UNIVERSIDAD POLITÉCNICA DE LAZARO CÁRDENAS

MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL

“DETERMINACIÓN DE COLIFORMES TOTALES A LECHE BRONCA

MEDIANTE EL MÉTODO DEL NMP”

CARRERA: ING. TECNOLOGÍA AMBIENTAL

PROFESORA: I.Q. ALONDRA GALLEGOS CARRILLO

LUGAR: LÁZARO CÁRDENAS, MICH. FECHA: 07/072018

 INTRODUCCIÓN
Las bacterias coliformes fecales forman parte del total del grupo coliforme. Estas
son definidas como bacilos gram-negativos, no esporulados que fermentan la
lactosa con producción de ácido y gas a 44.5°C ± 0.2°C dentro de las 24 ± 2
horas. La mayor especie en el grupo de coliforme fecal es Escherichia Coli.
En la determinación del grupo coliforme se realiza una diferenciación entre los
coliformes de origen fecal y no fecal. En el grupo de bacterias coliforme es
normalmente encontrado en las heces de animales homeotermos (mamíferos,
aves). Cuando deseamos conocer la calidad de agua contaminada por descargas
domésticas se emplea el grupo coliforme fecal como indicador debido a que estas
bacterias generalmente no se multiplicas en el intestino.
La determinación del número más probable (NMP) de bacterias coliformes fecales
se realiza a partir de los cultivos de todos los tubos positivos de caldo, los cuales
son inoculados en tubos conteniendo medio E.C., incubados a 44.5 ± 0.2°C en
baño maría con agitación y temperatura constante, durante24 horas. La formación
de gas en tubos invertidos se considera reacción positiva de coliforme fecal. La
densidad del grupo coliforme fecal es calculada por la tabla del NMP teniendo
como base los tubos positivos del medio E.C.
En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el
adecuado desarrollo bacteriano, la bilis y el verde brillante son los agentes
selectivos que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y Gram negativas
a excepción de coliformes, y la lactosa es el hidrato de carbono fermentable.
Es una propiedad del grupo coliforme, la fermentación de la lactosa con
producción de ácido y gas.

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 OBJETIVO
Determinar la existencia de Coliformes en leche cruda de vaca, así mismo,
conocer el procedimiento que este requiere.

DESARROLLO
1. Se enjuagó el material con agua de la llave y posteriormente con agua
destilada.
2. Se realizaron los cálculos para saber la cantidad de Caldo Verde Brillante
Bilis se pesarían.

3. Se pesaron 4 gr de caldo Verde Brillante Bilis en la balanza analítica

previamente calibrada.

4. Se diluyeron los 4 g de caldo en 100 ml de agua destilada.

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5. De pasaron 9 ml de Caldo Verde Brillante a cada uno de los 9 tubos con
ayuda una pipeta.

6. Se marcaron tres tubos con caldo como 1:10, otros tres tubos fueron
marcados como 1:100 y los tres tubos restantes fueron marcados como
1:1000.
7. Con una probeta se midieron 45 ml de agua destilada (sustituyendo a la
solución madre) y se vertieron en un vaso de precipitado de 50 ml.
8. Se pipetearon 5 ml de leche cruda de vaca y se vertieron en el vaso de
precipitado con los 45 ml de agua destilada previamente medidos. Se
marcó dicha solución como “Solución 1:10”

9. Se agregaron 9 ml de agua destilada (sustituyendo a la solución madre) a

dos tubos de ensaye.
10. Se pipeteó 1 ml de solución 1:10 a uno de los tubos con 9 ml de agua y se
le marcó como “Solución 1:100”.
11. Se pipeteó 1 ml de solución 1:100 al tubo restante con agua y se le marcó
como “Solución 1:1000”

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12. Agregamos 1 ml de cada solución a cada uno de los tubos
correspondientes en base si era 1:10, 1:100 o 1:1000.
13. Se elaboraron gorros de papel del tamaño de la embocadura de los tubos
para empaquetarlos.

14. Se colocaron en incubación 24 horas a temperatura ambiente.

15. Pasadas las 24 horas se verificó que sí dieron positivos a coliformes en
todos los tubos.
16. Se tiró el contenido de los tubos, se lavaron y guardaron en su lugar
correspondiente.

OBSERVACIONES
En la práctica se pudo observar como luce una muestra positiva de coliformes
fecales en medio líquido como lo es el Caldo Verde Brillante Bilis.
Se puso ver la producción de gas mediante la fermentación de la muestra en
cada uno de los tubos, claro que por la concentración de las soluciones,
algunos tubos presentaban menos gas que otros.

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 CONCLUSIONES
Para concluir esta práctica es necesario hacer hincapié en la importancia de la
determinación de los coliformes fecales, ya que son microorganismos que
pueden alterar la salud pública.
Así también es importante recalcar que fue una práctica muy productiva ya que
una gran parte de los alumnos de la carrera no conocían en qué consisten los
análisis microbiológicos.

BIBLIOGRAFÍA
 http://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a298c913
58b4.pdf
 http://www.ehowenespanol.com/caracteristicas-bacteria-coliforme-
lista_55320/

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