FACULTAD DE INGENIERÍA CIVIL

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA

SANITARIA

LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA SANITARIA II

PRACTICA N°6

 DOCENTE: M. Sc. María del Carmen Valdez Ortiz

 ALUMNO: Amanqui Roca Oscar Manuel
 CUI:20151136
 FECHA DE ENTREGA:24/06/20

24 de Junio del 2020

Arequipa - Perú
 PRÁCTICA Nª 06

TÉCNICAS DE SIEMBRA, CULTIVO EN MUESTRAS BIOLÓGICAS.

RESULTADOS:
Como vimos en la clase de laboratorio existen varios métodos para obtener un cultivo puro a
partir de mezclas de cultivos. Los dos métodos más frecuentemente usados involucran hacer
una estría en una placa o una sobre una placa. Ambas técnicas involucran el uso de pequeñas
cantidades de microorganismos de tal forma que las especies individuales puedan ser
seleccionadas de las otras.

CONCLUSIONES:

 Logramos aplicar los diferentes tipos de siembra bacteriana en la superficie de los

medios de cultivo en placas Petri.
 Vimos el método fundamental para estudiar las bacterias es cultivarlas en un medio
líquido o en la superficie de un medio sólido de agar.
 Hemos aprendido a reconocer y clasificar medios de cultivo por su origen animal,
vegetal y mineral.

TRABAJO ENCARGADO:

1. Describir los medios usados en la práctica, usos y características antes y después de

la siembra.

AGAR MACCONKEY
El agar MacConkey es un medio de cultivo selectivo y diferencial para bacterias
diseñado para aislar selectivamente bacilos Gram negativos y entéricos (encontrados
normalmente en el tracto intestinal) y diferenciarlos sobre la base de la fermentación
de la lactosa.1 El cristal violeta y las sales biliares inhiben el crecimiento de organismos
grampositivos, lo que permite la selección y el aislamiento de bacterias gramnegativas.
Las bacterias entéricas que tienen la habilidad de fermentar lactosa pueden ser
detectadas utilizando el carbohidrato lactosa y el indicador de pH rojo neutro.
 Ingredientes
Los ingredientes necesarios para este medio son los siguientes: sales biliares (medio
inhóspito para el crecimiento de bacterias Gram positivas, excepto Enterococcus y
algunas especies de Staphylococcus), colorante cristal violeta (inhóspito para cierto
tipo de bacterias Gram-positivo), indicador rojo neutro (el cual marca microorganismos
que fermenten la lactosa), lactosa, peptona y cloruro sódico.
 Usos
Sirve como un indicador visual de pH, distinguiendo así las bacterias gram negativas
que pueden fermentar la lactosa (Lac+) y las que no pueden (Lac-).
 Lac+
 Al utilizar la lactosa en el medio, las bacterias Lac+ como lo son Escherichia
coli, Enterobacter y Klebsiella producen acidez, lo cual hace que baje el pH de
7,1 ± 0,2 lo que tiene como consecuencia la aparición de colonias de color
rosadas o rojas. Algunas
bacterias en cambio fermentan la lactosa de manera lenta, estas siguen siendo
Lac+ por ejemplo: Serratia y Citrobacter.
 Lac-
Bacterias que no fermenten la lactosa como lo son Salmonella, Proteus y
Shigella utilizaran peptona en su lugar, formando amoníaco, lo cual
incrementa el pH del agar, formando colonias blancas o incoloras.

Agar MacConkey con colonias Lac+ (izquierda) y colonias Lac- (derecha).

AGAR MANITOL SALADO

Agar Manitol salado o siglas en inglés MSA (Mannitol salt agar) es un medio de cultivo
que se utiliza normalmente en microbiología. Permite el crecimiento de bacterias
Gram-positivas mientras inhibe el crecimiento de Gram-negativas. Este medio es
importante en el laboratorio clínico debido a que es capaz de distinguir los
microorganismo patogénicos en un corto periodo de tiempo. Contiene una alta
concentración (~7.5%-10%) de sal (NaCl), haciéndolo selectivo para Staphylococcus (y
'Micrococcaceae) debido su alta concentración de NaCl es inhibitorio para la mayoría
de las bacterias Gram negativas. Además contiene manitol otro inhibidor de bacterias
Gram negativas y un indicador de pH indicador de fermentación ; rojo de fenol.

Coagulasa-positivo Staphylococcus producen colonias amarillas con zonas amarillas,

mientras que coagulasa-negativo Staphylococcus producen colonias rojas o
ligeramente rosadas sin cambio alguno al medio. Si un organismo es capaz de
fermentar el manitol, un subproducto ácido es creado que hace que el rojo de fenol
cambie a amarillo. Se usa para el aislamiento selectivo de colonias de Staphylococcus
sospechosas de ser patógenas.

 Composición típica
El agar manitol salado suele tener la siguiente composición:2

- 5.0 g/L digerido enzimático de caseína

- 5.0 g/L digerido enzimático de tejido animal
- 1.0g/L extracto de carne de vaca
 - 10.0 g/L D-manitol
- 75.0 g/L NaCl
- 0.025 g/L rojo de fenol
- 15.0 g/L agar
- pH 7.4 ± 0.2 at 25 °C

Una placa de agar Manitol salado con colonias de Micrococcus sp. (1), [[]] (2) and S. aureus (3).

SALMONELLA SHIGELLA AGAR

USO PREVISTO
Salmonella Shigella Agar (agar SS) es un medio selectivo y de diferenciación para el
aislamiento de bacilos entéricos patógenos, en especial los pertenecientes al género
Salmonella, a partir de muestras clínicas.
PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO
Método microbiológico.
El agar Salmonella-Shigella es una modificación del agar citrato desoxicolato descrito
por Leifson. Se le considera un medio moderadamente selectivo según el nivel de
inhibición de los microorganismos gram positivos y Enterobacteriaceae diferentes de
Salmonella y Shigella, que inhibe por contenido de sales biliares, verde brillante y
citratos.
En BD Salmonella Shigella Agar, la diferenciación de los organismos entéricos se logra
mediante la incorporación de lactosa en el medio. Los organismos que fermentan
lactosa producen ácido que, en presencia del indicador rojo neutro, propicia la
formación de colonias de color rojo. Los organismos no fermentadores de lactosa
forman colonias incoloras. Este último grupo incluye la mayoría de los patógenos
intestinales, incluidas Salmonella y Shigella. El tiosulfato sódico y el citrato férrico
permiten la detección de producción de ácido sulfhídrico, como lo demuestran las
colonias con centros de color negro. Este medio se utiliza para el aislamiento primario
de Salmonella a partir de muestras fecales humanas. Dado que existen medios más
eficaces para el aislamiento de Shigella, no debe utilizarse para el aislamiento de este
organismo.
CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
Salmonella Shigella Agar es uno de los medios recomendados para el aislamiento de
las especies Salmonella a partir de muestras fecales humanas. Este medio no se
 recomienda para el aislamiento de Shigella. En cambio, deben utilizarse BD XLD Agar o
BD Hektoen Enteric Agar. BD Salmonella Shigella Agar no debe utilizarse como medio
para un subcultivo de caldo Selenite F. En cambio, deben utilizarse BD MacConkey II
Agar, BD XLD Agar o BD Hektoen Enteric Agar. Sólo en raras ocasiones es posible
recuperar en un único medio a todos los patógenos contenidos en una muestra. Por
tanto, para el aislamiento de Salmonella, Shigella y posiblemente otros patógenos
entéricos es preciso inocular la muestra en otros medios. Ciertas pruebas diagnósticas
pueden efectuarse directamente en este medio; no obstante, para lograr la
identificación completa, se necesitan pruebas bioquímicas, y (si así se indica), pruebas
inmunológicas usando cultivos puros. Consultar las referencias correspondientes.

Salmonella-Shigella Agar

2. Describir clases se siembra y esquematizarlas

1. Siembra en placas:
Con el asa ya esterilizada, se toma una gota de líquido o de una emulsión del producto
patológico y se deposita en un costado del agar de una placa Petri, se estría a partir de
ese punto pasando suavemente el asa en zig-zag por la superficie del agar sin rasparlo,
rotar la placa en 1/3 y repetir el procedimiento 2 a 3 veces. A menudo se reciben
tórulas para cultivo y con ellas se practica la primera de las estrías, procediendo
después a diseminar con el asa o pipeta en la forma descrita.

2. Siembra en tubos de agar tendido:

El cuello del tubo debe ser flameado antes y después de ser sembrado. Con el asa
previamente esterilizada a la llama, se toma una pequeña cantidad de la muestra y se
lleva al fondo del tubo, luego se estría suavemente la superficie del medio en forma
ondulante.
Antes de introducir el tubo a la estufa de cultivo, debe dejarse suelto el tapón de goma
para evitar que los gases expulsen el tapón.
3. Siembra por picadura:
El inóculo es introducido con el asa recta o pipeta pasteur hasta el fondo del medio
con un solo movimiento y teniendo cuidado en hacer el mismo trayecto de entrada
que de salida. Debe flamearse la boca del tubo antes y después de la siembra. Antes
 de introducir el tubo a la estufa de cultivo debe soltarse el tapón de goma para evitar
que los gases expulsen el tapón.
4. Siembra en superficie y picadura:
El inóculo es introducido con el asa recta o pipeta pasteur hasta el fondo del medio
con un solo movimiento y teniendo cuidado en hacer el mismo trayecto de entrada
que de salida, se retira hacia la superficie inclinada del agar haciendo suavemente una
estría ondulada. Debe flamearse la boca del tubo antes y después de la siembra.
Antes de introducir el tubo a la estufa de cultivo debe soltarse el tapón de goma para
evitar que los gases expulsen el tapón.
5. Siembra en profundidad:
Al inocular un medio líquido como es el tioglocolato, el tubo se inclina y el material se
extrae del asa por frotamiento contra la pared del tubo, cuando éste se endereza el
material se encuentra bajo la superficie del medio. Al inocular el medio líquido con
tórula o con inóculo líquido se deposita este en el fondo del tubo. Debe flamearse la
boca del tubo antes y después de efectuada la siembra. Antes de introducir el tubo a
la estufa de cultivo debe soltarse el tapón de goma para evitar que los gases expulsen
el tapón.

3. Diferencias entre cepa, colonia, clon

Cepa
Una cepa, en microbiología, es una población de microorganismos de una sola especie
descendientes de una única célula o que provienen de una determinada muestra en
particular, la que usualmente es propagada clonalmente, debido al interés en la
conservación de sus cualidades definitorias. De una manera más básica puede
definirse como un conjunto de especímenes bacterianos o virales que comparten, al
menos, una característica o variante genética.
Existen sociedades científicas, las colecciones de cultivos tipo, que almacenan una gran
diversidad de microorganismos y que los difunden a petición de los investigadores; en
dichas colecciones, la atribución taxonómica de cada clon está perfectamente
asegurada hasta el nivel de cepa.

Colonia
Es una unidad de medida que se emplea para la cuantificación de microorganismos, es
decir, para contabilizar el número de bacterias o células fúngicas (levaduras) viables en
una muestra líquida o sólida. La viabilidad se define como la habilidad de multiplicarse
por fisión binaria en condiciones controladas. Por lo tanto, en el recuento de UFC de
un cultivo de microorganismos solo se consideran las células viables, mientras que en
el examen microscópico se considerarán tanto células vivas como muertas. Dentro de
un cultivo de células, una colonia debe presentar un crecimiento significativo, aunque
en el recuento de colonias no es posible saber si una colonia surgió de una o varias
células.

Clon
Se conoce como clon al conjunto de células u organismos que son idénticos desde el
punto de vista genético y que se originan por reproducción asexual. La clonación es la
 técnica que permite esta reproducción a partir de una única célula u organismo o
mediante la división artificial de estados embrionarios iniciales.

BIBLIOGRAFIA

 PRESCOTT et al. “Microbiología. 5ª Edición. Editorial Mc. Graw Hill Interamericana.

2012.

 INGRAHAM AND INGRAHAM. “Introducción a la Microbiología”. Editorial Reverté.

2015.

 SCHLEGEL, H.G. “Microbiología general”. Ediciones Omega, S.A. 2018

 JIMENEZ SANCHEZ Y GUERRERO. “Genética molecular bacteriana”. Editorial Reverté.