INFORME DE LABORATORIO N° 5

UNIVER
SIDAD
NACION
INGENIERIA
AL DE AGROINDUSTRIAL
PRACTICA DE LABORATORIO N°5
MOQUE
CURSO: BIOQUIMICA
GUA
TEMA: PUNTO ISOELÉCTRICO DE LAS PROTEÍNAS

DOCENTE: BGO. EDWIN SMIT VILLALOBOS

ESTUDIANTE: TURPO QUINCHO ABDIS HENRRY

CÓDIGO: 2012102033

MOQUEGUA, febrero de 2014

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I. INTRODUCCIÓN.
Las proteínas tienen un pH característico al cual su carga neta es cero. A este pH se le
denomina punto isoeléctrico (PI). En el punto isoeléctrico se encuentran en el equilibrio las
cargas positivas y negativas por lo que la proteína presenta su máxima posibilidad para
ser precipitada al disminuir su solubilidad y facilitar su agregación. La palabra caseína
proviene del latín caseus que significa "queso". La caseína es una proteína de la leche,
del tipo fosfoproteína, que se separa de la leche por acidificación y forma una masa
blanca. Se emplea para fabricar pinturas especiales y en el apresto de tejidos, la
clarificación de vinos, la elaboración de preparados farmacéuticos y la fabricación de
plásticos, caseína casera (para la elaboración de fórmulas hospitalarias). Representa
cerca del 77% al 82% de las proteínas de la leche. Cuando coagula con renina, es
llamada paracaseína, y cuando coagula a través de la reducción del pH es llamada
caseína ácida. Cuando no está coagulada se le llama caseinógeno. El punto Isoeléctrico
(o pH isoeléctrico) de la caseína es 4.6. A este pH, la caseína se encuentra en su punto
de menos solubilidad, debido a que hay menos repulsiones intermoleculares, por lo que
precipita.

II. OBJETIVOS.

II.1. OBJETIVO GENERAL

 Determinar el punto isoeléctrico (PI) de diferentes proteínas.

 Observar el efecto del alcohol como agente precipitante.

III. INSTRUMENTOS Y MATERIALES.

III.1. MATERIALES.

 Vaso de precipitado de 100ml, 250ml, 500ml.

 Tubos de ensayo.
 Gradillas.
 Pipetas graduadas de 5 y 10ml.
 Espátula.
 Balanza semianalítica.
 peseta

III.2. REACTIVOS.

 Gelatina al 1.0 %
 Ovoalbúmina KCl 1.16
 Ácido acético 0.01; 0.1; 1.0

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 NaOH 1.0 N
 Acetato de sodio 0.1 N
 Alcohol etílico
 Agua destilada

III.3. EQUIPOS.

 pH metro.

 Baño maría balanza

 Balanza semianalítica.

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL.

IV.1. DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOELÉCTRICO DE LA

GELATINA

 La gelatina y otras proteínas se disuelven por completo en el agua a un en su

punto isoeléctrico, por lo tanto debe añadirse agentes precipitantes como el
alcohol etílico para hacer manifiesto.

 Se preparó los tobos de ensayo según la siguiente tabla.

REACTIVOS Tubo Tubo Tubo Tubo Tubo Tubo Tubo Tubo Tubo
1 2 3 4 5 6 7 8 9
Acetato de sodio 0.1N 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml

Ácido acético 0.1N 0.12ml 0.25ml 0.5ml 1ml 2ml 4ml - - -

Ácido acético 1.0N - - - - - - 0.8ml 1.6ml 3.2ml

Agua destilada 3.86ml 3.75ml 3.5ml 3ml 2ml - 3.2ml 2.4ml 0.6ml

Gelatina al 1% 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml

 Se mesclo bien el contenido de los tubos y se desechó la mitad de cada uno.

 Al tubo N° 5 se le añadió 8ml de alcohol etílico hasta producir una.

 Luego también se le agrego esa misma cantidad de alcohol a cada uno de los
tubos.

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 Se esperó aproximadamente unos 15 minutos y se anotó los resultados

IV.2. DETERMINACION DEL PUNTO ISOELECTRICO DE LA

OVAALBUMINA.

 En esta práctica se preparó 7 tubos de ensayos según el siguiente cuadro.

REACTIVOS Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5 Tubo 6 Tubo 7

Acetato de sodio 0.1N 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml
Ácido acético 0.01N - 0.05ml - - - - -
Ácido acético 0.1N - - 0.25ml 1ml 4ml - -
Ácido acético 1.0N - - - - - 1.6ml 8.4ml
NaOH 1.0N 0.05ml 0.05ml - - - - -
Agua destilada 6.95ml 6.95ml 6.75ml 6ml 3ml 5.4ml 0.6ml
Ovoalbúmina 1.5ml 1.5ml 1.5ml 1.5ml 1.5ml 1.5ml 1.5ml
pH aproximado 8 7 5 4 4 3.4 2.8

 Luego de ello se agito bien, se comenzó a medir los pH y se anotó los datos.

V. RESULTADOS.

V.1. DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOELÉCTRICO DE LA

GELATINA

N° de pH Punto isoeléctrico Observación

Tubo
1 6.60 x
2 6.11 x
3 5.83 x
4 5.49 x
5 5.16  La muestra se encuentra con
turbidez.
6 4.99 x
7 4.93 x
8 4.56 x
9 4.27 x

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V.2. DETERMINACION DEL PUNTO ISOELECTRICO DE LA

OVAALBUMINA.

N° de pH pH Punto isoeléctrico Observación

Tubo aproximado
1 12.05 8
2 12.24 7
3 4.92 5
4 4.54 4
5 3.88 4
6 3.47 3.4
7 2.54 2.8

VI. DISCUSION DE RESULTADOS.

VII. CONCLUSIÓN.

 Pudimos comprobar que el tubo 5 de la gelatina fue el único que alcanzó a

presentar cambios y determinar su punto isoeléctrico porque existe una
concentración de iones de hidrogeno o un pH en el cual, la proteína no
tiene ninguna carga eléctrica y como no hay carga entonces esta no
interactúa con el medio y se vuelve insoluble.
 También pudimos darnos cuenta que el punto isoeléctrico (pI) de la
ovoalbúmina es 4.6. A este pH, la ovoalbúmina se encuentra en su punto
de menor solubilidad, debido a la reducción de repulsiones
intermoleculares, por lo que precipita y está a diferencia de muchas otras
proteínas, la ovoalbúmina no precipita al calor.

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VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.

 http://es.wikipedia.org/wiki/Case%C3%ADna [1]
 http://es.scribd.com/doc/17382881/Case-in-A [2 ]
 http://biokimik2011.blogspot.com/2011/09/separacion-y-cuantificacion-de.html [3]
 http://es.wikipedia.org/wiki/Punto_isoel%C3%A9ctrico [4]
 http://guidewhois.com/2011/02/alimentos-que-contienen-proteina-caseina/ [5]

IX. ANEXOS.

Responde el siguiente cuestionario:

1. Defina PI de una proteína.

Más que de las proteínas, de los aminoácidos.

El punto isoeléctrico (PI) es el pH en el que el aminoácido se encuentra en la forma neutra

o de zwitterion, ya que como presentan grupos ácido y básico en la misma molécula
podrán encontrarse 3 estructuras posibles según el pH del medio:

2. Escriba la ecuación de Henderson Hasselbach.

3. ¿Por qué el alcohol actúa como agente precipitante para la gelatina?

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La gelatina, es una mezcla heterogénea de proteínas, de alto peso molecular, todas son
proteínas solubles en agua, y el agua está incorporada dentro de las moléculas
individuales de los aminoácidos, lo que hace su carácter de gel.

Al agregar suficiente alcohol etílico, se rompen las uniones de las moléculas, pues el agua
se mezcla con el alcohol, y las proteínas precipitan, además de no ser solubles en
alcohol.

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