trombóticas y anti-infecciosas
HDL se sintetizan de novo en el hígado e intestino delgado

Las recién sintetizadas son pequeñas partículas discoidales (HDL nacientes ó Apo A-I nacientes), constituidas por:
Apolipoproteínas: Apo A-I (70%), Apo A-II, Apo C-I, Apo C-II, Apo E
Carecen de colesterol libre o de ésteres de colesterol
HDL actúan como almacén circulante de Apo: C-I, C-II y E para los QM y VLDL
Permitiendo activar la LPL-1 a nivel endotelial
Apo C-II retornarán a las HDL a partir de los remanentes de QM y de las IDL
Transportan varios tipos de enzimas, como:
Glutatión peroxidasa
Lecitin-Colesterol aciltransferasa (LCAT)
Proteína de transferencia de ésteres de colesterol (CETP)
Esfingosina- 1P, permite a la HDL interactuar con receptores celulares
HDL nacientes:
Mediante exocitosis pasan al torrente sanguíneo
En el medio sanguíneo, captan el exceso de colesterol de los tejidos extrahepáticos, principalmente a través de:
1. Interacción indirecta: tejido extrahepático - HDL naciente a través de los MACRÓFAGOS situados en los espacios sub-endoteliales
 La interacción se produce entre la Apo A-I (HDL naciente) y proteína ABCA1 (macrófago)
 Esto va a permitir:
 la transferencia de colesterol libre desde el tejido periférico
 La formación partículas discoidales pre b-HDL, donde:
 Colesterol libre es esterificado por la enzima LCAT, usando como cofactor a la Apo A-I
 Los ésteres de colesterol (CE) formados van pasando al núcleo hidrofóbico de la pre b-HDL
 A medida que la absorción de colesterol continua, la partícula va adquiriendo forma esférica,
 Dando lugar a la formación de las partículas HDL3
2. Interacción directa: tejido extrahepático – HDL3

 La interacción se produce entre la Apo A-I (HDL3) y proteína ABCG1 (tejido extrahepático), permitiendo:
 La transferencia directa del colesterol libre del tejido extrahepático a la HDL3, donde:
 Colesterol será esterificado por LCAT
 Aumentando tanto su contenido en colesterol esterificado como el tamaño de la HDL
 dando lugar a la formación de las partícula HDL2
Estas HDL3 y HDL2 se denominan HDLs maduras, que intercambian:

CE por TAGs con las lipoproteínas VLDL, LDL y QM por medio de la Proteína de transferencia de ésteres de colesterol (CETP)
Recoge fosfolípidos desde VLDL por medio de la Proteína Transferidora de fosfolípidos (PLTP)
HDLs maduras
Caracterizadas por un alto contenido en ésteres de colesterol deben retornar al hígado
Se unen al receptor SR-BI (scaverger receptor) presente en las membranas de los hepatocitos
La unión no va acompañada de endocitosis
CE pasan al hepatocito a través de caveolas (“balsas lipídicas”)
 El resultado final es la descarga de CE en el hígado para su posterior eliminación como sales biliares
La Enzima Lipoproteína lipasa hepática (HL) del hígado termina de hidrolizar su pequeña carga de TAGs
Finalmente, HDL retorna al torrente sanguíneo para iniciar un nuevo ciclo
Recordar: hígado es el único órgano
capaz de eliminar el exceso de
colesterol de los tejidos periféricos

3. METABOLISMO DEL COLESTEROL
Niveles de colesterol en el organismo dependen de:

Cantidad de ingesta de colesterol de la dieta (colesterol exógeno)
Biosíntesis del colesterol endógeno: ocurre en todas las células animales, sobre todo, en hígado, intestino y corteza suprarrenal
3.1. SÍNTESIS
Se sintetiza a partir del acetato en forma de acetilCoA

Unidades del acetato será convertido en un intermediario que porta unidades de isopreno
Condensación unidades de isopreno molécula lineal (30C) colesterol
Proceso total consta de 4 fases:

1. SÍNTESIS DE MEVALONATO a partir de acetilCoA
Se necesitan 3 moléculas de acetilCoA

HMG-CoA sintetasa es citosólica
HMG-CoA sintetasa mitocondrial interviene en la síntesis de cuerpos cetónicos
El 4º paso constituye la reducción del HMG-CoA a mevalonato
El agente reductor es el NADPH
La enzima implicada HMG-CoA reductasa Intermediario
isoprenoide
 Localizada en la membrana del RE liso
 Es el principal punto regulador en la síntesis de colesterol

2. Conversión del mevalonato en 2 unidades de isopreno activadas
3. Condensación de 6 unidades de isopreno en escualeno
4. Ciclación del escualeno en colesterol

3.2. REGULACIÓN
Síntesis de colesterol es un proceso complejo y energéticamente caro

El exceso de colesterol no puede ser metabolizado como fuente de energía ni degradado a su precursor, la acetilCoA.
El excedente de colesterol es eliminado del organismo en forma de sales biliares mediante su transporte inverso (vía hepática)
Es necesario regular su biosíntesis, complementando las necesidades con la ingesta de colesterol exógeno
En mamíferos, la producción de colesterol está regulada a 3 grandes niveles:
Regulando la actividad del enzima, HMG-CoA reductasa, que cataliza el paso de HMG-CoA a mevalonato
CORTO PLAZO:
 Regulación alostérica:
 ⇈ [colesterol]
Actúan como inhibidores alostéricos
 ⇈ [FFA insaturados]
 modificación covalente por fosforilación-desfosforilación
 Control hormonal: insulina y glucagón
 [AMP], [ATP]
LARGO PLAZO:
 Regulación velocidad síntesis del mRNA HMG-CoA reductasa
 Regulación velocidad de degradación de la HMG-CoA reductasa
Regulando la [colesterol intracelular] a través del:

enzima acilCoA colesterol transferasa (ACAT)
Regulando la [colesterol plasmático] a través de:

receptor de LDL, que permite su absorción a las células
Transporte reverso por las HDL
3.2.1. ESTRUCTURA DE HMG-CoA REDUCTASA
Es una glicoproteína localizada en la membrana del retículo endoplásmico liso
Es, por tanto, una proteína transmembrana
Presenta dos dominios distintos:
un dominio N-terminal hidrofóbico
Es el encargado de unir la proteína a la membrana a través de 8 regiones a-transmembrana.
Se proyecta también hacia el lumen del RE conteniendo:
 Los sitios de marcaje por ubiquitinización
 Necesarios para la regulación de la velocidad de degradación de la enzima, HMG-CoA reductasa mediante:
 mecanismo de control de la degradación proteolítica inducida por las altas concentraciones de esteroles
un dominio C-terminal hidrófilo que se proyecta hacia el citosol
Es el encargado de la actividad enzimática (centros activos)
 No tiene ningún papel en la degradación regulada de la enzima

3.2.2. REGULACIÓN POR MODIFICACIÓN COVALENTE DE HMG-CoA REDUCTASA en HÍGADO
Esta enzima presenta MODIFICACIÓN COVALENTE por fosforilación – desfosforilación y, por tanto 2 formas:
HMG-COA REDUCTASA (FOSFORILADA), SE CORRESPONDE CON SU FORMA INACTIVA
Su fosforilación es ejecutada de forma directa por:

 Proteína quinasa dependiente de AMP (AMPK), la cual se activa por fosforilación mediante la actuación de 2 enzimas quinasas:
 Proteína quinasa hepática (LKB1)
 activada en respuesta altos [AMP] citosólicos
 Calmodulina quinasa dependiente de Ca2+ (CaMKK)
 activada en respuesta altas [Ca2+] citosol
Inactivación HMG-CoA redutasa:

inhibida síntesis colesterol
⇊ [colesterol intracelular]
Para mantener, HMG-CoA reductasa en su forma activa, es imprescindible el papel de:

 Glucagón a través de la PKA, encargada de:
 Activar (fosforilación) al Inhibidor proteínas fosfatasas (PPP2R) PPP2R -P

 PPP2R-P , se encargará de desactivar a la HMGR-fosfatasa (PP2A)
 impide la activación HMG-CoA reductasa por desfosforilación

HMG-COA REDUTASA (DESFOSFORILADA), SE CORRESPONDE CON SU FORMA ACTIVA
La desfosforilación es llevado a cabo por la proteína fosfatasa HMGR-fosfatasa (PP2A)
INSULINA mediante la vía citosólica de la PI-3K activa la PKB, que se encarga de:
 Activar por fosforilación a la HMGR-fosfatasa (PP2A), que a su vez se encarga de:
 Desfosforilar a a la proteína quinasa, AMPK

Inactivándolos
 Desfosforilar al inhibidor, PPP2R
 Activar la fosfodiesterasa dependiente de cAMP, y por tanto, desactiva a la PKA
Además la insulina:
 Inhibe la liberación de glucagón
activación HMG-CoA redutasa

estimula síntesis colesterol
⇈ [colesterol intracelular]
HMG-CoA redutasa desfosforilada presenta tb control alostérico:

INHIBICIÓN:
⇈[colesterol] intracelular
⇈ [FFA insaturados] intracelular
3.2.3. REGULACIÓN LARGO PLAZO DE LA HMG-CoA REDUCTASA
Nº moléculas del enzima, HMG-CoA reductasa aumenta o disminuye en respuesta a la [colesterol intracelular]:
Esto implica una regulación a largo plazo mediante el control de la transcripción de:
Genes: HMG-CoA reductasa y del receptor de LDL
≈ 20 genes implicados en la captación y síntesis de colesterol y FFA insaturados
Este control es llevado a cabo por la actuación conjunta de 3 tipos de proteínas:

Proteínas de unión del elemento regulador de esteroles, conocidas como, SREBP
Proteínas activadoras del corte de la SREBP, denominadas, SCAP Localizadas en la membrana del RE
Proteína génica inducida por la insulina, conocida como, Insig
Cuando [esteroles intracelular] es alta:
Los sitios de unión de los esteroles ( y sus derivados, los oxyesteroles), localizados en SCAP y Insig están ocupados, y consecuentemente:
 El complejo de formado por Insig-SREBP-SCAP es retenido en la membrana del RE
 En estas condiciones, SREBP está inactiva, y por tanto, inhibiendo transcripción del gen de la HMG-CoA reductasa
 Lo que conlleva: inhibición de la síntesis de colesterol
Cuando [esteroles intracelular] es baja:
Los sitios de unión de los esteroles y oxyesteroles localizados en Insig y SCAP están desocupados, de tal manera que:
 Complejo SREBP-SCAP, migra mediante la acción de proteínas secretoras hacia el aparato de Golgi, donde:
 SREBP sufre proteólisis por 2 proteasas, liberando:
 Un fragmento regulador que migra hacia el núcleo, activando transcripción de:
 gen del enzima HMG-CoA reductasa y de la proteína receptora de lipoproteínas LDL
o Lo que conlleva: aumento síntesis de colesterol endógeno y aumento captación de colesterol exógeno
 Otros genes que codifican proteína necesarias para la síntesis de lípidos
 Insig, es marcada para su ubiquitinización
 Degradación proteolítica en el complejo del proteasoma
Cuando [esteroles intracelular] vuelve a valores normales:
Se para la liberación proteolítica del fragmento regulador de SREBP
SREBP se marca para su ubiquitinización y degradación en el proteasoma

Otro mecanismo de regular a largo plazo de la actividad del enzima HMG-CoA reductasa es provocando su:
Degradación proteolítica (disminución del nº de unidades de dicho enzima):
Este proceso es modulado por la proteína Insig, que detecta altas [colesterol intracelular]
 Esto provoca la ubiquitinización del enzima, HMG-CoA reductasa lo que permitirá,
 Su posterior degradación en el complejo del proteasoma
EXISTEN OTROS 2 MECANISMOS QUE SE PONEN EN MARCHA CUANDO LA [COLESTEROL INTRACELULAR] ES ELEVADA:
activa la enzima ACAT ⇈ [colesterol esterificado] para su almacenamiento en vesículas
⇊ transcripción SREBP-2, que provoca una caída en la transcripción de los genes de:
Gen HMG-CoA redutasa ⇊ síntesis del enzima HMGCoA reductasa disminuye la síntesis de colesterol
receptor de la LDL ⇊ captación colesterol exógeno que circula en la sangre

5. REGULACIÓN DE LA LIPÓLISIS (degradación de las reservas lipídicas)
MOVILIZACIÓN de los TRIACILGLICÉRIDOS (TAGs) almacenados en el tejido adiposo está siempre bajo un control hormonal
Intervienen varias proteínas y enzimas:
Perilipina y Cofactor proteico (CGI)
Triglicérido lipasa adiposa (ATGL)
Lipasa sensible a hormonas (HSL), punto de regulación
Monoacilglicerol lipasa (MGL)
ESTIMULACIÓN HORMONAL LIPÓLISIS (TEJIDO ADIPOSO):

Cortisol y hormonas tiroideas Receptores intracelulares tipo I y II inducen transcripción del gen de HSL
Glucagón activación HSL (fosforilación)
Receptores b-adrenérgicos adenilato ciclasa ⇈ [cAMP] activación PKA
Adrenalina Fosforilación perilipina
Perilipina-P tiene 2 efectos:
 Liberación del cofactor (CGI) de la perilipina

 CGI se une ATGL, para iniciar la hidrolisis del TAG
 Reestructura gota grasa: favorece el contacto TAGs con HSL
INHIBICIÓN HORMONAL LIPÓLISIS (TEJIDO ADIPOSO):
Prostaglandinas
Insulina, a través de la vía citosólica PI3K PKB, activando:
PP1, se encarga de desfosforilar la enzima HSL (forma inactiva)
Fosfodiesterasa dependiente de cAMP PKA inactiva
/gluconeogenesis
6. DEGRADACIÓN DE LOS ÁCIDOS GRASOS (b-oxidación)
Este proceso ocurre en la matriz mitocondrial de las células animales

Es especialmente activa en tejidos que necesitan grandes cantidades de ATP (músculo)
También es muy activa en el hígado, ya que es el lugar de síntesis de cuerpos cetónicos y colesterol
Degradación FFA consta de 3 fases bien diferenciadas:
➊ Activación FFA presentes en el citosol

Enzima: Acil CoA sintetasas
Localizadas: lado citosólico membrana mitocondrial externa y RE
Específicas: ácidos grasos de cadena corta, media o larga
Proceso acoplado a la escisión del ATP en AMP + PPi
Genera una ACILGRASO CoA
➋ Transporte acilgraso-CoA al interior de la mitocondria

FFA de C ≤ 14, atraviesan las membranas mitocondriales
FFA de C ≥ 14 son transportados por la lanzadera de la carnitina
Enzimas implicadas:
Carnitina aciltransferasa I acil graso-carnitina + CoA
Carnitina aciltransferasa II acilgraso-CoA + carnitina
Translocasa (tte pasivo facilitado), permite el paso de:
Acil graso-carnitina hacia la matriz
Carnitina hacia el espacio intermembrana
El proceso de entrada mediado por la carnitina es el punto de regulación de la oxidación de ácidos grasos
➌ b-oxidación, se puede dividir en 3 subfases:
FFA sufre b-oxidación para generar residuos acetilo en forma de AcetilCoA
Este proceso consta de 4 reacciones consecutivas:
 deshidrogenación por FAD+ originando la formación de un derivado enoil
 hidratación del doble enlace, Cb sufre una hidroxilación
 deshidrogenación por NAD+ del grupo OH
 fragmentación tiólica mediante el ataque de una 2ª molécula de CoA sobre Cb,
liberándose:
 Acilgraso CoA con 2C menos
 acetilCoA
 NADH y FADH2
Este proceso se repite hasta que todos los C del FFA son
convertidos en acetilCoA ruta cíclica
acetilCoA es oxidada en el ciclo Krebs, generando:

GTP ATP
CO2
NADH y FADH2
NADH, FADH2 generados en la b-oxidación y ciclo Krebs

pasan a la CTE ATP (fosforilación oxidativa)
7. DEGRADACIÓN DE LOS ÁCIDOS GRASOS (formación de cuerpos cetónicos)
Catabolismo de TAGs y glúcidos deben estar equilibrados para permitir que acetil CoA (b-oxidación de FFA) pasa al ciclo Krebs
Esto va a depender de [oxalacetato mitocondrial], el cual depende de los niveles de:

piruvato procedente de la vía glucolítica (principalmente)
Intermediarios c. Krebs (degradación de aa gluconeogénicos)
Diabetes
Ayuno prolongado ⇊ [glucosa] ⇊ [oxalacetato mitocondrial]
Inanición
vía gluconeogénica para mantener glucemia
AcetilCoA no pasa al ciclo Krebs, es derivado hacia la cetogénesis

Ocurre en la matriz mitocondrial de los hepatocitos
Cuerpos cetónicos son exportados totalmente a los tejidos extrahepáticos
Hígado no usa cuerpos cetónicos por

carecer de la enzima b-cetoacilCoA
transferasa
8. REGULACIÓN DE LA DEGRADACIÓN DE FFA
La degradación FFA en los tejidos extrahepáticos como el músculo esquelético se carcteriza por:
no está sujeta a regulación hormonal
ocurre sin hay FFA disponibles procedentes de la dieta o de la degradación lipolítica de los TAGs en el tejido adiposo
si es necesario obtener ATP
ESTE CONTROL OCURRE ÚNICAMENTE EN EL HÍGADO
El primer punto de regulación es la entrada de los FFA en la matriz mitocondrial, que depende de los niveles de:
[glicerol-3P] citosólico, el armazón principal de la estructura de los TAGs y fosfoglicéridos
 Altas [glicerol-3P] inhiben la entrada mitocondrial de los FFA
Malonil-CoA citosólico, intermediario en la síntesis de FFA
 Indica que hígado está en proceso de síntesis de ácidos grasos, típico de dietas ricas en glúcidos
 El excedente de glucosa se convierte en FFA TAGs (almacenan en el tejido adiposo)
 Altas [malonil-CoA] inhiben la carnitina aciltransferasa I:
 inhiben b-oxidación
 inhiben cetogénesis
 activan síntesis TAGs
AMPK (⇈ [AMP])
El segundo punto de regulación recae sobre la actividad de ciertas enzimas:
[NADH ó FADH2]
 Altas [NADH ó FADH2] inhiben a las 2 deshidrogenasas de la b-oxidación:
Carga energética
 ⇈ [ATP] inhiben fosforilación oxidativa, provocando:
 Se para la CTE y, consecuentemente, no hay oxidación coenzimas reducidas
 ⇈ [NADH] [FADH2] que terminan inhibiendo la b-oxidación y cetogénesis
 ⇈ [AMP]: activa alostéricamente a la proteína quinasa dependiente de AMP, la AMPK, provocando:
 Inhibición por fosforilación de la acetilCoA carboxilasa
 Enzima encargada de pasar la acetilCoA a malonilCoA
 Si no hay malonilCoA, la entrada de los acilgraso-carnitina a la mitocondria está libre
 Por tanto, el AMP provoca:

 Activación b-oxidación y cetogénesis
 Inhibición síntesis FFA
AMPK ( ⇈ [AMP]
[acetilCoA]
 Altas [acetilCoA] inhiben la enzima tiolasa, que cataliza el paso de acetoacetilCoA a acetilCoA, conllevando a:
 Inhibición b-oxidación
 Activación cetogénesis, ya que la acetoacetilCoA es el sustrato en la síntesis de cuerpos cetónicos
El tercer punto de regulación recae sobre la disponibilidad de:
oxalacetato
 Bajas [OAA] producido por una caída:
 los niveles de glucosa Inhibe la b-oxidación
 Necesidad de transformar OAA en glucosa de novo (gluconeogénesis) Activa la cetogénesis
 Una caída de la [OAA] también provoca una caída [citrato]. OAA y citrato forman parte ciclo krebs
[citrato]
 Posee un efecto indirecto, el citrato es necesario para la síntesis de FFA
 Participa en el transporte de acetilCoA desde la mitocondria al citosol (lanzadera del citrato)
 AcetilCoA en el citosol pasa a malonilCoA (mediante la ACC)
 Inhibe la b-oxidación
 Activa la síntesis de ácidos grasos
9. REGULACIÓN DE LA BIOSÍNTESIS DE FFA
Biosíntesis FFA es un proceso citosólico
Proceso que requiere NADPH y acetilCoA (sustrato)
AcetilCoA es transportada desde la mitocondria al citosol (lanzadera del citrato)
Lanzadera genera parte del NADPH necesario a través de la enzima málica
La otra fuente de NADPH es la ruta de las pentosas fosfato
La enzima encargada es la ÁCIDO GRASO SINTASA (FAS I)

En mamíferos, es una única cadena polipeptídica
Hay 7 dominios distintos con diferentes actividades enzimáticas
Cada sitio activo está en un dominio diferente de la enzima:
ACP (proteína transportadora de grupos acilo)

Malonil/acetil-CoA-ACP transferasa (MAT): transferencia de grupos acilo y malonilo
b-cetoacil-ACP sintasa (KS): reacción de condensación

b-cetoacil-ACP reductasa (KR): reacción reducción
b-3-hidroxiacil-ACP deshidratasa (DH): reacción deshidratación
Enoil-ACP-reductasa (ER): reacción reducción
Tioesterasa (TE): liberación del palmitato

El proceso se puede dividir en 2 grandes etapas:
Formación del intermediario, malonil CoA
Proceso catalizado por la acetil CoA carboxilasa
Es el principal paso regulado
Adición consecutiva (ciclos) de unidades de 2 átomos de C

 Abundancia de carbohidratos en la dieta
Biosíntesis FFA está estrictamente regulada, siendo máxima cuando  Carga energética (ATP) alta
 [ácidos grasos] baja
Enzima reguladora: acetil-CoA carboxilasa (ACC) mediante:
➊ Modificación alostérica
 [palmitato citosólico] (retroinhibición por el producto) inhibe ACC
 [acetilCoA] mit
Inhibe PFK-1 y PK (glucólisis)
Dieta rica en glúcidos:  [ATP] mit  [citrato citosólico]
 [citrato]mit Activación ACC (lipogénesis)
( Vmax)
➋ Modulación covalente por fosforilación-desfosforilación (bajo control hormonal)
Forma activa desfosforilada, ACC se polimeriza largos filamentos muy activos

Forma inactiva fosforilada, ACC se disocia (formas monoméricas) con pérdida de actividad
AMPK Glucagón (hígado)

Activa PKA Activa: lipólisis de TAGs y degradación FFA
Adrenalina (tejido adiposo)
Inhibe: síntesis de FFA y TAGs
⇈ [AMP] activa AMPK
Insulina a través PI3K, activa la síntesis FFA y su acumulación como TAGs
 Efecto (+) sobre ACC inactiva

 [citrato]
 Favorece la polimerización a filamentos activos
citosólico
 Revierte parcialmente la inhibición producida por su fosforilación

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Universidad de Vigo Facultad de Ciencias

BIOQUÍMICA II (2º Grado Biología)

Primeras células aparecen hace 3.5 millones años (≈ actuales procariotas)

Estos sistemas se vuelven más complejos en los organismos pluricelulares para:

Unión específica receptor-ligando

 poco numerosos y están evolutivamente muy conservados

➊ INTERCELULAR (Transmisión de señales entre las células)

Supervivencia y Apoptosis (muerte celular programada) depende de la presencia o ausencia

METABOLISMO, control de las vías catabólicas y anabólicas

PROCESOS FISIOLÓGICOS: visión, olfato, impulso nervioso….

Crecimiento y desarrollo del organismo

2. MOLÉCULAS SEÑAL (LIGANDOS)

Proceso fisiológico específico

Son siempre moléculas extracelulares

Provocan una respuesta molecular específica en la célula diana “target cell”

Respecto a la concentración celular de las moléculas señal:

Según su naturaleza química pueden ser:

 Capaces de atravesar la membrana celular

 No atraviesan la membrana celular

2.2. CLASIFICACIÓN SEGÚN SU RADIO DE ACCIÓN

 Rápidamente captada por la matriz extracelular de la célula diana

 Ejemplo: Factores de crecimiento

Algunas moléculas señal pueden comportarse diferente modo:

PARACRINA: transmisión del impulso nervioso

 FACTOR DE CRECIMIENTO EPIDÉRMICO (EGF):

EGF sufre escisión proteolítica Actuar células diana adyacentes (PARACRINA)

2.3. MECANISMO GENERAL DE ACCIÓN DE LA MOLÉCULA SEÑAL

1. Síntesis de la molécula señal en la célula productora en respuesta a un estímulo externo u interno

2. Liberación de la molécula señal por la célula productora

3. El transporte de la molécula señal hasta la célula diana

4. Detección de la señal por una proteína receptora específica

5. Cambio en la célula diana inducido por la formación del complejo receptor-señal

6. Eliminación de la señal, interrumpiendo la respuesta celular

Los pasos 4 y 5 supone un proceso muy complejo

2.4. CARACTERÍSTICAS DE LA UNIÓN RECEPTOR-MOLÉCULA SEÑAL

 Complementariedad molecular: receptor- molécula señal

 Unión es específica pero también versátil:

 Un mismo receptor puede reconocer señales diferentes

 Receptor presenta una ALTA AFINIDAD por su ligando o señal

 En la célula el n0 de receptores para una determinada señal es grande.

4. REGULACIÓN DEL NÚMERO DE RECEPTORES EN ACTIVO

 [molécula señal] es muy altos, el propio receptor provoca su inactivación

 disminución del número de receptores

5. AMPLIFICACIÓN DE LA SEÑAL POR CASCADAS ENZIMÁTICAS

 Ocurre cuando la señal activa un receptor asociado a una enzima, activándola

6. INTEGRACIÓN DE LAS SEÑALES

3. RECEPTORES Y VÍAS DE SEÑALIZACIÓN

3.1. TIPOS DE RECEPTORES

Interior celular (INTRACELULARES)  Receptores citosólicos

 Receptores acoplados a la proteína G

3.2. RECEPTORES INTRACELULARES

Son macromoléculas de origen proteico, localizadas:

Receptores intracelulares pueden funcionar como activadores ó inhibidores transcripcionales

FAMILIA RECEPTORA NOMBRE RECEPTOR LIGANDOS

Implicados en funciones reguladoras de la proliferación, división y diferenciación celular

3.2.1. ESTRCUTURA DEL RECEPTOR INTRACELULAR:

Se puede dividir en:

 Dominio encargado de activar la transcripción

 Dominio encargado de unirse al DNA (reconocer HREs)

 Dominio para unir su ligando (hormona) correspondiente

Región HRE (hormonal response element) del DNA:

 Esta secuencia es específica del receptor (secuencia consenso)