APELLIDOS Y NOMBRES: NAUCA SEVILLANO CRISTIAN

INSTRUCCIÓN. - Estimado alumno, preste mucha atención a la clase por

videoconferencia, lea la información de las referencias bibliográficas
consignadas en el sílabus del curso, los artículos científicos y videos
vinculados al Módulo de aprendizaje y luego, observe con atención los
esquemas que se muestran en orden cronológico sobre el proceso de
Replicación in vivo y Replicación in vitro (PCR) y/o complételos. O
desarrolle, según corresponda.
 REPLICACIÓN IN VIVO

1.-En la siguiente molécula de ADN se ha sombreado de color celeste el Origen de Replicación; sin embargo, faltan detalles moleculares
importantes que deberían de estar presentes en este esquema. Por lo tanto, observe con atención y luego complétela desarrollando las siguientes
actividades:
1.1.- Escriba la correcta direccionalidad de ambas hebras dentro de las circunferencias en esta molécula bicatenaria de ADN.
1.2.- Complemente todos los Pares Nucleotídicos (pb) en toda la molécula de ADN con los respectivos enlaces Puente de Hidrógeno, trazando 02
o 03 líneas para cada pb. Recuerde que:
Adenina (A) se complementa con Timina (T) (o viceversa) mediante 02 enlaces Puente de Hidrógeno
Guanina (G) se complementa con Citosina (C) (o viceversa) mediante 03 enlaces Puente de Hidrógeno.

5’ 3’
3’ 5’

F-M01.01-DDA/PG-006 / Rev. 2
2.- Continuando la práctica con la misma molécula de ADN del ejercicio anterior; ahora, en esta molécula represente UNA BURBUJA DE REPLICACIÓN.
Para ello, debe de recordar que los enlaces Puente de Hidrógeno deberán romperse en toda la extensión del Origen de Replicación lo que conllevará a la
obtención focalizada de cadenas monocatenarias de ADN.
Deberá estar muy atento para mantener la secuencia de nucleótidos de la molécula y no alterarla.

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 3.- En la siguiente molécula de ADN, se le presenta una Burbuja de Replicación con esquemas de las moléculas protéicas que están involucradas en
el inicio de este proceso. En este sentido, los óvalos amarillos están representando a un tipo protéico que se asocia sólo a hebras monocatenarias de ADN;
así como, las flechas celestes están representando a una enzima que convierte el ADN bicatenario en ADN monocatenario. Con este antecedente general,
usted deberá:
3.1. Escribir el nombre y detallar la función de estas moléculas dentro de los recuadros, según corresponda.
3.2. Delimitar las HORQUILLAS DE REPLICACIÓN trazando una línea vertical en el centro de la Burbuja de replicación.

Helicasa SSB

Es la proteína que reconoce los orígenes de replicación y Es la proteína que impide que se cierre la burbuja de

rompe los enlaces puente de hidrogeno dando paso a la burbuja de replicación.

replicación.

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 Observe y analice el esquema del Replicón, y luego realice las siguientes actividades:
4.1. Identifique las dos Horquillas de Replicación y delimite a cada una de ellas con un rectángulo.
4.2. En cada horquilla de replicación, escriba la direccionalidad de las hebras molde (plantillas) de ADN.
4.3. Inicie el proceso de síntesis de Primers o cebadores escribiendo los nucleótidos correctos dentro de cada óvalo rojo, tanto en la cadena adelantada,
como en la cadena retardada en ambas Horquillas de replicación.
4.4. Elongue las cadenas nuevas de ADN teniendo en cuenta la complementariedad de bases con la hebra molde de ADN, tanto en la cadena adelantada,
como, en la retardada.
4.5.- Señale con una flecha y sombree a los Fragmentos de Okasaki.

3´ 5´
Fragmento de Okasaki

UAG

CUA

Fragmento de Okasaki
5´ 3´
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 5.- Considerando la burbuja de replicación anterior, culmine la replicación de la Horquilla izquierda. En tanto, la horquilla derecha deberá mantenerse
en el mismo estado de replicación que en el ejercicio anterior.

[Las barras laterales son perfectas para remarcar puntos

importantes del texto o proporcionar información adicional de
referencia rápida, por ejemplo una programación.
Normalmente se colocan en la parte izquierda o derecha de la
página, o en la parte superior o en la inferior. Pero puede
arrastrarla fácilmente hasta el lugar que prefiera.
Cuando esté listo para agregar contenido, haga clic aquí y
empiece a escribir.]

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 6.- Ahora, usted ya tiene la horquilla izquierda replicada totalmente. Entonces, en este momento deberá replicar la horquilla derecha de la
burbuja de replicación. No olvide de escribir también la horquilla izquierda, que aunque ya está replicada, deberá representarse obligadamente,
puesto que, ambas horquillas forman a la Burbuja de replicación.

Explique brevemente el destino final de los Primers

(cebadores):_Son cortados y remplazados por DNA polimerasa.
_________________________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________________________________

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En los siguientes recuadros escriba la secuencia de nucleótidos de la cadena bicatenaria de ADN original (inicial) y las moléculas de ADN “hijas” obtenidas
como producto del proceso de REPLICACIÓN.
ADN inicial

Molécula de ADN “hija” obtenida después del proceso de Replicación

Molécula de ADN “hija” obtenida después del proceso de Replicación

Compare la secuencia de pb de la molécula de ADN inicial con las moléculas “hijas” y escriba sus comentarios.

Comentario: Gracias a la complementación entre las bases que forman la secuencia de cada una de las cadenas, el ADN tiene la importante propiedad de reproducirse
idénticamente, lo que permite que la información genética se transmita de una célula madre a las células hijas y es la base de la herencia del material genético.

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 REPLICACIÓN IN VITRO: PCR

1.- La Técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) permite amplificar u

obtener muchas copias de un fragmento de una molécula de ADN en forma sintética
en un equipo, de temperatura y tiempo programable, llamado Termociclador. Para el
efecto, se utilizan diferentes componentes moleculares, además del ADN molde o
plantilla y diferentes condiciones de temperatura y tiempos en cada ciclo. A
continuación, desarrolle las siguientes actividades:

1.1. Escriba los componentes moleculares esenciales para realizar una Reacción en
Cadena de la Polimerasa (PCR)

- Un molde de ADN
- Cebadores
- TAQ polimerasa
- Nucleótidos

1.2. Representar 02 ciclos de amplificación de la Reacción en Cadena de la Polimerasa

considerando lo siguiente:
• Primers o Iniciadores:
Reverse primer (Iniciador reverso) 3’ GAGCTACGA 5
Forward primer (Iniciador hacia adelante) 5’ TCGGTAAATT 3’

• Condiciones de síntesis:
Ciclo 1:
Denaturación del ADN a 95°C durante 2-4 minutos
Hibridación de Primers a 60°C durante 30’’
Extensión a 72° C durante 30’’
Ciclo 2:
Denaturación del ADN a 95°C durante 30’’
Hibridación de Primers a 60°C durante 30’’
Extensión a 72° C durante 30’’

A partir del siguiente fragmento de la molécula original (inicial) de ADN:

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 CICLO 1
Denaturación del ADN a 95°C durante 2-4 minutos

5’ TAGGGTCGAACGTCGCTCGGTAAATTGAATATGCGCGCTCACACGCTCGTCACTCGATGCTAGCTCACCAGCTCCGCT3’

3’ ATCCCAGCTTGCAGCGAGCCATTTAACTTATACGCGCGAGTGTGCGAGCAGTGAGCTACGATCGAGTGGTCGAGGCGA 5’

Hibridación de Primers a 60°C durante 30’’

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 Extensión a 72° C durante 30’’

Complete la secuencia sintetizada por la ADN polimerasa (Taq pol).

3❜ ATCCCA GCTTGCAGCGAGCC ATTTAAC TTATACGCGCGAGTGTGCG AGCAGT

GAATATGCGCGCT CACACGC TCGT CACTC GATGCTA GCTCA CCAGCTCCGCT 3❜

Escribir el número de moléculas de ADN resultantes después del Ciclo 1:

2
CICLO 2

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 Denaturación del ADN a 95°C durante 2 -4 minutos

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 Hibridación de Primers a 60°C durante 30’’

GAGCTACGA5’

5’TCGGTAAATT

GAGCTACGA 5’

3’TCGGTAAATT

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 Extensión a 72° C durante 30’’

3’ GAGCTACGA 5’

5’ TCGGTAAATT 3’

3’ GAGCTACGA 5’

5’ TCGGTAAATT 3’

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Escribir el número de moléculas de ADN resultantes después del Ciclo 2:
4

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