La espectrometría ultravioleta-visible o espectrofotometría UV-Vis implica la

espectroscopia de fotones en la región de radiación ultravioleta-visible. Utiliza la luz en

los rangos visible y adyacentes el ultravioleta cercano y el infrarrojo cercano.
Compuestos orgánicos

Los disolventes orgánicos pueden tener una significativa absorción de UV, por lo que
no todos los disolventes son adecuados para su uso en espectrometría UV.
La ley de Beer-Lambert establece que la absorbancia de una solución es directamente
proporcional a la concentración de la solución. Es necesario saber con qué rapidez
cambia la absorbancia con la concentración. La respuesta para un concentración
particular se conoce como factor de respuesta.

LEY DE BEER-LAMBERT

-Fórmula Ley de Beer-Lambert donde A es la absorbancia medida, I0 es la intensidad

de la luz incidente a una determinada longitud de onda, I es la intensidad de
transmisión, L la longitud de ruta a través de la muestra, y c la concentración de las
especies absorbentes. Para cada especie y longitud de onda, es una constante
conocida como absortividad molar o coeficiente de extinción.

ESPECTROFOTÓMETRO ULTRAVIOLETA-VISIBLE

El instrumento utilizado en la espectrometría ultravioleta-visible se llama

espectrofotómetro UV-Vis.

A = - log

Las partes básicas de un espectrofotómetro son una fuente de luz , un soporte para la
muestra, una rejilla de difracción o monocromador para separar las diferentes
longitudes de onda de la luz, y un detector. El detector suele ser un fotodiodo o un
CCD. Los fotodiodos se usan con monochomadores, que filtran la luz de modo que
una sola longitud de onda alcanza el detector. El detector alterna entre la medida del
haz de muestra y la del haz de referencia.

.ESPECTRO ULTRAVIOLETA-VISIBLE

Un espectro ultravioleta-visible es esencialmente un gráfico de absorbancia de luz

frente a una longitud de onda en el rango del ultravioleta o la luz visible. Este gráfico
estándar sería efectivamente «la concentración corregida» y, por tanto, independiente
de la concentración.
Espectrometría infrarroja

La espectrometría de infrarrojos es un tipo de espectrometría de absorción que utiliza

la región infrarroja del espectro electromagnético. La espectrometría infrarroja se basa
en el hecho de que los enlaces químicos de las sustancias tienen frecuencias de
vibración específicas, que corresponden a los niveles de energía de la molécula.
Si la molécula recibe luz con la misma energía de esa vibración, entonces la luz será
absorbida si se dan ciertas condiciones. Para que una vibración aparezca en el
espectro infrarrojo, la molécula debe someterse a un cambio en su momento dipolar
durante la vibración. Con el fin de hacer medidas en una muestra, se transmite un rayo
monocromo de luz infrarroja a través de la muestra, y se registra la cantidad de
energía absorbida.
Espectrometría infrarroja

La espectrometría de infrarrojos es un tipo de espectrometría de absorción que utiliza

la región infrarroja del espectro electromagnético. La espectrometría infrarroja se basa
en el hecho de que los enlaces químicos de las sustancias tienen frecuencias de
vibración específicas, que corresponden a los niveles de energía de la molécula.
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

Las muestras líquidas pueden ser prensadas entre dos planchas de una sal de alta
pureza . Las placas obviamente son solubles en agua, por lo que la muestra, los
reactivos de lavado y el medio deben ser anhidros .
Esta mezcla se tritura y se prensa con el fin de formar una pastilla por la que pueda
pasar la luz. La pastilla necesita ser prensada a altas presiones para asegurar que sea
translúcida, pero esto no puede lograrse sin un equipo adecuado .
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

Las muestras líquidas pueden ser prensadas entre dos planchas de una sal de alta
pureza . Las placas obviamente son solubles en agua, por lo que la muestra, los
reactivos de lavado y el medio deben ser anhidros .
Esta mezcla se tritura y se prensa con el fin de formar una pastilla por la que pueda
pasar la luz.
MÉTODO TÍPICO

Uno pasa por la muestra, y el otro por una referencia que suele ser la sustancia en la
que está disuelta o mezclada la muestra. * Evita que las fluctuaciones de energía
eléctrica de la fuente afecten a los resultados finales, ya que tanto la muestra como la
referencia se ven afectadas del mismo modo.
USOS Y APLICACIONES

La espectrometría infrarroja se utiliza ampliamente tanto en la industria como en la

investigación científica, porque es una técnica rápida y fiable para medidas, control de
calidad y análisis dinámicos. Los instrumentos actuales son pequeños y pueden ser
transportados, incluso para tomar medidas de campo. Haciendo medidas a una
frecuencia específica a través del tiempo, se pueden seguir los cambios en la
naturaleza o la cantidad de un enlace en particular, lo que es especialmente útil para
medir el grado de polimerización en la fabricación de polímeros. Esto se puede hacer
mientras se toman medidas simultáneas con otras técnicas.
USOS Y APLICACIONES

La espectrometría infrarroja se utiliza ampliamente tanto en la industria como en la

investigación científica, porque es una técnica rápida y fiable para medidas, control de
calidad y análisis dinámicos. Haciendo medidas a una frecuencia específica a través
del tiempo, se pueden seguir los cambios en la naturaleza o la cantidad de un enlace
en particular, lo que es especialmente útil para medir el grado de polimerización en la
fabricación de polímeros.

Espectrometría de resonancia magnética

nuclear
La espectrometría de resonancia magnética nuclear , más comúnmente conocida
como espectrometría RMN, es una técnica que explota las propiedades magnéticas de
ciertos núcleos. Pueden obtenerse muchos tipos de información mediante un espectro
RMN. Al igual que se utiliza la espectrometría de infrarrojos para identificar grupos
funcionales, el análisis de un espectro RMN unidimensional proporciona información
sobre el número y tipo de entidades químicas en una molécula.
Puede utilizarse, entre otras cosas, para estudiar mezclas de analitos, para
comprender efectos dinámicos como el cambio en la temperatura y los mecanismos de
reacción, y es una herramienta de valor incalculable para la comprensión de la
estructura y función de las proteínas y los ácidos nucleicos.
Resumen
La espectrometría de resonancia magnética nuclear , más comúnmente conocida
como espectrometría RMN, es una técnica que explota las propiedades magnéticas de
ciertos núcleos. Al igual que se utiliza la espectrometría de infrarrojos para identificar
grupos funcionales, el análisis de un espectro RMN unidimensional proporciona
información sobre el número y tipo de entidades químicas en una molécula.
TÉCNICAS BÁSICAS DE ESPECTROMETRÍA RMN

Cuando se sitúan dentro de un campo magnético, los núcleos activos de RMN

absorben a una frecuencia característica del isótopo. Por ejemplo, en un campo
magnético de 21 Tesla, los protones resuenan a 900 MHz. En el campo magnético
terrestre, los mismos núcleos resuenan en frecuencias de audio. Este efecto se utiliza
en los espectrómetros RMN y otros instrumentos.
TÉCNICAS BÁSICAS DE ESPECTROMETRÍA RMN

Cuando se sitúan dentro de un campo magnético, los núcleos activos de RMN

absorben a una frecuencia característica del isótopo. En el campo magnético
terrestre, los mismos núcleos resuenan en frecuencias de audio.
RESONANCIA MAGNÉTICA NUCLEAR DE ESTADO SÓLIDO

Una variedad de circunstancias físicas impide que las moléculas sean estudiadas en
solución, ni tampoco mediante otras técnicas espectroscópicas a un nivel atómico. En
la espectrometría RMN convencional en estado de solución, estas interacciones
adicionales darían lugar a una ampliación considerable de las líneas
espectrales. Diversas técnicas permiten establecer condiciones de alta resolución, que
pueden, al menos para los espectros de 13 C, ser comparables a los espectros RMN
en estado de solución. Dos conceptos importantes para la alta resolución en la
espectrometría RMN de estado sólido son la limitación de la posible orientación
molecular mediante orientación de la muestra, y la reducción de las interacciones
magnéticas nucleares anisotrópicas mediante giro de la muestra.

Una serie de técnicas intermedias, con muestras de alineamiento parcial o movilidad

reducida, se están utilizando también en espectrometría RMN.
RESONANCIA MAGNÉTICA NUCLEAR DE ESTADO SÓLIDO

Una variedad de circunstancias físicas impide que las moléculas sean estudiadas en
solución, ni tampoco mediante otras técnicas espectroscópicas a un nivel
atómico. Diversas técnicas permiten establecer condiciones de alta resolución, que
pueden, al menos para los espectros de 13 C, ser comparables a los espectros RMN
en estado de solución. Una serie de técnicas intermedias, con muestras de
alineamiento parcial o movilidad reducida, se están utilizando también en
espectrometría RMN.
ESPECTROMETRÍA RMN APLICADA A PROTEÍNAS

Gran parte de la reciente innovación dentro de la espectrometría RMN se ha dado en

el campo de estudio de las proteínas, y se ha convertido en una técnica muy
importante en la biología estructural. Un objetivo común de estas investigaciones es
obtener una alta resolución de las estructuras tridimensionales de las proteínas, similar
a lo que puede lograrse por cristalografía de rayos X. En contraste con la cristalografía
de rayos X, la RMN se limita sobre todo a las proteínas relativamente pequeñas, de
menos de 35 kDa, aunque los avances técnicos permiten la resolución de estructuras
más grandes. La espectrometría RMN es a menudo la única manera de obtener
información de alta resolución, en todo o en parte, de proteínas no estructuradas. Las
proteínas son varios órdenes de magnitud más grandes que las pequeñas moléculas
orgánicas que se mencionaron anteriormente en este artículo, pero la misma teoría se
aplica a la RMN.

El método más importante utilizado para la determinación de la estructura de las

proteínas utiliza experimentos NOE para medir las distancias entre pares de átomos
dentro de la molécula.
ESPECTROMETRÍA RMN APLICADA A PROTEÍNAS

Gran parte de la reciente innovación dentro de la espectrometría RMN se ha dado en

el campo de estudio de las proteínas, y se ha convertido en una técnica muy
importante en la biología estructural. La espectrometría RMN es a menudo la única
manera de obtener información de alta resolución, en todo o en parte, de proteínas no
estructuradas. El método más importante utilizado para la determinación de la
estructura de las proteínas utiliza experimentos NOE para medir las distancias entre
pares de átomos dentro de la molécula.
Espectrometría de absorción

En la espectrometría de absorción, se compara la intensidad de un haz de luz medida

antes y después de la interacción con una muestra. Las palabras transmisión y
remisión se refieren a la dirección de viaje de los haces de luz medidos antes y
después de la absorción.
Otro descriptor asociado con la espectrometría de absorción es la variedad de
longitudes de onda de radiación que se usa en el haz de luz incidente. Por otra
parte, también se encuentran referencias a otros rangos de longitud de onda, como la
espectrometría de rayos X, que por lo general denotan una espectrometría de
emisión. La espectrometría UV-visible se refiere a técnicas donde se mide cuánta luz
de una longitud de onda particular es absorbida por una muestra.
Técnicamente, la espectrometría de absorción se basa en la absorción de fotones por
una o más sustancias presentes en una muestra , y la promoción subsiguiente del
electrón desde un nivel de energía a otro en esa sustancia. En la espectroscopia de
absorción, los fotones absorbidos no son emitidos de nuevo sino que la energía que se
transfiere al compuesto químico en la absorbancia de un fotón se pierde por medios no
radiantes, como la transferencia de energía por calor a otras moléculas. El gráfico de
la cantidad de radiación absorbida respecto a la longitud de onda para un compuesto
particular se conoce como espectro de absorción.
Espectrometría como instrumento analítico

A menudo es de interés conocer no sólo la composición química de una muestra

dada, sino también las concentraciones relativas de varios compuestos de una
mezcla. Para hacer esto debe construirse una escala, o curva de calibración, usando
varias concentraciones conocidas para cada compuesto de interés. La repetición de
este proceso para cada compuesto en una muestra da un modelo de varios espectros
de absorción que en conjunto reproducen la absorción observada. Una muestra
desconocida da un valor de 834. Ya que esta es una relación lineal y pasa por el
origen, el valor desconocido se calcula fácilmente como 108 partes por millón. Con
este método de proporción no es necesario conocer los valores de los coeficientes
gobernantes, o cromóforos, o la longitud de célula experimental.
Espectrometría como instrumento analítico

A menudo es de interés conocer no sólo la composición química de una muestra

dada, sino también las concentraciones relativas de varios compuestos de una
mezcla. La repetición de este proceso para cada compuesto en una muestra da un
modelo de varios espectros de absorción que en conjunto reproducen la absorción
observada. Ya que esta es una relación lineal y pasa por el origen, el valor
desconocido se calcula fácilmente como 108 partes por millón.