Phytothérapie (2012) 10:151–160

© Springer-Verlag France 2012

DOI 10.1007/s10298-012-0704-3

Article original
Pharmacognosie

Activités antioxydante, apoptotique et antiproliférative

de Tetraena gaetula (Emb. & Maire) Beier & Thulin
et de Berberis hispanica Boiss. & Reut. originaires du Maroc
A. El H. El Youbi 1,2, D. Bousta 2,*, B. Jamoussi 3, H. Greche 2, L. EL Mansouri 2, J. Benjilali 2, S.H. Soidrou 2
1
LMBF, faculté des sciences et techniques, Fès, Maroc
2
LPAMSN, institut national des plantes médicinales et aromatiques, Taounate, Maroc
3
Laboratoire de chimie analytique, institut supérieur de l’éducation et de la formation continue, Tunis, Tunisie
Correspondance : dalila_bousta@yahoo.fr

Résumé : Les extraits aqueux (EA) de la partie aérienne de
Tetraena gaetula et de l’écorce de la racine de Berberis hispa-
nica ont montré d’intéressants profils immunomodulateurs
dans nos travaux précédents [16,17]. Dans ce sens, nous
avons entrepris des études sur les activités antiprolifératives
et apoptotiques d’EA de Tetraena gaetula et de Berberis his-
panica sur les sous-populations des leucocytes des rats, après
avoir étudié leur pouvoir antioxydant in vitro. Nous rap-
portons ici que l’administration du peroxyde d’hydrogène
« H2O2 » à une dose de 34 mg/kg de poids corporel (p.c.)
de l’animal, utilisé comme lot témoin, induit une prolifé-
ration incontrôlée du cycle cellulaire des sous-populations
leucocytaires. Nous avons également noté une activité anti-
proliférative importante après le traitement avec l’EA de
Tetraena gaetula à 300 mg/kg, p.c., avec un arrêt du cycle
en phase G0/G1 (85 %) et une apparition d’un pic pré-G0/
G1 (14 %). Dans cette étude, nous avons également évalué, au
moyen de deux tests, les activités antioxydantes (test DPPH)
et apoptotiques (annexine V-FITC/IP). À ce propos, nos
extraits ont montré une activité antioxydante, avec une plus
grande activité in vitro de l’EA de Berberis hispanica (IC
50 = 0,2 mg/ml). Nous avons également noté une activité
apoptotique in vivo des deux extraits de Berberis hispanica
et de Tetraena gaetula respectivement à 80 et 300 mg/kg,
p.c., probablement via des voies différentes. L’analyse phyto-
chimique a révélé la présence d’alcaloïdes et des coumarines
dans l’EA de Berberis hispanica, de saponines de type tri-
terpénoïde et d’alcaloïdes à noyau tropolone dans l’EA de
Tetraena gaetula. En conclusion, notre travail a mis en évi-
dence le pouvoir antioxydant, antiprolifératif et apoptotique
des EA de Berberis hispanica et de Tetraena gaetula, in vitro
et in vivo. Ces résultats peuvent contribuer à l’élaboration
de nouveaux médicaments anticancéreux d’origine naturelle
complémentaires à la médication chimique.
Mots clés : Tetraena gaetula – Berberis hispanica – Anti-
oxydant – Apoptotique – Antiprolifératif
Antioxidant, antiproliferative and apoptotic activities
of Tetraena gaetula (Emb. & Maire) Beier & Thulin
and Berberis hispanica Boiss. & Reut. from Morocco
Abstract: The aqueous extracts (AE) of aerial part of Tetra-
ena gaetula and root bark of Berberis hispanica showed
some interesting immunomodulatory activities in our pre-
vious works [16,17]. In this sense we undertook studies
on the antiproliferative and apoptotic activities of AE
of Tetraena gaetula and Berberis hispanica on leukocyte
subpopulations in rats, after studying their antioxydant
power in vitro. Here, we report that administration of
hydrogen peroxide “H2O2” at a dose of 34 mg/kg of animal
body-weight (b.w.), used as control, causes uncontrolled
proliferation of the cell cycle of leukocytes subpopulation.
The higher antiproliferative activity was observed with
the AE of Tetraena gaetula (300 mg/kg, b.w.), inducing
a cycle arrest in G0/G1 phase (85%) with the appearance
of sub-G0/G1 peak detection (14%) for Tetraena gaetula.
According to the antioxydant (DPPH test) and apoptotic
profiles (annexine V-FITC/IP) tests, our extracts show a
radical-scavenging power with a higher in vitro activity for
AE of Berberis hispanica (IC 50 = 0,2 mg/ml). We also noted
an in vivo apoptotic activity of AE of Berberis hispanica
and Tetraena gaetula, respectively at 80 and 300 mg/kg,
b.w. in the same order, probably by different pathways.
Further, the phytochemical analysis revealed the presence
of alkaloids and coumarins in AE of Berberis hispanica,
and triterpenoid saponins and tropolone-alkaloids in the
Tetraena gaetula ones. Therefore, this work demonstrated
an antioxidant, antiproliferative and apoptotic activities of
AE of Berberis hispanica and Tetraena gaetula, in vitro
152
and in vivo. These results may contribute to the devel-
opment of natural anticancer-drugs, complementary to
chemical medication.
Keywords: Tetraena gaetula – Berberis hispanica – Anti-
oxidant – Apoptotic – Antiproliferative
Introduction
Les plantes médicinales ont été employées pendant des
siècles comme remèdes pour les maladies humaines, parce
qu’elles contiennent des composants de valeurs théra-
peutiques. Toutefois, malgré les énormes progrès réalisés
par la médecine moderne dans la prise en charge des mala-
dies, la phytothérapie est devenue, à l’heure actuelle, l’une
des issues les plus empruntées pour se soigner et lutter
contre les maladies chroniques telles que le cancer.
Les plantes immunomodulatrices, dans le concept d’acti-
vité globale immunostimulante ou immunosuppressive,
agissent sur plusieurs facteurs de l’immunité extra- et
intracellulaire, et par conséquent, elles exercent une action
directe et/ou indirecte sur les cellules tumorales [7,24]. De
ce fait, leurs propriétés thérapeutiques, telles les activités
antioxydantes et antiprolifératives, ne sont pas directe-
ment liées au cancer, mais à des modulations pharmaco-
logiques d’ordre immunitaire pour combattre sa propaga-
tion [19,58,60].
Dans le présent travail, nous nous sommes intéressés
aux propriétés antioxydantes, apoptotiques et antiprolifé-
ratives de deux plantes (Tetraena gaetula [Emb. & Maire]
Beier & Thulin et Berberis hispanica Boiss. & Reut), précé-
demment décrites par leurs activités immunomodulatrices
[16,17], afin de mettre au point des traitements naturels
complémentaires à la médication chimique utilisée dans le
traitement du cancer.
Matériels et méthodes
Matériel
Matériel animal
L’étude a été réalisée sur des rats de souche « Wistar »
dont le poids varie entre 130 et 170 g. Ces animaux ont
été fournis par le centre ECWP « Emirates Center for
Wildlife Propagation » de la région de Missour (Maroc).
Les animaux sont logés dans des cages métalliques et main-
tenus à une température ambiante de l’ordre de 21 ± 2 °C
et à une photopériode de 12 heures/12.
Matériel végétal
La partie aérienne de Tetraena gaetula est récoltée à Boudnib
(région d’Errachidia, Sud du Maroc) durant la saison de
végétation 2007 ; l’écorce de la racine de Berberis hispa-
nica est collectée dans la région d’Immouzer-Mermoucha
(Centre Nord du Maroc) durant la saison de végéta-
tion 2008. Des spécimens de ces plantes sont déposés à
l’herbier de l’Institut national des plantes médicinales
et aromatiques, Taounate (exsiccata INP210 et INP76
respectivement pour Tetraena gaetula et Berberis hispa-
nica). Les échantillons ont été lavés à l’eau distillée, puis
séchés à l’ombre à l’abri de la lumière et à température
ambiante. Après séchage, ces échantillons ont été broyés
pour obtenir une poudre fine, utilisée pour la préparation
des extraits.
Réactifs
Les produits utilisés sont :
– 1,1-Diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH) (Sigma Aldrich,
Allemagne) ;
– l’acide ascorbique et l’hydroxytoluène butylé (BHT)
(Sigma Aldrich, Allemagne) ;
– kit Annexine V-FITC, IP (Immunotech, France) ;
– kit DNA Pre, IP (Immunotech, France).
Méthodologie
Préparation des extraits aqueux (EA)
Des macérations aqueuses de Tetraena gaetula et de
Berberis hispanica à 12 % ont été préparées dans du
tampon phosphate salin (PBS, pH : 7,4), suivi d’une agita-
tion pendant deux heures. L’ensemble est gardé pendant
une nuit à 4 °C. Ensuite, les solutions sont centrifugées à
2 700 g durant 15 minutes, et les surnageants sont filtrés.
Les extraits obtenus après filtration sont conservés à –20 °C
jusqu’à utilisation.
Criblage phytochimique
Les essais phytochimiques ont été menés selon les techni-
ques décrites par Bruneton [8], Dohou et al. [15] et Karumi
et al. [31]. Ces essais consistent à mettre en évidence la
présence d’un certain nombre de groupes chimiques des
EA de Tetraena gaetula et de Berberis hispanica et réputés
pour leurs effets pharmacologiques étudiés. Les réactifs
de caractérisation utilisés nous ont permis de mettre en
évidence les groupes chimiques suivants : les alcaloïdes
(Dragendorff et de Mayer), noyau tropolone, saponines–
triterpènoïdes (Liebermann Burchard), caroténoïdes–
triterpènes (Carr et Price), coumarines, flavonoïdes
(cyanidine), tanins (chlorure ferrique), quinones (Born-
traeger), anthraquinones et anthocyanes.
Activité antioxydante
Nous avons évalué les activités antioxydantes des extraits
des plantes étudiées par le biais de la méthode du 1,1-Di-
phenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH) [6,13,57]. La solution
de DPPH est obtenue en dissolvant 2 mg de la poudre

dans 50 ml de l’éthanol (EtOH). Les antioxydants de
référence, tels l’acide ascorbique, le BHT et les extraits
testés, sont ajoutés à la solution de DPPH à différentes
concentrations. La mesure de la variation de l’absorbance
a été effectuée par spectrophotométrie à une longueur
d’onde de 517 nm, 30 minutes après l’ajout des extraits.
Le graphique de la variation de l’absorbance en fonc-
tion de la concentration a permis de déterminer l’IC 50
(concentration correspondant à 50 % d’inhibition). Les
pourcentages d’inhibition ont été calculés en utilisant la
formule suivante [59] :
% d’inhibition = {[absorbance (témoin) – absorbance
(antioxydant)]⁄absorbance (témoin)} × 100
Pour mieux caractériser le pouvoir antioxydant, deux
autres paramètres ont été calculés [44] :
– concentration effective à 50 % (EC 50) [EC 50 = IC 50/
masse DPPH en mg] ;
– pouvoir antiradicalaire (APR) [APR = 1/EC 50].
Quantification de l’apoptose
Vingt-quatre heures après le traitement avec les extraits
de Tetraena gaetula et de Berberis hispanica, les animaux
sont anesthésiés par voie intrapéritonéale « i.p. » par
du pentobarbital sodique à raison de 30 mg/kg p.c. Le
sang est récupéré dans des tubes héparinés ; les héma-
ties sont lysées par l’ajout du chlorure d’ammonium. Les
cellules ajustées à 5,106 cellules/ml sont incubées avec 1 µl
d’annexine V-FITC et 5 µl de l’iodure de propidium (IP)
pendant 15 minutes à l’obscurité et au froid. Après l’incu-
bation, 400 µl de tampon binding ont été ajoutés. Le pour-
centage des cellules préapoptotiques, postapoptotiques et
nécrotiques est déterminé par l’analyse au cytomètre en
flux (CMF) [CMF de type Epics-XL MC]. L’acide buty-
rique (5 mg/kg, p.c.) a été utilisé comme substance de
référence [61].
Cycle d’ADN
La répartition des cellules dans les différentes phases du
cycle cellulaire a été étudiée par cytométrie en flux en
Tableau 1. Screening phytochimique de l’extrait de Berberis hispanica
Alcaloïdes
Réactif
Plante Réactif
de Dragendroff CCM
de Mayer « sels »
« bases »
Berberis hispanica +++ +++ ++
NB : la présence des composés chimiques est : (+++) importante, (++) : modérée, (+) légère, (–) absence.
153
utilisant le kit DNA Prep (Immunotech, France). Cette
méthode consiste à marquer l’ADN par l’IP, qui s’intercale
entre les bases de l’ADN après la dégradation de l’ARN
par l’ARNase.
Cette technique révèle les différents stades de multipli-
cation cellulaire : pré-G0/G1 : (< 2 N) ; G0/G1 : (= 2 N) ;
S : (2 < N < 4), G2/M : (= 4 N).
Au cours de cette étude, nous avons testé les effets de
Tetraena gaetula et de Berberis hispanica sur la proliféra-
tion cellulaire anarchique induite in vivo par l’utilisation
de l’H2O2 [28]. En effet, les animaux ont été repartis en
quatre lots de cinq animaux. Chaque lot reçoit pendant
quatre jours les traitements suivants :
– lot I : NaCl à 0,9 % ;
– lot II : H2O2 à la dose 34 mg/kg, p.c. ;
– lots III et IV : EA de Tetraena gaetula et de
Berberis hispanica ; 30 minutes après, les animaux reçoi-
vent un second traitement par l’H2O2.
Étude statistique
Les résultats sont exprimés en moyenne ± SEM. Toutes les
expériences ont été réalisées en triple. Le test t de Student
a été utilisé pour comparer statistiquement les résultats
obtenus. Les valeurs de p ≤ 0,05 sont considérées statisti-
quement significatives.
Résultats
Screening phytochimique
Les essais phytochimiques effectués sur l’extrait de
Berberis hispanica ont révélé la présence de couma-
rines et surtout celle d’alcaloïdes de manière abondante
(Tableaux 1 et 2). La chromatographie sur couche mince de
l’extrait dans le système éluant AcEt/MeOH/NH40H (9:1:1)
présente de nombreuses taches orange après révélation
avec le réactif de Dragendorff ; ce qui signifie la présence
des alcaloïdes bases (Tableau 2). Les alcaloïdes sels ont été
mis en évidence par le réactif de Mayer (Tableau 1). En
revanche, l’exposition aux vapeurs de NH3 sur les CCM
Coumarines Tanins
Stérols-triterpènes
noyau tropolone
Anthraquinones
Caroténoïdes-
Anthocyanes
Saponosides
Alcaloïdes à
Catèchiques
Flavonoïdes
triterpènes
Quinones
Galliques
Tubes
++ – – – – – – – – – –
154

Tableau 2. Révélation sur CCM des coumarines et des alcaloïdes de l’extrait de Berberis hispanica
Plante Coumarines Alcaloïdes
Couleurs après
Couleurs après
Types de composés révélation au réactif Types de composés
révélation au NH3
possibles de Dragendorff possibles
Rf Visible 365 nm Rf Visible
Berberis hispanica
0.46 Jaune Bleu Coumarines 0.08 Orange NI
0.59 Jaune Bleu Christelle-Chantal et al. [12] 0.35 Orange NI
0.63 Jaune Bleu 0.44 Orange NI
0.56 Orange Chlorhydrate de berbérine
Christelle-Chantal et al. [12]
NI : non identifié.

montre, après visualisation sous UV à 365 nm, une appa- Activité antioxydante
rition de taches bleues fluorescentes ; cela confirme la
présence de coumarines (Tableau 2). Ces résultats ont été Les EA de Tetraena gaetula et de Berberis hispanica
confirmés par une autre technique décrite dans les travaux possèdent une activité antioxydante dose-dépendante
(Figs. 1,2). Nous avons noté que le pouvoir antioxydant
de Benmehdi [5] (Tableau 1). Les tests de révélation
de Berberis hispanica est plus important que celui du
des quinones, des anthraquinones, des anthocyanes, des
Tetraena gaetula avec une IC 50 de 0,2 mg/ml et un APR
flavonoïdes, des saponines–triterpènoïdes, des carotènes–
de 0,2 mg/ml, suivi par Tetraena gaetula avec une IC 50
triterpènes, des alcaloïdes à noyau tropolone et des tanins
de 0,8 mg/ml et un APR de 0,047 mg/ml (Tableau 4).
ont été négatifs dans l’extrait de Berberis hispanica. Par
En comparaison avec les antioxydants standard, les deux
ailleurs, la révélation des mêmes composés chimiques
extraits testés s’avèrent moins actifs.
étudiés dans l’extrait de Tetraena gaetula révèle l’absence
de toutes les familles chimiques citées, à l’exception de
saponines–triterpènoïdes, des alcaloïdes à noyau tropolone Activité apoptotique
(Tableau 3) et des flavonoïdes de types flavones, ayant été L’évaluation de l’activité apoptotique des EA de
antérieurement démontrés [16]. Tetraena gaetula et de Berberis hispanica a été réalisée par

Tableau 3. Screening phytochimique de l’extrait de Tetraena gaetula

Alcaloïdes Coumarines
noyau tropolone

Anthraquinones

Caroténoïdes-
triterpènoïdes
Anthocyanes
Alcaloïdes à

Saponines-

triterpènes
Plante
Quinones

Réactif Réactif de Dragendroff

CCM Tubes
de Mayer « sels » « bases »

Tetraena gaetula – t – – + – – – +++ –

NB : la présence des composés chimiques est : (+++) importante, (++) modérée, (+) légère, t : trace, (–) absence.

Tableau 4. Activité antioxydante des extraits aqueux de Berberis hispanica et Tetraena gaetula
IC 50 (mg/ml) EC 50 APR
Berberis hispanica 0,200 ± 0,010 5,000 ± 0,002 0,200 ± 0,001
Tetraena gaetula 0,855 ± 0,050 21,370 ± 0,002 0,047 ± 0,000
Acide ascorbique 0,055 ± 1,750 1,370 ± 0,167 0,720 ± 0,002
BHT 0,070 ± 1,050 1,750 ± 0,070 0,570 ± 0,010
EC 50 = IC 50/masse du DPPH en mg ; APR = 1/EC 50.
 155

Fig. 1. Activité antioxydante de l’extrait aqueux de Tetraena gaetula

gaetula, exprimée par l’inhibition de
l’activité radicalaire du DPPH Fig. 2. Activité antioxydante de l’extrait aqueux de Berberis hispanica, exprimée par l’inhibition de
l’activité radicalaire du DPPH

le biais du CMF. Ainsi, le double marquage par l’annexine

V-FITC/IP nous a permis une distinction évidente de
quatre types de populations cellulaires : des cellules
vivantes « N-AP » (annexine V-FITC –/IP–), des cellules
apoptotiques précoces « Pr-AP » (annexine V-FITC+/IP–),
des cellules apoptotiques tardives « Ps-AP » (annexine
V-FITC+/IP+) et des cellules nécrotiques « Nec » (annexine
V-FITC–/IP+).
Les résultats de la Figure 3a soulignent une corrélation
significative entre l’administration de l’EA de Berberis hispa-
nica et l’induction de la mort cellulaire en comparaison
avec le lot témoin. Nous notons des effets apoptotique et
nécrotique prononcés à la dose de 80 mg/kg, p.c. (Pr-AP :
36 % ; Ps-AP : 33 % et Nec : 60 %) (Fig. 4d).
Cependant, l’administration de l’EA de Tetraena gaetula
induit un profil différent après l’administration de la dose
de 300 mg/kg, p.c. (Fig. 3b), un stade précoce d’apoptose
(Pr-AP : 7 %) et un stade de nécrose (Nec : 3 %) (Fig. 4c).
(a)

Effets antiprolifératifs des extraits de Berberis hispanica

et de Tetraena gaetula in vivo sur les subpopulations
leucocytaires (Figs. 5a,b).
Le suivi des quantités d’ADN des leucocytes périphériques
dans les différents stades (G1, S et G2/M) a révélé des arrêts
différents du cycle cellulaire en fonction de l’extrait étudié
en comparaison avec le lot traité avec l’H2O2 in vivo [G1 :
57 % ; S : 22 % et G2/M : 21 %].
Dans ce sens, l’administration de l’extrait de
Berberis hispanica à 80 mg/kg, p.c. induit un arrêt du cycle
cellulaire des leucocytes en phase G0/G1 [G0/G1 : 85 %],
avec une accumulation des cellules en phase S [S : 15 %]
(Figs. 5a et 6d). Cependant, l’administration de l’EA de
Tetraena gaetula à 300 mg/kg, p.c. provoque un arrêt du
(b)
cycle cellulaire leucocytaire au stade G1, avec une induc-
Fig. 3. Effets de l’extrait aqueux de Berberis hispanica (a) et de Tetraena gaetula (b) sur l’apoptose
tion d’apoptose au stade pré-G0/G1 [38,56], correspondant des cellules leucocytaires, détectée par un comarquage à l’annexine V-FITC/IP. Les valeurs représentent
aux cellules caractérisées par une quantité d’ADN (N < 2) les pourcentages cellulaires en phases d’apoptose et de nécrose. N-Ap : non apoptotique, Pr-Ap :
[pré-G0/G1 : 14 % ; G1 : 85 %] (Figs. 5b et 6c). proapoptotique, Ps-Ap : postapoptotique, Nec : nécrose
156
Fig. 4. Effets de l’extrait aqueux de Tetraena gaetula (c) et de Berberis hispanica (d) sur l’apoptose des cellules leucocytaires, détectée par un comarquage à l’annexine V-FITC/IP en comparaison avec un lot traité
à l’acide butyrique (b) et un lot traité au NaCl 0,9 % (a). Les histogrammes montrent les quatre phases cellulaires N-Ap : non apoptotique, Pr-Ap : proapoptotique, Ps-Ap : postapoptotique, Nec : nécrose
Discussion
Dans une étude antérieure [16], nous avons relevé par
le biais de criblage phytochimique quelques principales
familles chimiques existantes dans l’EA de Tetraena gaetula.
Dans ce sens, d’autres investigations d’ordre chimique ont
été réalisées pour élucider les différents composants de
Berberis hispanica et également pour compléter le travail
initié chez Tetraena gaetula [16].
Dans notre étude, nous avons montré pour la première
fois la présence de coumarines dans l’extrait de Berberis
hispanica au lieu des flavonoïdes type « flavonols » exis-
tants chez des espèces voisines telles Berberis vulgaris et
Berberis croatica [62]. En concordance avec les travaux
de Lmnaouer [37], nos résultats démontrent également la
présence dominante d’alcaloïdes avec une quantité moins
importante de coumarines dans l’extrait de Berberis hispanica.
Comme pour les autres espèces de la famille des Berberi-
daceae, les alcaloïdes sont les constituants majoritaires de
Berberis hispanica [37], dont le principal composé est la
berbérine [4,33,49].
Dans ce même contexte, et en concordance avec les
travaux de Safir et al. [47] et Aquino et al. [2], nos résul-
tats montrent, d’une part, l’existence de saponines–
triterpènoïdes dans l’extrait de Tetraena gaetula et, d’autre
part, une présence d’alcaloïdes à noyau tropolone, révélés
pour la première fois dans la littérature.
Dans ce travail, nous avons évalué le pouvoir antioxydant
des EA de Berberis hispanica et de Tetraena gaetula. Les
résultats obtenus montrent un potentiel antioxydant
important de l’extrait de Berberis hispanica avec une IC 50
de 0,2 mg/ml et un APR de 0,2 mg/ml. Ce pouvoir antioxy-
dant est en relation étroite avec la nature des composés
chimiques existants dans chaque espèce, particulièrement
les alcaloïdes [34,49,57] et les coumarines [3,42,54,55].
À l’issue de ce travail, les résultats obtenus montrent
un profil à la fois pré/post-apoptotique et nécrotique de
l’EA de Berberis hispanica à la dose 80 mg/kg, p.c. in vivo.
 157

(a) (b)

Fig. 5. Effets des extraits aqueux de Berberis hispanica (a) et de Tetraena gaetula (b) sur le cycle cellulaire des leucocytes du rat. Les valeurs représentent les pourcentages cellulaires à différentes phases du
cycle cellulaire

Fig. 6. Effets de l’extrait aqueux de Tetraena gaetula (c) et de Berberis hispanica (d) sur la quantité d’ADN des leucocytes du rat, détectée par un marquage à l’IP en comparaison avec un lot traité à l’eau oxygénée
(b) et un lot traité au NaCl 0,9 % (a)
158
Tandis que l’EA de Tetraena gaetula à la dose 300 mg/kg
p.c. induit plutôt un effet préapoptotique et nécrotique.
En accord avec le travail de Mercié et Belloc [40], nous
soupçonnons que le déclenchement de la mort cellulaire
programmée, précoce (préapoptose), postapoptose ou
accidentelle (nécrose), est conditionné par la nature des
molécules bioactives existantes dans l’extrait, et par la
survenue d’un signal inducteur de l’apoptose, l’état, le type
et l’origine histologique des cellules. Dans cette optique,
nous pouvons soupçonner l’induction de l’apoptose et de
la nécrose cellulaire par les principaux constituants chimi-
ques de l’EA de Tetraena gaetula qui sont les saponines et
les flavonoïdes. Ces hypothèses s’inscrivent dans le fait que
les saponines sont des molécules cytotoxiques [45] capables
de déclencher la fragmentation de l’ADN via l’activation
des caspases 3 et 7 et donc, l’induction de l’apoptose [10].
Cependant, les flavonoïdes ont tendance à emprunter une
autre voie d’induction de la fragmentation de l’ADN via
l’activation des caspases 3, 8 et 9 [11,48].
En outre, les constituants majoritaires de l’EA de
Berberis hispanica, tels les alcaloïdes (berbérine) et les
coumarines, sont fortement soupçonnés dans le processus
d’apoptose [18,20,32,46]. Dans ce sens, la voie apoptotique
d’alcaloïdes est corrélée probablement avec l’activation de
la voie mitochondriale [35,36,39].
Il est connu également que le système immunitaire joue
un rôle crucial dans l’apoptose et la nécrose cellulaire, et
cela pourrait dépendre directement et/ou indirectement des
propriétés immunomodulatrices des espèces étudiées. De
ce fait, les mécanismes d’actions, probablement sollicités
par les molécules immunosuppressives de Tetraena gaetula
à la dose de 300 mg/kg, p.c. [16], pourraient être à l’origine
de l’activation de la voie glucocorticoïdergique et l’induc-
tion de l’apoptose [52].
Cependant, la propriété immunostimulante de l’EA de
Berberis hispanica à la dose de 80 mg/kg, p.c. [17] pourrait
emprunter une autre voie directe et/ou indirecte via :
– l’activation de la sécrétion des médiateurs responsables
de l’induction de l’apoptose par les cellules immunitaires, tels
que l’IL-1, IL-2, TNFα, INFα et INFγ gamma [21,23,41,60] ;
– l’activation des cellules NK et/ou les cellules lympho-
cytaires cytotoxiques [1,14,30,51].
En parallèle à l’activité apoptotique des extraits des
plantes étudiées, d’autres investigations ont été entreprises
pour élucider leurs profils antiprolifératifs. Les résultats
obtenus avec le traitement à l’H2O2 plaident en faveur
d’une forte augmentation de l’oxydation de l’ADN des
subpopulations leucocytaires et une prolifération anar-
chique traduite par l’apparition des cellules en synthèse S
(22 %) et en mitose G2/M (21 %). Cet état prolifératif des
leucocytes pourrait être comparé à un cas cancéreux décrit
dans l’étude de Chen et al. [9].
Nos résultats ont démontré un effet antiprolifératif signifi-
catif in vivo de l’EA de Tetraena gaetula à la dose de 300 mg/kg,
p.c. puisqu’il y a une induction d’apoptose (14 %), due
probablement aux effets apoptotiques des saponines de type
triterpénoïdes, et un important effet antiprolifératif de ces
composés induisant un arrêt du cycle en phase G0/G1. Cette
activité antiproliférative est le résultat d’une sous-régulation
des cyclines du cycle cellulaire [29]. Hormis ces postulats,
il ne faut pas exclure l’effet antiprolifératif des flavonoïdes
par arrêt du cycle cellulaire en phase G1/S en contrôlant la
protéine phosphokinase du G1/S [22,26,27].
Ainsi, nous avons observé l’apparition d’une popula-
tion pré-G0/G1 (< 2 N) en stade d’apoptose sous l’effet du
traitement par l’EA de Tetraena gaetula. Selon les travaux
décrits par Lopez-Gonzalez et al. [38] et Yan et al. [56], ce
phénomène d’apoptose pré-G0/G1 est dû probablement à
une fragmentation de l’ADN internucléosomale.
En concordance avec les travaux de Khan et al. [33],
l’administration de l’extrait de Berberis hispanica à la dose
de 80 mg/kg p.c. n’a arrêté le cycle cellulaire qu’à la phase
S (15 %), probablement via le mécanisme d’apoptose induit
par la berbérine [33,39] et sans négliger l’effet apoptotique
des coumarines [46].
En comparaison avec l’effet antiprolifératif des sapo-
nines de type triterpénoïdes et celui des flavonoïdes de
Tetraena gaetula, médié par la fragmentation d’ADN, les
alcaloïdes et les coumarines de Berberis hispanica semblent
emprunter la voie mitochondriale et/ou la voie des caspases
comme des voies d’activation de l’apoptose [35,36,39]. Cette
dernière explique en partie l’effet antiprolifératif des EA de
Tetraena gaetula et de Berberis hispanica.
Nous pouvons également souligner l’intérêt des propriétés
antioxydantes des plantes étudiées dans l’inhibition de la proli-
fération cellulaire anarchique. D’autres travaux ont démontré
les effets antiprolifératifs des composés doués d’activités
antioxydantes [53,58]. En effet, ces molécules antioxydantes,
particulièrement les composés phénoliques (flavonoïdes et
coumarines), sont capables de modifier la réponse proliféra-
tive des cellules par la modulation de la sécrétion des protéines
kinases intervenant dans la prolifération des cellules tumo-
rales et induisant l’expression des enzymes anticarcinogènes
et/ou empêchant l’induction des enzymes impliquées dans la
promotion du cancer [25,43,50].
Conclusion
La présente étude a permis de mettre en évidence pour
la première fois des activités antioxydante, apoptotique
et antiproliférative des EA de Tetraena gaetula et de
Berberis hispanica in vitro et in vivo. Ces résultats pour-
raient constituer une base scientifique solide pour la
recherche de nouveaux composés anticancéreux naturels,
complémentaires à la thérapie chimique existante.
Remerciements
Nous remercions le Pr Abdeslam Ennabili de l’Institut
national des plantes médicinales et aromatiques (province de
Taounate) pour l’identification botanique du matériel végétal,

et le « Center Emiratie Wildlife Propagation (ECWP) »,
région de Missour (Maroc) pour le don des animaux.
Conflit d’intérêt : les auteurs ne déclarent aucun conflit
d’intérêt.
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