Aplicación de dos sistemas bicistrónicos en los que están implicadas secuencias 2A

e IRES para la biosíntesis de carotenoides en endospermo de arroz

Sumario

La coordinación de múltiple transgenes es esencial para la ingeniería metabólica.

Aquí, nosotros informamos de la utilización de dos sistemas bicistrónicos en los cuales
están implicados las secuencias 2A del virus de la fiebre actosa y las secuencias del sitio
de entrada al ribosoma (IRES) del tobamovirus para la biosíntesis de carotenoides en
endospermo de arroz. Dos genes de biosíntesis de carotenoides, phytoene synthase (Psy)
de Capsicum y carotene desaturase (Crtl) de Pantoea fueron unidos via secuencia
sintética que fue optimizada para codones de arroz así como por la via de la secuencia
IRES bajo el control del promotor de globulina de arroz generando las construcciones
PAC (Psy-2A-Crtl) y PIC (Psy-IRES-Crtl) respectivamente. El endospermo transgénico
del arroz PAC tenia un color dorado mas intenso que el que tenía el arroz PIC,
demostrando que 2A es mucho mas eficiente que IRES coordinando expresión génica.
Las construcciones 2Ae IRES fue igualmente efectiva dirigiendo la transcripción de
transgenes. Como siempre, en el análisis de inmunoglobulinas de CRTl, una proteina
codificada por el marco de lectura abierto de la construcción bicistrónica reveló que 2A
fue 9 veces más efectiva que IRES en la traducción. Los endospermos PAC acumulaban
una media de 1,3 µg/g de carotenoides total, que era 9 veces superior que la observada
para los endospermos PIC. En particular, la acumulación de β-caroteno fue mucho
superior en endospermos PAC que en los PIC. En conjunto, estos resultados demuestran
que tanto las secuencias 2ª como las IRES pueden coordinar la expresión de dos genes
biosintéticos, con el sistema 2A exbihiendo gran eficiencia. Consecuentamente la
expresión del sistema 2A descrito aquí es una nueva herramienta efectiva para el
apilamiento multigénico en biotecnología de cultivos.

Introduccion:

La introducción de multigenes ha sido usada para diversas aplicaciones en la

biotecnología de cultivos. Tales modificaciones de plantas pueden ser logradas por
cruzamiento de individuos transformados, co transformación (transformación para dos
características) de diferentes plásmidos usando vía directa o transformación mediada via
Agrobacterium o la transformación de un simple plásmido binario equipado con
multicassettes.
Cada método tiene inconvenientes relacionados con la duración y la expresión estable
de múltiples transgenes.
El cruzamiento genético para el apilamiento de transgenes es impracticable para un gran
número de genes debido al tiempo que conlleva almacenar todos los transgenes en una
línea. Algunos transgenes cotransformados están insertados independientemente en el
genoma causando gran variación en la expresión de transgenes.
Además, en ambos casos, los transgenes pueden